Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 183
Текст из файла (страница 183)
1988а). Нозчечег, сЬе пшпЪег от" ялсаЫе епхутпеа (а еп!аг8ет) зчЬеп сЬе шсЫп8 геасПоп В сагпес1 ош ш йе ргеаепсе о! ейзсПшп ЬгозпЫе. Рпс(ег !Пейте сопсПсюпя тпапу геаспсПоп епхушеа (псгот)исе и)с)са Ыю сЬе а!таит) сопяаПп8 о! сопчепПопа1 РЬоьрЬогПеьсег Ъопеа Ьш аге ипаЫе со с1еаче сЬе а!таис) сопсашш8 РЬоарЬогосЬюасе геа(т)иеа (5ауега ес а!. 1988Ь; Вауега апс( Ес)схсе)п 1991).
'з'зтЬеп оПВопис!еосЫекПгессеП шиса8епеяа ь саге(ед ош оп т)оиЫе-а!таит(ет) Р)з(А сепзр!асея ехопис!еаае сПВеасзоп В пьес) со Вепегасе а геВПоп о! аш81е-а!таит)ес( Р!з)А со зчЬзсЬ йе изша8ешс оПВопис!еос(с)е сап ейзс(епс1у аппеа!. РоПозчш8 ро)ушат(хас)оп зи йе ргеаепсе о! йгее ИНТРИГ апс) опе сП4ТР-5, а текст(сиоп епхузпе ь ыес! со шсгос!исе шс)сь тисо сЬе ъо1йсуре а!таис(, зчЫсЬ сопсаша оп1у сопчепПопа1 РЬоя РЬосПеяег Ьопт)я Айет йе пк)с Ьаь Ьееп ехрапс)ес( аь с(еьсг)Ьет) аЬоче, а аесопс( топит( о! Ро1ушет(хасюп В ыес1 со Вепегате а Ьошос)ир1ех сЬас сагНеа сЬе с(еягет) шшаПоп ш ЬосЬ асгапсЬ (О!реп апт! Ес)сьсе)п 1990, 1991).
Ве1ес!!оп 1и Ч!чо Тзчо рт(гпегь аге ЬуЪт(т(!тес) яиш1сапеоы1у со сЬе с1епасигес1 сетпр!асе РНА; опе рптпег зпсгодисеа йе з(еягет) пшсасюп (и йе саг8ес Р)з)А апт( сЬе ойег гера(га а ипиаПои ш ап аппЬюск геяасапсе Пепе сагпес1 Ы сЬе чессог. Айег сЬе ш чПто шиса8епеяа геассюп ь сошр1есес1, йе геаи!Пп8 Ьесегос1ир1ех Р(4А ь иаес( со !тапа(отш а ягаш от Е.
соП сЬас В Пейсзепс зп соггессш8 йе ш)ашассЬет) Ьаае, (ог ехашр1е, а ягаш саггузп8 а тит5 иизсаПоп. ТЬе пияпассЬес1 Ьаае разгх (и сЬе Ьесегос!ир1ех РНА аге геао!чес) Ьу герПсасюп, гасЬег йап гераи. А утассюп о! сЬе р1аашЫа гесочегет) згош сЬе та!5 сгапа(огшапсь ъоП сЬеп саггу сЬе с)еягес) тпшапоп апс) а пезч1у Вапссюпа! апПЬзосзс геяьсапсе Вепе. ТЬеае р!аяпЫа аге сЬеп гесочегез) зп а аесопс( гоипс( о! сгапа(оипапоп — сЫа сзше 1псо а иияиассЬ-гера(г соизресепс Ьоьс — зчиЬ ье1ессюп (ог йе геьсогет( апсзЬ(осзс геяяапсе депе (Еезч(а аит) ТЬошраоп 1990; НаьЬипосо-СтосоЬ ет а1. 1995; РоьПпа апс) РаЬгепЬо1г 1995; ВоЬпаас)с 1996). и о1 Адеп(пе Кеа!т1оеь Ьу Раси Ме!Ьу1аье !и Е.
соП, ас(еп(ие геяс1иеа ешЪесЫес( ш сЬе тес)иепсе з,,..,бАТС...,,' саггу а пзесЬу) Втоир астасЬес! со йе )з)' асоти (Нашпап ес а1. 1978). Моте сЬап 999а от" сЬеае пзосППес) ат)ешпе Ьааея зчЫсЬ аге Сопит) оп ЬосЬ асгапй о! тЬе раПпс(гош(с тесо8пшоп вес)попсе, аге сотшес( Ьу ассюп о! Р)з)А ас)епше шесЬу!аае (з(ат), а яи81е-язЬипп иис!еосЫе-(пс(арсис(еис (суре 1!) Р)ч)А шесЬу1сгапа!егаае сЬас сгапа!ета а тпесЬу) 8тоир (тош 5-аз)епоау!шесЬюшпе со ас(епзпе геяс(иеа ш йе гесо8шПоп ает)иепсе (безег апс) Мос)гкЬ 1979; (ог геч(езчя р!еаае аее Маипы 1987; Ра1шег апт) Маппы 1994).
ТЬе тесо8т поп ясса от" аечета! геаспсПои ептушез (шс(исПп8 Рчи1, ВатН1, Вс!1, ВВ!!1, ХЬо11, МЬо1, апд 5аиЗА1) сопсаш сЬе ает)иепсе -' .....САТС.....з, аь с(о а ргорогпоп о! сЬе ясеа гесо8шхеП Ьу С1а! (-1 ясе (и 4), ХЬа1 (! ясе зп ! 6), МЬоИ (1 ясе зп 16), Тщ! (1 а(се ш 16), апс) НРЫ (1 ясе (и 16). ТЬе сгапатег о! а пзейу! Вгоир со сЬе )зтз асопз о! адешпе р!асеа а ЬиПсу аПсу! шЬаПшепс ш йе арпа)ог Вгооче о! В-Готш РЫА апс! сошр!есе!у ргечепь с!еача8е зп исто Ъу аоше геьст(ссюп епгугпеа (е.8., МЬо(; Рте(аеПсе1гпапзз ес а1.
1979). Ойег геаспсПоп ептупзех зчП) ас Ьеас с)саче а шЬаес о! йеи гесо8ппюп ьиея Рог ехаизр(е, СПП гесо8пзхеь сЬе ает)иепсе "АТССАТз .! ! сЫа аез)иепсе )а ргесет(ет) Ьу б, ГоПозчес1 Ьу С, ог ЬосЬ, еиЬег ог ЬосЬ о! сЬе А геаЫиеа зчП) Ъе шесЬу!асес( апс) сЬе ясе ргосессес) (тоти с!еача8е. Но мечет, спейу(аВоп т)оеа иос епдозч сЬе тес)иепсе бАТС зчиЬ аЬш1исе ипишпиу згогп с(еача8е Ьу апу апс1 аП геьсНсПоп ептутпеа. Рог ехагир1е, сЬе геяисПоп епхуше 5аиЗА1, ап ВоасЫхотпег о! МЬо1, Неачеь — бАТС- ьециепсеь ге8аМ!ета о! Ме!Ьу1а!1о А)6-МЕТНУЕАОЕМ)з4Е, 0АМ МЕТНЧЕАоЕ, АВ)0 МЕТНУЕАТ10!ч)-БЕВ!$!Т1ЧЕ КЕпТК1СТ1ОВ) Ей1ХЧМЕЯ 13.88 Отартег 13| АЕитаееиевтв сЬе|г всасе о! а|1ешпе шейу1а6оп, ъчЬегеав йе ептуше Рри1 врес(6саПу с!еачев ЕиПу шейу1асес1 — С"'"АТС вЂ” вес)иепсев (Ьас(св апъ) СгеепЬет8 ! 975, 1977; Се(ег апс( Моъ(т)сЬ 1979). Рсъ|Ав шой6ет( Ьу т(ат шесЬу1аве ш чЬго а)во гетпа(п вепяПче со геяпс6оп Ьу |Ье Е, соП тсг апс( тгг вувсешя МапппаПап Р(4А |в пос гпесЬу1асеь( ас йе )ъ)в роясюп оЕ аъ)еп(пе апт( сЬегеЕоге сап Ье с!еаче|1 то со|пр!еПоп Ьу гевспссюп епхутпев сЬас аге вепв(с(че со т(ат ше|Ьу!ас(оп оЕ рго1|агуопс РЫА.
Ь(всв оЕ гевспссюп епхугпев ъчЬове рапегп о( Неача8е (в аЕЕессес( Ьу т(ат шейу1асюп Ьаче Ьееп аяетпЫеъ! Ьу Кея! ег ап|1 Маиса (1990) ап|1 МсС! еПап|1 ап|1 )ъ(е!воп (1988); а|Ы16опа! |псоппасюп тпау Ье Еоип|1 |п сЬе ЬгосЬигев оЕ и|о|с сопипегс|а! виррПегв оЕ епхутпев апс( ш а с(асаЬаве оЕ геягксюп апс( пюй6сасюп епхуп|ев (КЕВА5Е) ассевяЫе ч|а |Ье!псегпес ас: Ьсср:0 ъчъчъч.пеЬ.сош!геЬаве)геЬаве.Ь|тп! ъътЬеп и 1в песе|вагу со с!еаче рго)ъагуос(с Р(ъ(А ас счету роя|Ые ясе ъчЬЬ гевспссюп епхушев сЬас аге вепвптче то т(агп шетЬу!асюп, сЬе Р)ъ(А пшвс Ье (во!асс|(6ош всгашв оЕЕ, со!1 сЬас аге т(ат (Маппив 1973; Вас1ипап 1980; КоЬегп ес а1. 1980; МсС!еПап|1 апс( !!е!воп 1988). ТЬеве всгашв (е.8., СМ2163 (в ачаПаЫе Егоп| ъъ)еъч Еп81ап|1 Вю1аЪв ап|1 !М110 6:отп сЬе АТСС) ехЫЬЬ а ъ!ии1|у РЬепосуре, шс1исПп8 е!ечасе|1 гасев оЕ вропсапеоы п|ша6оп ап|1 гесошЬ|пасюп, шсгеавет( вепв(с(ч(су со | т ът |ггайасюп, Ь|8Ь гатев оЕ гесоп|- Ь|пасюп, апс) шсгеавес( гасев оЕ (пт(иссюп оЕ 1уво8ешс ЬассепорЬа8ев (Еог йвсияюп, р!саве вее Маппив 1987; Ра1шег ап|1 Магшы 1994).
т(ат всгашв аге ВепегаПу!ея гоЬия сЬап ъчПс(-суре К-12 вставив Ъесаиве ъ(еутс(епсу оЕ т(ат |шра|гв йе аЪ|1|су оЕ |Ье ш!вшассЬ гера|г вуяегп иъ соггесс епогв ш йе рго8епу ятап|1 оЕ пеъч1у герПсасе|1 Р)ъ)А Д.и ес а!. 1983; РиИ|Па ес а1. 1983; Еог геч|еччв, р!еаве вее Мос(гкЬ 1989; Ра!гпег ап|1 Мат|им 1994). ТЬе аЬвепсе оЕ т(ат гпе|Ьу!апоп йеге!оге 1еай со шсгеавет) гасев оЕ вроптапеоы п|исапоп, т(ат яга|ы тпау а1во ехЬ|Ъ|с аЬеггапс ге8и!ас(оп оЕ сегса|п с1аяев оЕ Вепев апс( а тес(исес( е(6- с)епсу оЕ шшасюп оЕ РНА гер1каПоп.
Весаые оЕ йеве ргоЫешв, т(ат всга|пв йюи!П пос Ье 8гоъчп Еог !оп8 регюс(в ш сопПпиоив си!шге ог всоге|1 оп р!асев ог всаЬ си!шгев |ог )оп8 реПос я 1пвсеай йеве встать вЬои!П Ье всогес( |п япаП а!и!иоь ас — 70'С. !и воп|е Е. со(т всгашв, |пашсепапсе оЕ сЬе т(ат пшса6оп (в епЬапсет( Ьу Вгоъч(п8 сЬе сеПв ш сЬе ргевепсе оЕ сЫота|прЬепко1 ог 1|апагпус|п. !п сЬеве яга|пв, сЬе т(ат репе |чав |пас6часеП Ьу швег6оп оЕ йе стапвровоп Тп9, ъчЬ(сЬ епсо|)ев сЫогап|РЬепко! теяяапсе (Магшив ес а1. 1983), ог Ьу гер1асегпепс оЕ рап оЕ |Ье Пепе ъчпЬ а РЕ4А Ега8шепс саггуш8 а )саи шаг)сег со !пасс|часе йе т(ат Пепе (Раг1|ег ап|1 Мат(пив 1988). А Пвс оЕ сопппоп!у ивет! т(ат яга|пв Ьав Ьееп риЪПвЬес( Ьу РаЬпег апъ) МаНпы (1994).
()ппсеЕЬу!асег! апсЕ Непь!гпеЕЕту!аЕег! Аг!еп(пе Кев(сЕиеып САТС !п воше всгашв о(Е, со(т', а япаП 6асПоп (-0.2впв ог)ея) о( |Ье евсппасеъ( 18 000 ' .....САТС.....| веср|епсев ате ипгпетЬу1асе|1 (К(п8ъ)и(вс апс( 5писЬ 1992). ТЬеве иппюйбе|1 ясев арреаг со Ье ргеЕегепПаПу 1осасе|1 пеаг сЬе от(8(п оЕ гер(касюп ог ш геЬПопв оЕ Вепоппс РЫА йас аге ргосессе|1 Еготп т(аит п|ейу!а6оп ш чп о Ьу РХА-Ь(пйп8 ргосешв (е.8., сАМР гесерсог ргосе|п) (К(п8с)и(вс ап|1 5тп1сЬ 1992; ЪЧап8 апъ) СЬигсЬ 1992; На1е ес а!. 1994). ТЬе ип(с)ие ог(8(п оЕ гер!капоп ш |Ье сЬгогповоше оЕ Е. со6 (аПС) В Ь|8Ыу еппсЬе|1 ш САТС вет!иепсев, ТЬе сапе оЕ ш|пасюп оЕ РМА вупсЬев(в ь сопсгоПес( Ьу а пшпЬег оЕ Еассогв, |пс1ийп8 сЬе всасе оЕ п|е|Ьу!асюп оЕ сЬеве веъ)иепсев (Еог ге|4еи; р1еаве вее Сгоо)се 1995).
Рипссиа! апъ) сппе!у (и|Пас|оп геъ)и(гев сЬат |Ьеве оПС-ргохппа! САТС веъ!иепсев Ъе ЕиПу |пейу)асс|1 Ъу сЬе Раш пис1еаве. 5еписопвегчас|че герПсасюп Вепегасев Ьеш(ше|Ьу1асес) бАТС веъ)иепсев, ъчЬкЬ Ьесо|пе Ьоипс( то сЬе Ъассепа! |пеп|Ъгапе, ъчЬеге сЬеу аге по 1оп8ег ассевяЫе со Рап| ше|Ьу!аве, Ве(оге йе пехс гоип|1 о( РЕ4А вупсЬеяв ышпасе|1, |Ье оНС ге8(оп (в ге!еаве|1 Поти |Ье тпе|пЬ|апе апт) сЬе 1оса( САТС ясев опсе а8аш Ьесотпе ЕиПу тпейу!асей Нотч |Ьеве ргосеяев аге соогтПпасес( В пос ЕиПу ип|1егвтоо|1. Еп)отта!)оп РапеЬ 13.89 ТАВЕЕ 13-6 тА)еЬ ))еаоигсеа апд Соптпзегс)а) Тоо)5 Еот Ми)ацепейа СОммтят5!К1т5 5ООасе И)ЕВ51тт АООВЕ55 ЫпЫ 1о шапу рго1осо) я1еа аа чче11 аа го Ы1 апг) геацепт тшрр1кга.
У5. )терт. оЕ Сопипегсе ипчтч.птч)ас.поаа.цоч!Ргогосо)а/геаоигсеа !ача-Вааес) Мо)еси!аг Вю!оцу Ъттог)с ВепсЬ Рпптег ае1есВоп ргоцгашя РптпегЗ иплкцепоше.тчцпит.ес)иПсц)айп! рпгпег!РгппегЗ.сц) 5си!ртог 1)тМ Митацепеяа Ы1. АптетаЬаш-РЬаггпас) а ВютесЬ тллч.арцао1есЬ.сош ))п)оие 5)ге Е))гпшаВоп )))5Е) ши1ацепеяа Ы1. Мота-цепс )п ч)гго гпттгацепеяа Ыт. Вю-Ваг) тчттпч.Ью-гаг).сош))п<)ех) ТгапаЕоппег яге-йгестег) пш1ацепеяа Ыт.
ипчтч.с)опгесЬ.сош С).ОХТЕСН ЫЕе ТесЬпо)оц)ет тчитч.))ЕегесЬ.сош СТЕР Ротчегцсап ппагацоп с)егес- тюп ачатепх Мигап-Ехргеы Кпт К)1. тчапч.рапчега.сошт')а)!пг)ех Рап ттега А)1егес) 5)теа 11 гп ч)гто пшгацепе- яа ауа1егпа. Ргошеца тчтчтч.ргошеца.сош бепе Ей!от 5уагеш. ! п1егсЬапце ш чгчо пштацепеяа ауатеш. Яш)с СЬапце яте-йгестес1 шшац.- пеаВ 1сп.
51гатацепе тчтчтч.агга1ацепе.сош Ех5гте РСВ-Ьааег) яте-йгесгес1 шитацепеяа Ыг. СЬаше)еоп г)оиЫе-51гапг)ег) яге- г))тесгег) пшгацепеяа Ыг. Сог)е20 Ыт. ипчтч.пеЬ. сош ХЕВ Апа-Сеп ТесЬпо1оц)еа )пс. тллч.апа-цеп.сопт)Митацепеяа.Ьтш РгочЫеа птигацепеяа аеглсе. СОММЕКС1АЕ К1ТО ЕОК О!ТЕ-О1КЕСТЕО МЕ)ТАСЕХЕЯ$ чллч.ешЬЬЬеЫе)Ьегцх)е!-1о!до)!ВМВ гЧ Ми16Р1е 1)пЫ го аеоиепсе апа1у- аеа ргоцгапы, )пс)ийпц РСВ Рпгпег Реяцп Ьу Еиса апт) ТоЫо апс) 01)цопис1ео)Ые Са)си)а!от Ьу Еицеп ВиеЫег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
