Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 172
Текст из файла (страница 172)
И йе (егпр(а(е 0ГЧА 'ь Ьогпогудоиз, опе о( (Ье (ччо геас(юпз 1 5ЬоиЫ соп(а(п а зесопд зпзаИег Ьапд счЬозе зупйез!5 ь рппзед Ьу оИдопис!ео((де 1 апд е|йег оИКопи- ' с|еодс|е 2 ог оИцопис|еодс|е 3, дерепд(пц оп счЬейег йе (егор|а(е 'ь гиисап( ог счдд-(уре. В йе (егор|а(е ( 014А 'ь Ье(егогудоиз, Ьо(Ь геас Иопз ъчИ) у|еЫ Ьчо ЬапсЬ. ТЬе згпаИег Ьапд 'ь изиаИу ргезеп( (п (осчег гпо|аг сопсеп|га(юп йап йе (агнес Ьапд. ТЬе геазоп ь йа( ! агирИса(юп Ьу йе аИе(е-зрес|Ис оИдопис(ео((де дерепдз оп ргюг агирИ|садоп о( йе (агВе( ге5!оп Ьу | оИцопис|еоддез 1 апс1 4.
ТЫ5 гпейюд ь 5!гпр(е, гар!д, апд гоЬиз(, апс1 сап Ье сьед Со зсгееп гпапу загпр|ез 5!гпи1(апеоиз(у, ТЬе ,' д!задчап(аде 'ь йас |( гес|йгез Гоиг зерага(е одопис(еоддез апс1 Ьчо агпрИса(юп геас Иопз. вг В2 ВЗ арьае А 6 А 6 М А 6 в| 5 6АС САС АСА 66т 6ст АС6 тАА тс з В2 5 АА6 АТ6 А6А ТСА АСА САА ТСТ ТСА А З вз 5 АА6 АТ6 АСА '(СА АСА САА тст тсА 6 з рз 5 т6А 6АА 6ст тсс т6А Абс тс6 тт З ч зоо ьр чгоо ьр чзооьр 50 Ьр В1 — Ю- 5' вг — ~ А 24| Ьр ~ Ггт Ьр В- ч — гг Ггт Ьр вз — м- аибсог 241 Ьр ЕГСЕ)КЕ 13-5 РСК Аги 1111са((оп оГ 5 ес!Йс А11е1ез (А) Рпгиегз К1 апс| Е1 цепегасе а 241-Ьр Ггадгиеп(, вЫсЬ зесчЕ5 аз а (егор|асс Гог е|йег рппзег К2 ог рпгпег КЗ (Ьа( д!Г(ег |и йе|г 3'-Сегпппа| пис|ео(Ые. Е)5Е ОГ еКЬег рпгпег К2 ог КЗ |и согпЫпадоп чий Е1 депега(ез а 127-Ьр Ггаупеп( 1Ьас гиассЬез е|(Ьег аИе|е А ог аИе|е С.
(В) Се| е|ессгорЬогеяз о( йе ргодись оГ а РСК (о с|есес( а ропп гии(адап ас пис|еодде 12932 (сос|оп 4311) |и ехоп 29 оГ (Ье ароВ депе. ЕасЬ загпр|е 'ь гергезеп(ед Ьу (счо |апез о( йе де(. 5агпр|е 1 ь Ьогпогуцоиз Гог аИе|е А, загпр|е 2 ь а Ье(егогудо(е, апд загпр|е 3 'ь Ьогиогуцось Гог аИе|е С. (1 апе М) 0ЫА 5(апдагдз (АгпрИ5!ге; Вю-Кас|).
(Моййес|, гий репи)55!оп, Г огп С|Ис апд А|ачапдс 1996 [СЬЕ)зеч(ег 5с|епсе!.) РГО1ОСО~ 8 Ое1ес6оп о1 Ми1а6опь Ьу 5!пц!е-Мгапс! Соп1оггпа6опа! Ро!угпогрЬ!ьгп апс! Не1егос!ир!ех Апа!уыил р гткстюы ог митлтюнь ь тккент!Аг ток могксылк снлклстгк!ллтюы, гдадпоаЬ, ргенеп6оп, апг) ггеагтепг оЕ !пЬег!гег! с1!аеааеа оЕ Ьитапь апй, пгоге депега!1у, го согге1аге РЬепосуре ьчгЬ депогуре ш огдап1ать аа сдчегае аа ппсе апг! а1ипе то1сЬ. ТЬе доа1 оЕ гпша6оп г!есесг!оп !а го 1осаге апг) ргес)ае1у йеасг)Ъе сЬапдеа ш ЕтХА аег)иепсе гЬаг аге геаропяЫе Еог раггки1аг РЬепогурек. ТЬе гапде оЕ роаяЫе тига6опа )к чету дгеас апг! шс1ийеь де1егюпя !паег6опя !пчегяопя ггапь!осагюпя сгапягюпя апг! ггапзчегьюпя догпе !агде-аса1е сЬапдеь сап Ье с$егесгес1, Еог ехагпр1е, Ьу сусосЬеппса! апа1уа!а оЕ сЬготоютеа ог ЯоигЬегп Ыогбпд оЕ депоппс ЕтХА.
Нончечег, Ъазе-Ъу-Ъаье согпраг1аоп оЕ гч!!с4-гуре апг! пшгапг Е)ХАь !а аг ргеаепс йе оп1у тейос1 го ршрошг тига6опь гЬаг аЕЕесг япд!е Ьааеа ог дгоирв оЕ Ьазея Весаиае аес)иепс!пд оЕ Ы1оЬаае 1епдгЬа оЕ ЭХА 1а ехрепяче, а!ой, апг! с1геагу, гпапу г!!ЕЕегепс гесЬпЬ!иеа Ьаче Ьееп г!ене!прей го !оса1гае пгша6опа апг1 Ьепсе гес1исе аес!иепс!пд со а пипипшп. ТЬеае ьсаппшд тегЬогЬ сбйег ъчЫе1у !п йе!г рогнег, ассигасу, арее6, апс! соаг, апс) еасЬ сап г!егесс оп!у а ьиЪаег оЕ тига6опя Аг ргеаепг, йегеЕоге, с!егесг!оп апс) 1оса1гаа6оп оЕ ипсЬагасгеПхег1 ро!пг тига!!опа ойеп гег!и!ге йе аегргеп6а1 арр1каиоп оЕ гнно ог гпоге асапп!пд тегЬосЬ, Ео!1оюег) Ьу УХА зег!иепс!пд го прес!Еу гЬе гпшагюп.
ТЬе оЫег !п гнЬ!сЬ гЬеве ьсапп)пд тегЬоиа аге арр!!ей апй ЕЬе!г зепа!г!ч1- су нату 6огп депе го депе ап6 Егот тига6оп со пшга6оп. 5сапп!пд тегЬос)а ш соттоп иае аге Ъааес) оп ЕКЕЕегепсеа !п е1есггорЬоге6с ппдгагюп апс) сЬгогпагодгарЬк ЪеЬанюг Ъеггчееп птгапг апд геЕегепсе !гн!!6-гуре) 01!Ая ТЬеае тегЬос)я гнЬ!сЬ !пс1иг!е япд1е-ьггапг! сопЕоппагюпа1 ро1утогрЬ!яп !ВВСР; гЬ)к ргогосо1), Ьегегойир1ех апа!уа!а (НА; гЬ!а ргогосо1), г1епагиПпд дгасдепг де1 е!есггорЬогеа!з (!ЭССЕ), апс1, тоге гесепг1у, соир1!пд юп-раи гечегае6-РЬазе 1!с!и!6 сЬготасодгарЬу, сап тар тигагюпа го ап ассигасу оЕ к 200 Ьр.
РЫеохуЕгпдегрг!пг1пд !г!г!Р), а ЬуЬгЫ Ъеггнееп с)Ыеохузециепс1пд апд ддСР, )а гпоге сИ6си1г аист ехрепяне, Ьиг 1г гк сараЪ!е оЕ тарр)пд тига6опь гч!гЬ а геьо1игюп оЕ - 10 Ьр. 61 ЧСЕ.Е-БТКАМ0 СОХГОКМАТ1ОЫА1. РОЕУМОКРН1$М ддСР !пчо1чеа йгее яеря ° агпр116са6оп Ьу РСК оЕ йе гагдег гед!оп оЕ йе депе ° с!епагигаг!оп оЕ йе РСК ргог!исг ° е1есггорЬогеа!а оЕ йе а!пд1е-аггапг!ес! Етт !А гЬгоидЬ а де! аг пеигга1 РН 13.49 13.50 СЬар|ег 13: Мига8епел!л алыгвпг поггпа! А в ггвпвлвгв бор|ахов с о А В А В гаво|не Ьу пвг|че де! в|вс|горпагвяв Е!х ОКЕ 13-6 БсЬепла|!с 1ог 8!и !е-в|гапоео Соп1огпла|!опа! Ро! олог Ь|яп А пг!хег! роро!аиоп о1 ||МА г!ир!ехев сопв!вл!п8 о1 поггпа! (гч!!г! гуре! ав гче!! ав а|агап| вес!иепсев !в г!еоагигег! ав г!евспЬег! |и йе |ех|, аог! |Ье гехи!6п8 в|п8!е-вггапг!ег! ргоЬев аге гево!чес! Ьу е!ес|горЬогеяв иог|ег ион|!епа|ыпп8 соглг||г!оов.
8!п8!е-вггапдег! 131х!А шо1еси1ев уо1|! !п|о сошр1ех |Ьгее-г!!шепа!опа! вггисгигев ав а сеял!| ог !пггавггапг) Ьаве ра|Пп8. 8!п81е вггапгЬ ог е|рла!!еп8й Ьи| с!!Кегепг ве|!иепсе сап гЬегегоге чагу сопв!г!егаЫу |и е1ес|горЬогейс гпоЪ|1пу ав а геял!| оГ |Ье 1оор|п8 апг! сошрас|юп саивег! Ьу 1псгавггапг! ра|Пп8.
А1|егаг!оп оГ йе пис1еог!г!е весрлепсе оу йе пю!еси!е Ьу ав 1!г|1е ав а яп81е Ъаве сап гевЬаре |Ье весопс!агу в|гис|иге, лч!|Ь сопвесрлеп| сЬап8ев ш е1есггорЬогег!с пюЪ|1Ьлев |Ьгои8Ь паг!че 8е1в (р1еаве вее Р!8иге 13-6). 88СР ехр1о!гв йе г!!ггегепсев ш |поЪ|1Ьу Ъегччееп ъч!18-гуре ап|! шшап| вггапг!в ог 13)х!А (Ог!га е| а1. 1989а,Ь, 1990; Ашв|чог|Ь ес а1. 1991; 13еап ап|1 беггагс! 1991; Сопг!!е е| а1. 1993; С1ачас ап|1 13еап 1993; лог геч!елчв, р!еаве вее Рап е| а!. 1993; Ах|оп ап|1 Напвоп 1998; 1аес1|е1 е| а1.
1998; 1ч1агага) е| а1. ! 999). Ртотосо! 8: Ретеспоп о~Магас!опт Ьу 55СР апт! НА 13.51 АгпрИ!еабоп ВосЬ я)па1е- аит) т)оцЫе-ясгапт)ет) Р)4Ая сап Ъе апа1ухет) Ьу 55СР. 1п еасЬ саяе, сЬе РЯА 1я атр11- 6ес1 угогп аепот)с РЫА сетр1асея Ьу еиЬег сопчепсюпа1 РСК ог аяупипеспс РСК (РСК-55СР). !)я!па т!оцЫе-ястапс)ес) РХА а11оння Ьой ястапт)я оГ сЬе сагаес геа)оп со Ье апа1ухет1 япш1сапеоця!у. ТЬля тау Ъе ап ат!напсаае япсе сЬе яепя6Ысу ол пилса6оп т1есессюп )я ойеп агеасег уог опе ясгапт) оу Р!нА сЬап сЬе осЬет, апт) Ь гя пос рояяЫе со ргейсс ънЫсЬ астапов лч111 у)е16 йе Ьеяс соп1оппегя Сот 55СР. Моя 1пчеяс)аасогя Влит) сЬас сЬе ейк)епсу пут)есессюп ау пшсасюпя ыпахста1 лчЬеп сЬе РЬ)А )я 150-200 Ъаяея ш!епасЬ апт! т)есгеаяея гарЫ!у ая сЬе я)хе от" сЬе РХА шсгеаяея !5Ье6)е16 ес а1. 1993; Качи))т-С!анас ес а1.
1994). Нонтечет, ойегя герогс йас йе еСТесся от" 6 аатепс 1епасЬ аге пос яо т)гата!)с !Рап ес а1. !993; Н)аЬят)сЬ ес а!. 1999). А та)опту оу 1пчеяс)аасогя цяе Тат) ог Р6 л со сага!ухе агпр1л6сасюп геассюпя, ънЬкЬ аге аепега11у гцп цпт)ег ясапт)агт) сопйсюпя. ТЬеге 1я цяиа!!у по пеет! со тетоне цпцяе6 рпгпегя ог т))ч)ТРя Ъеготе сЬе яатр!е гя апа1ухей Нолнечег, 6 гя ипрогсапс со пипспихе йе ргойлссюп оу попяресгбс атр1л6са6оп ргос)цсся, чнЬояе ргеяепсе сап сотр1касе сЬе тисегргесапоп от" геяц1ся ол ае! е1ессгорЬогеыя. ОепаШга1!оп Вегоге!оайпа оп СЬе ае1, тсоцЫе-я!таит!ет) Р)н!А )я т)епатцгет) Ъу аПта11 ог, тоге сопипоп!у, Ьу а сотЪлпаиоп от" тоттатпЫе апт) Ьеас.
!т" йе Р)ч)А Ьая Ьееп атпр116тет) 1гот а Ьесегохуаосе, а ргорог6оп оуйе т)епасцгет) сотр1егпепсагу ясгапт)я тпау геаппеа1 со опе апойег Ьетоге сЬе РХА гя 1оат1ет1 опто йе ае!. А ргорогпоп от йеяе пю1есц1ея чч!11 Ье ЬесеготЬлр!ехея уоттес) Ьу аппеа!шВ от" сотр!етеисату лн11йсуре аит1 пшсапс ягаийц ТЬе ргеяепсе от" ЬосЬ я)пВ1е-я!таит)ес) ап6 Ьесетот)цр!ех РЬ)Ая ш йе яатие яапср)е ргочЫея ап оррогсцшсу со цяе слчо ясапп)иВ тпесЬот)я я!тц!сапеоця1у (55СР апт! НА; яее Ъе1олн).
1Г йе РсйА цпт1ет сея! Ьая Ъееп агпр116ет1 !гопт а Ьар1оЫ огВашят ог лгот а Ьотохуаоця йр1оЫ, сЬе тоттасюп оГ Ьесетот)цр1ехея сап Ье рготосес) Ъу асЫша ап арргорпасе атпоцпс оуйе соггеяропйиВ яеатепс ол лч!1д-суре 1Ахсоп апс1 Напяоп 1998). Ноънечег, лче гесопипепс1 йе япил1сапеоця цяе оу снчо ясапп)па сесЬштрлея оп1у Сот сЬояе !пчея6Васогя ччЬо аге Яцепс ли 55СР апт) НА. Е!ес1горЬоге5!5 Соптоттегя оу я!па1е-я!таит!ес) Р11А аге яерагасет! Ьу ае! е!ессгорЬогеяя цпт)ег попдепасцппа сопйсюпя.
Весацяе йетг тоЪ|1иу чапея сопя)т)егаЫу тч)сЬ сетрегасцге апт) юпк ясгепасЬ, и )я цяца)1у песеяяагу со апа1ухе яатр!ея цпт)ег стно ог тоге яеся от сопйсюпя со оЬсатп ассерсаЫе геяо1ц6оп от" йСТетепт сопуоттегя. С!ояе Со 1009о от" пшСа6опя сап Ье т)етестет) 1155СР )я сагпет! ош ш а гаиае ол Ьцйегя апт! сетрегашгея !е.а., 0.5х ТВЕ ас 4'С апс) 15*С ог 0.5х ТВЕ лч)сЬ апт! нн)сЬоцс сотроцпт)я яцсЬ ая В!усего! йас аге псЬ ти Ьут1гоху1 агоцря [С1ачас аит) Реап 1993; НауаяЬт апт! 'таит!е!1 !993; Н)аЬятссЬ ес а!. 1999; 1.ш ес а1. 1999!) !Р1еаяе яее сЬе 1пГоппапоп рапе! оп СГГСЕКОс). Ассигасе сопсго1 оГ сетпрегасше т)цппа е!ессторЬогеяя 1я еяяепс)а1 со ртенеис йяяос)ас)оп оу )пстаясгапт) Ъаяе ралгя, деясаЫ1схапоп оу соптоппегя, апй сопяет!цепс)у, 1ояя от' геяо1цпоп.
ТЬе яепябчпу оГ 55СР чапея нн)сЬ йе суре оГ ае! таспх, лн)сЬ орсппшп геяц1ся Ье!пВ оЬса)пес) 6отп сгояя-Вп)тет) ро1уасту1атЫе. То асЬтече гергот)цс)Ы11су, тапу шчеяс)аасогя цяе ргегпат)е сопипегста! яо1цбопя оГ асгу1атЫе апт! Ь)яасгу1атпЫе (е.В., Асгу1оВе! ВРН). Нолчечег, сЬе Ъеяс геяо1шюп !я оЬсашет) ггот сЬе Ну<!го!ш)с яепея оу ае1 тасгкея (Ми!шаг) ес а1. !993); сЬеяе аге яо!6 цпт)ег йе стас)е паите оу МРЕ !Мосас)оп Ресессюп ЕпЬапсептепс) Ъу РМС Вюртос1цсп, КосИапд, Маше. 13.52 СЬаргег 13: МигаКепез(з Ое(есЕ(оп То зирргезз йе Гоппабоп оГ а зиг(еп оЕ доиЫе-з(гапг(ег( то!еси!ез, оп!у япа11 апюип(з оГ Г7ХА сап Ье 1оаде6 оп(о гЬ!и (0.4 пип) ае1з. ТЬе сопГоггпегз аге йеп 6егес(ест Ьу аи(огайоцгарЬу оЕ РСК ргойкгз ог Ьу з(а(шпВ оЕ ип!аЬе1ег( (3(х(А еВГЬ ВУВВ Со!6 ог я!чег.
чЧЬеп ГЬ(с1с (1 пип) ае1з аге изей, йе Е7(х(А гпау Ье г(егессаЫе Ьу зга!и!пд зч!(Ь ей(йшп Ьгош!6е. Ас!чап(аце8 апс! 0(Вас!чапЕаееь оЕ %СР ВОСР Ьаз 6гашаг!са(1у нпргочес1 (Ье е(Ггс!епсу зч!(Ь зчЫсЬ пизга6опз сап Ье !г)епг!Веб Ьу пю1еси1аг апа1узез оГ гпагпгпа1(ап гпзиез. ТЬе ше(Ьо6 сап а!зо Ье изег( го бе(ее( ййегепс шигапг аПе!ез апяпВ Ггош сЬеппса! шигацепез!з, саззегге шигааепез!з, ог яге-Йгесгеб шигааепеяз чйй Гапи1(ез оГ о!!аопис1еог!с(е шигааепз. ТЬе гесЬп!с(ие гез)шгез по зрес!а! ез(и!ргпепс Н ге1а6че1у згга!ВЬЕГогзчагг( го рег(опп, Н зче11 зи!(ед го попгайоас6че ше(Ьог(з о( г(есесг!оп, апг( сап Ье аг(арсез( го а гапае оЕ е1ессгорЬогебс сопйгюпз.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
