Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 163
Текст из файла (страница 163)
ТЬе гехи!1)па огас!1-сопга)п)па япа1е-а<таис)ес) РЪ<А сх иаег! аа 1Ье гегпр1аге 1и а агапе!агс! о1!аопис!еог!с!е-с!!гесгес) шигааепеа)а ргосес!иге го аепегаге а Ьегегодир1ех пю!еси!е ъе!1Ь игасг1 ги 1Ье гегпр!аге аггапг! апг! йупипе ш 1Ье аггапс) аупгЬеягес) !и 1Ье )и ч!1го геасВоп Гргогосо! 2). Тгапауогшагюп оу 1ЬЬ РЪ<А гпго ап ипд яга)п геаи11а 1и г)еягисВоп оЕ 1Ье гешр1а1е ягапд, те!1Ь сопаес)иепг аирргеаа)оп оу 1Ье ргог!исг)оп оу ъе1)с$-гуре ЪасгепорЬааея А !агае ргорогг!оп (ир го 80еге) оу йе ргоцепу ЪасгепорЬааев аге йегеуоге с)енес! Ггош гер1кагюп оугЬе ггапауесгес) огас!1-Ггее à — ) аггапй Весаиае йе аупйеяа оу й)а а!таис! ь рпшес) Ьу йе шигааепк о1!аопис!ео<Ые, а Ь)аЬ ргорогпоп оу 1Ье ргоаепу Ъасгег!орЬааеа саггу йе с)еягед пшгапоп.
МАТЕК1АЕ5 САЕ)Т!ОЛ<: Р1еаае аее Аррепг)!х 72 Гог арргорпа1е ЬапгП!иа о< гпа1епа1а шаг)еег) чл1Ь <1>. Войег5 апг! Ьо!06оп5 Р1еаье аее Аррепс)!х 7 !ог сошроиеп1ь о! а1ос1с ьо!ипопа, Ьийегя апг1 геааеп1я О)1и1е а1осЕ ао1ипопь 1о йе арргорпа1е сопсеп1гапопя Ейапо! Л<аС! Г2.5 м) сои<а<и<па 75аа ро!уейу<епе д!усо! Ги4г, РЕС 8000) (! > РЛепо! <рН 8.0) (1> РЛепо<гсЛ!огоуогги Г7:7, г)г) (!> 5ос<<игп асегаге <8 м, рН 5.2) ТЕ ГрН г.б) Се!5 Ацагоае ае! Р1еаае аее 5<ер <6. 13. 11 13.12 СЬаргег 13г Мищепеь)ь )ь)сьс1е1с Ас14Ь апг! О!коппс!ео64!е5 Маг)сег Р)Я)А, ь!08)е-Ягапг7ег) Р)с(А Егот (Ье оп8!па! Ьасгег(орЬа8е М73 гесотЬспап1 Мейа 2х УТ тег7)ит 2х УТ тег7!ит сопга(п!08 0.25 агут! иг)с7)пе Сеп$11Еще5 апс! КРФог8 5огча)! С5А го1ог ог еди)га!еп1 5огча!! 55-34 го1ог ог едиача)епг прес!а! Ес!о! ргпеп$ Согех сепсг(Еи8е гиЬея (75 т! апг7 30 т0 Раяеиг рсреоеь 5рип-со)итп сЬгота108гарЬу гоп ()яе а ргерас)сес) геып юсЬ ая 5ерЬасгу! 5-400 (РЬаппас)а) ог Мспсргер 5рпп Со!пгппь (Ргоше8а).
Яа1ег Ьа1Ь ргеье1 го 60 С АеЫ16опа1 Веацеп18 51ер 7 оЕ 1Ьгь ргогосо! гедшгеь (Ье геа8епгь 7131ег7 и СЬар1ег 3, Ргососо)ь 3, 4, апс( 6. 51ер 6 оЕ 1Ьгь ргогосо! гедшгеь 1Ье геа8епгь 7(пег) )п СЬаргег 3, Рго1осо! 7. Уес1ог8 апе! Вас1ег1а! Яга1п5 Р!еаье яее Аррепг7(х 3. Е. со)) ьгга!и С!236 (с)01 ипц Е ) Рог с)оса))я, р!еаяе яее Кпп1се1 (1983) апс) Кпп1се! ес а!. (1987). Е. со)1 ь1гат ТС7, )М709, ог едшча)епг Р1еаяе ьее 8сер 6. МЕТНО0 1.
Ргераге 1ог тпса8епеь)я. а. С!опе а япаП Ега8тепс оЕ РХА (<500 Ьр) саггу)п8 )Ье саг8ес яедпепсе ппо ап арргорпа1е Ъассег)орЬа8е М13 чес1ог ьпсЬ аь М13тр18 ог гпр19. Ь. 1яо1а1е я)п8!е-ьсгапс)ес) сеспр1асе РХА апс) с)опЫе-ьсгапс)ес) гер!кас)че Еопп РХА Егот а ЕгеяЬ!у 8госчп р!адпе Кепегасес) Ьу )Ье гесотЬ)папс Ъассег)орЬа8е. МесЬос)я Еог с)ошп8 )псо ЬассегюрЬа8е М)3 чессогь апс$ Еог ргерагасюп оЕ я)п8)е-ясгапс)ес) апс) герука6че Еопп ЬассепорЬа8е РЫА аге 8)чеп ш СЬарсег 3, Ргососо!я 3, 4, апс)6. с. СЬес1с сЬе Вс!е1Ьу оЕ сЬе гесотЪспапс с!опе Ьу геягкпоп гпарр)п8 оЕ 1Ье гер!капче Еопп РХА апг) Ьу РХА ьедпепс!08 оЕ 1Ье яп8!е-ьсгапс)ес) РХА. ТЬе Кпп)се) ргосес)пге сап а!яо Ье арр))ес) со ргос)псе огас)1-япЬяс)спсес) я)п8)е-ясгапс)ес) РХАя 8епегасес) Егош РЬа8ешЫ чессогя (МсС)агу ес а1.
1989; Ъчап8 ес а1. 1989; Ып ес а1. ! 990; Еог шчсечг р)еаье яее На8егпесег 1996). Неге, сЬе с)опЫе-ясгапс)ес) РЬа8егпЫ РХА сопсасшп8 сЬе сагаес яецпепсе Ь 6гы шей со сгапьуопп Е. со6 С!236 (ог апосЬег ясга)п о( Кепосуре гЬа ип8 Г) со ашрсс)!1ш геыьсапсе. ТЬе гею16п8 Ьассепа аге юрепп6:ссес) чг)сЬ а Ье)рег ЬассепорЬа8е со яЬ)Ес сЬе гер!капоп гпос)е о( сЬе РЬа8егпЫ РЫА Ьопс сЬе ргос)пссюп оЕ с)опЫе-ясгапс)ес) РНА со я)п8)е-ясгапс)ес) РХАя (р!саяе яее СЬарсег 3, Ргососо! 8). Ро)!осч)п8 8госчсЬ )п шес))шп сопса)псп8 пп8)пе, сЬе я)п8!е-ясгапс)ес) РХАя, счЬ)сЬ сопсаш пгасс1 геяк$пея ш р!асс оЕ югпе оЕ сЬе сЬупопе Ьаяея, аге рас)са8ес))псо ч)га) рапк!ея апс) Ргососо! 1: Ргерагаг)оп оЕ вегас!1-гипса!пт~ Етд!е-яггаиг)ег) ВассегсорЬа8е М13 13ХА 13.13 весгесед шсо сЬе 8госчсЬ шед)ит.
ТЬь ))ХА Ь сЬеп ьо)асед )аз девспЬед Посп Егер 5 опсчагд) апд шес) ая а сепср1асе сп зпекПгессес) пнсса8епеыя Гргососо! 2). ТЬе ше оЕ РЬа8епид чессогя ссгсшпчепь сЬе пеед со с1опе сЬе ясагдп8 сагцес ТсЫА )псо а ЪассегюрЬа8е М)3 чессог Ьеуоге ысекПгессед тша8епеыз. 2. 13яе а ясеп1е Раяеиг р)рессе со сгапяЕег а яп8!е р1ас)ие ргодисед Ьу сЬе ЬассегюрЬа8е М13 гесотЬспапс со а писгори8е сиЬе сопсаиип8 1 т! оЕ 2х г'Т тед)шп. 3. 1псиЬасе сЬе сиЬе Еог 5 пипшез ас 60"С со ЫП Ьассепа1 сеПя. (11 )я )трогсапс со ЫП сЬе Ьассепа1 сеПя со ргечепс сЬет Егогп сопПпшп8 со ргойке сЬупигПпе-сопсаспсп8 счга! Р)х)А дипп8 сЬе пехс гоипд оЕ ЬассепорЬа8е 8госчсЬ.) ссогсех сЬе сиЬе ч)8огоия!у Еог 30 яесопдя со ге1еаяе йе ЬассепорЬа8ея сгарред ш )Ье сор а8аг.
Петоче деад Ьассепа! сеПя апд Ега8- гпепсз оЕ а8аг Ьу сепспЕи8!08 йе сиЬе ас гпахипшп яреед )ог 2 пиписея ас 4 С сп а гпкгоЕи8е. 4. ТгапзЕег 50 р1 оЕ )Ье зирегпасапс со а 500-гп1 Пая)с сои!а)п)п8 50 т! оЕ 2х УТ тед)ит яирр1епсепсес1 сч)сЬ 0.25 )с81т! ипд)пе. ТЬеге )я по пеес1 со яирр1еспепс сЬе псегПигп сч!)Ь сЬупигПпе ог адепояпе ая оп8)паПу дезспЬед Ъу Кип)се1 ( ! 985). АсЫ 5 гп! оЕ а гпЫ-!о8-рЬаяе си1- шге оЕ Е.
со11 ягаш С)236 Гз)ис ип8 Р'). 1псиЬасе сЬе си1)иге сч)сЬ Ы8огоия зЬаЫп8 (300 сус1еяут)писе оп а госагу яЬа)сег) !ог 6 Ьоигя ас 37'С. НПс)епс аегасюп )я сгисса! !Ог еЕЕсс)епс 8гоччсЬ оЕ ЬассепорЬа8ея. ТЬе ЬассепорЬа8е зшрепзюп шед аз ап шоси)шп сурка11у сопсаспв Ьессчееп )Ов апд )О'в РГи)т!. А гок01о8-рЬазе си1сиге оГ Е. соЕ сопсашз -5 х )Оз Ъассег)а)т). ТЬе )оъч пш!др1киу оЕ чЬа) шЕессюп 10.02 — 0.2 руи)се1!) епзигея йас йе чаы спа)опсу оЕ сЬе ЪассепорЬа8ев гесочегед Егосп сЬе си!сше счс11 Ьачс Ьееп Еепегасед сп сЬе дис сси)Е Р' всга)п оЕЕ. сой. 5. РеПес сЬе се1Ь Ьу сепспЕи8асюп ас 50008 )6470 грпс сп а 5огчаП 85-34 госог) Еог 30 пиписея ас 4'С.
ТгапяЕег )Ье яирегпасапс со а ЕгеяЬ 250-пс1 сепспЕи8е Ьосс1е йас ичП Пс )псо а 5огчаП СЕА госог ог ес)шча1епс. 6. Весегт)пе сЬе ге!аиче Псег оЕ )Ье ЬассегюрЬа8е яиярепяоп оп Е соП зсгаш С)236 (я)иг ищ Р') апд а ясга)п яисЬ ая !М109 ог ТС1 (р!еаяе яее СЬарсег 3, Ргососо! 1). ТЬе сПег оп зсга)п С)236 яЬои1д Ье Еоиг со Пче огдегз оЕ спа8тшде 8геасег сЬап йас оп сЬе Иш ии8 ясгаш ОЕ Е, со1с'. То яаче йпе, пюзс )пчезс!Еасогв риг)Еу сЬе ЬассегюрЬа8е рагск1ез ЬеЕоге сЬе геви1)з оЕ йе дсгасюп асс ачас1аЫе.
Носзечег, сЕ йе рипйсадоп Ь роясропед, зсоге сЬе сгиде ЬассепорЬа8е яизрепыоп сп 1се. ТЬе усе!д оЕ ЬассепорЬа8ев чапея Егот гесогпЪспапс со гесотЬспапс. Турка)!у, сЬе снег оЕ с )сия рагис1ез )и йе яирегпасапс, теаяигед оп а дис иие Р' Е. соЕ зсга)п !С)236), Ь 5 х )О'в со ! х )Ои РГи)ш). Носчечег, роог!у Егозя)и8 сесошЪ)пап!в тау апаш исегв оГ оп)у ! х ) О'в со 2 х )О'в РГи)т!. )Е сЬе у)е!д оГ ып81е-ыгапдед Г)ХА Ь )падес)пасе, йе Го!!очдп8 аге ьчо розыЫе гегпегПез; ° Меавиге сЬе сЬег оГ сЬе ЬассепорЬа8е в!ос)с шед со спЕесс йе йа иссч Г' игаса оЕ Е.
со)Е Ад)ияс сЬе чо1ите оГ сЬе споси1шп со асЫече а пш!др)кЬу оЕ шЕ.сбоп оГ О. ! руи)Ьассепа) се11. Сгосч сЬе спЕессед си! сиге Еог 6 Ьошз ая дезспЬед. ° )псиЬасе сЬе )пЕессес) си)сигея Еог )2 Ьоигз гасЬег сЬап 6 Ьоигз. Аз сПясияед ш СЬарсег 3, де1есед чаг)апсз тау оис8госч сЬе ог)8)па) гесогпЬспапс дипп8 ехсепдед реподз оЕ спсиЬадоп, апс) йия п Ь адчЬаЫе со чег)Гу сЬас сЬе спа)огпу оЕ сЬе ып81е-яссапдед Есх)А изед ая гетр)асе Ь оЕ йе соггесс ыге. МесЬосЬ со апа)ухе сЬе я)хе оЕ Ъассег)орЬа8е М ! 3 Е)ЫА Ьу Ее) е!ессгорЬогеыя аге с)еяспЬес! )и СЬарсег 3, Ргососо! 7. 7. Меаяиге сЬе чо1шпе оЕ сЬе ЬассегюрЬа8е яиярепя)оп, апд сЬеп адд 0.25 чо!ите оЕ 2.5 М оЕ )х)аС! сопСаш)п8 159о Есчуч) РЕС 8000.
Мсх йе сопСепСя оЕ СЬе сепСпуи8е ЬоСС!е Ьу ясч!гПп8, апд зсоге сЬе Ьоп!е оп )се Еог 1 Ьоиг. 8. Кесочег СЬе ргессрПасес) ЬассегюрЬа8е рагПс1ез Ьу сепспЕи8асюп ас 50008 (5500 грт сп а 5огчаП 65А госог) Еог 20 ппписея ас 4 С. Петоче сЬе яирегпасапс Ьу аяр)гаПоп, апд сЬеп 13.14 СЬаргег 13: Мпгацепел!л 10.
12. 14. 16. 17. шчегг гЬе Ъогг1е го а11о|ч !Ье !аа! ггасеа оЕ аирегпагапг го г)га)п а|чау. !)ье а р|реие ассасЬес) со а часишп 1ше го геточе апу г!гора оЕ во!иг)оп а|ЕЬег)п8 го йе ъча11а оЕ йе Ьогг)е. Кеяларепс) гЬе ЬасгепорЬа8е ре!!е! 1п 4 п|1 оЕ ТЕ (РН 7.6). ТгапаЕег 1Ье яларепяоп го а 15- гп1 Согех сепгпрл8е гиЬе, апс) |чааЬ !Ье ъча11а оЕ гЬе сепсг)Еи8е Ъо!11е лч)гЬ апогЬег 2 гп! оЕТЕ !рН 7.6).
ТгапаЕег гЬе лчааЬ)п8 Го йе Согех ГиЬе. чогсех 1Ье язепа)оп ч)8огоиа!у Еог 30 аесопс)я апг) гЬеп ьгоге йе гиЪе оп ке Еог 1 Ьоиг. Чоггех йе аиарепяоп ч!8огоиа1у Еог 30 аесопсЬ, ап|1 йеп ре11е! йе ЬасгеПа! с!еЬг)а Ьу сеп- Гг)Еи8ал)оп аг 5000ч 16470 грт ш а 5огча!1 55-34 гогог) Еог 20 т)пи!ее ал 4'С. ТаЫп8 саге пог го с!!агигЪ гЬе ре1!ег оЕ ЬасгеПа1 |1еЬПя ггапаЕег йе аирегпагапг го а 15-т! ро!ургору!епе гиЬе. Ехггасг гЬе аиарепяоп очке лч)гЬ РЬепо1 1РН 8.0) апг) опсе ъч)гЬ РЬепоЬсИого)опп. 5ерагале ГЬе РЬааеа Ьу сепгг)Еи8ал)оп аГ 40008 !5800 грп| |п а 5огча1! 55-34 гогог) Еог 5 т)пигеь аг гоогп гетрега!иге.
АчоЫ ггапаЕегг!п8 гпа!епа! Его|и гЬе |пгегЕасе. ТгапаЕег йе ас)иеоиа РЬаае Егот ГЬе 6па! ехггасГ!оп !о а 8!ааа сепГПйл8е ГиЬе Ее.8., а 30-п|1 Согех гиЬе). Меааиге йе чо)ите оЕ гЬе ао1и!!оп, апс! ас!д 0.1 чо!шпе оЕ 3 М оЕ аог)1шп аселаге (РН 5.2), Ео!!отчее! Ьу 2 чо1шпеа оЕ ейапо! а! 0'С. М|х йе сопгепса оЕ !Ье ГиЬе !Ьогои8Ыу, ап|1 гЬеп а!осе йе !иЪе оп ке Еог 30 пипигея Кесочег йе РХА Ъу сеп!г)Еи8аг)оп а! 50008 (6470 грт |п а 5огча!1 55-34 гогог) Еог 20 пипи!ее а! 4'С. СагеЕи11у геточе |Ье аирегпагап!.
АИ 10 т! оЕ 70% егЬапо! а! гоогп гегпрегагиге, чог!ех гЬе ао1иг)оп Ъг)е))у, апс! гесепгПЬл8е. СагеЕи1!у гепюче йе аирегпагап! Ъу аар)гаг)оп ап|Е а!иге гЬе гиЪе ш ап шчегсес) роягюп аг гоот гетрегагиге оп!11 гЬе 1ая !гасеа оЕ егЬапо! Ьаче ечарогасе|1. Р)аао1че йе РЬ)А ш 200 р1 оЕ ТЕ ЕРН 7.6). РипЕу гЬе геаиарепдее! а)п81е-ьггапс)ед огас!1-сопла!п!п8 ЬасгегюрЬа8е М13 РХА Ьу ьрипсо1шпп сЬгагпало8гарЬу ияп8 со!итие ГЬал ехс1и|1е!аг8е РХАа ()100 пис1еоГЫеа) аа с)еасг)Ъе|1 ш Арреп|1)х 8.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
