Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 182
Текст из файла (страница 182)
ъчтЬеп сЬ)а РХА ь чьей аа а сетпр!асе |и а с1ааяса! шиса8епеыа ргосес)иге, йе ргос)исс !ъ а Ьесего|1ир1ех пю!еси!е мл|Ь огас|1 ш сЬе ъч|1йсуре асгапс) ап|1 |Ьупнпе |и |Ье ъсгапс) аупсЬеягес) |и чьго. Ехроыге оГ |Ье Ьесегоъ)ир!ех со игасй-РЫА 8!усоау!аае, еьЬег ш чпго ог айег стана(ессюп оГ йе РХА шсо ап ип8 асгаш, гехи!та |и гетпоча! оГ йе огас|1 апс1 с!еачайе оГ йе РЬо|РЬосйеасег Ьас1|- Ьопе ас сЬе геы1сш8 арупшЫшк ясея ТЬеае 1ейа! !еяо|ь гея|1с ш ае1есьче ап|1 есйс)епс ъ)еасгиссюп оГ йе сетпр!асе |кап|1 апс! а тес(исс(оп ш ш(есспйсу оГ арргохнпасе1у 6че огдега оГ ша8п(сиъ)е.
А 1агйе ргорогйоп (ир со 80ай) оГ сЬе ЬассепорЬайе р1аъ)иеа аге йегеГоге йетйеь Ьу гер1касюп оГ йе стана(есс)п8, огас|1-Ггее ( — ) асгапй Весаиае аупсйеяа оГ сЬ)а а|ганс) ь рг)шеъ) Ъу йе пппайешс оййопис1еосЫе, п|апу оГ йе ргойепу ЬассегюрЬайеа саксу сЬе с)еягес) тпшайоп. ТЬе Кип)се! шесЬот) Ьаа сЬап8ес( чету 1йс!е япсе |ь шсгойисйоп (Кип)се! 1985; Гог геч(ею, р1еаае аее Кип1|е) ес а1. 1991). РегЬара сЬе опе яйшйсапс ьпргочешепс ь сЬе ехсепяоп оГ йе сесЬпп)ие со шс!иъ)е с)оиЫе-асгапдеъ) сешр1асеа с)ейчед Ггош РЬайепнъЬ (МсС!агу ес а1.! 989; мътап8 ет а1. 1989; Ыи ес а!. 1990; Гог тем(еъч, р1еаае аее Найеше|ег 1996) апъ) р!ааш!сЬ (!ип8 ес а1. 1992).
ТЬ)а нпргочеп|епс е1)ш)пасеа |Ье пеес) со ыЬс1опе йе Ггайшепс оГ шсегеас шсо яп81е-|станс)ет) чессога ЬеГоге пшсайепеыя Но|мечет, йе 1пуогтагюоп РатЬ 13.85 у|е16 оупшгапп Ь Пеиега1!у гайег!оъч апс1 адйбопа! ьгерь аге ойеп гейи(гед со гедисе йе Ъас1сгоипд о1 чд!с1-гуре рйайепидь ог р!аяпнЬ, !п адйгюп, Ьесаые 1Ье шьеггь 1Ьас сап Ье ргорайасед ш доиЫе-ягапдед несгогь аге )агйег, ь|йи|йюсапс1у пюге РХА ьейиепсшй иъау Ье гесригед со соийпи йе тигабоп(ь) о1 юпсегеь1 апс| го чегюуу йаг по гпигабопь Ьаче апьеп аиуъчйеге е!ье ндгЫп 1Ье гагйес РХА.
РЕ)Т ТЬе диг депе о1 Е. со(ю епсодеь 6()ТРаье, а гдпс-сопга|п|пй 1е1гатепс ругорйоьрба1аье (М, = 64,000) (5Ыогпа! апд КогпЬегй 1978; ЕипдЬегй е1 а!. 1983). |п диг гпигап1ь, йе сейь аЫйгу 1о сопнеп 6()ТР 1о 60МР пдгпра|гесй ТЬЬ десгеаье геьийь )и а 25 — 306оЫ )псгеаье |и 1Ье )п1гасейи(аг роо! о1 6()ТР ТЬе е|ена(ес| сабо о1 6()ТР:6ТТР |еасЬ го ап )псгеаье |и 1Ье Ьег|иепсу о( гпкбпсогрога(юп о1 6РТР аю а гапдогп ьиЬьег о( йе ьйеь попиайу оссир!ед Ьу йут|пе. ТЬе диг пвгап(ь о( Е, сой пьес| юп йе Кип1ъе! гпе(Ьос| ай соп(а)п а 1гасе о( 6()ТРаье асбч(у (Копгас| апд Еейтап 1975; Носйбаиьег апд )Аюе)ьь 1978), регйарь Ьесаиье а сотр!е1е )асй о1 1Ье епгупъе Ыейа| (е|- Най ег а|. 1988). МаЫе дию пв1апгь ьйоън )псгеаьед га1еь о( гесогпЬ|пабоп апд ьроп1апеоиь гпи(абоп, ъчЫсЬ геьи31 (гоги 1Ье сегпрогагу ь(гапд Ьгеайь апс| Парь |п ОХА саиьед Ьу ехсЬюп о1 1Ье игасй геяс3иеь Ьу огас)3-РХА П!усоьу(аье, епсодед Ьу йе ипй депе.
Е(МС Ргасй геьк|иеь )псогрога(ед |пса РХА |и Е. со(ю аге погпъайу гепючед Ьу 1Ье яиай топотег(с епгуте огас)3- РХА П)усоьу(аье (дедисед М, = 25,664) ънЬ|сЬ с!еанеь 1Ье А-й|усоьусйс Ьопс1 Ьеинееп йе Ьаье апд йе деохупЬоье рйоьрйасе Ьас)ъбопе, Еепега((ой ап арупткййс я(е (РпдаЫ 1974; (ог ген(еъч, р|еаье ьее РпдаЫ 1982; Тотй!п апд Аргеййона 1989). Пъе рйоьрйосйеь(ег Ьас)дюопе аг йеье я(еь Ь с!еанед Ьу епдопис!еаьеь (ехопис(еаье П| ог епдопис(еаье (Н) ((ог ген(еън, р!еаье ьее роуд апд Рпп 1993) апд 1Ьеп гера гег1 Ьу РХА ро|уюпегаье 3 апс3 Пеаье.
Сейь дейюс!еп1 !и игасй-РХА д!усоьу(аье саппос деаче 1Ье )ъ)-й!усоьуд(е Ьопд апс! 6Ьр|ау |псгеаьес| га(еь о1 ьропгаиеоиь ти(абоп ъчЫсЬ аге Ыаьес| 1оънагс| С:СъА:Т ггапь)бопь (Рипсап апс| М(йег 1980; Рипсап апс1 И(е(ьь 1982). ТЬе ипе Пепе о( Е. со(ю Ьаь Ьееп с)опед (Оипсап апд СЬагпЬегь 1984), аь Ьаче Ь|ф|у сопьегнес1 ипе депеь (гот тапу ойег огцап(ьть (пс|ийпй уеая, Ьигпапь, апд Ьегреючгиьеь Мог ге(егепсеь, р!еаье ьее ОЬеп ег а|.
1991; Роуд апд Рпп 1993). ТЬеье цепеь ргоЬаЫу еноЫед 1о гегпоне гпи(айеп)с деапипа1ед с)аоь|пе геядиеь (гоги РХА. (7пюдие Веьггюсгюоо 5юге Е)ютюоа(юоп 1)пк!ие яге е!юпипабоп (РВЕ) Ь етр1оуес| ш с1аьь|са! о|юйопис!еогЫе-йгесгес1 пшгайепеяь го йцеы ишишагед доиЫе-ьггапдес! Р1аяиЫ РХАь гЬаг саггу а ип|г)ие геыпсбоп яге юп а попеяепгюа! гей(оп (Репй аид Х|с)со!о11 1992). 1п йюь тейод, гъчо ргипегь аге ЬуЬпйгес| яюии!сапеоиь1у го 1Ье депагигед гегпр!аге РХА апс! опе ргииег Ыггодисеь йе с1еягег| пшгагюп юп йе гагйег РХА; 1Ье огЬег с|еягоуь йе ипк!ие геыпсбоп ьие юп 1Ье р!аяпЫ. Айег йе ш чиго тигайепеяь геасг)оп Ь сотр1егед, 1Ье р1аяпЫ РХА Ь иьед го ггапьуогт а ягаюп о1 Е.
сой 1Ьаг Ь дейюс(епг ш соггесг(ий т(ьтагсйед Ьаьеь, 1ог ехаиюр1е, а ьггаш саггу(ий а июиг5 пшгагюп. ТЬе пияпагсйед Ъаье ра|гь юи 1Ье Ьеюегодир!ех РХА аге геьоЫед Ьу герйсагюп, гагЬег 1Ьап гера|г. ТЬе р|аьгпЫ РХА ргерагеъ1 1гогп роо1ед сгаиьуоппапгь |ь йеп ййеьгед ндй 1Ье геыпсбои еигуиюе гЬаг с!еачеь н616-гуре РХА аг гЬе иин!ие яге. Р1аяинЬ гЬаг биче егкаред тигайепеяь нд|! Ье деачед Ьу йе епгуюпе шго!шеаг РХА, ъчЫсЬ ггапьуогть Е. со(ю шеуйюс(еп11у. Мшапг р1аятсЬ, оп йе огЬег Ьапс|, аге геьЬгапг со ййеыюп, гегаюп 1и11 ггапьуогтшй аЬю!Ьу, аис1 аге еуйюс(еи11у гесонегед ау(ею ггапьуогтабоп о1 а тию5' ягаш оу Е.
сой (Репй апс| Х)с)со!оП 1992; Ойгегиюаи ес а!. 1996). ТЬе РВЕ июегЬод ъчогйь ндй )псгеаьед еуйюс(епсу 11 йе гъчо пниабопь сап Ье сотЫпед шго а яп51е ргипег, ъчЫсЬ гпау Ье ьупгйеь|гед с1е почо ог, гпоге сопппоп)у, Пепегасед Ъу РСК. ТЬЬ арр!кабоп Ь еьрес|айу иье|61 (1) 111Ье геыпсбои яге иьеъ1 1ог ье1есгюп Ь ВашН1, Вч(!1, ог Рчи!1; 1Ье геьггкбоп яге ье!есгюп Ьаьед оп йеье епгугие гесойп)боп ягеь, 1ог ип1споъчп геаьоиь, доеь пог нюог1ь ъче11 ъчЬеп гъчо ьерагаге тигайеи)с рпгпегь аге иьед ог (2) 111Ье р1аяиЫ иьед аъ гетр1аге Ь!агйе (>б )сЬ). Рог тоге шуопиагюп, р!еаье ьее шыгисгюпь ргочЫед Ьу 1Ье пюапиуасгшегь о1 ()5Е тигайепеяь 36Ь (е.й., АюиегьЬагпРЬаппас)а) (р1еаье ьее йе шуогтабоп репе! оп СОММЕПС!АЕ К|Т5 ГОП 5!ТЕ-Р!3(ЕСТЕР М(3ТАСЕХЕ- 515).
13.86 СЛарсег 13: Масалиев(в О О=Р 1 О О=Р Е(ССЗКЕ 13-11 5(тие(иге о1 РЬов Лого(Ыоа(е-соп(а!п(п О11 опис1еоСЫе РЬоврЬогосЫоасе апа!о8в о( О!|А ап|! К(ъ)А соп(а(п а ви!(иг аСот (п р!асе о( оху8еп |и йе рЬоврЬог)1- евсег !!п(ъаВе Ьесъчееп Ьавев, (а) 5сгис(иге о( СЬе поппа! рЬоврЬое8евсег !)пЕа8е; (6) в!гостите о( йе рЬоврЬогосЫоасе-сопса!п)па !(п(са8е, (Кес)гаъчп, иа!сЬ реппьвюп, 6оп| ТгБп(с В(оТесЬпо!о8!ев, !пс.) 1пеогрогабол о1 РЛоврЛого(6!пасе Апа(одв тсо 16е Мигалт Ягапгу РЬоврЬого|Ыоасе апа1о8в оу ТтсвА апс! КсвА сопсаш а ви!тиг асогп |и р(асе о( а попЬг(г(81п8 оху8еп ас опе ог тпоге аусЬе 1|п1|а8ев Ьесчтееп аг()асепс пис1ео|Ыев ((ог геч(еъч, р1еаве вее Ес1|всеш 1985; Хоп ап|1 беЬег 1991).
1ъис1ек ас(ъ(в сопса|шп8 РЬоврЬого|Ыоасе Ьиегпис!еоь)е 1ш(св сап Ье вупсЬев(хет( ш чпго Ъу РИА апс( КХА ро!утпегавев (п геас6о|ь сопсашш8 пис1еовЫе РЬоврЬогогЬюасев ав виЪвсгасев (ача)1айе 6оп| 5упсЬе8еп ог Арр1|е|1 Вювувсепь). ъътЬеп вирр!(еъ) ъчпЬ 5 -йаыегеогпегв оГ т(ХТР-5 ог (ъ(ТР-5, Ьой сурев т о( ро1утегавев есу|с(епс!у саса!ухе |Ье 1оппасюп от РЬоврЬогосЬюасе шсегпис1еосЫе 1ш)са8ев ехс!ияче1у ш |Ье К -т((авсегеотег(с еоп68ига6оп (Тот геч(еиь р!еаве вее Ес)свсеш апс( ОЬЬ 1989). 1псогрогасюп оу у пис1еоыде РЬоврЬого|Ьюасев |псо а 8гоъчш8 Р|5(А ог КсвА сЬаш сЬеге(оге тчоьев пег шчегяоп от соп68игас!оп ас сЬе Ьг(ъ(8(п8 РЬоврЬогив а|от (р1еаве вее Е18иге 13-11) (Ес1|всеш 1985).
РЬоврЬогосЬюасе-сопсашш8 )3)ъ(Ав ап|1 КХАв аге чету ыпи!аг (п ыгиссиге со сопчеп6опа1 пис1е|с асЫв. Ноъчечег, йе ргевепсе о(а ви!(иг асоп| ъч(сЬ а 1аг8ег чап т(ег ъътаа!в гайт, 1оъчег е!еесгопе8ас!ч(су, ап|1 гет(исеь) аЪ|16у со Тост пт16Р1е Ьопй гехи!ь ш чье|и! сЬап8ев ш сЬеписа1 ргорегВев сЬас сап Ье Ьагпеввет( (ог а чаг!есу о( ригровев ш п|о!еси1аг Ью1о8у апт( пю(еси1аг с!опш8, Рог ехаспр1е, Ьесагье от" сЬе гейкеь) е!ессгорЬ(!к)су о( сЬе ви!6и. асогп, РЬоврЬогосЫоасе 1ш)|а8ев ш Ет)ь(А ап|1 К(ъ(А аге геяяапс со Ьу|!го1увь Ьу сегса|п пис!еавев, ъч(сЬ сЬе |)е8гее ог" геявсапсе Ьеш8 ъ)ерепс)епс оп сЬе рагбси1аг пис1еаве, йе всегеосЬегпьсгу от" сЬе РЬоврЬогосЬюасе 1ш)|а8е, |ь с()всапсе угот сЬе вс(я(1е Ъопд, апс! сЬе суре ос |пега! со(ассог геъ(и(гет( Ьу |Ье епхугпе. РЬоврЬогойюасев тпау Ье ивет( со шсгеаве сЬе е(утс(епсу о( о118опие1еосЫе-т)(гессе|) пп|са8епеяв ог ЬосЬ яп81е-ыгап|1е|1 сетпр1атев (Тау1ог ес а1.
! 985; съа)татпауе ап|1 Ес)|все(п 1986; 5ауегв ес а1. 1988а,Ъ, ! 992; 5ауегв апг( Ес)свсеш 1989, 1991, 5и8(тоси ес а1. 1989) апт) г(оиЫе-всгапс)ес) сетр1асев (ОЬеп апт( Ее1|всеш 1990, 199!). 1п йе саве оуяп81е всгапъ(ет( тетр1асев, а т)втасеЬет) о118опис!еосЫе ргипег ь аппеа!е|1 со а в(п8)е-встаат(ес( РЬ)А сетр!асе ав г(евсг(Ьеь( Ьу Хо!1ег ап|! 5писЬ (1983). ТЬе рпп|ег ь ехсеп|!е|1 Ьу а ро1успепхаВоп геас6оп сиса!утес( Ьу ЬассегюрЬа8е Ту Р)ъ(А ро1утпегаве ог сЬе К1епоъч Сга8тепс.
1п сЫв геассюп, опе оу сЬе сопчепсюпа! т((ътТРв (|ьиа!!у т(СТР) ь гер!все|1 Ьу |Ье соггевроп|Вп8 т()ь)ТР-5. ТЬе геви1с|п8 Ьесегодир1ех сЬеге(оге сопявь о( а сетр1асе астап|1 ъчЬове Ьас1|Ьопе сопсашв сопчепсюпа! РЬоврЬогВевсег Ьопт(в ап|1 а тисасеъ) (е) всгапс( йас сагпев РЬоврЬогосЬюасе (псегпис1еоп|Вс 1ш1|а8ев со сЬе 5' вЫе оуа!! дС гея|Ьсев арап 6оп| йове соотг)Ьисеь( Ьу сЬе птса8етс о118опис!ео|Ые ргипег. 1пеиЬасюп о(йе Ьесегоъ(ир1ех ъч( сЬ а гевспссюп епгуте (ивиаНу №|1 ог Аъ а1) тес и1св |и а рагс|а! геас6оп |и ъчЬ(еЬ |Ье се|пр1асе астап|1 ь ве(еес|че!у те(|ей ТЬе астап|1 саггуш8 РЬоврЬоготЬюасе сея|!иев ь геяяапс ю с68евсюп Ьу сЬе гевспссюп епхуп|е. ТЬе пк1|в ш тЬе сетр!асе астап|! аге ехсеп|1ет! Ьу геас6оп ъч(сЬ ап ехопис!еаве (ехопие1еаве П1, Ту ехопис!еаве, ог )ъ ехопис1еаве).
ТЬе Вар Вепегасес( ш |Ьзв ъчау (в сЬеп 6!!ет( Ы а весопт( 1и(отта!(оп РаиеВ 1З.В7 ро!ушепхасюп геасПоп зп зчЫсЬ сЬе ишсапс (е) а!таит) (а изет) аа а сетпр1асе. Весаиае сЬе гпшапоп )а позч сагпес1 оп ЬосЬ а!таис(а от' сЬе РНА, >90ауа от сЬе р! ат)иеь Вепегасет) атсег !тапа(есс(оп сопа!ьс ехс1ияче1у оз сЬе с1еятес) тпшапс. 'ззтЬеп йВ сесЬпщие зчаа Пгас с1ече1орес(, йе сЬоке о! теьсПсиоп епхупзеа зчаь Пиисес1 со сЬоае сЬас Вепегасет) шс)сес( Ьесегос)ир!ехеа зчЬеп ргеаепсез) зч)сЬ шЬягатеа йат Ьас) Ьееп аьуиипесисаПу 1аЬе! ет) зч(сЬ РЬоарЬогойюасеь (5ауел ес а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
