Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 161
Текст из файла (страница 161)
ТЬеге !а по гчау го )спочч ччЬегЬег гЬе ьиЬя!гиг!оп оЕ опе апипо асЫ Еог апогЬег Ьаа аЕЕесге6 оп!у йе Еипс6оп оЕ гЬе асбче яге ог ччЬегЬег П Ьаь Ьаб гпоге 8!оЬа1 еЕЕесгя ТЬе ргоЫеш ччои16 гегпаш ечеп !Е йе ЕЬгееяпгпепяопа1 ьггисшге оЕ йе гп!6-гуре епхуше мече $споччп. ЬЕо а!8ог!гЬпм Ьаче уег Ъееп Печьей гЬаг ассигаге1у ргесПсг йе реггигЪаг!опа !п ргоге!и аггисгиге саиае6 Ьу йе аиЬя)ги6оп, асЫПюп, ог де1ег!оп оЕ апипо асЫ геядиея Ноъчечег, гЬеае 6!ЕПси1г!еа сап Ъе аПеч!аге6 Ъу свече!- ор!п8 1пберепдепг аааауа Еог йе Ео1сПп8 оЕ йе ргосегп оЕ 1пгегеаг. 5исЬ аааауа сопипоп1у|пс1ибе гЬе аЬг1Пу оЕ гЬе ргоге!и го геасг ы)гЬ гпопо- ог ро!ус!опа1 ап6ЬосПеа гЬас аге аресгПс Еог пабче ог ипЕо!Пес1 ерпорея йе ргорег гпочешепг ап6 рояггапь1а6опа1 пюсППсагюп оЕ йе ргоге)п чпгЫп а сеП, гЬе гегепбоп оЕ сага1уг!с ог П8ап6-Ъ|п6!п8 Еипсбопя ап6 йе лепя!)ч!гу ог геяя гапсе оЕ гЬе шшапг ргоге!и го сППеагюп чч!гЬ ргосеааея 1Е ге!гаЫе ааааа аге ачаПаЫе го сопйпп гЬаг йе пшга8епгеед ргоге!и Еа соггесг1у Ео1де6, оП8опис1еог!Пе-6!гесге6 шига8епеа!а Ьесошеа ап апа1угка1 гесЬпн!ие чпй ЬогЬ ехои!яге ьрес1- Егс!гу ап6 ехггаогсПпагу ЬгеайЬ.
Мига!!опт ЕЬаг сои!д печег Ъе Еоип6 ш па!иге сап подач Ье 1пггог)исггоп 13.5 пто1адеп~с оГ1допсс~ео11бе ргипег апд1е-аггапбеб гесопгьгпап1 М13 ОГГА сопгагп!пд а сору о1 ваб-1урегагде1 аедсепсе ех1епб гпс1адеп1с оГ~допсс~еоббе ргапег свпд О11А рогугпегаае апб бГЕГра 1гапяес1 Е. сод апб есгееп М13 р)адоеа 1ог пи1ап1 с1опеа догму сапб!ба1е с1опеа апб неп1у пгогаггоп ьу пос~еоибе аериепс1пд сс~ттг тот: стет сто,.тс.хттххтс хт с тс 30 70 ВО ссс' о' г тот'сто*' ' сс тс"'.тт .:тс.'.,т' с тт 60 гт 10 Нх сггтЕ 13-1 Сепега! 5сьегпе Еог О11 опис!еоцдекцгесГед МиГа епеага гюрЬаце РХА саггу!пц ап ашЪег пшга6оп, "шаг)сег геаспе'" учаа оЪаегчей ).е., ЬассеПорЬацеа саггу)пц гч)16-гуре цепошеа тчеге цепегагед. Маг)сег геаспе осспггег) ш гЬе ггапаЕесгег) ЬасГепа Ъесапае гЬе Егацшепг оЕ ге!14-гуре Р)х)А аппеа!ег! го йе соггеаропццпц аег)пепсе оЕ йе ашЬег пшгапг, Еогпппц а ппашагсЬег! Ьегегог)пр!ех йаг тчаа сопчеггет) Ьу Ьоаг-арес!6ег! гп!ашагсЬ- герагг ауаГеша )псо а ЕО11-1епцй ге!14-Гуре цепоше.
1Г гчаа г!шсИу геа!)хег! йаГ ГЬ13 ргосеаа сопЫ аЬО Ъе паес! !и гечегае, Ье., йас арес!6с пппа6опа сои!6 Ье 1пггойкег! гпго ге!16-гуре РХА пяпц пшгаге11 г)оиЫе-аггапг!ег) Егацшепга ОЕ чгга) РХА (ЪЧе13Ьее)г апг! чап г!е ро1 1970; НпгсЬ!аоп ап11 Ельце!1 1971). Е.агег, гчЬеп рюпееппц чгог)г !и Р)х)А сЬеш!3ггу 1е11 го 1Ье гожие аупгЬеяа оЕ обцоппс1еоГЫеа (1.еГяпцег апг) ЬппаЕогг)197б; КЬогапа 1979; Сагпйега еГ а1. 1983), апг! тчЬеп йе ача!!аЬ!6гу апг! г!пацгу оЕ РХА ро!ушегааеа апг) РХА 6цааеа Ьаг! ппргочед, Яш!гЬ ап11 со!- 1еацпеа г)ече1орег! гп чцго сесЬпщпеа Еог оццоппс1еогЫе-г!1гесгег! РХА пшгацепеяя ТЬе 6гаг шегЬогЬ паег! аупгЬегк о11цоппс1еогЫеа гЬаг туесе сошр1еге!у Ьошо1оцоиа Го япц!е-аггапг1ег) !3.о Огаргег !Зг Мийцепеяз ЪасГегюрЬа8е фХ!74 РЫА ехсерГ гог а яп81е Ьаае сЬап8е ГЬаг, !г !псогрогаГег! гиГо йе ЬасгегюрЬа8е 8епоте, гчои!6 8епегаге а ье1есгаЫе рЬеиогуре.
ТЬе о1!8опис!еог!бей хеге аипеа1ед го а!п81е-асгапг!ес! ЪасГегюрЬа8е фХ174 РЫА апг! иае6 аа ргппега гог РЫА аупГЬеа!а сага!утес! !и чЬго Ьу йе К1епогч гга8шепг ог' ЕьсЬег!сЬга соЕ РЬ)А ро1утегаье 1. ЪЬеп йе геязРНп8 Ьесегобир1ехеа веге сгаиьгесгед шго Ъасгепа, а дгатаг!с !псгеазе гчаь оЬаегчег! ги йе ггег!иепсу ог" ЪассепорЬа8ев с!!ар!ау!и8 ГЬе 6еыгег) рЬепоГуре !НиГсЬ!аоп еГ а1. 1978; Ках!п еГ а1. 1978). Мапу ог" гЬе шегЬогЬ иаег! !ог о!!8опис1еог!6е-шег!!агег) пшга8епеяа с)!гТег 1г61е гп рПпсгр1е ггогп йе шаг1сег гезсие гесЬи!с)иеа иаег! ог!8!па!!у Ьу С1уг!е НигсЬ~аоп апг! Ь!ь со!1еа8иеа аг СЬаре1 Н!11, ЫоггЬ Саго!!па.
ТЬгои8Ьоиг гЬе 1980я ргогосо!з гог о!!8опис1еогЫе-шег!!агео пшга8епеь!а гурка1!у !пчо1чег! гЬе Уо1!оичп8 агеря ° Рея8п апс! ьупгЬеа!ь ог ишга8епк о!г8опис!еогЫея ° НуЬг!6!хаг!оп ог пшга8еп!с о!!8опис!еог!6еа со ыи81е-ьггапг1ес) !агнес РЫА с1опег) !и а ЪасгеПорЬа8е ог рЬа8егиЫ чесгог. 1Ле ог" аисЬ а!и8!е-аггапбег) гешр1агеа е1птппагеа согпре66оп Ьегюееп гЬе ишга8епк о1г8опис!еогЫе апг) а сошр1егиепгагу аггапг! ог" РНА. ° Ехгепяоп ог гЬе ЬуЬгЫгхег1 о!!8опис!еог!6е Ьу РЫА ро!ушегаье !и йе ргеаепсе ог" а11 гоиг 6еохупис1еояде гбрЬоьрЬагеа (огчТРа).
° РогшаГ!оп ог с!пьес) с!гси1аг РЫА Ьу1!8аГ!оп чбй РЫА 1!8аье. ° Тгапьгесг!оп ог ьиасерг!Ьге Ьасгепа, ° 8сгееп!п8 ог' с!пиеа Ъу ЬуЬгЫ!гаг!оп (е,8., го гЬе пшга8еп!с о1!8опис1еогЫе рпгиег) гог гЬоье саггугп8 ГЬе г!еягег! ишГаГюп. ° Ргерага6оп ог" яп8!е-аггапбе<$ РЫА ггош йе пшга8еп!гег! с!оиея ° Соп!)гшаг!оп Ъу РЫА аециепс!п8 йаг гЬе гаг8ег Р)чА !и гЬе тша8епгхе6 с1опеа сагг!еа гЬе с1еягег! пииагюп ап6 по ойег. ° Кесочегу ог" гЬе пшгагед Гга8гпепг ог РЫА.
° 8иЪьгЬи6оп ог" йе гпига8еп!хек Гга8тепг гог йе соггеьроп6!п8 ье8шепг ог М16-гуре РЫА. ТЬгои8Ьоиг гЬе 1980я а аиссеаяоп ог !шргочешепга го гбггиа11у а1! ог йе гесЬп!са! аьресга ог йе ргосег1иге !пс1ибегЬ ° Рече!ортепг ог" а чегааг!1е аег ог" ЪасгепорЬа8е М13 апг) рЬа8егпЫ чесгогя ег)и!ррег! чбгЬ ро1ус1опш8 ягея ° 1)ае ог Ичо о1!8опис1еоГЫе рпшегя опе ог'гчЬ!сЬ !а а аГапбаЫ ипгчегьа! рпшег апг! ГЬе ойег а пшГа8епгс ргииег (!чогг!а еГ а1. !983; 7о!1ег аиг! 8гп!ГЬ !984, 1987).
ТЬе иае ог Гюо рптега ги гЬе ехгепяои геас6ои е1!ппиагег! йе иеег! го !ао1аге соча!спг!у с!оаег) с!гси1аг РЫЛ. ° !)ае ог" гио рг!шегь апс) а г!оиЫе-аггапс)ес) р1аяиЫ ог рЬа8ешЫ РЫА аа сешр1аге (8сЬо!6 ег а1. 1984). ТЫь ргосег)иге, а!гЬои8Ь 1еаа егЕс!епг пг сегшь ог" у!е!й ог ишгаппи е!ишпагег! гЬе пее6 го аиЪс1опе гаг8ег РЫА !пго а ЬасгепорЬа8е М13 чесгог. ° 1гпргочегпепг ог" гесЬпщиеа го ьсгееп ЬасгеборЬа8е М13 р1ациеа гог гЬе г!еягес) пшгабоп Ьу о1!8опис1еоГ!6е ЬуЬг!6!гаГ!оп (Ч'а11асе ег а!.
1979, 1981; Еи88а еГ а1. 1981). ° 1Ле ог Ь!8Ыу ассигаГе РЫА ро1утегааеа епсог!ег! Ьу ЬасГеборЬа8е Т4 ог Т7, иЬ!сЬ ьЬоггеп ГЬе 6ше гег)и!гег! Го аупгЬеа!хе йе Ьегегодир!ех !гот 12 Ьоига го 1 ог 2 Ьоигь (Ыоааа! 1974; МсС!агу ег а1. 1989; 8сЬепа 1989). ТЬеае ро1ушегааеь Ьаче гЬе асЫ!г!опа! аг!чапга8е ог пог саияп8 д!ар1асетепг ог' гЬе 5' епс! ог" гЬе ишга8епк о!!8опис!еогЫе ргипег.
!лггос)исгтол 13.7 1п с1акяса! шетЬобк оЕ яте-йгес1ес1 шитацепек!к, 1Ье ргорогтюп оЕ с1опек соптатшп8 1Ье беяге6 шшатюп чапек Еготп 0.19о то )5058 с)ерепс!!п8 оп 1Ье ейк)еису оЕ йе пшта8епк о118опис1еосЫе. 5ечега1 шетЬобк Ьаче Ьееп бече!орет) то ке1ест а8ашкт с1опек 1Ьат сои!а!п поппштапт 13)ч)Ак, !пс1ийп8 (1) ке1ес6че й8ектюп оЕ тетпр!ате РХАк Ъу гетпоча1 оЕ пюйуте6 Ъакек (Кпп)се! 1985; Кип)се! ет а1. 1991), гектпсбоп епхугпек (НоЕег апс) КЬЫе!п 1993), ог ехопис!еакек (Тау1ог ет а!.
1985); (2) геяога6оп оЕ ап ап6Ъю6с геяктапсе 8епе ог ап оп8!п оЕ гер!ка6оп (НакЬипого-Со1оЬ ег а!. !995); апс1 (3) е1тпипабоп оЕ а гек1пстюп яте Егош тпшапг РХАк (Реп8 апс1 )к)!с)со!оЕЕ 1992). Рог а пюге 6ета!1ес) йксикяоп оЕ 1Ьеке шетЬос!к, р1еаке кее 1Ье !пЕоггпа6оп рапе1 оп 5ЕЕЕСТ!!к!С АСА!ткт5Т ЪЧ!10-ТУРЕ О!к!А !!к! 5!ТЕ-О!КЕСТЕ0 МстТАСЕтктЕ5!5. Весаике оЕ 1Ьеке ипргочетиептк, йе с!аккк шейос) оЕ о118опис!ео66е-шейатес) я1е-йгестес) гпша8епеяк очег 1Ье уеагк Ъесаше ехтгеше1у еЕ6с!епт ап6 ге1!аЫе. Ноччечег, 1!)се гпапу отЬег е!е8апт апс1 шчеп6че тесЬпкртек, К тчак с)и!сИу гепс1егес1 оЬю1ете Ъу РСК апс1 !к по !оп8ег йе 6гкт сЬоке то сгеаге тпша6опк ти а гаг8ет ке8шепт оЕ Р)к)А.
Мокс яте-6!гестес) пш1абопк йеке баук аге июге еак!1у 8епегагес! Ъу опе оЕ1Ье шапу чапаптк оЕ РСК йап Ьу 1Ье с1акк)с шейос)к. РСтк-МБт!АТЕО ЯТЕ-ттИЕСТЕ0 М!.)ТАСЕЬ)Ей!й Моя оЕ 1Ье РСК-Ьакес1 шетЬос)к оЕ пшта8еиек)к !и сиггепт ике аге йгест с1ексепс1аптк оЕ тесЬ- пиЕиек оп8!па!!у с!експЪе6 ш йе 1а1е 1980к, кооп аЕтег 1Ье !птго6ис6оп оЕ 1ЬеппокгаЫе РХА Ро1Уптегакек!о РСК (Нт8исЫ е1 а1. 1988; Но е1 а!. 1989; Кас)отча)с) е1 а!. 1989; Ча11еПе ет а1. 1989). А1 1Ьат йпе, Ь тчак а1геабу )споччп 1Ьа1 септга!1у!осатес1 яп8!е-Ъаке шыпа1сЬек )и ЬуЬгЫк Ьеттчееп о1т8опис1еосЫе рпшегк апд 1Ье таг8ет РЬ)А йд пот аЕЕест йе еЕЕтс!епсу оЕ ашр!!6сатюп.
Еаг1у !пчек68атогк кЬотчес) йат йеке пияпагсЬек сои!д Ье сопчег1ес1 тп1о пштатюпк!осатес1 !и 1Ье ргипег ге8)опк оЕ РСК ргойктк, тчЫсЬ, тп шгп, сои!6 Ъе юЬктКитес1 !ог йе Ьопю1о8оик чч!1д-туре ке8шепт !и, Еог ехашр1е, а гесогиЪ!пап! р1аяпЫ. ТЬе Ео11очч)п8 аге пирогтап1 ас)чапта8ек оЕ РСК-Ьакеб ше1Ьобк Еог к!те-с!!гестес) шша8епеяк: ° Ням гатек оЕгесочегу оЕтигалгк. 1п шапу сакек, 1Ье утеЫ оЕ пштапгк гк ю Ьт8Ь йат ке!есгюп а8а!пк1 поптпшапг тептр1агек !к по1 гес)шгес1. ° АЬт!тгу го ике сЕоиЫе-кггалсЕесЕ В)сЕА гетр!агек ап6 то !птгос)исе шшатюпк ат а1тпокт апу яге. ° Е)ке оЕЬщЬ гетрегагигек то тес!исе 1Ье аЬт16у оЕ йе тешр1ате РХА то Еопп кесопс)агу ктгис- тигек 1Ьа1 !отчет йе еЕ6с!епсу оЕ 1Ье ехтепяоп геас6оп оп яп81е-ктгапс1ес1 РХА тешр!атек.
° Рече!ортелг оЕтегЬосЕк тп ъчЫсЬ а!1 оЕ йе геас6опк аге сагпес! оп1 тп опе тиЪе (е.8., р1еаке кее Мапш е1 а!. 1993; Ркап1 е1 а!. 1994; Ке апс1 Майюп 1997). ° АчатТаЬтТ!гу оЕ соттегста! )стгк. ° БреесЕ алс! елке. )ч)о гпоге с1оптп8 ш Ъас1егюрЬа8е М13 честогк! ТЬе Ео)!отч)п8 аге ротеп6а1 йкасЬап1а8ек оЕ РСК-Ьакес1 шейобк: ° Ке!агтче!у Ьтфю гаге о) еггогк т РСтс ртостистк йат оЕгеп соп1атп иптчаптес) шитабопк тп асЫт6оп 1о бек!ге6 а11егабопк. ТЬ)к ргоЫеш сап Ье пипппие6 Ъу !1) !птпбп8 1Ье пшпЬег оЕ ашр1!6са6оп сус1ек апс1 (2) ияп8, ш ргеЕегепсе то Тас), йегшояаЫе Р)к)А ро!ушегакек, кцсЬ ак РЕи апс1 желт, ччЬ)сЬ сапу а 3'-5' ехопис1еаке ас6чКу апс) Ьаче ап ей6п8 аЪ|1Ку.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
