Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 165
Текст из файла (страница 165)
!993). Нокчечег, а 1бО: ! пихсше оЕ К1епсак) (АВ РерсЫеа) апд РЕи ро1ушегаье (5сгаса8епе) Ьаа сЬе арргорпасе вес оЕ ргорег6ея А сурка1 ппхсиге сопка!пз 0.187 ипП оЕ Р)и апк) 33.7 ип!са оЕ К1епсак)! !п а соса1 чо1шпе оЕ 1.2 )к1. Ехашр1еь оЕ сопипекскаПу ачак1аЫе ппхсигеа кпс1ис1е Так)Р1иь Екош 5сгаса8епе апд сЬе Ехрапс1 Н!ВЬ РЫе1Пу РСП Вуасеш Егош ВоеЬпп8ег МаппЬеип. 5!п81е сЬеппоасаЫе РЬ)А ро1ушегааев сЬас Ьаче Ъееп паек! аиссеааЬсПу кп скгси1аг РСВ !пс1ис1е Ри о РЫА ро!ушегаае (Н!Па)ас апс! МсЬПсо1 1997), гТй РЫА ро1ушегаае Х).
(Ри ес а1. 1995; Сак1ш ек а1. 1995), ЪелИ РЬСА ро1ушегаае (НиВЬеь апк! Апк)гесчь 199б), ап6 РЯл Р!чА ро1ушегаье (р1еаае атее Ъе1очч). ТЬеае ро1ушегаьеа Ьаче опе кпа)ог к!!как!чапса8е: Пе1ас)че!у Ь!ВЬ сопсепкгак!опт оЕ оПВопис1еоСЫе ргппега аке гек)и!ке6 ( !) Со соипСегасС СЬе еЕЕеска оЕ Пе8кас)а6оп Ьу 3'-5' ехопис1еаае асичиу апд !2) со епаиге сЬас сЬе рпгпега аге кп чая пю!ак ехсеаа Е50 — 100-Ео!Й) очек СЬе Сешр1аке РЬ)А (р!еаве атее СЬаркег 8, ТаЫе 8-1). РпЕогкипаке1у, аисЬ ЬгВЬ сопсепсгас!опт Еачог йе Еоппабоп оЕ ЬуЪпсЬ Ьесччееп сЬе сччо сокпр1ешегиагу оПВопис1еос!Пе рпшегя сЬекеЬу гек!ис)п8 йе ейк!епсу оЕ сЬе ашрПЕксас!оп геас6оп.
Весаиае оЕ сЬе сопаек)иепс ипсепашсу аЬоис йе еЕЕесс!че сопсепсгасюп оЕ рпшекя гюше !пчел!Пасоса саггу ош ркеПпи'- пагу ехрег!кпепкв Со ор6гпые СЬе сошропепЬ оЕ СЬе агпр!гПсаСюп геасСюп. ТуркаПу, СЬеае ехрегппепса иае а8агоае Ве1 е1ессгорЬогеа!а со гпеавиге сЬе у!е!д оЕ 1гпеаг ЕиП-1еп8сЬ РЬ)А ьупСЬеяке6 ш агпр!гПсакюп геаск!опа сопка!и!п8 а сопькапк агпоипС оЕ Секпр1аСе Р!чА (иаиаПу 50 п8) апд а гап8е оЕ ргипег сопсепСгак)опа (е.8., р1еаае аее Рап1й ап6 биеп8епсЫ 998). Ночкечег, кп оиг ЬапсЬ, ор6пикабоп оЕ рг!шека Ь иппесеааагу ип!еаа сЬе шисас!опт аге сопгр1ех !пюге сЬап йгее яп81е-Ъаье сЬап8ея де!е6оп ог )паегс!оп оЕ кпоге йап ссчо пис!еос!дев). Ргогосо! ЕЬ Ти )г(гго Мигаеепег)г (Вте РоиЫе-ггтапс(ес( РИА Тетр1агея Ве!ее!гоп оЕМигапгг п47Ь Ррп) 73.27 15(Ьеп иа!пВ япВ1е ГЬегтоасаЫе РЫА ро1утегавея асЫ)сюпа! ьсера гпау Ье са1сеп Со Еиг)Ьег липин!хе )Ье сЬапсе оЕ ипгчапгес) пшсапй ассипш1а))пВ ВиппВ атр!)Егсабоп: ° ТЬе гппга1 сопсепггас!опа оЕ с))4ТРь апс) МВ2+ гп йе геасбоп пихгиге пшас по! ехсеес) 250 РМ апс) !.5 тМ, гезресс)че1у.
° Весаизе ЕЬегтоагаЫе РЫА ро1угпегааеа аисЬ аа РЕи апс) Ри о гес)и)ге а тоге а!)са!ше Ьи((ег йап Тас), йе рН оЕ йе Тг)а-ЪиЕЕегес) геасгюп пихгиге 5Ьои16 Ъе 8.9 (теааигес) ас 25'С). ° ТЬе питЬег оЕ сус)еа оЕ 1шеаг атрИкаг!оп тиаг Ье 1серг го а Ьаге пшшпшп (р1еаае атее Вгер 6 оЕ )Ь|в ргогосо1), ечеп )Е йь сопягашг теапа иа!пВ ге1а6че1у 1агВе агпоипга оЕ сетр1аге РЫА ш )Ье геас6оп пихгиге. Сопипегс!а11у ача!1аЫе )с!га Еог спси1аг тигаВепеяа шс1ис1е (2и))сСЬапце (ВггагаВепе), счУВсЬ Ьаз а р1аяп)с) РЫА гетр1а!е апс1 ти)аахен)с ргипега )Ьас сап Ъе наес) аа а роя))че сопсго1.
ТЬе )с!! !а ЕЬегеЕоге еарес)а!1у иаеЬг! Еог !пчеаг!Вагогь гчЬо аге иа!пц с!гси1аг тигацепеяа Еог йе Йгаг 6гпе. )ч1АТЕ)с1А1.о СА))Т)ОЫ: Р)еаае атее АррепВ)х 12 Еог арргорпа!е Ьапд!!пе оЕ гпа!епа15 таг)сед ъч!ЕЬ <! >. ВНЕЕегь апд Ьо!НЕ!оп5 Р1еаае аее Аррепд!х 1 Еог сотропеп(а о( 5!ос)с ао1и6опя Ьи((его, апд геадеппи 0)ппе ь!ос)с ао)опона !о !Ье арргорпа!е сопсеп!га6опя АТР (7 0 глм) с)ЬГТР ао(ипоп сол(а(л(лд аП Еоиг с(ЫТР5, еасЬ а( 5 тМ 70х ЕолВ РСВ Ьийег (ъчЬел иялВ тгхгигег оЕ Р(4А ро(утегагеа) 500 пгм Тпь-С1 (рН 9.0 аг гоопг гешрегашге) 160 шм апнпон)шн еа!Гаге 25 шм МВС! !.5 шВ(ш! Ъочше ьегнш а)Ъшшн ВнВегз шрр1гес! Ъу йе шапн(асшгег анс! сшгаЫе Еог ые чВй )ЬегшоагаЫе РНА ро1угоегаьев гоау Ье ыеВ гп р1асе оЕ гЬе аЬоче ЬнЕ(еги ог 70х Ми(аВелеа(5 Ьи((ег ГгчЬел иа!лВ РЬГА ро(утегазез ьисЬ аа Р(ц) )00 шм КС! 100 шм апннопшш гш1Еаге 200 шм Тгп (рН 8.9 аг гоого гегнрегагнге) 20 м МВ5о4 !9о Тпгоп Х-)00 ) шх(гп! ннс!еасе-Егее Ьояпе сегнш а1Ьшпгн ЫаОН (7 м)(ЕРТА (7 гпм) ГорполаВ <!> 5оспит асегаге (3 м, рН 4.8) (ор6ола!) ТЬЬ го1нгюп ь огес) аа а пешгаВгшВ ахен! апс1 ЕЬегеЕоге Ьас а к!)ВЬг)у )очег рН )Ьап нгоаг юспшп асесаге ьо1ниопз нгес) гп гпо)есн1аг с!он)нВ.
ТЕ ГрН 8.0) Епкугпе5 апс! ВНЕЕегь Вас(елорЬаВе Т4 Р(с)А Егдаае (орпола0 ВасгегюрЬаВе Т4 ро(улис)еопде )с(лаге (ор6ола!) Ррп! геппс6ол еле)олис)еаае ТЬетоагаЫе Р(4А ро(утегаье Ге.В., Р(и РЫА ро(утегаье) ТЬе сопспгюпс с)егсг)Ьес) гн йы ргогосо1 аге оргитпгес) Еог р)иТнгЬо РЫА ро)ушегасе. Ношечег, йеу аге еас)у ас)аргес) Еог ше гч))Ь ойег ЕЬегшоьгаЫе ро)ушегазес ог пнхгнгес о( ро1угнегаьеи РЕи ы ага)1- 13.22 СЬарсег 13: Мисаеепеыь аЫе Егосп 5сгаса8епе си йгее Еоппв; сЬе папче епгуп|е, а гесоп|Ьспапс епгуп|е ехргеые6 !гоги а с!опас! чегяоп оЕ сЬе Руи 8епе, ап|1 а ргерагаиоп Р)иги|Ъо вчЬ~сЬ зв а Еогпш!асюп оЕ гесоп|Ь|папс Руи РХА ро!ушегаве ап|1 а паче! йеппояаЬЕЬТу Еассог вчЬове пашге |в ип61вс! овес! Ьш счЬьсЬ |в ваЫ со епЬапсе |Ье усе!6 оЕ ашр11Е|е|1 рго|Ьчсс и|1|Ьоис а1сепп8 |Ье Е|6е11су оЕ РХА гер!капоп.
ТЬе п|апиЕасшгег с1аипв сЬас РЕиТигЬо РХА ро!ушегаве Ь аЫе со ашр11Еу РХАв 15 1|Ъ |и 1еп8|Ь. 1п оиг Ьап|Ь, Ьовче| ег, йе еЕЕ|- с|епсу оЕ ашр1|6сасюп сСесгеавев счЬеп сЬе!еп8|Ь оЕ |1оиЫе-яга|Ые|1 р!аяпЫ РХА ехсее|Ь 7 — 8 1|Ь. Се!5 АВагоье Ве) Л® сопсагпспВ 0.5 РВ1т1 есЬЕд)ит Ьготгде <1> Р!саве вее 5сер 8. 1Чос!е!с АснЬ апе! О!фопссс!ео$!е!е5 ОВВопис1еоСЕде рптегь Рог аВЫсе оп йе с)ев18п оЕ о118опис!еосЫе рпспегв, р1еаве вее йе шсгосСисссоп со йЬ ргососо1 хи|С сЬе шсогшапоп рапе1 оп МС7ТАС|ЕХ1С ОПСОХРСЕЕОТ1РЕ5.
ТЬе Ьея гевиссв аге асЬсечегс К |Ье о118опис1еосЫе рпшегв аге рис!усе|с Ьу РРЕС ог РАСЕ со ге|Сисе йе!ече! оЕ сопсапипадоп ичсЬ ва!св Ер!саве вес СЬарсег 1(), Ргососос ! ог 5). ТЬе рис!усе|С рпгпегв аге йяо1че6 ш Н, О ас а сапсеппадоп оЕ 20 |пя. Рlаьтгд РЬЕА ТЬе сешрсасе РХА иве|с Еог шиса8епеяв Ь а с|гси1аг р!авшЫ сопса|п|п8 сЬе 8епе ог сРХА оЕ |псегевс.
1п 8епега1, сЬе вЬогсег сЬе р1аяпЫ, сЬе и|оге еЕ6ссепс йе ап|р!|6сас|оп оЕ йе саг8ес РХА. Р! аяиЫв ичсЬ а соса! 1еп8|Ь оЕ <7 1|Ь вчогСс |че!Ь Ьовчечег, виссеы Ьав Ьееп асЬ|ече|1 мчсЬ р1аяпЫ сегпр1асев ир со ! !.5 1|Ъ |и 1еп8сЬ (Сас!1и ес а!. 1995), ТЬе р!аяпЫ РХА вЬои!6 Ье йыо!че6 ас 1 р81ш! |п 1 ш|а Тпв-С1 ЕРН 7.6) сапсаспсп8 а!овч сопсепсгасюп оЕЕРТА 1<03 п|м).
прес!а! Ее!о!ргпепЕ Ваггсег Прь Еог аиготадс гп1сгор|реССеь МссгоуоВе СиЬеь 10.5 т1, ЕЬ1п-сча11ед Еог атрЬВ|садоп) ог МЕсгоИег р!аСеь РоьЕСЕче-дгьр)асетепС р)реССе ТЬегта1 сусlег ргоВгаттед и |ЕЬ деягед атрl|Вса дои ргососо1 1Е |Ье сЬеппа1 сус1ес ы пос ессшрре|С едсЬ а Ьеасе|1 1Ы, ые еЬЬег иипега! о|1 ог рагарап свах со ргечепс ечаросаиоп оЕ 11|Сш6 Сгош йе геассюп пах|иге Вигш8 РСрс АЙЙЕ!опа! КеацепЬ 5сер 14 оЕ ЕЬЕь ргососо1 гег)шгеь 57ер 75 оЕ СЬЕь ргоСосо1 гег)шгеь 57ер 16 оЕ СЬ)ь ргоСосо1 гес)исгеь 7Ье геаВепсь 1гьсед т СЬарсег 7, Ргососоl 23. ЕЬе геаВепсь 1Всег1!п СЬарсег 1, Ргососо) 1.
СЬе геадепсь!гяед и| СЬарсег 12, Ргососо) 3, 4, ог 5. ЧесЕог5 апе! Вас$ег!а! Яга!п5 Р)еаье ьее АррепсВх 3. Сотрегепг Е. со!| ьега|п |чЕСЬ ап ЬьдК77 ВепоСуре Ее.В., ХЕ7-В!ое, ХЕ2-ВЕое МКЕ', ог РН5а) МЕТНО0 2. А|Ы 5 )а! оЕ3 М ьос)1и|п асесасе (рН 4.8) со пеиСга11ге йе ьо1ис)оп. Ргес|рпасе |Ье РХА илсЬ 150 Ес! оЕ ке-со16 есЬапо!.
АгпрИ!Са6оп о4 Йе Тагце1 0МА сьг!1!7 Мо1ацеп!с Рг!!гпег5 5серь 1 апс1 2 аге орйопа1 (р1еаье ьее пасе аЕсег Всер 3). 1. Репа!иге сЬе р1аяпЫ РХА се|пр1асе 1п а геаспоп сопса)п)пВ 1-10 )сВ оЕ р1аяпЫ РХА с)1ььо1чес! |п 40 р! оЕ Н О р1пь 10 Сс! оЕ 1 М ХаОН11 спМ ЕРТА. 1псиЬаСе СЬе Е|ХА ш СЬе г!епасиг)пВ ьо!исюп !ог 15 пшппеь ас 37"С. Со11есг йе с1епагигес1 р1аяп!с! Е))ъ)А Ьу сепгП6лПа6оп Еог 10 ш!пигеа аг 4'С ш а ш!сго6лае. Саге6л!1у с1есапг йе егЬапо!лс гшрегпагапг апг! Ппае гЬе ре11ег ъъ ЬЬ 150 р1 оЕ 70% егЬапо1. КесепгП6лде Еог 2 пшплгея г)есапс йе аирегпагапг, апс1 а1!оъч гЬе 1азг ггасеа оЕ ейапо1 со ечарогаге аг гоогп гешрегагиге. Кеаиврепс! ЕЬе Е)ХА Еп 20 )г! оЕ 13 О.
1п йеогу, йеге Ь по пеег) со г)епагиге гЬе р1аяпЫ РХА ЪеЕоге П )а иаег) аа а гелпр!аге лп РСК. 1Е ЕЬе аПга!лпе г)епагшаиоп агар ь огпЬгей гирегЬе1лса1, паггче г)оиЫе-хггапг)ег) РЫА ъч61 Ье г)епагигег) Ьу Ьеа6пП го 94'С ш гЬе 6гаг сус1е оЕ РСК. 5о ъчЬу ЬогЬег ъч)гЬ 5герх 1 апг1 2? ТЬе апаъчег ргоЬаЫу Пел 1п гЬе ъгаге оЕ йе р1аашЫ РХА айег рго!опцеП Пепагигаиоп лп аПга16 Риг)пц ехрогшге го 0.2 я )ъ)аОН, йе р!ааплЫ РХА соПархех гпсо а г)епае, игечегыЬ!у г)епагигег) соП гЬаг сап легче ах а гепгр1асе )п РСК Ьиг Ьаа !лгг)е аЬг!иу го сгапаЕопп Ьасгепа. ТЬе Ьас)гВгоипг) оЕ со!оплел сопгаш)пВ иппилгагег) М!с$-гуре Е))ъ)А Ь гЬегеЕоге гпаг1сегПу гег)исе6 1Ри ег а1. 1995; Е)оггеП ег а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
