Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 164
Текст из файла (страница 164)
ТЬе а!п81е-ягапиеи Ъас|епорЬа8е М13 ПХА йа| Ьаь Ьееп ргора8аге|! 1и |Ье |лог пщ Г агга|п оу Е. соб !а рш|бей Ьу арпи-со1шпп сЬгота|о8гарЬу |о геточе соп|апппабп8 япаП Р14А апг! КЬ!А о1!8оппс!ео|гиея ТЬеае попьресубс о!!8оппс!ео|Ыеь сап ас| аь рпп|ея 1и |тЬьеииеп| пт|а8епеяа геас||опя сапяп8 а Ь|8Ь Ьас1|8гоип|1 о! Еа!зе рог|те р1а|р|еа. Меааиге !Ье РЬ)А аресггорЬоготе|Пса!1у аг 260 пт (! ОР = 40 )гфт1) !Еог с!ега!1а оп г)иапг)гаг!п8 РХА, р!еаье атее Аррепс))х 8). Апа1ухе гЬе яхе оЕ ап а1нрю! оЕ йе РХА !0 5 )|8) Ьу 8е! е1ессгорЬогеяя ияп8 яп81е-аггапс)ел! РЫА оЕ йе ог!8!па! ЬасгепорЬа8е М13 гесотЬ|папг (5!ер 1) аа а яхе таг)сег. Саггу оиг о118опис1еоГЫе-о)гесгес) тила8епеяа аь г)еасг)Ъес! |п Рголосо1 2.
О!~цопис!ео6с!е-Йгес1ес! МШацепеыь ог Япд!е-Мгапс!ес! 0МА т нгв сеА551с ркотосот сомвиче5 тне Рог7вте-рв)меа теснн1т2178 оЕ Уо!1ег апт1 5ппгЬ (1984, 1987) апт1 гЬе Кип)ге1 (1985) гпегЬот1 оЕ епг)сЬ!08 тЬе у)е!д оЕ пшгапп (р!еаае атее ЕЬе шЕоппа11оп рапе! оп 5ЕЕЕСТ1НС АСА1Н5Т УУ!ЕР-т тРЕ РНА 1Н 5!ТЕ-РИЕСТЕР МЕ)ТАСЕНЕ515). ТЬе яп8!еягапт1ет1 Ет)х)А гетпр1агеа пает! тп 1Ье ргососо! гоп!а)п а Ь18Ьег гЬап поппа! пшпЪег оЕ огас!! геят)иеа Ъесапае 1Ьеу аге ргерагет1 Еготп М13 Ъасгег)орЬа8еа Вготап тп а Ягаш оЕ Е, го1т 1Ьаг сагт)еа тпигат)опт Еп 1Ье ипд апт1 т)ит Вепеа !р!еаае аее Ргогосо! 1).
МАТЕВ1АЕ5 ВегЕЕег5 апг1 Ьо!06оп5 Р1еаае аее Аррепгпх 7 Еог согпропеп15 оЕ 81ос)т ао1иоопа, Ьийега, апг! геадеп18. 0тЬПе атосЬ 801011опа Ео ЕЬе арргорпа1е еопсеп1гапопа. АТР !70 птм) 70х РЕ7 ЬиЕЕет 200 тпМ Тпа-С! ЕРН 7.5) ! 00 птМ МКС1 500 тпМ 14аС1 10 тпМ ййютЬтетто! 70х РЕ2 ЬиЕЕет 200 тМ Тга-С! (рН 7.5) 100 тпМ М8С! 100 птм йтЬ)отЬте)то! Ешуптев апг! ВоЕЕегв ВастетторЬа8е Т4 07тЕА Етааье ВаегетторЬа8е Т4 ро)упис)еоттг)е Еттпаае К)епоту ЕтаВпгепт оЕ Е со!1 Ртт)А ро)угпетаье! Апу оЕ тенета! йЕЕегепт РНА ро!угпегатеа тпау Ье аае4 тп тЬе ехтепатоп теастюп 15тера 4 апт) 5). ТЬе К1епоъч Етарпепт 1ас1та 5' ехопис!ео!ут)с аст)тт)ту апт1 Ь ЕЬететоте пюараЫе оЕ т1евгайпв тЬе !егор!ате. Ноттечет, ойет ептуптеа, аасЬ аа ЬастетюрЬаве Т4 Р74А ро!утпетаае !Хогга! 1974; Сеьае!ювег ет а1. 1987), павче Т7 Р)4А ро1утпегаае ЕВевепе)т апт) Кип)те! 1989), апт) 5е9аепаае ЕвсЬепа 1989; Уеп)т)тагатпап 1989) ге9йге аЬоттег пюаЬатюп типеа.
ТЬеае ептутпеа ате оЫтватогу ттЬеп а РЬоарЬо- 13.15 13.16 СЬаргег 13: Мигацепев)в гу!асес! пшса8еисе о118опнс!еосЫе Ь наес! ав сЬе ып81е рпшег ш сЬе ро!ушеиаабоп)ехсепвюп геассюп. С)пИсе сЬе К1епосч Ггарпепс, пеЬЬег 5еднепаве пог йе панче 7)ХА ро1угиегавев епсоссес! Ьу ЬассегюРЬа8ев Т4 апсС Т7 аге аЫе со ссор!асе сЬе псша8епк о!18опнс!еосЫе Ггосп ссв сеспр1асе !Хопа! 1974; Кип)се! 1985; Вебепе)с аис) Кнп!се! 1989; 5сЬепа 19891. !атос!е!с АснЬ апс! О!коппс!ео1!е!е5 Вассег!орЬаае М73 ипсчегва! ведиепс)ла рптег Аиу сопнпегсса11у ачас!аЫе ншчегва1 рпшег нвед со рпгие йаеоху веднепеш8 геаебопв Ь.ош Г+) всгаис) ЬассепорЬа8е М 1 3 сешр!асев к411 счог1с кеН си сЬ)в ргососо!. с)НТР во)ипил соп1а!п)пВ аП Гоиг с))ч)ТРв, еасЬ ас 2 та) С)ве с)ХТРв оГ йе Ь|8Ьевс дна!1су со пнпип)хе сЬе ровяЬс!иу йас сопсашспасси8 с!С)ТР сч1!1 Ье спсогрогамс1 спсо сЬе песе!у вупсЬевсхес! всгаис! оГ Т)ХА.
ТЬе еопсепсгасес! с1ХТР во1шюпв во!6 Ьу РЬаппасса Ьаче счогЕес! сче1! си онг ЬагхЬ. Мигаееп!с Ьассег!орЬаее М73 в)па!е-81гапс)ег) ОА1А гетр)аге Ми1аВетс о))полис)еог)с)е рптег ТЬе шша8епк о1!Воине!еосЫе вЬон18 Ъе с)ея8пес) ав онс1шес) си сЬе шГоппасюп рапе1 оп МЬТАСЕХ!С ОБСОХ!)СЗ.ЕОТ10Е5. Веуоге нве сп ассе-йгессес) гпнса8епеяв, рнпГу йе пниа8епк о!18опнс1еосЫе Ъу 5ер-Ра!с С,„со1шпп сЬгоспасо8гарЬу со геспоче ва1ь апс1 осЬег нпрнпбев Гр!еаве вее СЬарсег ! О, Ргососо1 61.
1с Ь пос песеыагу со рнпГу йе о118опнс1еосЫе Ьу ро1уасгу1ашЫе 8е! е!ессгорЬогеяв оп1ея сЬе о!18опнс1еосЫе Ь слоге йап 30 пнс!еосЫев ш 1еп8сЬ ог Ь со Ье овес! Гог "1оорси" ог "1оор-оас" ишса8епеяв. Мег!!а 2х уТ 1ор аааг апг) уТ аВаг р)а1ев прес!а! Ег!о!ргпеп1 Еа)соп 2059 1иЬев ГсЬсйес0 ог Е!есггоригапоп сичеоев Неаг Ыос)с ог и агег ЬагЬ ргевег Го 47'С Яасег ЬасЬв ргеве1 со 76'С, 42'С, алс) бВ'С Яасег ЬаГЬ ргеве1 со ГЬе арргоргса1е с)ела!ига!)оп гетрегасиге Р!еаве вее 5сер 3. А!сегпабче!у, а сЬеппа! сус!ег сап Ье овес! Гог йЬ всер. АГ!Й6опа! Веацеп$5 51ер 7 оГ 1Ыв ргососо! гедисгев ГЬе геааеп13 !!всес) сп Ргогоси! 7 оГ ГЬгв сЬарсег.
51ер 7 оГ ГЫв рго1осо! геди)гев !Ье геацепп !!всех)!п СЬарсег 72, Рго1осо! 3 ог 4. 51ер 7 оГ 1Ыв рго1осо! тау гедшге 1Ье геадепсв !!всех) сл Ргососо) 7 оГ 1Ьгв сЬаргег. 'хуес1ог5 ап4! Вас1ег!а! Ига!п5 Р)еаве вее Аррепс))х 3. Е. со!1 всгат вшсаЫе Гог сгапвуогтапоп Ге.е., ТС7) Е. со!1 всга)л ТС), согпре1епг Гог 1гапвуогтаггоп Ргераге еопсресепс се1!в ав с!евсгсЬес) сп СЬарсег 1, Ргососо! 25 ог 26.
Е. со!1 всга!л ТС7, очеглсВЬ1 си)1иге МЕ ! НОО 1. Ргераге йе 81п51е-всгапс1ес! Ьассег1орЬаде М13 сешр1асе ав с1евспЬес1 пс Рго1осо! 1. Рцпуу 1Ье огас!1-солса)п1пц 1ешр1асе Ьу врпп-со1шпп сЬгогпасоагарЬу. 2. РЬоврЬогу1асе 1Ье шпсааешс о11аоппс!еосЫе апс1 1Ье пшчегва1 ведпепс)па рпшег илй Ьассег)орЬаце Т4 ро!упнс1ео1Ые Ыпаве. 1п верагасе ш)сгоупВе сиЬев ппх; 13.1В СЬарсег 13: МисиВепеяс 6. Тгапагесс согпресеп( Е. со!1 оу ап арргорпасе Ьоас асса|и (е.а., ТС1) аа $011оччы а. Ргераге а аеПеа 01 й1исюпа 0$ йе геасс|оп пихсиге (1:10, 1:100, апс1 1:500) |и 10 гп(с( Тг|а-С1 (РН 7.6).
Ь. То а аеПеа ог сЫ11ес$ (О С) Ра1соп 2059 сиЬеы сгапьгег 1 ф апс$5 р1 оу (г) йе ог(а(па1 геассюп пихсиге апс| (й) еасЬ сИисюп. АсЫ 200 р1 оу а ргерагасюп ог' согпресепс ТС1 се!!а со еасЬ сиЪе. с. 5(оге йе пихсигеа оп ссе Гог 30 пиписеы апс$ (Ьеп сгапауег йегп Еог ехасс!у 2 ппписеа со а ччасег Ьай ес)и111Ьгасес$ а(42"С.
й гсегпоче йе сгапагессес$ си1(игеа (гоги йе ччасег Ъа(Ь, апс$ ас|с$100 р1 ог а асапс)агс$ очегп|ВЬ( си!(ше оу ТС1 се1ЬО ТЬе асЫпюп оу се1!а гпа1сеа Ь еаыег со аее ЬассеПорЬаВе М13 р!ас)иеа сп (Ье 1аччп оуЪассеПа! се!!а. ТЬеге Ь по пеев со асЫ ТС| сеПа 3( СгеаЬ|у ргерагей гасЬег йап Сгогеп, сопгрегепг Ьассепа| се!!я аге иаес3 Ы 5сер Ъ. е. Ас|с$2.5 гп1 оу 2х УТ сор аааг (гпе!сес$ апс$ соо1ес$ со 47'С) со еасЬ |иЬе, апс$ р1асе (Ье гехи!с(пц гп(х(игеа оп аерагасе УТ айаг р1а(еы 1псиЬасе (Ье р!асея гог 12 — 16 Ьоига ас 37'С со а1!о~ч р1аг)иеа со соггп. ТЬе гпгпасед Г3$4А сап а|со Ье 3пггог|исед |иго Е.
соВ Ьу е|есггорогаВоп. Весаше |Ье йеОиепсу о( |сапа(есс(оп Ь Ы 8епега| псисЬ ЫВЬег сч|сЬ е|ессгорогас|о, ап а|сВиос о( гЬе пппахепеяь геаспоп аЬои38 Вгас Ье г33!исес3 ! !100, 3!500, 3 ЛООО, апг$3! 3 0000 (п Н,О Ье|оге е1ессгорогаВоп о( 3 — $0 р| о( йе г33!игег3 пихсигеа. В а(па|е-а(гапс|ег$33(чА с|ег|чег$(гогп а РЬааегпк$ аисЬ ас р(3С! ! 8 ог р((С1 $9 'ь иаес3 аа йе сегпр|а(е (ог пийадепеа|а, иае $ -Р3 апс| 5-03 а3(с|посс о( йе ипс333исес3 геас8оп пах(иге (о (гала(опп согпресеп( си!(игеа о( ап Е. соВ агга|п аи3(аЫе (ог РЬаВегп(с3 ргора8аВоп ((ог а с|еасг(рг|оп о( (ЬВ а(га(п, р|еаае аее СЬар|ег 3, Ргососо| 8; (ог а с$еаспрВоп о( (Ье (сапа(оппа(3оп гпе(Ьос$, р|еаае атее СЬар(ег $ ). Йа(е 50-р! апс$100-р3 а|крлои о| еасЬ (сапа(оппа((оп гпаииге оп(о сВ аааг р!а(еа соп(ап|пц 50 08(гп! агп р |с| | | | и.
Агп р(с(33(п-геа|агап( со|оп |еа аЬои! д арреаг а(гег 18-24 Ьои га о( |псиЬаиоп ас 3 7'С. 5сгееп йе (сапа(оггпес3 со|оп|еа аа с|еасг(Ьег$ |п Ргососо| 7. 7. 5сгееп р1ас)иеа Ьу аес)иепс|пВ ргерага(юпа оу ып81е-асгапс)ес$ Ьасгег|ОРЬаае 33Ь)А (р!еаае аее СЬарсег 12, Ргососо1 3 ог 4). !г" песеааагу, йе р!ас)иеа сап Ье асгеепес$ Ъу ЬуЬг|йгас(оп чч1(Ь а гайо!аЬе1е<$ 011аопис1еос|с)е ргоЬе со с1е(есс гписапса йас аг|ае ас а 1очч (гес|иепсу (Ргососо1 7). ТКОЕ|ВЕЕ5НООТЗЬ|О 3$ р!ас|иеа оЬ(а|пес$ а(гег (сапа(есСюп с|о поС соп(а(п йе с|еа(гес3 СЗЬ(А асс|паосе: ° Риг((у йе прицеп(с о338опис|ео((с|е Ьу ро|уасгу|агпЫе це3 е|ес(горЬогеа(ь Ье(оге саггу|па ои( йе гпи(ааепеа(а рго(осо|.
° вериг|(у йе Ьас(ег(ОРЬаае (Ч(! 3 сегпр|асе Ьу арии-со!ипзп сЬгопзасоВгарЬу аа с|еаспЬес$(п Аррепс|(х 8. (3ае а гоп (е.а., 5ерЬасгу3 5-400) йа( ехс!ис|еа Ь(ВЬ-гпо|еси|аг-сче(ВЬ(333чАа. ° Теаг йе гпи(ацеп|е о||цопис|ео(Ые (ог |Ы аЬ(33(у (о рпгпе 33Ь(А суп(Ьеаь ас (Ье арргорг(асе |осасюп оп йе а(083е-асгапс|ес3 (егпр|асе 33(чА (Ло|!ег апс! 5гп((Ь 1987). ($ае а ипЫегаа1 асс|пепе(па рпгпег аа а рос(((че соп(го|. 3$ рпгп(па осе ига (гоги пюге йап опе ы(е, ауп(Ьеа(хе а |опаег гпи(ааеп(с о!|копие!еопс|е (Ьас Ы ос|а арсе!Оса!!у (о йе !егор|а(е 33ЫА. ($ае а аЬопег ойдопис|еоВс$е аа а ЬуЬпсйхаВоп ргоЬе со асгееп (ог (Ье с|еа|гес$ гпи(ап( аа с|еасг(Ьес$ |п Ргососо! 7, $$ рг(гп(па Ьу йе гпиСааеп|с ойдопис|ео(Ые 'ь (пе(8с(епс, геаупйеъйе (Ье о338опис|еог(с|е апс$ риг((у К Ьу ро|уасгу|агпк|е Ве| е|ессгорЬогеа(ы 13.20 СЬаркек 13: Микаеепеккк ° Якои!И кекттаке ки а 6 ок С кок)кЕие.
° Хеек1 пок Ье рЬокрйоту1акей. ТЬ!з Ь Ьесаиье Р)и, йе сЬегшоьсаЫе РЬ)А ро1ушегаье шоьс сопипоп1у паек) со саса1уке сЬе ашр!аеас!оп кеас6оп, Ь ипаЫе со 6)ар1асе оПВопис1еосЫеа ЬуЪпйие6 со сЬекг сагцес вес)иепсе, кчЬесЬег ог пос сЬе оПВопис1еосЫез аге РЬоьрЬогу1асес1. ° Сап Пепета11у Ье икекЕ сч)кБоик риккуксаксоп. Ноиечег, Ь!ВЬег еЕПс!епс!еь оЕ гписа6оп, еврескаПу кч!сЬ !пресс!опт ап6 к!е!е6опя аге оЪса!пек$ !Е сЬе рк!шеки аге рипйек1 Ьу еПЬек Еаьс-регЕоппапсе Пс)и!6 сЬгошасо8гарЬу (РРЬС) ог ро1уасгу!ашЫе Ве1 е1ессгорЬогеа)ь (РАСЕ).
'ччЬеп а рошс пшса6оп Ь со Ье !псгок!исе6, опе ргипег сагг!еь а ьч!д-суре век)иепсе, ччЬегеав сЬе осЬек рпгпег сагпеа йе с1еягес1 пшсасюп аист Ьаь а пипипшп оЕ 12 Ьаьез оЕ соггесс век)иепсе оп еасЬ а!к!е оЕ сЬе сепсгаПу р1асес1 пшсабоп. 1Е а к1е1есюп Ь со Ье !псгойке6, йе скчо ргипегыпау ЪосЬ Ьаче а кчПд-суре аек)иепсе, Ьис йеу аке арасек) а сПяапсе арагс оп сЬе сешр1асе сЬас соггеаропсЬ со сЬе 1еп8й оЕ сЬе с!е!ес)оп.
!папесс!оп шисас!опа гес)шге опе рпгпек оЕ ъчП6- суре век)иепсе апд опе ъч!сЬ сЬе аеоиепсе со Ье !пьексес1 1осасес1 ас !са 5' сепп!пия ТНЕКМОЬТАВЕЕ 01ЧА РО!ЛкМЕКАЯЕ ТЬгее ргорекс!еа аке гек)и!гед оЕ сЬегшоьсаЫе РЫА ро1ушегаьеь иье6 Еог шиса8епеа!в оЕ к!епашге6 р!аьпсЫ сешр1асея ° ап еЕПс!епс ргооЕкеа6!п8 асс!ч!су ° а 1осч гасе оЕ шсогрога6оп оЕ ппашассЬек) Ьааеь ° а 1ас1с оЕ ипсешр1асес1 сепп!па! сгапьЕегазе асс)ч!су Так) Поев пос Еи1ЕкП сЬеае сгПепа апс1 Ь сЬекеЕоге епсне1у шьи!саЫе Еог ясеяПгессес1 шиса8епеяа (5сепппег апд Могг!ь 1992; ЪЧас)с!пь ес а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
