Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 168
Текст из файла (страница 168)
ТЬе о«18!па! тпе8арпшег ше«Ьотса ъчеге ейк(епс оп1у ъчЬеп «Ье ше8аргнпег ъчаа ри«16|ед Ъу ро!уасгу1ашЫе 8е! е1ессгорЬогеж сгош сЬе геаЫиа! о118опис1ео«Ыеа пает( со ргнпе сЬе 6|гас РСК (Капнпапп еС а1. 1989; О!еЬе! ап|1 8рпС« 1990). Рип6саСЫп ъчаз а 6тпе-сопаштнп8 ап|1 ъчеапютпе яер сп ап о«Ьегъчсае е!е8апс ргососо1. Кесепс1у, Ке ап«1 Маебюп (1997) Ьаче т)ече1- орет! а ше8аргнпег п|ейос1 тЬас Ьаа сЬе нпрогсапс ат)чапса8е о( пос гет)и(т!п8 рипбса6оп от" 13ХА Ьесъчееп сЬе съчо гонит)ь от" РСК.
ТЬе шейот! пав тогъчагт! апг! гечегье ехсегпа1 рг(шега ит(«Ь я8шбсап«1у г(1«уегепс ше!ссп8 сетпрегасигея А ше8арпгпег !а туп«Ьеастет) |п йе 6|гас атпр1|- 6са«юп геасбоп ияп8 а пшСа8епк рпшег, ап ех«егпа! ргнпег ъчКЬ а!оъч Т, апг) а 1оъч аппеа1- |п8 сеп|регашге. ТЬе зесопт! РСК (а регтотшег) |п «Ье ааше сиЬе аа йе 6|гас ап|1 и61!геа йе ше8арптпег ргот!исет) !п сЬе 6|гас геассюп, ап ехсегпа1 ргнпег ъчнЬ а Ь!8Ь Т, апт( ап аппеа11п8 сетпрегашге (иана!!у 72 С) Ь|8Ь епои8Ь со ргечепс рт)пип8 Ъу сЬе геьи4иа! 1оъч Т ргнпег.
ТЬе ачега8е ши«а8епеяа ейк|епсу от" СЬыпе«Ьот) (а )809о (Ке ап|1 Матссюп 1997). Сатебт! т)ея8п от !3)ъ)А ргппега са еяеп6а1 тот асИечш8 гарЫ ап6 ИКИу е«6|с)епс пшса8епеяа ияп8 «Ь(а РСК-Ъаает! Ргососо1. Орснпа!, йогс ехсегпа! Рптпега аге и|шаПу 13-16 Ъааеа!оп8 13.31 13.32 СЬаргег 13! МигаКепеггг 5' 3 з | Пс — — еРСН ! (депега!)оп о! пседарг)гпег) о~адар!)гпег 5' 5' 3' !егор)асе 5' 3' 3' пседаоп пег 5' 3' сегпр)асе 3' 5' | ехсепвоп о! пседарпгпег ~ — — Р2 3' 5' гписап! ггадгпепсв 3' ~1 5' | ргегегепиа) агар))!)оас)оп о! гпосап! сепср)а!ее ~ 52 3' 5' чгаб-суре !гад пепси 3' и! ~ 5' Е!СС)КЕ 13-3 ТЬе Менар!!псег МеСЬог) апг1 сурка11у роееея а са1сц1асег) Т Ъесиееп 42'С апг( 46'С.
ТЬе Т (гп 'С) оЕ о!!Копцс1еос!сне ргппега сап Ъе еес!псасег( цяпд йе есапг(агг( Еогисц1ая Т = 4(С+С) + 2(АЕТ) счЬеге (С+С) ге сЬе япп оЕ б апс) С геядцеа !и сЬе о1!Копцс1еосЫе апг1 (А-гТ) !3 сЬе яип оЕ сЬе А апг1 Т гее!с1цеа !и сЬе о!фопцс1еосЫе. ог Т = 81.5+ 16.6 !паса ()х)а+] + 0.41 (%[С+С]) — (675)п) — (% ппяпассЬ) счЬеге и ге сЬе 1епК)Ь оЕ йе рпгпег си Ъааея ТЬе Есгас Еоггпц!а ге арргорпасе Еог 3Ьогс о!!Коицс1еосЫея счЬегеаа сЬе еесопс) Еоппц1а ге цаег) чч!сЬ 1опаег Е))х)А. ТЬе исцсадеи!с о!(допцс1еосЫе 5Ьоц16 а(ео Ье г(еа!Кпег( со Ьаче а 1ои езсппасег( Т апг( а 1епасЬ оЕ 16 — 25 Ьааея ТЬе г(еа!гег( псцсас(оп, апг! сЬегеЕоге сЬе пс!япассЬег( геК!оп оЕ гЬе рг(исеггсеиср1асе г(цр1ех, 3Ьоц16 Ье 1осасес1 !и сЬе пскЫ1е оЕ йе рппсег сч!сЬ 8 — 10 Ьааее оЕ соггесс1у (А) РСК 1 ге реиоггпег) ией а псцгадепк согъчагг! ргппег (М) апг) а гечегае ргппег (К1 ) Со депегаге апг) апсрйу а г(оцЫе-есгапг)ег) гпеКарпгпег (г Кои п )п со!ог), (В) )и СЬе 6гег сус!е(3) о! РСК 2, СЬе гпеаарпгпег Еоггпег) !п РСК 1 ге ехгепг1ег! оп йе опК)па! Сегпр)аге.
)п СЬе ецЬьег)цепг сус!ея иЬ)сЬ цее Еогъчагг) апг( гечегье рпгпегь Г2 апг! К2, йе г(ее)гег) псцгапга аге Ецгйег агар!)Е)ег(. (Мог))Е)ег), члй регги)53)оп, !гоги Со!оа)гпо е! а!. 1999.) Ртососо! 5: КарЫ апс1 Ефс(епс 5(се-тЕ(тес!ее! Мисаеепет(т Ьу сИе 5тпе!е-сиЬе Мееарт(тает РСК МесИотЕ 13.33 тпа(сЬе6 вес(пепсех оп еасЬ ябе оГ йе т(япа(сЬе6 ге61оп.
ТАсЬеп ияпп Тат( 13ХА ро!угпегаае, счЬ(сЬ роааеааех а сегпппа1 сгапаЕегаае-11Ье асссч(су 1Ьас аоспейпех 1псогрогасех ап ппсеспр1асед дА геядие а1 сЬе 3' епд оГ1Ье агпр!16ед гпецарпспег, 1Ье пшсацепк ргппег са беяппед ао сЬас 1са Вгас 5' пцс1еос16е Г011осча а Т геяйпе 1п сЬе аагпе ксгапс1 оЕ сЬе сеспр!асе аес(пепсе. ТЬе 1опцег оГ йе ссчо Г(апЬ(пд рптпегх хЬоц16 Ье беядпед со соп1асп 25 — 30 Ьааеь ап6 роааеах а са1сп1асе6 Т Ье1счееп 72'С ап6 85'С. ТЬ|а ргососо1 счав 1606!у ргоч16е6 Ъу Ед Маб(хоп апс1 Вопи Ке оГ Соучае 1пс., Вап ГС(е60, Са1сТогп(а. МАТЕК!Асй СА(4Т1ОЫ: Р1еаае аее Аррепб!х 12 Еог аррторпа1е Ьап611пе оЕ пса1еиаса спас!сед счп1Ь <! >. ВНГГеу5 апс! йо!обоп5 Рсеаае атее Аррепбсх 1 Еог сопсропепса оЕ асосЬ ао(иссопа, Ьи(Гога, ап6 геадепся 01!псе асос!с ао1011опа со ЕЬе арргорпа1е сопсепсгапопя 10х АтрИВссапоп ЬиЕЕет сЕАЕТР хо!и!(оп спаса(п(пВ аП Еоиг 61 1ТРь, еасИ а1 а 2.5 гпм Епкупсе5 апс! ВНГГет5 ТИегтоь(аЫе РА(А ро1утегаье (Нос-ТиЬ РАЕА Ро!утегахе ЕАтегхИат1 ог ее!ива!еп11 Мохс сЪегшоьсаЫе РНА росушсгахст ате тпрр!сед (и а хсога5е Ъийег сопсаспспц 50чтч 51усего1.
ТЪЬ ко!ос(оп ь чету часоы атис ь са(6спсс со рсрессе ассигасе1у. ТЪе Ъесс хатпр1(п5 тпесЪо6 ы со сепсий5е сЬе шЪе сопсаспспд сЪе сптутпс ас псахппшп трес6 Еос 10 сссопбх ас 4'С сп а постойче аи6 йеп со счссЬ6та~ч йе тес(ште6 агпоипс оЕ ептутпе их!ад а рос!с!те-6(кр!асешепс рсрепе. Бье ашотпабс рсрес6пц иечссеь ес(шррес$ п(сЪ Ъагпег барс со аяеп1Ые йе сошропепсх оЕ РСКя Се!5 АВагозе Ве( (1Уч1 ог ро!уасгу1ат(6е Ве( соп1атспВ 0.5 !снап( еСИ(6(ит Ьготсде <1> Р1еахе атее 5сер 6. (х(пс!е!с Асн!5 апс! О!коппс!еобс!е5 Рптегх Ргяо1че сЪе Еогсчагб апс( гсчсгхе ехсстпа! ргстпегс си Н,О ас а сопсепстасюп оЕ ! 00 рм ( 1 00 рпю!ет!К!1.
Рсяо1че йе пшсацепсс рптпсг сп Н О ас а сопсепстасюп оЕ 10 пм (10 риси!ее/Сс1Ь Тетр!а1е ЕС11А 5црсгЪе1ка!, доиЫе-ьсгап6е6 р! ахшЫ РНА, рпгсуте6 Ъу есЫсбшп ЪсопсЫе — СхС! 6епясу ега6(епс сеисийца6оп (СЬарсег с, Ргососо1 10 ог с 11 ог сЪготпасоцтарЪу оп а Осадеп теми (СЪарсег с, Ргососо! 9Ь Раю1че сЪе сетпр1асс РНА сп ТЕ (РН 8,01 ас а сопсепсга6оп оЕ 0.1 06(ш!. прес!а! Ес!псрпсепЕ Вагпег С(рх Еог аисота6с тпссгорсрепех М(сгоуиВе сиЬеь (5 т!, СИ(п-игаl!е6 Еог атрИВсса6оп) Рос(1(че-бар!асетепС р(ре11е ТИегта1 сус1ег ртоВтаттесЕ счссИ деяте6 атр!ЕЕсса6оп ртососо( ЕЕ йе сЪегша! сус1сг Ь пос сг(шрре6 часЬ а Исатель 1Ы, псе еЬЬег шгпсга! о(1 ог рагаЕ6п пах со ргечепс ечарогабоп оЕ!(сртЫ Егопг йе гсассюп пихсиге дитспд РСК.
Ас!Йбопа! КеадепЕ5 5сер 6 оЕ сИ(х ргососо! тес(и(тех ЕИе геаВепсх Васесс и СИарсег 1, Ргососо! 7 7 ог 19. Ртотоео! 5: Яарсг! апг! ЕЯисепт ассе-йгеегей Мптадепеггг Ьу сЬе Етфе-сиЪе Меулртгпсет РСВ МегЬоЫ 13.35 б. Апа!ухе 5отй ог сЬе аесопс1 аспр116сасюп геассюп оп ап ааагоае ог ро!уасгу!апсЫе ае! апс1 еьс!псасе сЬе сопсепсгасюп ог агпр1111ег! сагпес г11!А. 11 геаспссюп а!сеа сеете р1асесС ш сЬе геонепееа ну сЬе ехсегпа! рпгпегя й8евс йе ашр!!11ег$11ЬСА тч!сЬ сЬе арргорпасе епкушеа апгС сЬеп шЬс! опе сс гпсо ап арргорпасе геесог.
Ассегпас!ге!у, рЬоя рЬогу!асе сЬе агпр1!бег! гсЬСА гга8шепс агою 5сер 5 апо йеп 1с8асе !с спсо а гессог йас Ьаа Ьееп йеамегс нисЬ а геаспебоп епкуше йас у!е!оа Ышсс епгСя Вееанае сЬЬ шесЬо0 у!е1сЬ пшсапь сг!сЬ ап еубссепсу о! -80и , Ь Ь 8епега!1у пеееяагу со ае1есс оп1у ях со!ошес уог усЬСА аеонепс!п8 со чег!гу сЬе ргеьепее оГ йе оеа!гес! шнсас!оп!а) апд со еопбпп йе аЬаепсе ос апу асЫссюпа! пнпаСют т йе еноте ргодиес ЕЧГА зеоиепее, Рго1осо! 6 Я1е-ьресшс Ми1ацепеыь оу Очепар Ех1емюп ОС|К РК|М885 ЛК8 |Ч8СОСО тО |Г|тКООС|СС Л яте-8РЕС|НС МС|тЛтЮя Ьу очег1ар ехСепяоп (р1еаае аее р18цге ! 3-4) !Н18цсЬ! ес а1.
1988; Но ес а1. 1989). Опе рап оЕ рг!шега Ь псе|1 со ашрЬЕу сЬе )3ХА |Ьас сопсаспа сЬе пшсабоп ясе со8ейег ъчЬЬ црасгеаш аег)цепсея ТЬе Еогсчагд рпгпег (РМ) сопса!па |Ье шцса6оп!я) со Ъе !псгодцсед шсо йе чд)д-суре сешр)асе Е)Ь)А, счЬегеаа сЬе гечегае ргнпег г|2 сопса)па а г61д-суре ке|!цепсе. Мапу шче|68асогз шс1цде а геасг|ебоп ясе !п сЬе 5' ге8)оп оЕ рпгпег ! со Еас|16асе ацЬс1оп)п8 оЕ йе шцсасед ае8псепс оЕ Е)ХА. ТЬе аесопд ра|г оЕ ргппегк Ь сьед со а|пр1|Еу йе 13Ь)А |Ьас сопсаша сЬе пппасюп ясе со8есЬег |чЬЬ досчпасгеаш вес)цепсея ТЬе гечегае рпгпег (КМ) оЕ сЬ!а ра|г сопса!па йе гпша6оп!а) со Ье шсгодцсед шсо йе сешр1асе 13Ь)А. Ас 1еазс 15 Ьазеа оЕ ргцпег КМ аЬоц1д Ье ехасс1у сошр1ешепсагу со ргцпег РМ. ТЬе Еогтчагд ргцпег (Р2) Ьаз а |ч!1д-суре аес)цепсе ап|1 гпау, !Е деягед, Ьаче а геа|пссюп ясе !п |ь 5' ге8)оп.
ТЬе ссчо аеь оЕ рг!шега аге цыед ш стчо аерагасе ашр1!Егсас)оп геассюпа со ашр)1Еу очег1арр|п8 Е)ХА Ега8шепь (геасс!опа 1 апд 2 оЕ р!8цге 13-4). ТЬе гпцсассоп(з) оЕ цпегеас ь 1осасед |п йе ге81оп оЕ очейар апд йегеЕоге !п ЬосЬ веса оЕ геял16п8 ашр116ед Ега8шепся ТЬе очег1арр|п8 Ега8шепь (геац1с!п8 Егогп |Ье Вгас апд аесопд гоцпда оЕ ашр1!Всабоп) аге пцхед, депасцгед, апд аппеа1ед со 8епегасе Ьесегодцр1ехек сЬас сап Ъе ехсепдед апд, !п а сЬдгд РСЕ (геассюп 3), ашр116ед шсо а Ец!1-1еп8|Ь 13Ь)А |ып8 ссчо рпп|ега |Ьас Ь!пд со |Ье ехсгешеа оЕ |Ье ьчо 1пЬНа1 Ега8шепся ТЬе шейод ь югргсяп81у еЕЕес6че, Ъцс Ь гег!ц)геа ссчо пшса8еп|е ргцпегя ссчо йапРдп8 о118опцс1еос!дея апд |Ьгее РСВА со сопасгцсс а пшсабоп. Еп |юше са|ея а яшр1ег чегаюп оЕ сЬе гпесЬод сап Ье цаед Еопе шцса8еп!с ргцпег ап|1 ссчо аег!цепс!а! РСйх) !Е асгасе81са1!у р!асед геяпс6оп ясен аге ача11аЫе со с1опе |Ье |е8шепс оЕ агпр1!дед Е|ЬСА сопса)п!п8 сЬе |пшасюп (А)уаг ес а1.
1996). МАТЕЙ!АЕЬ САСЗТ!ОЬ!| Р1еаае аее Аррепд!х 12 Еог арргорпасе Ьапд1!п8 оЕ п|а|епа1а |паг!сед |ч!СЬ <! >. Вс|ЕЕег8 апс! Ьо!с|11оп8 Р1еаае аее Аррепд!х 1 Еог сотропепЬ оЕ а!ос!г ао)ц6опя ЬиЕЕегя апд геа8еп|я 01!цге а!ос)с аосцС!опа Со йе арргорг!а|е еопсеп|га6опя 10х Атр)!Е!еагюп ЬцЕЕег 611ТР ю!цг!оп сопгасйп8 аП Еоиг дЛ|ТРя еас 8 аг 20 гпМ 13.3б Рготосо/ б: 5/те-грег//тс МитаКепезтз Ьу Очег/ар Ехтепз|оп 13.37 5' з з Сегпр|ате Отта 5' Оеиасиге апи аииеа| ришегз а — Сг 3' 5' ГМ 3' 5' 5' 3' ЯМ 5' 3' пг — з г 5' 3' 3' 5 5' 3 3' 5' 5' 3' 3' 5' Г1СС)КЕ 13-4 5!те-с/!гестег[ Мота епез!5 Ьу Очег!ар Ехтепзюп 1п зерагате ашрИ|сатюиз, 1 апг) 2, Ьчо тгацтеитз о/ йе тасует депе аге ашрИ|ед.
РСК 1 итйгез ргииегз ГМ апс[ К2, счЬегеаз РСК 2 ип!сеез рптегз КМ апс) Г2. ТЬе Ьохес) рогпоп о( йе /!риге гергезеитз йе !птегшес[!ате Пера СЬат аге !|[се!у Со оссиг т/иг|пц СЬе соигзе от' РСК 3, |и юЫсЬ с/епатигег/ ГМК 2 аист Кму 2 апиеа! ат йе геК)оп от очег!ар аге ехтеит/ет( аз зЬоччи Ьу сЬе с/азЬет) Кпез со (огт (и!1-!епдСЬ т/оиЫе-а!таис[ее/ тиСапт Р|4А. !п РСК 4, СЬе /и!1-!епКСЬ гпитапС Р)з/А !3 агпр!!/!ес) из!пц рппсегз К2 аист Г2. (Мойбед, гМСЬ реггп!зз!ои, /гопс Но ет а!. 1989 [©Е!зеч!ег 5с|епсе).) Се!5 Алагезе де/ (1%) ог ро/уасгу/ат/г/е де/ сои!а/и/лК ().3 РК/т/ етЬ!с//ит Ьгот/с/е < ! > Р!еазе зее 5Серз 6 апгт 11. Епкугпе5 апт$ Впбеу5 ТЬегтозтаЫе Р/з/А рп/утегазе То ачога сЬе [псгостиесюп о/ епопеоы Ьазез, тие а ЫВЫу ргосезяче йегспозсаЫе Р)4А ро1угпегазе гчтсЬ 3'-5' ехопис1еазе "ргоо/геайп5" сарастсу ш очег!ар ехсепяоп шисазепеяз. 1п аййстоп, йе РВА ро!упсегазе изет[ пшзс пос саса!уге сЬе попсешр1асе адйсюп о/ агтепше гез|гтиез.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
