Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 184
Текст из файла (страница 184)
13.90 СЬартет $3: А(игадеаеязя ъ. ЕУСЕ$яОЕ С1усего! (р1еаяе вее 168иге 13-12) Ь ивет) Еог вечега1 ригровев |п тпо1еси!аг с!ошп8, шс1ийп8; ° рог ятаЬЕ!!хат)оп оЕеплушев. Мовс ептупзея аге я|РРПе|1 Ьу сосптегс(а) тапиЕассигегв ш Ьи((егв сопсашш8 509|я 81усего!, ъчЬкЬ аПоъчв сЬе ргерага6опв со Ье азоте|1 ас — 20 С чбсЬоис Егеех(п8. С!усего1в апз( ойег ро1уо1в аге сЬоиВЬ| со ехегс |Ье|г еЕЕессв Ъу всаЪ|1Ьш8 ргосеш-ргосеш |псегассюпв.
С!усего! Ь сЬегеЕоге ъчЫе1у ивет! то Вепегасе сопсшиоив |(епясу Вгайевсв Еог |Ье апа1увь оЕ сЬе сопзрояс|оп апс( пю!еси1аг ъче(8Ыя оЕ ргосеш сотпр1ехев. ° Еа Ке)-Еоа|$!п8 Ьи),'Еетв. С!усего! Ь зье6 со 1псгеаве йе з)гиясу оЕ Ве!-!оайп8 Ьи6егв ап|$ йегеЬу 1асП|- сасе сЬе )оайп8 оЕ пис1ек асЫв апз( ргосе(пв |псо |Ье в!оь оЕ аВагове аптс ро1уасгу!апзЫе Ве!я. Н18Ь сопсепсгасюп оЕ 81усего! (>89а) |п ватр)ев аррПез( со Р)ъ|А вес)иепс(п8 ВеЬ, Ьочзечег, Вепегасе Ъепз)в |п йе яез)иепсш8 стас)ь апз( Ыигпп8 оЕ Ьапз)в >300 Ьавея ш яте (ТаЬог апс( К)сЬагт(яоп 1987).
ТЫя япеапв8 Ь а1товс сегсаш!у Ьесаиве 8!усего! геассв ъч(сЬ Ьопс асЫ ш |Ье Ве1-гипп|п8 Ьийег со сопи пе8асье!у сЬаг8ез( евсегв |Ьас пи8гасе сЬгоиВЬ сЬе Ве! з(иг)п8 е!ессгорЬогеяв (Воеве)теп 1949). ТЬЬ ргоЫет сап Ье яо1че|$ ш яечега! ъчаув (РЬа-'ъзй16атвоп ап|$ РиПег 1992): 161и6п8 |Ье Рсъ)А ро1утпегаяе |псо Ьибегв сЬас |$о пос сопсаш 8!усего1.
Кер!асш8 Ьопс асЫ ш |Ье Ве! ап|$ |п |Ье гиптп8 ЬиЕЕег ъч(сЬ саиппе, а ъчеа1| апипови11ошс асЫ ъч(сЬ а РК, япи1аг со сЬас оЕ Ьогк асЫ. Таит(пе/ЕРТА/ТгЬ Ьибег сопявь оЕ 1.78 м ТгЬ, 057 м саиппе, апз)0.01 м ЕРТА. А 20х во!и6ов йегеуоге сои|а|па 2!6 8 оЕ Тгь, 72 8 оЕ саиппе, апт(2 8 оЕ ЕРТА рег 1вег. Ргес|РЬасш8 сЬе рго|$ись о1|Ье вез)иепс1п8 геассюп ъч)сЬ е|Ьапо! Ье(оге 1оайп8 опсо |Ье Ве!.
° Еа ро)уасгу)атЫе че(в. С1усего! (я )пс!из(ез(1п вовсе суре| оЕ гюп|1епашпп8 ро1уасгу1атЫе Ве!я со ппргоче йе е!ессгорЬогес|с верагасюп оЕ сопЕоппегв оЕ яв81е-ясгавз(ез( Р)ъ)А тпо1еси!ев т(ипп8 апа1уяв оЕ пш|а|юпв Ьу 55СР (С!ачас ап|$ Реап 1993). ТЬе геавопв Еог сЬе Ьепебс|а1 еСТессв оЕ 8!усего1, ъчЫсЬ аге тповс ечЫепс ъчЬеп 55СР Ве!я аге тип ас гоо|п сетпрегасше, аге ипс1еаг. КиЫса ес а!. ($997) вЬоъче6 |Ьас |Ье РН оЕ|Ье Ве1 Ьийез Ь 1оъчеш|1 (тоти 8.4 со 7.7 Ьу сЬе аййсюп оЕ 81усего!, ъчЫсЬ геась ъчиЬ сЬе Ьогасе юпв ш ТВЕ. Ноъчечег, |с Ь йубси1с со вес Ьоъч йЬ есуесс сои!0 ехр!аш сЬе сетрегасиге-з(ерепз(епс |тргоъетепс ш гево1и6оп оЕ яп81евсгапз(ет( сопЕоппегя.
Науа|Ы (199 Ц ргорове|$ |Ьас 81усего! апз( осЬег ро1уо1в висЬ ая якгояе ав|! ро)уе|Ьу1епе 8!усо! (Маг)то(Е ес а!. 1997) аге ъчеа1| з(епасигапсв, ъчЬояе ро1аг ОН Вгоирв з(Ьгирс |Ье Е|68гее оЕ Ьу|$го8еп Ьопйп8 ш яп8!е-встав|(е|$ соп(оппегя. ТЬЬ ехр1ава6оп Ь сопявсепс ъч)сЬ йе оЬвегчасюп |Ьас 81усего1 рте(егеп6аПу шсгеавев сЬе пюЬ|1Ьу оЕ сов(огтпегв сЬас аге псЬ зп риппев.
° рот 8$усето! Ьоовь тЬат тсгеаве тЬе е!7зсченсу оЕ сгапяепс ехргевяоп апт( сгапв1оппасюп оЕ зпап|- |паПап се1Ь. Тгапвуессе6 си1сшея аге ехрояез( Ьпебу со 15 — 209а 8!усего! ш ьосошс ваПпе (Ргояс ап|! 'ъъзППатв 1978; Раг1|ег ап|1 5саг)с 1979). С!усего! Ь сохк, Ъис сЬе зреет( апт) еЕ6с|епсу оЕ Ьв роЬопоив ейесь |агу ъчЫе!у Еготп опе суре оЕ сеП со апойег.
ТЬе орсвпа1 типе, 1еп8сЬ, ап|$ шсепясу оЕ сгеасспепс пшвс |ЬегеЕоге Ъе з(есегт(пез) етр|гкаПу Еог еасЬ сеП Ппе. ° 1л е!усего! втер 8таз$!ептв (ъзапз)е чътоиз(е ес а1. $979), ъчЫсЬ аге |ьед ая а Еаясег апз( сЬеарег а!сегпа6че со С|С! всер Вгайепсв (Уататосо ес а1. 1970) |п сЬе!аг8е-вса1е рипбсасюп оЕ ЬассепорЬа8е Х раг6- с1ев.
Риге 81усего! Ьав а з)епясу оЕ $.2сз Вйп1, ъчЫсЬ зв Ьаг|$!у яиЕ6с(епс со я|ррогс ЬассегюрЬа8е Х рагс|с!ея (т(епясу -1А0 Взт!). ЕПусего! втер Вгайепь аге сЬегесоге сепспй|8езс оп!у Еог вий|с|епс свпе со сопсепсгасе |Ье Ыг|ь раг6с1ев ас опе оЕ |Ье |сера. ° рот !оп8-тегт втота8е оЕ Ьасгет(а! атос)ь. Вассепа! си!шгев сап Ье всосет((пт)еузв(се!у ас — 70'С ъч(сЬоис я8шбсавс!оы оЕЫаЬ!!Пу ш тпейа сопсашш8 $5чзо (ч)ч) оЕ 8!усего1. СНЕОН 1 СНОН 1 СНЕОН 1$С()КЕ !3-12 5|гис|иге о1С! сего! 03ар1ее 13: Ми1аеепее3з 3 >О -' о 3 й с,д 3 О О О' О О о с 3 ЕО 3" о О 'а о ма' О О 3 О О О О 300 О 33 О 3 3 ЕО, 3 34 3О ОО и )3 О3 а с М ОЕ "с Р. с О 0 о О' с 'аз ' 3 Од Е О. ОО" с а.
Е 3 3 ,0 а, о о .Оо с О3 д О 3 Д 0 о ОД о с 33 3 О ЕЕ асс О Е3- Е~ )3а .х Е е'„о с >О с -„о с о о д х О >Д Е >О „ д ОО 33 С Е .3 О О 3 3 д о -о "а Е О. О 'О с н 33 с о с Е >О с 3 .о а О Е о о о -о О. О с 3 о > о >. ад "о х Е О 3Д .с с о О о ЬО С с Е 'х с >Е ' О О а 3 Е .Е о 3 О ю к о % :3 и Х о Е с 333 и с о с % О О д о О3 О з о)0 .с О О О с о а с о.а Е ~' о " >Е "33 О 3 й Е 3 О 3 о аа> ОЕа с ОО 3 .Е Е,.
с — о О о Е Е > о о лс р 3 3 3 а. О .с 3 >О 3 с 3 0 3 Е 0 О 3 Е Е о 3 'а ос со Е)Ео д о Е О~ О О 0 О 3 а,-"Ф Е О 33. Ъ 3 О О С 3Д с 3 о Оо)3 с 33 „О О 3 оооо ,.Е д Е'и О' Д ОООО 0.0 оЫ .Дал3СО 3 3 ЭД .0 О ОЯО О, ОБ-Б 0 „ООЮ с а ад о а >. д 3 3 с 3 о .ОО Е О О 3 3 а о— "33 Ф о О О ад) 3 3 Е 3С О й О, О О 3 О о с 3 «3 а. 3 Е~Е 3 о Е. й О 3 Ы О О о СО О о „д 3 3 с,Е Е)с" л с о Е Е о а о .с % о О. Е с Е Е л 03 О3 Ф х ОО с 3 :а >О' )3 с о а3с о с а с 'Е Ое Р.
О— д к о) хо 3 %< о Е '3 33 .С с 3 о' с 3 >О Е 3Е а о д 33 3 о а о Е" '3" О, Е о О Э с с О О О Е 0 ц с с с 3 ац, Е О 33 .33 д о Е ,д о О- р. с Е С "О ,3 33 33 3 ) О О О й 3 ОО -- О О, О Е ъ 30 дО ос с О с ос д О Е'с >О',, Я с .Е о '„Е ФЕ с с Е ОО Е О3 О оС ао 30 од >О с 3 ) а "О о .Е о с Е о о '„ х Е4 о О д В О 3 о э 3 с >О '$ о Е Е >О Е 3 о О а 3 3 О с О3 с О ( 33 Р. 3 о ОЕО .с 5 о 3Е 6 с '- Е с С 3 ) о д > 3 а о ,О о 0 Ф .Е 'Е О б -О О о ) с 3 3 ОД О .с 3 >О 'а о й о \ с О О 0 ' С 33 >О ЕЕ я, а „.Ю х 3 Е с Е >О С с 3 'Я О ' .х >Оо ЕО ф „ о ЕЯ д о с Ф Ф с о О О > О О Е с о О О с 3 0 о Е <.
Е Е о о -о 33 ОО 3 о с о о л >Е ,3 Е ' 333 О (5 > о < Х ЬО с а, О 'О -з 3 с- 3,С и с Е Е 'Е 3Е о' 3Ео 33 а,о 33 а Р . О оа ОЗЕ о 3' с 3 >О Е 'б -д 0 О Я О-О 3О .0 Од О „.33 а3с ° 3С »,'з йо 3 О с О с О Е 3 х' а О с о О3 а Е х4 О с .с о д .ссЕОЛ 0 р 3 — ; о ее, Е О ЕО~ сто ~ЕЕЕ" Е64ОЫ О С О Е с "О О Е >О .а 3 о С 333 С 3 ао )3хс о .д 33 3 Х 3 д 0 О, а 303'О о Е С О О С,",О О Е о 333 Ю 3 ОО О а 3 3 О а. 3 Е Ц О «3 с О С3 О3 а ОО д о Я о „ с .Е.а о а 3 > 33 „Л 3 О С ИО о бо о Е с Ясо 3 33 д >О о Е Е о 3 30 03 й с о о с о 3 О >О 33 О '> 3 С'О С 3 "3 ОД >Π— о;;.- с а„) О ЕО, О Ьд Х 1п1оггпае3оп Ропе!з 13.93 О3 с О .:~ мма м "3, О С 3> ОО О х Я.а 'с .33,0 3.
30 3 О -С ОО '3' О 3 О \ О о- О а м О 33 ДМ О-О а 3 .И 0 33Я ом > .Ео ОООО ОО ОО о О о о О ОО О ) О 3 .С 0 33 33 Е у3а Е О с а о О й О о О' с Е о 30 Я :Е ~а оф а .О Я с 'Е а -к а д Я аЯ ог о О 'О3 0 'Я д О 3 од с О 'с ог О О, Оа оо .Е Ю .О о О .О о 0 ОД "х 3 О О. В Е О о ОД Я Я а о О О О .О а О 3 с о "Е с д .а О О3 а Я О о 30 .а с О О .С .,3 >3 о О Д о ,х . р © о О О Е о о О С О 0 с а 3 О О С а 3 а с О с О' 3 3 О Р :Я О о О' О С О с .с ос о р Е о О О н а о Я О О Е 0 с а о >- О О Я 3. о >с .О ОО с о' .О О С с ос с О о М Я О.
Я 3 о 3 СО, оО 333 'Яй а о Я 3 )- о 3 а С а а о о 0 > .а О а Од О 3' с 3 Я 30 х М О о од о о О а о 3 :3.3,0 а 'г" о од о 'а >. ОД ОД а о 3 -а ы Я 3Я 'О 3 О .С ) 3 ' 'О О. О 0" 'з з "О о О О Я ,д р Ед а о "О Ь с С О О ОО 33 .а я о о -О о О од 3 О .О о 6 3 О О О сО О /\ Л 30 ОО а- О < 3\ м 0 Я 'О Я Я Оо а 3 Од О Я О О О 3 Е О. .33 Я О 3 0 с а .О ' С .С 3 О С 3 а.„-' о „- 0-Оо О -о 3 о)оа С,Я 0 ОО, 3'Я О 3 3 'Ф С СД К 'а о а а роаоаас Д Ос >3ЯО о 3-Е о 3.0'->од д ),ласаа-"дд ~оааоо„аЯ-З я ЯОЕ ЕОС О-СОР О О О а 3. 3 с 3 СΠ— "да Ьд~"и '.о" м Я а Ь «-'и а О о Е 3 \ .Я о с О О 0 3 Е С 3 0 С О Е„, О О о а О Е О дс Р с 3 3 .Ем 0 .- о ,. а - ) 33 х 33 ад \ „с О -О 3 О .с а ю .О о О С О Я .
с м а .О ) Я с О х О О. ОК Я,с д й к 30 О С 3 3' 3 Ид гд О 0 О а.о О о од с а "с 'а о С О С "О 'О а „о аа с О «3 м ,.-. 30 о .й о О Я 3 Е О ) о О О 3,3 .О Я н О О 3 х а О, о са 'с о ) .О 'О .с ) с -д О," ай Е С ОО ' 3 о а,с Е Е О о а Я О О О О О 6 о О О .0 > Е ;Я ° ай р д О .с О 0 с о ОД о =И р О О о О 'О р с о о а ОД о с 3 я с ,33 < Е о' о 3 О О о С 0 .0 О р 3а О .а ) о .а "О с 3 3 > д д „о б .0 = О х од Я С ОЕ с 'Я С 3 О, н О О О 3 о -0 д а \ о а Е .О с О о 'о 0 ОД 3 — И О с .О 'О 33 > .а Я а о О 3 'О О ОД О 3 О р ' о Я ас О .с О > 3 Я 3 .с 'Я с о 3 Е О .а о о о О. О .Я ОО с 33 0 о ОД с Е с Е О д Е 0 >- о о 3 Х, с 'Е оо о с О 3 ОД "0 О 'Я х 33 '3 О с О с а О ) о 3Я с о Я и О '33 о с а О О ОД а" ) О О О 0 О О - о О с р Е1 >.
и ае О .) О ОД О О О 3 3 .С .О о О. Я о О Ф Я О р фд О О о а О 0 О с ОД О О од с 3 О О с с о > 0 О 3 "0 О ',о о а о О сО с ОО 3 О .с "О О О 33 Е О О' О 3 3 Я 33 ОД ОО 3 р~ о а ,С .О 3 3 ". ф :О О. о .33 О Б р .а ;с Ь о ЕЯ О. 3 ода .с а о Я ,а О Д .С ф ;х 'О ) О 3 О а о оо о ;0 о Е ам' 3 О о О Х ар о О од 'с с о о с р о а с оО с ~- о .3 ) ОД х Е х о О 30 ас .о Я О О а О 'О р с о 'О Ь .а .а о Е О Оо а О О м Е с 3 3а < а р Е О.