Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 162
Текст из файла (страница 162)
° 1лггосЕисттол оЕ илтчалгесЕ лис!еогтсЕек аг гЬе 3 ' гегтлтлт оЕ атр1 тут есЕ В)сЕАк. ТЫк ргоЫеш саи а1ко Ъе ко!чес! Ъу ияп8 РЕи РХА ро!ушегаке гайег 1Ьап Тас). !3.8 СЬаргег !3| Мигадепекгк ° Г,агде нитЬег оу рг1тегк аи|Г атр!|Г|саг1он геасг1опк ге|1и1ге|Г уог еасЬ тигадепекь ехреп'- тепг Ьу коте РСК-Ьаке|Г тегЬо|Гк. Рог ехатр1е, коте оЕ |Ье "гпедаргнпег" тегЬог!к йксиккег! Ье!о|ч ге|!шге |Ьгее ог Гонг ргнпегк апйог |Ьгее ке|!иепьа! РСКк. ° Кедшгетеиг го орг1т!ее ГЬе сои|!1|1онк Еог РСИ Гог еасЬ пего кег оГрг1тегк ан|Г!ог гетр!аге. чч)1Ьоиг орснп)ха6оп, йе РХА рго|1ись оЕ йе РСК-Ъаке|1 тегЬог!к |пау Ъе Ье|егодепео|ыи к!ге апг! и|ау индга|е йгоидЬ адагоке де1к ак а япеаг, га|Ьег йап ак а йксге|е Ъап|1.
° Н!дЬ Гге|Гиенсуог апти!адетеег! с1опек геки!гтд!гот сангат!пег!оп оу гЬе РСК-атр1|)!егГ РХА |ч!1Ь 1Ье рагеп|а1, ип1д-гуре РХА |ье|1 ак |етр1а|е !и |Ье РСК. ТЬь ргоЫет ь Ъек| ко!че6 Ьу ияпд а гек|пс|юп еноте яюЬ ак Рри! |о йдек| |Ье р!акт)с) ке1ес6че1у !е.д., р1еаке кее Ъе)пег е| а1. 1994; Аика1й е| а1. 1996; 1з ап|1 'чч!1)с!окоп 1997) (р1еаке кее йе шЕоппа|юп рапе1 оп 5ЕЕЕСТ!|||С АСА1Х5Т ЪЧ1Е0-ТТРЕ 0ХА 1!Н 5!ТЕ-01РЕСТЕ0 МРТАСЕМЕ515).
° 1пефс1е~су |и атр!Егутд РАГА Егадтепгк 1оидег ГЬаи 2 — 3 ЙЬ Ьу кгаи|Гаг|Г РСК. Ро|еп6а1 ко1и|юпк |о й|к ргоЫет аге йксиккег! !и СЬар|ег 8, Рго|осо! 13. ТЬь 1ы оГ йка|Ьап|адек тау кееи| 1опд, Ьи| и кЬои1|! по| Ье кееп ак Гнпп!|)аЫе. Моя оЕ|Ье ргоЫеиь сап Ье ачо!г!ес) епьге!у кч!!Ь а 1н|!е Еогейоидй апг! Р1аппшд; ко1и|юпк |о ойегк аге ача!1аЫе е|йег !и СЬар|ег 8 оЕ йнк п|апиа1, ш |Ье 16ега|иге йа| ассогпрашек соинпегс|аПу ача!1аЫе иш|адепекь )г!гк, оп тапиГас|игегк' 1п|егпе| я|ек, ог ш йе кс|еп66с !Вега|иге.
МЕТНО0$ Ог РСВ-ВАТАЕВ М!.)ТАСЕ)ЧЕЫ$ ОЕ |Ье |папу риЫьЬе|1 чапаи|к оЕ РСКЬакег) иш|адеиеык, 1|чо кгапс) ои| Гог йе|г |1игаЪ|! ||у ап|1 гоЪиыпекя очег1ар ех|епяоп иш|адепеык ап|! тедаргнпег иш|адеиеяк. !и очег1ар ех|епыоп пш|адепеык !Н|дисЬ~ е| а!. 1988; Но е| а1. 1989), ||го очейарр!ид Р!чА Егадтепь аге атр!|бе|1 ш керага|е РСКк (р1еаке кее Ргососо1 6). ТЬе ппна6оп оЕ !п|егек| Ь сопк|гис|е|1 ш йе гед)оп оЕ очег!ар ап|1 ь ргекеп| !и Ьо|Ь атр11Е|ег! Егадтепь. ТЬе очег1арр!пд Егадтепгк аге т!хе|1 аий ш а й!г|Г РСК, аге а|ир1|6е|1 ш|о а Еи11-1епд|Ь РХА ияпд 1|чо ргнпегк |Ьа| Ъ)п|1 |о йе ехсгетек оЕ йе ||чо пн6а1 Егадтепь.
ТЬе гпейо|1 ь кигрпыпд1у ейес6че, Ьи| || гег!и!гек ||чо тигадеп!с рпп|егк, 1|чо йап)с|пд о!1допис1ео6|)ек, апг) |Ьгее РСКк |о сопягис| а иш|а6оп. Гп кои|е сакек, а кнпр1ег чегяоп оЕ |Ье те|Ьо|1 сап Ъе икег! !опе |ии|адеп|с ргнпег апд гччо ке|р|епьа1 РСКк) |Т кггагед!са11у р!асег! гек|пс|юп ы|ек аге ача!1аЫе со с1опе йе кедтепг оЕ атр11Е|е|1 Р)к)А сои|а!тпд |Ье и|ша|юп !А!уаг ес а1. 1996). ТЬгк ь по| аЬчаук йе саке. ТЬе тедарпгпег те!Ьог) !и!го|!псе|1 Ьу Капнпапп е| а!. (1989) апс) киЬке|!иеп11у то|1!Еге|1 Ъу даг1|аг ап|1 5опппег !1990, 1992), ЯеЬе! апг! 5рг!гг ( !990), ап|1 хаий е| а1.
( 1990) !к |Ье ятр1ея апг! ток| сок!-еГГесг!че те|Ьо|1 оГ РСК-Ъаке|1 пш|адепеяк сиггепбу ача|!аЫе. ТЬе гпегЬог! |пчо1чек ьчо гони|!к оЕ РСК |Ьа| етр1оу 1|чо бапдбпд рптегк ап|1 опе |п|егпа! пш|адеп|с ргнпег сои|а|и)пд |Ье с)ек!ге|1 Ъаке киЬкг!1иг!опк. ТЬе бап)с|од рптегк сап Ье сотр1етеп|агу |о кес!иепсек |и |Ье с1опе|1 депе ог со аг!)асепг чес|ог кег!иепсек. ТЬе пшгадеп!с ргниег сап, !и |Ьеогу, Ъе ог!епгег) го|час|1 е|йег оГ |Ье йапдбпд рпгпегк.
1п ргас6се, Ьоччечег, йе тигадеп!с ргнпег Ь аЬчаук опеп!ег) !окчагс! |Ье пеагег оГ йе ичо бап)с)пд рптегк ко |Ьа| |Ье !епд|Ь оЕ |Ье гпедаргнпег ь 1|ер| |о а пнпнпшп. !и |Ье опд!па! Рго|осо!к Гр!еаке кее Р)доге 13-2), йе 6ы гони|1 оГ РСК Ь регГоппег) кч!1Ь |Ье пш|адеп)с ргнпег, |Ье пеагег оЕ йе йапдбпд рптегк, апг! а чч!1йгуре РХА |етр1а|е. ТЬе рго|1ис| оГ йь 6гк| геас6оп, а г!оиЫе-к!ганг)ед гпедарпп|ег, Ь рипЕ|ег! апг! оке|1 !и а кесопг! РСК, содейег |чЬЬ ГЬе гечегке бап)с)пд ргнпег.
ТЬе ргодисг ь а с)оиЫе-к!ганг!е|! РХА |Ьа| соп|а|пк |Ье пш|а6оп ап|1 |чЬоке ыхе Ь ег!иа) |о йе йк|апсе Ьег|чееп йе ||чо ои1к)г!е йапдбпд !пггодисдоп 13.9 я! — ~ 5' п)езаРппуеу 5' 3' 5 з поп- ехуепеаие апб апо 3 5' з 5' ех!епвоп РСЯ 2 ° — 52 з 5 3' 5' 5 3' Я2 — М- РСЯ 2 Молзее еупоо Еаг!у пуеяоп Е)С()РЕ 13.2 ТЬе Ваяс Ме а гппег Мейод РСй ) (5 рег(оггпед ччпй а гпигацепгс Еогиагд ргппег (М) апд а гечегзе рпгпег (й) ) (о Еепега(е апд апзр)!- (у а доиЫе-5(гапдег! пуееарг(гпег (зйоучп !и со)ог). (ЕеЕ() (и йе еаг!у гпе(Ьод, (Ье гпееарпгпег )5 рипйед апд изед уий ап адд)г(опа! Еопчагд рппуег [Г2) )и РСй 2 го СЬ(а)п (Ье деягед (и))-!епц(Ь и!и(ап!. (йфЬ() (и (Ье пуод(Е!ед гпе(Ьод, (Ье пуейарпгпег (5 ехгепдед оп йе ог(й)па! (егпр!3(е (о Еопп пуигапг:хч(!д-(уре Ьесегодир!ехез, ччЫсЬ аге изед аз геупр)асез (и а зесопд РСй (РСй 2), рппуед Ьу о!(Еопис!еог(дез й2 апг! Р2.
(Моей(!ед, чупй реггп(55(оп, Е оп! 6пй апд йоЬ)пзоп 1997 (ФАсадегп(с Ргезз).) ргппегз. 1Е ГЬе йапйдпй рппуегз соп(а!и гез(пс(юп ы(ез Еог еазе оЕ с!оп!пе, йе ргодис( оЕ йе зесопд-гоипд РСК сап Ье изед со гесопягисг а гпшацеп(хед чегяоп оЕ гЬе !агнес йепе. 1п гЬе зесопд апд пюге гесеп( гпе(Ьод, а рипбед ог иприп6ед гпейаргппег !5 ехгепдед оп а уч)1д-гуре Т)ХА гегпр1аге (Мапп) ег а1. 1993). Весаизе оп!у опе ягапг1 оЕ йе гпецарпгпег сап Ье ехсепдед, (Ье ргодисг оЕ гЬе геасдоп гз а 6311-1епйгЬ 5!пй!е-5(гапдед Ез)х)А (Ьас сагпез йе г1еягед гпига(!оп(5). ТЫ5 )у)х)А !3 йеп агпр!гбед ияпй йе гхчо 6ап)г)пй ргппегз (Ргсагг1 ег а1.
! 994; 1!пе апд КоЬ!пзоп 1997). 1п оиг Ьапдз, Ьоучечег, (Ы5 ргогосо! Ез гпс1гу апд хчог)гз уче1! оп1у учЬеп йе ехгепдед гпейаргипег !5 рипбед апд изед гп Ь!ЕЬ сопсепЕгадоп пз а зесопд РСК учЬозе рагагпе(егз Ьаче Ъееп саге6311у ор((пихед. ТЬе сЫеЕ ргоЫет уч!(Ь Ъо(Ь чаг!апь оЕ ЕЬе тееарг!гпег гпегЬод 15 йе (!гпе-сопзигп!пй апд 1аЬопоиз рип6сагюп яер, учЬ!СЬ 15 изиаПу ассогпр1!5Ьед Ъу ацагозе йе1 е!есггорЬогеяз апд е!идоп. Рипбсадоп !5 ге!)шгед го гегпоче геядиа1 рптегз Егот (Ье агпр1!6ед гпецарпгпег зуп(Ьеяхед !п йе Еггз( РСК. Ап (пеепюиз апд ягпр1е зо1идоп го (Ы5 СВЕ6си1су !3 го изе Вап)с(пй ргппегз уч!(Ь яцпгбсапду д!ЕЕегеп( пуе16пц сегпрега(игез (7 ) го ргппе (Ье гучо РСК5 (Ке апд Мад!зоп 1997).
ТЬе 6гзг 6ап)г!пе ргппег !5 )изг 15 ог 16 Ьазез 1опц апд Ьаз а са1си!агег1 Т оЕ 13.10 СЬарсет 13: Мита8епеллл -45 С, ТЬе 6гаС РСК Ь гЬегегоге рго8гапппес! Тч!ТЬ а 1олч аппеа1лп8 СешрегаСпге. АС йе епсг от" сЬе 6гас РСК, гЬе Еесопс1 бапЫп8 ргииег, 25 — 30 Ьааеа !и 1епВЕЬ апс1 тч!сЬ а са1сп1асет! Т от" 72-80 С, Ь асЫед йгес6у со сЬе геас6оп шЬе. ТЬе Еесопс! РСК Ь гЬеп сагг!ес! опс пып8 а ЫВЬ- сеплрегасиге аппеа!!п8 Есер (папа1!у 72 — 80'С).
ТЬе 6па1, 6л11-1еп8гЬ гл14А ргос1псс Ь СЬегегоге Вепегасес! Ьу рпппи8 лч!сЬ гЬе тпе8арпшег апс) гЬе Еесопс) ВапЫп8 рпшег. Весапае аппеабп8 ог сЬе 6гы ВапЫп8 ргпиег Ь 5ИРРГЕ55Етг ас Ы8Ь сетпрегаспге, йе ьи1йгуре гешр1асе РХА Ь пог ашр1!6ел! ейклепС1у !и йе аесопс! РСК. ТЬе ргос!Осг ос йе аесопт! РСК СЬегегоге сопяаС5 а!шоаС епслге1у ол пшсасес! ЛЫА. МЕТНО0$ $)ЬЕ0 1!Ч ТН1$ СНАРТЕ!е ТАВЕЕ 13-1 5!Се-гг!гесгесС Мига8епеа!5 ТемРЕАте МетнОО 05ео тО ена1сн РОЕ мотаят5 ркотосог аси8!е-асгаптгетг РВА тСоаЫе-аггаптгетС РС4А 8оаЫс-асгаийетг РС4А тСоаЫе-аггапделг !!ХА тгоаЫс-асгаптгесг РВА ае!есиоп а8а!паг атас!с-ааЬаг!сасе8 РВА ае!ессюп ог гигааиь гбгЬ Ррп! е!ишиас!ои от" а геяиссюи ясе !05р пшса8епеыа) гпе8арптиег ар!Рсе очаг!ар ехсеияоп ! аптг 2 3 4 5 6 Апу ги11лс!епг!у ассчапсесс гесЬпо!осу Ь спг)1511п8и!5ЬаЫе1топл пла81с.
АггЬиг С. С1аг1се ТЬе шесЬосЬ оу ысе-йгессес1 иплса8епеаЬ с!еаспЪес! !и йе 6гас ях ргогосо15 оу сЬл5 сЬаргег аге Еипипапхетс лп ТаЫе 13- !. Ргогосо! 7 с!еаст!Ьеа Есгееплп8 оу ЬасСегюрЬа8е р1ат!ие5 сот пшгапга Ъу гас!!о1аЬе!ес! О!!Вопис!еосЫеа, лчЬегеаа Ргососо! 8 т!еаст!Ъеа гччо гпегЬотЬ го тсесесс пшса6опя 55СР апс! Ьегегос1ир!ех апа1уыа.
Рог 6лггЬег сгега!15 от" 5сгееи!О8, 5сапшп8, апс1 Ыеп66сасюп от" пшгаСюпа, р1еаае Еее йе !пготшаг!оп рапе! оп МЕЛТАТЮЫ РЕТЕСТЮЫ апс! лга ассошрапулп8 саЫе гЬаг ылиипапке5 шесЬосЬ соиипоп!у паес1 го с1есесс пшсасюп5. 1п абай!!оп, лче беаспЬе шейосЬ со Вепегасе пеасес! ппЫ!гес6опа1 !Ргососо! 9) апсг Ълйгес6опа1 с1е1есюпа (Ргососо! 10) ияп8 ехоппс1еаае !П апс! ВА1. 31 пис!еаае, геарессьче1у. Р!па!!у, аа Ь !псгеаяп81у йе сгепт! Гог шапу плесЬосЬ !и ию1есп1аг Ью1о8у, а тчЫе чапесу оу Ыга аге ача!1аЫе тгош чагюп5 шапптасгпгега !Р!еаае Еее СЬе !пуоппа6оп рапе! оп СОММЕК- ссАЕ к!т5 ГОВ 5!те-01кесте0 мглтАсехе515). Рго1осо! 1 Ргерага6оп о1 0гас~1-соп1а~п~пд Япд!е-й~гапдед Вас1епорЬаце М13 0МА не с<А55|с К<)нкее метнов ое ое<сон<)сгеот<ое-о<аестео митлсенея5 га)сеа аг)гапгаае о6 йе ьггопа зе!есВоп ааа!иаг огас!1-аиЪа111игес) РЪ)А ехЬ!Ъ!гес! Ьу агга!пь оу В.
со!1 йаг ехргеаа огас!1-РЪ<А а1усоау!аде Гр1еаье аее йе шуогшапоп рапе! оп М1)ТАСЕМС О11СОо<Г)СЕЕОТ10Е5). Тегпр1аге РЪ<А )а Вгаг ргерагес1 Ъу агоаегЬ оу ап арргорпаге гесопгЬ!пап1 ЪасгепорЬаае М! 3 1и а агга)п оЕЕ; со17 йаг!а с)пг ип5 Р' (с)еасг!Ъег) ш 1Ь!а ргогосо)).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
