Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 169
Текст из файла (страница 169)
ТЬеппояаЫе РтзА ро1ушегазез тч!сЬ йе арргорпасе ргорегиез тпс1игте Ргчо Р)4А ро1ушегазе (ВоеЬппзег МаппЬеип), гуй Р)4А ро1ушегазе ХЕ (РегИп-Е1гпег), таите РХА ро|угпегазе (1(етч Еи51аигт Вю!аЬз), аигт Р/и Рт(А ро!ушегазе (5сгаса5еие). Мтхез о( йегпюзсаЫе Р)з)А ро1ушегазез гтеязиест (ог изе сп 1опц РСК аге а1зо тче11 за!тест /ог очег!ар ехсепяоп пшса5епезгя 13.38 СЬаргег 13г Мигаеепеггг 1Чос!е!с Асн!5 апс! О!коппс!ео1!е!е5 О118опис1ео((де Ритегх ЕасЬ рпшег аЬои16 Ье 20 — 30 пис!еогЫеа ш 1епцгЬ апг( сопгаш арргохипаге!у едиа) пишЬега оЕ йе Еоиг Ьааея юпЬ а Ьа!апсег1 адяпЬшюп о( С апг) С геябиеа апг) а!огч ргорепа(гу со Еопп агаЫе аесопг(агу а!гас!иге. ТЬе аег)иепсеа о! йе шигацеп(с о1(цопис1еогЫе рг(шага рМ апг( КМ аЬоиЫ аЬаге аг 1еааг а ! 5- Ьр очег)ар (р!еаае аее Бциге 13-4), апо йе пияпагсЬег! Ьзхе ра(га чшгЫп гЬеае рг!гпега аЬои16 Ье 1осагег( гп гЬе сепгег о( гЬе 6115опис!еогЫе.
ТЬе ргипег аег)иепсеа аг гЬе 5' апг) 3' епг)х о( йе ОЛ)А Егаошепг го Ье агпр1гаег) ((.е., йоге МгЬ га!с$-гуре аедиепсеа К2, р2) сап гпсогрогаге ипгдие геаггкдоп епг(опис1еаае деачауе ягеа со аЫ ш йе шЬаедиепг с!оп!пК оЕ йе пшгадеп(хег! РХА ЕгаКшепг. рог цепега1 !еагигеа оЕ рпгпег г)еяоп, р!еаге аее йе йасыяоп оп Реядп о( О)(Копие!еогЫе рг!шага 1п гЬе (пггог)исгюп го СЬаргег 1О. О)15опис!еогЫе рг(шага аупйеягег( оп ап аигошагег( ОНА аупйеяхег сап сапега!!у Ье ыеб ш очег1ар ехгепяоп гпигацепеа(ылгЬоиг ЕиггЬег риг(йсагюп. Тетр1аге ЕЗХА ТЬе гегпр!аге ОЛ(А иаег( Еог шигацепеяа Ь гьиа!1у а р!аяпЫ ОЛ)А сопгаш(пц гЬе депе ог сО)4А оЕ (пгегевг. Огяо1че гЬе Е)Л)А аг ! иц/гп) гп 1О гпм ТпяС1 (рН 7.6) сои!а(пшд а 1ою сопсепггагюп о( ЕГ)ТА (<0.1 гпм). прес(а! Ее!о!репеп1 Вагг!ег дрх Еог аи(отадс ткгор)реоеа М!сгоуи8е гиЬех (0.5 т1, ГЬ(п-ччаИед Еог атр1!Е(са1(оп) ог Мкгодгег р1а(еа Рох!1!че-д(хр(асетеп( ргреое ТЬеггпа1 сус)ег рго8гаттед чч!ГЬ деягед атрИка((оп ргогосо1 1( гЬе гЬеппа! сус1ег ь пог еди(ррег( гч(гЬ а Ьеагег!!Ы, иае е(гЬег гпгпега! ог1 ог рага!Вш арчах го ргечепс ечарогагюп оЕ 1(ди(О Егогп гЬе геасдоп пихшге г(иг(пц РСК.
Ас!Й6опа! КеацепЬ 5(ер 7 7 оЕ ГЬ(х рго(осо) гедсдгех йе геа8еп(5 115(ед т СЬар(ег 7, Рго(осо( 77 ог 79. 5гер 72 оЕ (Ь(5 ргогосо! гедиггех (Ье геа8елга 1(агес( Еп СЬаргег 72, Ргогосо! 3, 4, ог 5. МЕТНОО 7. Е)еа(8п апд ауп!Ьеа(хе 01!Вопис1еодде рпшега РМ, КМ, К2, апд Р2 Ьааед оп йе )споигп аедиепсе оЕ йе Е)Л(А, ах ои!1шег1 ш йе ргогосо1 гпггодисдоп апд Ма!епа15 аесдоп. 2. 1п а агеп1е 0.5-ш1 писгоуиае ! 0Ье ог ашр176садоп гиЬе, хе! ир РСК 1 Ьу ш(х(пе !Ье ЕоПои(пе геа8еп! я гегпр1асе РЛА -100 по )ох агпр1гВсагюп Ьи((ег !оФ 20 шм пах!иге оЕ 6зиг г))4ТРа !.О 01 5 рм ргипег РМ (30 ршо!еа) 6.0 и) 5 иМ рпшег К2 (30 рпю!еа) 6.О )г! гЬегшоагаЫе ОНА ро1ушегаае 1 — 2 ип(ь Н,О Го 100 и! 3.
1п а аесопд агеп1е 0.5-ш! ш)сгоуи8е гиЬе ог агпр!76садоп !ОЬе, аес ир РСК 2 Ъу пах(п8 (Ье Ео!1оччша геаВеп(я !егор!аге ОЛ)А -!оо по 10х ашр110садоп Ьи((ег 10 и) 20 гпм пихгше оЕ Еонг 6ХТРа ! 0(г) 5 рм рпгпег КМ (30 рпю1еа) 6.0 р! 5 КМ рпшег Р2 (30 ршо!еа) 6.0 и) гЬегпгоагаЫе )3Л(А ро!угпегаае 1 — 2 шиь Н,О го !оои! Ртотосо! 6т 5!те-зрес(Етс Мисаеепез(т Ьу Очет!ар Ехтепз!оп 13.39 4. 1Е тЬе йегпюсус1ег т1оез пос Ьаче а Ьеасес)! Ы, очег1ау йе РСВз члсЬ 1 с)тор (-50 $$1) оЕ 1!8Ьс пппега! о!1. Р1асе сЬе тпЬез !и а йеппосус1ег.
5. АтпрНу сЬе пис!ек асЫз пяп8 йе депаспга6оп, аппеа!!п8, апс) ро1утпепта6оп сипез апс1 сетпрегаспгез 1!зсет) тп йе таЫе Ье1очч. ТЬезе 6исез ате зшсаЫе Еот $00-р1 теасссоиз аыеисЫес1 си сЫи-тчабес$0.5-ш! шЬез аис( $исиЬасес( Еи сЬепиа! сус1егз шсЬ аз йе Рет!Ки-Е1шет 9600 от 5700, Макет Сус!ет (Ерреис(от(), аис$ РТС $00 (М! КезеатсЬ). Таиез аи6 сетиретаситез сиау иеес( со Ье ас(арс- ес$ со зшс осЬег !урез оЕ ес(шршеис аид теасиои чосшиез. ТЬе (еи8$Ь оЕ йе ро1упсептаиои зсер зЬои(с( Ъе са(си(асе6 Етош сЬе ро1уптет(аасюи тасе оЕ сЬе сЬетиюзсаЫе ЕтЬЕА ро1утиетазе еитрсоуес1 аис$ йе (еи8$Ь оЕ сЬе $2ЫА сетир!асе со Ье аиср1сбей ТЬе септреташте оЕ тЬе аииеа((и8 теаспои шау Ьаче со Ье ас))изсес( дереийи8 ои йе зес(иеисе оЕ сЬе ишса8ешс рптиетз.
6. Апа1ухе 5% оЕ еасЬ оЕ йе тччо РСВз оп ап а8агозе ог ро1уасгу!атпЫе 8е! апс) еянпасе сЬе сопсепсга6оп оЕ атпр66ед саг8ес РХАз. 7. (Орйоиа1) РппЕу йе !что РСВ ргос)исса из!08 опе оЕ сЬе ргососо!з с(езспЬет) !и СЬарсег 5. 1пс1псбп8 сЬ(з рип6сасюп зсер ойеп !псгеазез йе у(е!6 оЕ тЬе с1еягес1 атпр!Тбсасюп ргос1исс !и 5сер 8 оЕ йе ргососо! апс1 гес1псез сЬе Ъас)с8гоппт) оЕ зрппопз атпр1!6са6оп ргойксз.
8. 1п а зсеп1е 0.5-гп! пт!сгобт8е сне ог атпр1$6сасюп спЪе, тп!х йе Е011очч!08 геа8епсз !и ап атпр1$6са6оп геасСсоп Со )о!и йе 5' апс)3' епт(з оЕ СЬе саг8ет Вепе: 9. 1Е сЬе тЬеппосус!ег с(оез пос Ьаче а Ьеасес1!Ы, очег!ау сЬе РСВз ъчЬЬ 1 с)гор (-50 $$1) оЕ 118Ьс пппега1 ос1. Р1асе сЬе спЪез сп а сЬеппосус1ег. 10. АтпрНу йе пис!ек асЫз ияп8 сЬе т1епаспга6оп, аппеа1сп8, апт1 ро1утпепта6оп 6гпез апс1 Сетпрегатпгез 1!зтет) аЬоче Ы 5тер 5. 11. Апа1уте 5% оЕ йе РСВ оп ап а8агозе ог ро!уасгу1апт!с(е асту1атпЫе Ве! апс( езСппаСе СЬе сопсепсгасюп оЕ агпр116тес) !агнес Р)ч(А. $Е тезспсиои еитутие ясез чтете р)асей ш сЬе зеоиеисез оЕ рпшетз Р2 аис$ К2, с68езс сЬе ашр((усев ЕзХА ъчКЬ сЬезе еитупсез аис$ сЬеи зиЬс(оие сЬети тисо аи аррторпасе честит.
А1сетиаИче!у, РЬозРЬоту1асе сЬе аитр66ед Ез(з$А Ета8шеис (тоти 5сер $0 аис$ сЬеи 1!Касс и сиса а честит с!сас Ьаз Ьееи с1еачес1 чбй а теяпсиои еитутие сЬас у(е(6з Ыиис еибз. 12. 'чтепЕу йе сотар!есе зес)пепсе оЕ сЬе атпр116ет( Еу(ч(А Егарпепс айег с1оп!п8 со епзпге йас по пшса6опз ойег йап йозе !п рптпегз РМ апс1 В)ч( счете !истое(псес( с1ипп8 сЬезе тпап!Рп1атюпз. АП РсзтА ро!ушетазез етЫЬсс а тиеазигаЫе еттот тасе зчЬеи изе6 ти $и чссто теист!опт. ашр1$6сасюи ртоссисс РСК ! (5сер 2) аиср!сскасюи ртос$исс РСК 2 (5сер 5) $0х атир(с6саиои Ьибет 5 рм рптиет Р2 (50 рию1ез) 5 рм рптиет К2 (30 ртио1ез) сЬегтиозсаЫе РЬЕА ро!ушетазе НО -50 и8 -50 и8 $0 тс! 0.0 и! $$.0 01 ! — 2 ишь со $00 р! 5сгееп~пц КесогпЬ~пап1 С!опеь аког Я1е-сйгес1ед Ми1ауепеыь Ьу Нуопйла6оп 1о Кайо!аое!ед О!~цопис!ео6деь 13.40 нотч Рхотосотз год яти-г||хгстео мг|тлсгтчеяз от япд!е-ягапдед ЬасгепорЬаде М!3 !3!ъ!А ъчеге |1ече!оред ш |Ье еат1у 1980з, депе6с |есЬпн!иез то зе1ест ада!пзг |Ье ъч11д-туре теп|- р1а|е з|гапд ъчеге по| ача!1аЫе.
Весаизе |Ье е16к|епсу от пш|адепеяз ъчаз оттеп !оъч, п|ейодз ъчеге ге|!шгет1 |о Ыепт!ту а япа11 пипог)ту от пш|апт р1ат)иез |п а депзе Ьас1сдгоип|1 от ъч!1д-туре р1ат!иез. Рог тпапу уеагя |Ье тесЬп)т!ие от" сЬо)се ъчаз зсгееп!пд от'р1ат!иез Ьу ЬуЪт)д!хат!оп, ияпд а гасдо1аЪе1ед ппиадепк о1|допис1ео|Ые аз а ргоЬе (е.д., р!еазе зее Хо!1ег апд дпигЬ !982, 1983). НуЬт!д)хатюп ъчаз сагпед ои| ипдег сопд!тюпз |Ьа| а1!оъчед йе гад)о1аЬе!ед о1!допис1еа|Ые |о аппеа1 то Ьо|Ь тпи|ап| апд ъч)!д-туре Р!ъ)Аз. ТЬе гея|16пд ЬуЬгЫ Ьеичееп |Ье гад)о1аЬе!ес1 пштадепк о11допис!еотЫе апд |Ье ъч!1д-туре зетр|епсе ъчои!д тЬегетоге сопта!и опе ог пюге пияпа|сЬед Ьазе ра|гз, ъчЬегеаз |Ье ЬуЬпд тотшед Ье|ъчееп |Ье пеъч1у сгеатед титапт апд |Ье о1|допис!ео|Ые ргоЬе ъчоиЫ Ъе регтесг!у шатсЬе|1.
ТЬе йеппа! з|аЬ|16у от" йезе тъчо |урез от" ЬуЬгЫз ъчои!д Ъе ехрестед |о дНег, ъч!|Ь пияпагсЬед ЬуЬпдз д!ззос)аг!пд ат а тетрегагиге 1оъчег |Ьап |Ьат от |Ье соггезропд)пд регтест ЬуЬгЫ. Ат йе 6тпе, Ьоъчечет, |Ье т)иапт)тат1че ейестз от" ш)з|пагсЬез оп |Ьеппа1 зтаЪ|!Ьу от о!1допис1еогЫе дир!ехез |чете пос ъче!! ипдегз|оо|1. 1| ъчаз оЬгдоиз |Ьат йе роябоп от' йе пияпа|сЬ, йе пшпЪег от ппяпа|сЬед Ьазез, йе 1епдй от' йе о11допис1ео|Ые, |Ье сопсепт от" С апд С гея|1иез, апд зес)иепсе соп|ех| ейесгз ъчоиЫ а11 1пйиепсе йе з|аЬ|!Ву от йе |п)япагсЬед ЬуЬгЫ.
Ви| и рточед д)йки1| |о ъчеаче йезе тасгогз ш|о ап ет!иа6оп йат ъчои!д зат!зту аП с)гсшпяапсез. 1п |Ье аЬзепсе от' а з|гопд ипдег!у)пд |Ьеоту, |Ье зиссезз от з!те-д)гесгед пш|адепеяз дерепде|1 оп |Ье аЬ~1иу от'|Ье тпчезттдагот со Вп|1 ап етпр)пса1 соп|- Ьтпабоп ог тешрега|иге апд юпк з|гепдй |Ьат саизед ппяпатсЬед ЬуЬпдз то д!ззос)ате Ьит Ьад по естест оп реггесг ЬуЪт)дз. А1|ЬоидЬ |пегЬодз |о тедисе |Ье ргорог|юп от" ъч|1|1-туре с1опез Ьаче я|Ъзтап6а11у гедисед йе пеед тот зсгееп!пд Ьу ЬуЬг)д)хат)оп, |Ье рго|осо! дезспЬед Ьеге ге|пашз изе)и! ш ягиа6опз ъчЬеге йе |1еяге|1 пш|ап| )з оЬта|пед ъч)тЬ !оъч ттет)иепсу (е.д., ъчЬеп сгеабпд!агде |1е!е|юпз ог соп|р!ех геаггапдешептз).
1п адд!т!оп, й|з рготосо1 Ьаз ойег арр! кабопз 1п шо1еси!ат Ъю!оду, !пс1ид!пд а1!е!е-зрес!Вс о!)допис1еотЫе ЬуЬт)д)гатюп, со!опу ЬуЬт)д)га6оп, Ыепбйсатюп от' зрес!ттс ппиа6опз атпопд а роро!абоп от" гапдот пшгаптз, апд теазит)пд йе ге!агедпезз апюпд тпешЬегз ог а депе !апп!у. ТЬе тпа!и ргососо1 |1езспЬез |Ье зсгееп|пд от" Ьас|епорЬаде М13 гесо|пЬ~пап| с!опез, ъчЬегеаз ап а1|егпа6че рго|осо! ргезеп|з а ше|Ьод тот зсгеешпд рЬадетпЫ-сопта|шпд Ьастепа1 со1ошез. А Впа! а1|егпатгче ргогосо! !пс!и|1е|1 !п й|з со!!ес6оп |1езспЬез йе де|ес6оп от" дедпе|1 шитапгз ияпд РСК.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
