Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 170
Текст из файла (страница 170)
Ргогосо! 7: 5сгеетпц КесогпЬтапг С!опт Тог 5!ге-г)!гесгег) Мигаеепеж )3.41 МАТЕК!А$5 СА1)Т1ОМ: Р1еаае бее Аррелспх 12 Гог арргорпа1е Ьалд!1ле о! гла1епа18 глаг1еед чч11Ь <! >, ВогГегб апд 501обопб Р1еаае аее Аррелспх 1 1ог согпролел18 о! 81осЬ ао!ипола, Ь011ега, алд геаеел18. сг1101е агосЬ ао!06ола 1о 1Ье арргорпа1е солсел1гапола. Аттопгит Гогта1е Г0.2 ае) <! > О!!Вилис!ео1Ые ЬуЬгГи!еа6оп ьо!06оп бх 55С 5х Г)елЬагдра геа8епг 10а го 10' браг/гл! гаг)101аЬе!еб о118ооис!еобг)е О!!еопис!еог!6е ргеЬуЬг!йгапоп зоlипоп бх 85С 5х РелЬагбра геабеог 0.158 ГМч) Юб бх 55С бх ВВС аЬоо)б Ье юаглаее) го чаг1оаа геглрегагагеа.
Р! еаае аее бгера 11, 12, аоб 13. ТЕ ГрН 7.6) Епкугпеб апс1 Войегб Васгег!орЬаее Т4 ро!упис!ео66е Ыпабе Йебгг)споп епяутеь Р1еаае аее бгера 18 алб 19. Се18 Ргерагагсое аВагоье Ве! Р1еаае аее бгер 18. !х)ос!е1с АспЬ апс1 О11еопос1ео11с1еб Мигаееп!с о!!Вопис!ео1Ые 110 рто!еа)1г!) Кайоас6че Со1проопс15 !РааР)АТР Г>5000 С!)ттоlе, 10 тСГ)т!) <1> Мейа 2х УТ гор аеаг апс) уТ аВаг р1а1еа орес1а! Ецшргпеп$ Еогсерь, о!ипг-епг)ес) Ге.В., М!!!!роге госсет) Нурог)егт!с пеег)!е Г) В еаиее) апг) !пг)!а !пЙ Горбопа!) !псиЬа1ог ргеьег Го 65оС, Гог ргеЬуЬгЫ!ха!гоп !псиЬа1ог ргеьег 1о арргорпаге ЬуЬгийга6оп ГетрегаГиге Р1еаае аее логе го бгер 7. Мггосе!)и!оке ог пу!оп В!!его 1хасиит очеп Ргогосо! 7г 5сгеептд ЯесотЬгпапг С!оггев)ог 5гуе-д)гесгед Мигачепевгв 1343 шаго8гаш со дече1ор ип61 гЬе во1чеп! Егоп! Ьав пщгасед а!гпов! со йе сор оЕ йе Ьеа1сег.
с. ЪЪггар !Ье ппр оЕ 13Е-81 рарег 1и 5агап ЪЪггар апд виЬ)ес! Ь со а негу ЬпеЕ репод оЕ аигогайо8гарЬу. 1)ве гЬе дече1орес1 Х-гау 61ш ав а Пшде го си! ои! йе гайоасдче ге81оп а! 1Ье во1чеп! Егопг, йе ог181п, апг1 апу ойег ге81оп йа! сои!а)пв гайоасдчду.
Меавше !Ье ашоип! оЕ гайоасй Ьу ш еасЬ весдоп 1и а вс)пППа!юп соипгег. 0118опис1еогЫев гегоаш аг гЬе ог181п, чгЬегеав АТР апд гпог8ап1с РЬоврЬаге пп8гаге 1п гЬе вагпе гагесгюп ав гЬе во!чепс. 1пог8апк РЬоврЬаге пп8гагев в!18Ь11у ЬеЬгпд гЬе во1чепг !гоп!, вчЬегеав АТР Ь арргохппаге1у еоиЫ1вгапг Егош гЬе опрп апд гЬе 1пог8апк РЬоврЬаге. ТЬив, ггапвуег оу РЬоврЬаге Ьогп !у>ир)АТР го гЬе о68опис1еогЫе геви1ь гп гЬе арреагапсе оЕ гагПоасгМгу ас гЬе оп8ш. Са1си!аге гЬе врес10с асдчггу оу гЬе гаг1ю1аЬе1ег1 ргоЬе !гого гЬе гпо!аг опапг111ев оЕ о118опис!еогЫе, гЬе вресупк асдчау оЕ гас !ув'Р) АТР гп гЬе геасгюп, апд гЬе еубгс)епсу о! ггапвЬи о! гЬе 1аЬе1 го гЬе о118оппс1еог1де. >509о оЕ гае гайоасдчггу гп гЬе геасдап пах!иге !5гер 1) вЬои!д Ье ггапвуеггег1 го гЬе о118опис!еогЫе. 4.
10рбопа!) Кешоче шшкогрогагег1 гайо!аЬе1 Егоги гЬе о68опис1еоггде Ьу ргесгрпадои хч!ЪЬ сегу1рупйпгиш Ьгопиде ав девспЬед ш СЬар!ег 10, Ргососо! 4. ТЫв вгер Ь песеяагу оп! у вчЬеп Ьас1г8гоипд ЬуЬпйхадоп Ь а регявгепг ргоЫеш. Ъгпдег поппа! сггсшпвгапсев, йе ипугасдопагед геасгюп ппхгоге пгау Ье ивег! ав а ргоЬе. 6сгееп1пд оЕ ВасЕег1орЬаде М13 Р!ацпеь 5. Ргераге гер!кав оЕ йе ЬасгепорЬаце М13 р!аг)иев гЬа! аге го Ье всгеепед чл!Ь йе гайо1аЬе!ед о68опис1еопде ав ЕоПовчв: а. ТгапвЕег р1агев сои!а)шп8 100 — 500 р1ас)иев !о 4 С Еог аг !еавг 30 ш)пи!ев.
!пс1иде аг 1еавг опе р1аге йаг сопгашв р!аг!иев оЕ йе ох!8!па! чд!д-гуре гесогпЬ1папг ЪасгепорЬа8е М ! 3. ТЬгв р1аге вегчев ав а пе8адче сопгго1 гп гЬе ЬуЬгЫ1хагюп апг! кавЬш8 веера. Ь. ЪЪгЬеп гЬе р1а!ев аге !Ьогои8Ыу сЬгПед, гешоче йегп 6огп !Ье со1д гооги апс1 пшпейаге1у 1ау а пшпЬегед, дгу ппгосеПи!ове ог пу1оп 6Ьег оп гЬе а8аг вигЕасе оЕ еасЬ р!аге. Уве ап 18-цаи8е Ьуродегпис пее<Пе го гпа1се а вепев оЕ Ьо!ев 1и еасЬ 6Ьег апс1 йе ипдег!уш8 а8аг. ТЬеве Ьо1ев илП !агег вегче !о 1сеу йе 66егв го йе р!агев. То гпа1ге ап шдеПЫе враг, гПР йе пеед1е Ы а яоа11 агпоипс о!1пйа 1п1г Ьеуоге вгаЬЫп8 гЬе 61гег.
с. Айег 30 весопдв со 4 пдпшев, иве Ыипг-епдед Еогсерв со рее! еасЬ 6Пег сагеуиПу Егош 1!в р!асе. 5ргеаг1 огп аП оЕ йе 6Пегв (р1аг)ие яде ир) оп а рад оЕ рарег говне!в. ЪЪггар !Ье р!агев ги 5агап ЪЪггар, апд вгоге йеш ас 4 С ип61 гЬеу аге пеедег!. д. ЪЪгЬеп гЬе 61гегв Ьаче дпед 1-30 пипи!ее а! гоогп гешрегагиге), ЬаЬе гЬет Еог 1 Ьоиг аг 80 С ш а часииш очеп. 1г 1в пос песеввагу го депашге гЬе Р1>А Ьу Ьаве ггеаппепг вчЬеп всгееп1п8 ЬасгепорЬа8е М13 р1аг!иев Ьесаые гЬе ЬаЫп8 яер ге1еавев гЬе в1п81е-вггапдед 1!г!А !тоги гЬе ч1гив. 6.
ТгапвЕег аП оЕ !Ье 6!сегв со а Ьеаг-веа1аЫе р!авгк Ьа8 (е.8., 5еагв 5еа!-А-Меа!), ог со ап ечарогадп8 йвЬ оЕ !Ье арргорпа!е йагпегег, ог го а ЬуЬпйаапоп гоПег Ьогг!е. Адд о68опис!еобде ргеЬуЬпйха!юп во!и!юп (-1О гп!г82-ппп 6Ьег ш Ьа8в ог д)вЬев; 5 ш!/82-шш 61- !ег 1и Ьои1ев). 5еа! гЬе Ьа8, сочег !Ье ечарогадп8 д!вЬ чг!ГЬ 5агап ЪЪгар, ог сар гЬе гоПег Ьов11е, апд гпсиЬаге йе 61гегв Еог 1 — 2 Ьоигв а! 65'С. 13.44 СЬарсег 13: МисаКепеаса 131асагь! ЕЬе ргеЬуЬгЫгхабоп ао!и6оп, апг! гер1асе и иисЬ о!1аоппс!еоссде ЬуЬпйга6оп ао!и6оп (-5 ш1)82-ппп 6!сег). Кеаеа! ЕЬе ЬаК, гесочег сЬе ечарогасспК йаЬ, ог гесар сЬе ЬуЬпйха6оп гоПег Ьосс1е, апс1 шсиЬасе сЬе ЬуЬпйха6оп геас6оп Еог А-б Ьоига ас йе арргорпаге сешрегагиге.
регсопп ЬуЬгЫ!хасюп члй йе гаг)со!аЬе!ед о11цопис!еосЫе ас а сеигрегасше 5 — 10'С Ье!оьч ЕЬе Т еасипасегС Егош сЬе Ео!!оъч)пц Еоипи1а: 7' = 41С-~-С) -|- 2ЕАяТ). ъчЬеге !С+С) ы сЬе ашп оЕ С апг1 С геяг1иеа ш сЬе о!фопис!еогЫе, апгс иЬеге !АеТ) ь гбе аииь оЕ сЬе А апъс Т геаЫиеь си йе о!сдопис1еосЫе. Ас йе епс1 оЕ йе ЬуЪпйха6оп репог1, с!шсИу сгапауег йе 6!сега со а сгау сопсашшц 200-300 ш! оЕ бх 55С ас гоосп сешрегасиге.
Сочег сЬе сгау ипсЬ 5агап ъъггар, апг) р!асе К оп а соса!!пц аЬа)сег Еог 15 пипшея Кер!асе сЬе ъчазЫпц 6иЫ ечегу 5 пиписея МеапъчЬ1!е, сгапаЕег сЬе геша)пс!ег оЕ сЬе гайоас6че ЬуЬпйха6оп ю1ийоп Егогп сЬе Ьац, йзЬ, ог го)1ег Ъоя1е со а йвроааЫе р1аабс сиЪе. С1оае сЬе сиЬе с)КЬс!у, апг1 а!иге йе гайоасбче ю1и6оп ас — 20 С ип61 К !а пеес!ег) Еог геасгеегбпц роя6че р1ас)иеа (5сер 13). ЬаЪе! апг1 яоге сЬе шЪе арргорпасе1у. Сошраге сЬе раиегп оЕ ЬуЪпйха6оп ъч)сЬ йе йяпЬисюп оЕ р1агрлея Ас сЬ1а асаКе, Ес 1а пог- гпа! со 6пг! ЕЬас ч)гша1!у ечегу р1ас)пе ЬуЬпйгеа со сЬе ргоЬе.
Турка1!у, Ьоъчечег, югпе р1аг!иеа ЬуЬпйхе псоге асгопц1у сЬап осЬегя апс! сЬеае ойеп сиги оис со Ье сЬе р!ас)иеа саг- гушд йе г)еягег! шшасюп, 10. Тгапауег СЬе 61сега со а р!аа6с Ьох сои!а)п)пц 100 — 200 ш! оЕ бх 55С йас Ьаь Ьееп счагшег) со 10"С Ье!оъч сЬе Т . Аусасе сЬе 61сега Еп сЬе ю!и6оп Еог 2 ш!посев (р!еаае атее посе Ье1оьч), апс! йеп Сгапауег СЬеш Со а рсесе оЕ 5агап ъъггар аа с)еасг)Ьег! !п 5Сер 9. Еагаы)аЬ апосЬег аисогайоКгарЬ. Ас сЬса а!аде, К Еа ойеп роаа)Ые со !г!епс)Еу съчо суреа оЕ р1аг!иея сЬоае ъчЬоае гайоас6че яапа! Ьаа г)есгеааег) ш шсепясу апг1 сЬоае сЬас аЬоъч по сЬапце )п спсепясу.
1!а аЬогс о1фопис!еосЫе ргоЬе 1<20 Ьааеь) Ы шее, до пос ъчааЬ йе 61сегь Еог пюге йап 2 иипнгеь аг СО'О Ье1оъч гЬе Т . ОгЬегълъе, гЬе регуесг ЬуЬгЫь ЕоггпеА Ьепчееп гЬе габиоаебче о!)чопги с!еосЫе апгС йе шигацеп)аег) сагаес аег)иепсе шау йыоссасе. Ьоиаег о1фопис1еогЫе ргоЬеа ге9шге июге ехсепяче ъчааЫпц сипеа ъчЫсЬ ишас Ье еагаЫЬЬегс епъргпса11у. ТЬь орсипЬабоп сап Ье г)опе ияпа а ЬапА-Ье1А иипгпюшсог апг) 11асепша Еог а г)есгеаае ш сЬе спсепясу оЕ сЬе гайоаобче яапа! аа ъчааЫпа ргосеег)а. Кереас йе сус1еа оЕ ъчааЬ)пц апс! аисогайоцгарЬу, Епсгеаяпд сЬе сегпрегасиге оЕ йе счааЬ- !пц ао1ис)оп Ьу 2-10'С сп еасЬ сус1е. ТЬе аип Ы со 6пг) а сешрегасиге йас с)оеа пос шаг)сес)- 1у айесс регЕесс ЬуЪг!с)ь Ьис саиаеа йааос)асюп оЕ шсяпассЬео ЬуЬгсоа (юсЬ аа сЬоае Еогшег) Ьесъчееп йе шисацепк о!фопис!еос!г!е апг) йе ог!К!па! ии1о-суре аес)иепсе).
ЪссЬ ргасбсе, Ь Ь роаяЫе со е11пипасе юше оЕ сЬе сус!еа оЕ ъчааЬшц апг) аисогаг)соагарЬу Ъу асапп1пд сЛе 61сегь аусег еасЬ ъчааЬ и ЬЬ а Ьапъ)-Ье!д иипипошсог. Ас йе епг) оЕ сЬе ъчааЬ)пц репой, ъ)и)сИу сгапауег сЬе 6!сега со а р)есе оЕ 5агап ъъггар аггеСсЬег! оп СЬе ЬепсЬ. Сочег СЬе 61Сега ииСЬ апоСЬег р)есе оЕ 5агап с'ъЕгар. Ро!д СЬе ефеа оЕ сЬе съчо р)есеа оЕ 5агап ъАггар соуесЬег со Еопп а с)КЬс аеа1. Арр1у аг)Ьеяче г!ос 1аЬе1а шаг)сег! ъч!ЕЬ гайоас6че ог сЬеш!!иш)пеасепс !п)г со йе опсаЫе оЕ йе рас)сне, апг) цепегасе ап аисогайоцгарЬ Ъу ехроа!пц йе рас)саде оЕ 61сега со Х-гау 61ш 1ог 1 — 2 Ьоига ас — 70 С, ияпд ап 1псепяуу)пд асгееп Ер!еаае аее Аррепйх 9). ~ 1МРОКТАМТ 13о поС аПои СЬе й!Сега Со г)гу оп СЬе 5агап ЧЧгар.
Рготосо!7: Бстеепт8 Ртесот(ттпттпт С(опеллог рте-т(ттестет)Миттт8епелтт 1ЗА5 Рот!1!са(1оп о1 Ро81т1че Р!аооеь Роятгче1у ЬуЬт(с(!т(п8 р!ас)иеа иаиа11у сопта(п а ппхтиге от" Ьой ппиапт апс( чч!1д-туре лес)иепсея !т (а йеге!оге еыепйа1 то р1ат!ие-рит)ту тЬе Ьастег(орЬа8еа ггош роя6че!у ЬуЪтЫ!х!п8 р1ас)иев аь то!!олчя а. ТоисЬ тЬе Ыипт епс1 от а яеп1е, с)1ьроааЫе лчоот!еп тоотЬрк1с то тЬе ьшрасе от' а роя6че!у ЬуЪт!6!г!пц р1аиие. Ь.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
