Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 174
Текст из файла (страница 174)
!977). Оп!у опе ыпц1е-алгапдед Ъапд чдН Ье дегеегед К сЬе слчо «оплр!егпепгагу лсгапда ос ЕЬе ГлЬ(А Ео!д шсо сопЕоппадопл гЬал саппос Ье гели!чед Ьу 55СР Тлчо а(п8)е-асгапдед РЫА Ьапда лч(П Ье десеесед !Е сЬе соплр|ешепсагу ыгапсЬ !о!д лпго гело1чаЫе сопЕогшегя ТЬе РСК ргодиег ос а Ьесегоху8оиа аПе1е Егогп а гНр1о!д огПап(яп аЬои1д Пепегасе ас )еааг Еоиг Ьапдя пчо ччЬоае шоЬл|ау лЬои!д Ье !Вепдеа1 го ЕЬаг ос гЬе чд!г$-гуре Ьапда апд глчо ЕЬаг аге сЬагассегЬгк ос йе рагиеи!аг пшгагюп. Ойеп, Ьолчечег, сЬеге чдП Ье лпоге гЬап глчо Ьапды елгЬег ал а сопаел(иеллсе ос Пепе!к ЬесегоПепе)гу (п сЬе лашр!е ог !лесасье йе слчо согпр!егпепгагу аггапй ос а РЫА пю!ееи!е еасЬ Ео1д |псо лпоге ЕЬап опе сопЕоппег. ТЬе рассегпа сап Ье Пи!ге согпр1ех апд аге пос еая1у ргегНссаЫе Ьалед оп РХА ле9иепсе, Пале еогпроягюп, ог Ега8шепс 1еп81Ы Ьолчечег, а 8(чеп раггегп Ь ослеп гНа8полдс Еог а рагдеи1аг плигадоп.
14. Ас йе согпр1елюп оЕ е1ессгорЬогеяя херагасе йе 8!аль р!асея апд сгаиаЕег йе Пе! со а аЬеес оЕ'лАгЬаслиап 3ММ В!сег рарег. Ргу йе це! оп а часиши г|гуег Еог 30 — 60 пиишеы 13.56 Сйаргег 13: МиеаеепезВ ТВОЕ)ВЕЕВНООТ3)ъ(С: СЕЕ ЧАК|АТЗО)ъ(5 ТЬ)е рго(осо| геео(чеь -75% о1 а|| ь)пВ(е Ьаье ра)г сЬапйеь )п ОНА 6 адпепге о1 <300 Ьр.
И (Ье гехи)(е аге по( ьа((е(ас(огу, (Ьеге аге а то(33(иде о1 сй((егеп( Ве) сопсй()опь (Ьа( сап Ье пеев (о гено)че ь(пц)е-е(гапсеИ , 034А соп1оггпегя. Еог ехатр|е: ° Сапу ои( е(ес(горЬогеь(ь (ог 12-1 6 Ьоигь а( 4-6чС. ° Сан( а ро)уасгу)агп(Ие Ве) ае с1еясг(Ьед аЬоче, Ьи( ъчйЬ е|(Ьег 5% (ч(ч) В|усего| ог по В|усет|. Сапу ои( е|ес(горЬогезь (ог 12 — 1 6 Ьоигь а( 4-6'С. ° Сае( а ро)уасгу(агп|Ие Ве) ие)пц а ЫВЬ-геео(и()оп Ве) ею|и(юп еисЬ аь Ми(айоп Ое(ес(юп Се1 5о)и(юи (е.ц., МОЕ Се! 5о|и(юп ЕМС В(оргоИос(х, Ма|пе). ТЬ|е гю|ийоп соп(а)пя а ргорие(агу Мпу! ро|угпег |и р|асе о1 ассу)ат)де. МОЕ це)е геео(че ьоте ь(пВ)е-ь(гапдед ОНА соп1оипегь Ьеиег (Ьап ро(уасгу)ат(Ие Ве|е.
Весаиье ИоиЫе-е(гапс$ес$034Ае гп)Ига(е гааге гар)И)у оп (Ьеке ВеВ |Ьап (Ьеу Ио оп ро)уасгу)ат(де 55СР Ве)% (Ье е(пВ)е-в(гапбес$0Е(Аа аге о((еп Иъе оп|у 1гайтеп(е с|е(ес(еИ Ьу аи(огасйойгарЬу. Еойоъч (Ье тапи(ас(игег'ь )пе(гисйопь (ог роиг)пВ МОЕ цеВ апс| по(е |Ьа( а сййГегеп( ь(гепц(Ь ТВЕ Ьи((ег 'ь иста||у иьед.
° 3 оад И(((егеп( чо(отея ог' |Ье е(аг(|пВ атрйугса((оп геасйоп (а((ег с|епа(ига(|оп) оп (Ье 55СР Ве!. 1и гюгие сазе% |оасйпВ )еыь 0(ъ(А Иесгеааек |Ье сЬапсе (Ьа( (Ье зерага(еИ ь)пВ)е ь(гапсЬ ъчй геаппеа! ъч(Ь опе апо(Ьег апс3 ъчй )пе(еаИ 1опп )п(гае(гап6 Ьубгойеп-Ьопдед ь(гис(огеь (Ьа( аге зерага(еИ оп (Ье 55СР Ве).
° Ойи(е (Ье РСК |п(о ап 505-соп(а(п)пВ Ьи((ег Ье1оге е|ес|горЬогееь. (и |Ье аЬоче ехагпр|е, И))и(е 1.5 и! о1 (Ье РСК ъч(Иь 8.5 и) о1 0.1% (чулан) 505 |и 10 тм ЕОТА апс1 10 и) о1 1оипапък|е ануе т(х. Во|| (Ье ватри ае с3еьсг|ЬеИ (п 5(ер 10, апд апа(ухе 2 и! о1 Изе с3епа(игес3 034А оп ап 55СР Ве|. Еог ип1споъчи геаеопь, ЕЬе ргеьепсе о1 505 гюгпейгиеь (асй|(а(ее (Ье геено|обои о( ь!пВ|е<игапИеИ 034А соп(огтегь. ° 5иЬъ(3(и(е 1х ТВЕ Ве( Ьи((ег соп(ап)пц 20 тм НЕ РЕ5 1ог 1х ТВЕ це) Ьи((ег в (Ье рго(осо|.
ТЬВ е(тр)е адИ)- (юп Вгеа()у сЬапйех |Ье е|ес(горЬогейс гиоЫййек о1 (Ье ъ(пВ)е-я(гапс1еИ ОЕ(Аь. Сгеа(ег |Ьап 95% о1 соп(оггпегь !и ОЕ(А 1гадпеп(е <350 Ьр (Ею апд 5оттег 1998) сап Ье гено)чеИ ие)пВ Ьчо Ве(В опе сои(а(п(пц 1х ТВЕ Ве3 Ьи((ег, апс3 |Ье о(Ьег сои(а(п)пц 1х ТВЕ Ве) Ьи(1ег еирр|епъеп(ес! ъч(Ь 20 тм НЕРЕ5.
° АсЫ игеа (5%] ог 1оггпат|с|е (5%) (о (Ье це( Ьи((ег (о ргечеп( ьтеаппц о1 соп1огтегь ъч)(Ь ЫВЬ соп(епйа о1 СИС (С|ачас апд Оеап 1993). Ас И)йоп о1 Ь~ВЬег сопсеп(га((опь о1 игеа ргос$исез и)сгаеЬагр ЬапИе Ьи( а!гю а Иесгеаъе |и яепе)йн)(у о1 55СР (Оо е( а!. 1999). Сепега6оп о1 Бей о1 МеМед Ое!европ Ми1ап1ь маей Ехопис!еаье Ш ютясь ОКЫт!ОН МитЛМт5 ГАСК!!ЧС ркОСаЬяЧГГ~ МОКГ !40СГЕОтюг5 Ггот опе епс) ог ГЬе огЬег оЕ а гаг8ес РХА аге иаег! го г!еугпе гЬе Ьоипс)аг)еа оЕ Гипс6опа1 с6-ас6п8 сопгго1 е1етепга ог, тоге гаге1у гЬеае г!ауя аа гегпр1агеа Еог сбгесге6 РЫА асс)иепсшц. ТЬе тегЬог!а ге!у оп пис1еааеа аисЬ аа ВАЬ 31, рапсгеа6с Р!ч!аае 1, ог ехоппс1еаае 111, ччЫсЬ 668еаг РХА 1и а ргесбсгаЫе ГааЬюп. ОЕ гЬеае епхутея ехопис1еаае И1 1а Ьу Еаг йе Ьеви ° ТЬе ехопис1ео1угк геас6оп ргосеег)а аг а гетаг)саЫу птЕопп апг! ргербсгаЫе гасе, та!с!п8 роаяЫе йе яит1гапеогь !ао1аг!оп Ъой оЕ пеагег) г!е!ег!опа апг! оЕ 8гоира оГ с)е!егюпа чбгЬ 68Ы1у с1иагегег! епдрогпгя ° ТЬе тегЬог! ь пос геагпсгег1 го апу раг6си1аг чесгог.
° ТЬе епг)ге аепеа оГ епхугпабс геасгюпа Гехопис1еаае с)18еагюи, ггеагтеис чч)гЬ пис1еаае 817типц Ьеап пис!еаае, апг! гес)гси1аг)ха6оп) сап Ье сагг)ег! ош ш а япц!е аег оЕ гиЬеа ъч)гЬ- ош рип6са6оп оЕ шгеппербаге ргог!исга (Неп))соГЕ 1984, 1987, 1990). 1п гЬе тегЬог! г1еаспЬес1 Ьу Неп)!соЕЕ 11984), йе с)оиЫе-аггапс)ег! РХА оЕ гесотЫпапг р1аяп)й рЬа8ет)й ог Ъассег)орЬа8е М13 гер1каг)че Гоггп РЬГА ь й8еагес1 гч)ГЬ гччо геягк6оп епхутеа ччЬоае а)геа оЕ с!еача8е ЬогЬ !ге Ьегъчееп опе епг) оЕ гЬе гаг8ег Р1чА апг! йе Ьшсбп8 яге оЕ а ипгчегаа1 рпгпег. ТЬе епхуте гЬаг с1еачеа пеагег йе гаг8ег аег!иепсе тиаг 8епегаге еЬЬег а Ыипг епг! ог а гесеье6 3' гепи!пия йе ойег епгуте тиаг 8епегаге а 4-пис1еог)г!е ргоггийп8 3' Геппшиа. Весагье оп1у йе ЫипГ ог гесеааег) 3' Гегпипгь оГ ГЬе геап1Г!п8 1шеаг РЫА ь аия сер6Ые го ехопис1еаае 111, с68еаиоп ргосеегЬ ипЫ!гесгюпа11у аюау Ггогп йе яге оЕ с!еача8е апг) гпсо йе гаг8ег РХА.
ТЬе ехроаег! яп8!е аггапгЬ аге гЬеп геточе6 Ъу й8еагюп гч)гЬ пис1еаае Я! ог тии8 Ъеап пис1еаае, апг) йе РЬ)А ь йеп гесггси!аггеей 1Е беягей а аупгЬег!с 11п!сег сап Ье шаеггес! ас йе иге оЕ гес)гси1агиаг!оп. ТЬе оп!у я8п)Егсапг 1ипиа6оп оЕ йе тейос1 1а гЬе гес)шгегпепс Гог ап арргорпасе геагпсгюп яге аг опе епг! оЕ йе гаг8ег РХА гЬаг !а пог яьсер6Ые го а!гас)с Ьу ехоппс1еаае П!. Нов ечег, ш ргасисе, йь !итгагюп 1а пог а аепогь !треб!тепг, ТЬе гап8е оГ с1опгп8 ягеа спггепг1у ачаг!- аЫе ш ЪассегюрЬа8е М!3, рЬа8ет)й апг! р!аяп)г! чесгога ь ао 1аг8е гЬас 1г ь аЬиоаг а1хауа роя яЫе го Егпг! а чесгог гЬаг ь аи)гаЫе Гог йе раг6сц!аг гаг8ег Ега8тепг ипс!ег агиг)у.
1и гЬоае гаге шагапсеа ччЬеп по аи!гаЫе геагг!сг!оп яге !а ачаг1аЫе, гесегьей 3' септт сап Ье ргогесгег! Егогп а!гас!с Ъу 61!ш8 чч)гЬ гЬе К!епоъч Ега8тепс оГ Е; со6 РХА ро!утегаае! апг! сг-йюрЬоарЬаге г)14ТРа !био апг! Ъи 1983; )аяп ег а1. 1983). А1гегпаг)че!у, а ргогесг!че "Ьийег" 6а8гпепс сап Ье 13.57 13.58 СЬаргег 13: Мига8епеь!ь МАТЕ К! А!5 САС)Т!ОЫ: Р1еаье ьее Аррепйх С 2 Еог арргорпаге Ьапд1!пц оЕ таСепась таг)сед илСЬ <!>. ВссЕЕегь апд Яо!НЕсопь Р!еаье ьее Аррепйх 1 Еог сотропепСь оЕ ьгос)с ьо!ибопь, ЬиЕЕегь, апд геа8епСь. Р!1иСе ьСос)с ьо1и6опь Со йе арргорпаСе сопсепСга6опь. с!НТР ьо!ипоп спаса!и!пВ г)АТР, г)СТР, апс! с)ТТР, еасЬ ас 0.5 тм !и 25 тм Тг!ь-С! ЕрН В.О) ЕСЬапо! 110056, гсе со!сс, апг) 70;4, гоопс Сетрегагиге) 10х Ехопис!еаье И ЬиЕЕег 660 гом Тпь-С! срН 8.0) 66 пгМ МЕС! 100 пгм 8-гпегсарсоесЬапо! <1> Е!ис!еаье 51 ьгор т!хгиге 0.3 М Тга Ьаьа 50 пгМ ЕС)ТА СРН 8.0) РЬепо1:сЫогоЕопп < ! > 5осВит асегаге ЕЗ м, рН 5.2) Еп2угпе5 апс! ВНЕЕег5 Ехопис!еаье И ТЬе срла16у оЕ ехопос1еаьс П! чапсь Егопг гоапасассогег со пгаписассшег апс! ьЬои!д !уска! Ж8еьи Ъссогс!аг8с-ьса1е ргсрагаиоп оЕ пеясс! с!с!ссгпо сесар!асса.
К!епосч т!хгиге ЕьиЕЕсс!епг Еог 30 ьатр!еь) НО 20 н! С М Мьс!а бн! 0.1 М ТгеиС! срН 7.6) 3н! К!епоъч Ега8пгепс 3 оп!и Ргераге сЬ!ь пихюге оп кс )иьс Ьесоге оье. С!Вахе т!хгиге ЕьиЕЕ!с!епг Еог 24 ьатр!еь) НО 55О н! сох ЬассспорЬа8е Т4!18ас1оп Ьосусг 100 и! 5 гпМ гАТР соо н! ро!усйу!аос 81усо! С309а гч)ч РЕС 8000) <.'> 250 н! ЪассспорЬа8с Т4 РССА!18аье 5 Ч'есьь иеась Ргсраге й!ь пг1хсагс оп ссе )оас Ьесоге иьс. Ье сЬссСсед сп апа- гпьегсед Ьессчееп йе ясе оЕ с!еача8е апс) сЬе Папрбп8 чессог ьесргепсеь (На!с!пег ес а1.
!985). !Е йе Ьийег Ега8тепс )ь!оп8 епои8Ь, сЬе рго8геьяче гегпоча) оЕ йе саг8ес РЫА Ъу ехопис1еаье П! !ь ип1!)се!у со Ъе ассотраспед Ъу 1оп оЕ еььепба1 ьессиепсеь Егогп йе Е)апЫп8 чессог. Рог сЬ!ь тиса8епеяь ргосес)иге со Ъе еПес6че, 6 !ь еььеп6а! йас 6!Веьс!оп оЕ йе сегпр1асе РХА Ъу сЬе арргор пасе геьспссюп епхутеь Ье согпр1есе.
Ноччечег, 1Е сЬе сачи геьспссюп ясеь аге с!оье со еасЬ осЬег, сопср1есе й8еьбоп гпау гес)шге й8еьс!п8 Еог ехсепс)ес) 6гпеь сч!сЬ 1аг8е агпоипсь оЕ опе ог ЬосЬ епхутеь, ччЬ!сЬ гпау 1еас) со и!с)608 оЕ сЬе сегпр!асе. Весаиье ехопис1еаье П1 еЕ6ссеп6у апас1сь сЬе 3' епс1 оЕ а пк1с (Маьатипе ес а1. 197 1), с)е1есюпь тау сЬеп Ье Вепегасес) сп ипс)еягаЫе !оса6опь !и ЪосЬ сЬе чессог апс) сЬе саг8ес РХА. 1п оиг Ьапс)ь, сЬгь ргоЬ1ет гетаспь 1аг8е!у а сЬеоге6са! роьь)Ь!1!су йас оссигь гаге!у !п ргас6се. ЧГе йегеЕоге гесогптепс) йе иье оЕа ргососо1 Ьаьес1 оп й8еьбоп оЕ йе сеспр1асе РЫА чпй ссчо геьспссюп епхутеь, аь беьспЬес) Ьу Неп!)соЕЕ (1984).
Ргосого! 9г Сепегасгоп оГ5егг оГ)4еггегГ Ре!епол Мигал!а нлГЬ Ехопиг(еаге Ш 13.59 А(ис!еахе 57 геаеКол т)х1иге Н,О 172 н! 10х 51 Ьнйег 27 р! пнс1еаае Я! 60 ниах Ргераге сЫа пнхсше )ыс ЬеЕоге нае. Мнпа Ьеап пне!еаае сап Ье анЬас(снсег( Еог пне1еаае 51 гп ЙЬ геаеКоп пах(иге. йехсг(с!гол елхутех Ки о) Рог а гВаенмюп оп еЬо!ее оЕ еихугпеа апг( епа(пеег(па сЬе(г гесоцпа!оп ясеа ргорег1у гпсо йе (агнес РГ(А, р1еахе аее йе (псгоднеКоп со ЙЬ ргосоео1 апс( Йе шСолпабоп ране! оп ЕХОЫСЗСЕЕА5Е 1ЕЕ Се!ь АВагоье Ве)х (Гаго), 7;4 (гч)ч) ааагохе (х(ос!есс АссГЬ апе! О!коппс!еоЕЫе5 ТагВе1 РА(А Апа(ухе (Ье аегснепее оЕ сЬе сагнес РВА Еог йе ргеаепсе оЕ ашсаЫе геасгкбоп ясеа. С!опе йе РСГА со Ье г((аеасег( шсо а р1аяпса ог Ьассег(орЬаее чессог сЬас солса(па аа Ее1ч попеяепсга1 аеднепсеа аа роьяЫе.
Апа1ухе ап а!сднос оЕ йе ргерагасюп оЕ гееопгЬ(паис р1аяпса РНА сЬас ь со Ье наес( аа а анЬасгасе Еог пшсааепеяа Ьу ааагоае ае! е!еесгорЬогеаа гп ТАЕ Ьнйег (р1еаае аее СЬарсег б, ргососо( 1). ТЬе р!аа- шЫ юнас Ье >90ай анрегЬе1ка( шо1ееи!еа, йернг(Еу йе ргерагаиоп сЕ апу 1шеаг ог >10ап пк)сес( ог ге!ахег( р1аяпкЬ аге г1есеесей Весаые ехопне1еаае!1! М!1 гшКасе йдеяюп Егогп япа!е-асгапг( пк(га, Ь ы 'ипрогсапс йас сЬе сешр!асе РВА солж( ргедош(пап(!у оЕ с!наес( е(ген!аг шо!еен1еа. РнлееаКоп оЕ йе сепгр!асе Ьаа ГЬе аИег( аг(чапсане о! гешочАпд япа1! р1ееех о( РГГА апг( КГ(А Егогп Йе с!оаегс е(ген!аг РГГА ргерагапоп. ТЬеае сап (псегЕеге ъчсЬ г((аеас(оп Ьу ехопне1еаае 111.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
