Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 166
Текст из файла (страница 166)
199б). Ву сопггааг, ЬпеЕ ехрохше со 95'С гп йе Пгя сус1е оЕ РСК йаплрь Ч агаоп-СгкЬ Ьаае ралгл!лиг г)оех пог песеяап!у г)еаггоу йе ггапхуогпипП сарасПу оЕ гЬе р1аяпЫ пю1еси1ех. А ЫПЬег ргороггюп оЕ йе ггапаЕоггпег1 со1оп)еа чЫП ЕЬегеуоге сопгалп ипшшагег1, рагепга!, р!аыпЫ шо!еси!ех. ТЬе ча!ие оЕ аПгаПпе г)епагигагюп доел пос Ъесогпе аррагепг ип61 йе епг) оЕ йе ехрепплепг ъчЬеп гЬе лпчехПВагог Ь Еасей ъЫгЬ гЬе гах)г оЕ яблпП гЬгоиВЬ со!опка го ЫепПЕу ЕЬоае гЬаг сопгаш пшгагег) Р)ъ)А.
1Е йе еЕПслепсу оЕ пппаПепеяа Ь 1оъч апг1 гЬе хе1есгюп Ьу Ррп) )пебкгепг, ЕЬе ргороггюп оЕ со1ошеа сопла)п)пП ъчл1йгуре гпо1еси1еа гпау Ье ипассерсаЫу ЫПЬ. !п хгеП1е 05-гп! ш!сгоЕиде гиЬея аег ир а хеПеа оЕ геасгюп пихшгеа сои!а!и!пП г!1ЕЕегепг агпоипгх (е.П., 5, 10, 25, апс1 50 пП) оЕ р1аяпЫ Р)ъ)А апс1 а сопхгапг агпоип! оЕ еасЬ оЕ гЬе !иго 01!Попис1еог)с!е ргипегя 1Ох гпиъаВепеяа Ьийег 5 и! гегпр)асе р1аяпЫ РХА 5-50 пП оППопис1еогЫе рпшег 1 120 гпм) 2.5 01 оППопис1еогЫе ргипег 2 !20 шм) 23 01 г)ЫТР пих 2.5 р1 НлО го 50 р! Ас!г! 2.5 ип65 оЕ РЕпТигЪо Е))ъ)А ро1ушегахе. !с ь ипроггапс го асЫ гЬе геацепга лп ЕЬе огг)ег хЬоъчп со гег)исе гЬе орроггиппу Еог гЬе Зи5' ехопис!еаае аспчПу оЕ РЕиТигЬо го ПеПгаг)е гЬе рпплегы 1Е гЬе гЬегша1 сус1сг ь пог Елггес! ъчЬЬ а Ьеагес1 11г1, онег1ау гЬе геас6оп ш)хгигеа ъч)ЕЬ 1 с1гор Е-50 П1) оЕ 1!КЬг пипега1 о!1 ог а Ъеаг! оЕ рагаЕ6п ъчах го ргечепс ечарога6оп оЕ гЬе аашр!еа с1иПпд гереагес1 сус1еа оЕ Ьеа6пд апс1 сои!!па.
Р!асе ЕЬе шЬеа ш йе гЬеппа! сус1ег. АплрИу гЬе пис1ек ас!лЬ ияпц гЬе г!епагигагюп, аппеа!!па, апс! ро!ушеПгагюп гппеа апс1 сешрегагигеа!!агег! ш йе саЫе. 5. 6. 1.ая сус1е 1 пип аг 94'С 10 пипа! 72 С 1 ппп аг 55'С ТЬеае Пгпеа аге шиаЫе Еог 50-р1 геасиопх аяешЫед гп гЬгп-каПед 0.5-гп1 гиЬеа апг) шси- Ъасег) лп йеппа1 сус1ега гшсЬ ах гЬе РегЫп-Е1шег 9о00 ог 9700, Махгег Сус!ег (Еррепг)огу), апг) РТС 100 ЕМ! КелеагсЬ).
Типех ап6 гепгрегагигеа пъау пееП ло Ье аг)ар!ел) со лшг огЬег сурел оЕ ег)шргпепс апг) геасг!оп чо1шиеы 'Рог ыпВ1е-Ьаае лиЬаг)гигюпл, гье 12 сус1еа оЕ !гпеаг агпр1л6сагюп; Еог аиЬя1гигюп оЕ опе апипо асЫ ъчПЬ апогЬег !июаПу гъчо ог ЕЬгее сопл)рюих Ьаае гшЬлйшюпа), гье 10 сус!еа; Еог Епхеггюпа апг) г1е!егюпа оЕ апу ыхе, иле 18 сус!ех. ТЬе гасе оЕ Р)ъ)А хупйеяа Ь 1.5 — 20 Пгпел х1оъчег ш ашр!л6саиоп геасгюпх сага!улет Ьу РЕи гЬап Еп геасиопл сага!ухег! Ьу Тиг). А ыпаП пшиЪег оЕ сус!ел 1х гьеП соцейег ъчиЬ а 1агПе апюипг оЕ хгаггшП гегпр1аге го геПисе гЬе шггойлс6оп оЕ хршюгь пшга6опа гЬлг)пП аплр!л6сагюп оЕ йе р!аяиЫ РНА апг1 аепегсРХА. Ргогосо! Зг Еп !л)гго Мигагеепет ~ЛЕпд Е3оиЫе-лггапгЕегЕ Е)НА Тетр!агея 5е!есггоп оЕ Мигапгл иой Ррпу 13.23 13.24 СЬаргег 13: Мигачепег(г Айег ашр166сапоп оЕ ЕЬе Р)х)А, р1асе ЕЬе геаспопа оп )се.
'чгег!Еу ЕЬаг ЕЬе !агапе! Р)х)А ччаь ашр1гбес1 Ьу апа1ух!пд !О р1 оЕ еасЬ геасгюп Ъу е1есГгорЬогеяк ГЬгоиКЬ а 196 ацагоае ае! сопга!пша 0.5 )гц/ш! еГЬ!с!!иш Ьгоппс1е. Аа аГапс)агсЬ, 1оас1 50 па оЕ ипагпр1!Егес( 1!пеапгес1 р1аяпЫ Р)х(А апс( а 1-)сЬ РХА 1а<Ыег шго ЕЬе оигег !апеа оЕ ЕЬе де1. !Е Йе еЕЕ1с!еису оЕ ашрИсаиои ь !очч, хег ир а чепец о( геаса!оих го оришгхе йе согироиеип оЕ Йе агирИсагюи геасгюи аиП Йе сусПих рагагиегегх. 5герк 9-12 аге орпопа1 апс1 аге Кепега1!у ихес) оп1у ччЬеп ЕЬе еЕ6сгепсу оЕ шигаПепеяа !а ехресг- ес1 го Ъе 1огч (е.п., ччЬеп сопаггисг!пд !пкегг!опа апс1 с)е1ег!опт).
Ехсгас! ЕЬе ашр!1Егед РХАк гчч!се чч)ЕЬ рЬепоЬсЫогоЕопп апс) ргесгрпасе чч(ЕЬ егЬапо1. Кеьиарепс) ЕЬе Р)х(А ре1!еп гп йе Ео!!очч!пд: 10. !псиЬаге ЕЬе геасбопа !ог 1 Ьоиг аг 37'СЛпасбчаге ЕЬе К(пахе епкугпе Ьу Ьеаг)пд аг 68чС !ог 10 пппшея Ехггасг ЕЬе рЬоьрЬогу!агес) Р)х)Аз ги !се чч!ЕЬ рЬепоЬсЫогоЕогш апс( со11есг ЕЬе РХАа Ьу ейапо1 ргес!рпагюп. Кеаиарепс( ЕЬе ре11ега оЕ рЬоьрЬогу1агес) Р)х(А (-0.9 )гд еасЬ) ш 90 р1 оЕ ТЕ. 5ег ир а ьепез оЕ ККагюп геаспопа сопгаш!пц ЕЬе рЬоарЬогу1а(ес! Р)х)Ав ас сопсепггаг!опа гапрпц Егош 0.1 Го 1 )га(ш!. 1псиЬаге ЕЬе геаспопь Еог 12-16 Ьоигх аг 16"С. !Е йе гох Ьассег!орЬаае Т4 Прахе Ьи((ег юррПед Ьу Йе гоаииЕасшгсг соига!иь АТР, оииг йе АТР !и гЬс аЬоче Пааг!ои геасиоия Соигпгюиь йас Еачог Йе Еопиагюи оЕ июиошепс с!гс!ех с(иг1иа Паагюи аге юеП иис!ешгооП !и гЬеогу (Соа!их аис! М.!ышаи 1984) Ьиг агс сПЕПси!с со асЬгечс !и ргасисе.
ТЬе гоо!аг соисеигга- гюи оЕ ОНА еиПх шихг Ье !оъч !и огдсг го Еачог гЬе Еоппагюи оЕ 1иггашо!оси!аг с!гс!еч очес сои- сасеиагеь. Ноъчечег, П Ь сПЕ6си!г го са1си1аге аи арргорпасе соисеисгагюи ччЬеи ччог)с!иа и4ЕЬ ашрППеи ОХАВ асисгагси Ьу зичсгчс ГСП Ьссаичс гЬс ргороггюи оЕ Еиа-!сихгЬ ргодись МгЬ иидашааес( сегпниг ь ии)сиама. Ехсгасс ЕЬе 1фасес! РХАа гчч)се гч(ЕЬ рЬепоЬсЫогоЕопп апс1 со1!есг йе Р)х(А Ьу ейапо! ргес!рКагюп.
Кехиарепд еасЬ ре!1ег ш 45 р1 оЕ Н,О. АсЫ 5 р1 оЕ 10х Ррп1 ЬиЕЕег го еасЬ шЪе. 12. Радев! йе ашр!1Егес) Р)х(Аа Ъу ас)с)!пав 10 ишеа оЕ Рри! Йгесг!у со йе геша)пс!ег оЕ йе ашр6- 6са6оп геасг!опт (5гер 7) ог го йе рЬоарЬогу1агес) апс) 1!Кагес( РХАа (5гер 12). Мпг ЕЬе геадепга Ьу р!регппд йе ао1ипоп ир апс) с!оччп аечега! !ипею сепгг!баете йе гиЪеа Еог 5 аес- опсЬ ш а ш(сгоЕиКе, апс1 ГЬеп шсиЬаге йегп Еог 1 Ьоиг аг 37'С. !Е гегирсгагигс сусПид мах сагг!ес( оиг !и ЕЬе ргечеисе оЕ иииега! оП ог очах, Ь и ипроггаиг го сиваше гЬас ЕЬе Еури! ь ас)с$ес( го йе а9исоы ропюи оЕ гЬе гсаспои гшхгигс.
Нхс Ьаш!ег иисгоргрсис г!Рь аис( Ье чшс го !ихегг гЬе еис( оЕ ЕЬс ир Ье!очч гЬс ииисга1 о!! ог ччах очег1ау. 13. 1.!!ца1!оп апс! Тгап5Еогепа6оп оЕ Агпр!!Е!его РгосЬСЕ !Ох Ъасгег1орЬаае Т4 ро1уиис1еоггае )с!иаье Ьи((ег 10 шхг АТР Ьасгег!орЬаае Т4 ро!уиис!еог!Пс )с!пахе НО РЬохрЬогу!агес( (5ХА !Ох ЬасгегюрЬаас Т4 РХА Пааье Ъи((ег !О гим АТР ЬасгегюрЬаае Т4 ОНА Пцахе Н,О 5 р1 5 Н! 5 иши го 50 р! (!О иа го !00 иа) !О р! Юр! 4 ии!Гь го 100 р! Тгапхгогш сошре)епг Е. со1| чч)$Ь 1, 2, апг)5 р1 ог йВеь)е|1 Р)х)А ассогйпВ Го $Ье ргосес1иге г)ехспЪег) ш СЬаргег 1, Ргогосо! 23.
Ма)ге хше йа| по пппега1 о|! Ь ггапгуегге|$ |то| и йе йцехВоп ппхшге го |Ье со|прегепг се||а. ТЬе ше оГ и||гасо| прегеп| Хс2-В)ие МКЕ' Е. соП $5ггагаВепе) ап|$ а |поййе|$ ггапя1ог| па!!оп ргосег)иге Ьаче Ьееп герог|е|1 |о уас||Ьаге гЬе гесочегу о! |пцгапгь !))огге)! ег а1. |996). Но|чечег, |и оиг Ьап|)х, Ьо| пе|па|)е ргерага|юпх о! ЫПЫу соп|регепг Е. гаП аге аг)е9иаге |ог | поз! Когтя о! с|гси|аг |пиГацепеых. Ргераге р1аяпЫ Р)х)А Ьогп аг 1еая 12 )пс)ерепс)епг ггапхуогшапгя 5сгееп йе Р)х)А ргерагаг!опх $ог шигаг)опт Ьу Р)х)А аег)иепс)пВ, Ьу о!|копие!еогЫе ЬуЬпйхаг)оп (аее Ргогосо1 7), ог Ъу гехггкгюп йВея)оп оу япа1! ргерагаг!опх ог" р1аяпЫ РЬ)А |Е а яге хчав сгеагег) ог г)еягоуе|1 Ьу йе !и!го|)осе|1 шигаг!оп, ог К ап )пхегг)оп ог г)е1ег!оп ччах 1пггог)исес) шго 1Ье гегпр1аге.
15. 5ег)иепсе )Ье епггге хеВшепг ог' гагВег Р)х)А го чег!гу йаг гЬе г)еягег) пшгагюп Ьаа Ьееп Веп- егагег| апг1 гЬа1 по хрипоиь шигаг)опа оссиггег) г)ипил агпр!г6сагюп (р1еаае атее СЬаргег 12, Ргогосо1 3, 4, ог 5). 16. ТКО1)ВЬЕВНООТ!Ь)С ° К попе о! йе р)ах|о||)х ргераге|$ |п 5$ер 15 сапу йе с)ех)гес) гпигагюп, йе епг|ге рори|агюп о$ Сгапх)оггпапгх сап Ье асгеепег) Ьу оПаопис)еог|г)е ЬуЬг|с )ха))оп го |с)епг||у гаге со)оп)ех гЬаг саггу )Ье г)ех)гег) гпигагюп.
° $$ йе ап|рИсагюп геа| Попа Ьаче |ч|ог$гег! ччеП Ьи! йе у|еЫ о1 | пигапгх 'ь роог, $9рп) 'ь йе П)ге)у си1рпг. 5е! ир а хег)ех о! геа| Попа Го сЬес1с ГЬа) $Ье епху| пе 'ь сараЫе о1 г)|аехГ)па 50 па о1 рагепга| р|аыпк! Го согпр1еПоп |и ! х рй| геасгюп Ьи)$ег К песех ха|у аг))их! йе ап|оппг о! Ррп ! ихе|$ апг$ гЬе Пп|е о$ $Ье гПцея гюп. ° К |$|аехг)оп чч)гЬ Ррп! )х ччог)г)па ейс|еп||у, сопх|г)ег их)па Ьчо-хгаае а|прИсагюп геа| Попа $$4)апа ап|! Ма|со1гп 1999).
|п гЬе Пгх) а!аде, Ьчо херагаге ахуш|пе)пс агпрИсагюп геа| Попь аге хеГ ир, еасЬ соп- га|гПпц)ихг опе о1 |Ье Ьчо оПаопис)со!||)е рпгпегы ТЬе ргог)исгх ог'гЬехе геасПопх аге ь)па)е-хггапг)ег) РНАЯ гЬа! сап хегче ах ге|ар)асех )ог йе хесоп|$-хгаае Ппеаг а|прППсаг)оп, ччЫсЬ )х сагг)ег) ои! |М$Ь Ьой оПкопис)еоПг)ея еххепПаПу ах г1ехспЬег! а$юче.
ТЬе аоа! о) йе 1)гхг-хгаае геасгюп ь го цепегаге гетр)агех Со чч з|сЬ йе пюгацеп|с рп) пега сап Ып|$ рег$ес||у ъч)бюиГ согпрейюп )го|и а и41|$$уре г)ир)ех. ргогосо1 3: 1п )г|гго МигаПепет ИтдРоиЫе-хггапг)ег$ РЖА Тетр!агея $е1есг|оп о)'Мигапь ~ч|гЬ РрпТ 13.25 Рго1осо! 4 О1|уоп|.|с!еобс1е-с1|гес1ес1 Ми1ацепеыь оу Е!|гп|па6оп ог а Ьгис1ие Кейг|с6оп Я1е (ЮЕ МШацепеяь) | н тнь мвтноо, тъчо оьсонглсгвот!глв вимввз Авв нчвв!огузо го гЬе загпе зггапс1 оЕ а йепа!изей йоиЫе-зггапс1ей гесошЬлпапг р1аяпЫ.
Опе ргцпег (гЬе пшгадепк ргцпег) 1пггойисез гЬе йеягей шшагюп !пго гЬе гагдег зеъ!цепсез, ъчЬегеаз гЬе зесопй рпгпег сагпез а гпшайоп ЕЬаг йезггоуз а ипирле гезггкйоп яге ш гЬе р1аяпЫ. ВогЬ ргцпегз аге е1опдагей лп а геасйоп сага1ухей Ьу ЬассепорЬаде Т4 ог Т7 Р)ъ(А ро1угпегазе. Кдс1сз ш гЬе ягапй оЕ пеъч!у зупЕЬеягес1 РМА аге зеа!ей чйгЬ ЪассегюрЬаде Т4 РХА!!Вазе. ТЬе ргойисс оЕ гЬе 6ьг рагг оЕ гЬе шеЕЬой Ь а Ьегегойцр1ех р!аяпЫ сопз!зг(пд оЕ а ъчдй-гуре рагепга1 зьапс1 апс1 а пеъч Еи11-1епдгЬ зггапс1 гЬаг сагпез гЬе йеягей пппайоп Ьш по 1опдег сопла!пз гЬе ипнрле гезгнсйоп яге. ТЬе рори1айоп оЕ р1азш(йз гЬегеЕоге сопязь ( ! ) оЕ чй1с1-гуре пю1еси1ез гЬаг, Еог опе геазоп ог апогЬег, ъчеге печет цзеъ1 аз гешр1агез Еог Р!ъ)А зупгЬеяз рпгпей Ъу гЬе гъчо о1(допис!еог!йе ргцпегз апй (2) оЕ Ьегегойцр1ех гпо1еси1ез ЕЬаг Ьаче!озг гЬе ишс!ие гезгпсйоп гйге апс1 дашей гЬе йез!гей пшгагюп. 1п гЬе зесопй рЬазе оЕ гЬе шегЬой, гЬе ш)хей рори1айоп Ь (псиЬагес1 ъч(гЬ ЕЬе геяпсйоп епхуше гЬас с1еачез гЬе ишс!ие яге.
ТЬе ъчдй-гуре гпо!еси1ез аге 1илеапгег1 апй ЕЬе пшгагей р1азпцйз аге геяяапг го й!дезг(оп. ТЬе пихгиге оЕ спеси!аг Ьегегойир1ех РХА апй 1шеаг ъч!1й-гуре РХА ь гЬеп изей со ггапзЕогш а згга(п оЕ Е. со6 гЬаг ы йебс!епг ш гера!г оЕ пцяпагсЬес1 Ьазез. Весацзе 1(пеаг РМА ГгапзЕоппз 10 — 1000-Ео!й 1езз еддс(епг1у гЬап с!гси1аг РХА (Соп1еу апй 5аипъ1еь !984), шапу оЕ гЬе ъч11й-гуре шо1еси1ез аге ипаЫе го геезгаЫ)зЬ ЕЬепье!чез ш Е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
