Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 151
Текст из файла (страница 151)
1999). ° Рог !аЬогасопев апа116п8!аг8е пшпЬегв оЕ ватпр1ев, ап еЕЕесс!че трта16у-соптго11ш8 вувсетп, со8ейег ибсЬ орегасюпа1 соо!в висЬ ав 1!ъ)и!й-Ьапй!!пц гоЬосв, В еяепста1 со тпашсаш сопявсепс1у Ь!ЕЬ-сЬгоиЕЬ- рш апт1 ассигасу. Сепопсе 5ес!оепс)пВ 54гаСецу ТЬе ехрапяче шсгеаве тп йаса сЬгоиЕЬрис геви1сш8 Егопт сесЬпо1о8!са) айчапсев Ьав Ьееп ассоптрашей Ьу шпочасюпв ш вет)иепс!08 всгасе8!ев. ъ/пс!1 1998, йе Еепега1 арргоасЬ са)теп Еог вет!иепс!08!аг8ег Еепотпев (сЬове >5 МЬ, !пс1ий!п8 усам, петпасойе, АгаЬЫорти, апъ1 Ьшпапв) сопявсей оЕ тпарр!п8 Ео11оъчей Лу вес)иепс!п8.
5рес!Еса11у, сЬе сопвсгисйоп оЕ очег!аррш8 аггаув оЕ 1аг8е-швегс Е. соВ виЬс1опев (е.8., ВАСЯ) ачега8!08 150-200 )тЬ ъчав Ео11оъчей Ьу сЬе сопър1есе веъ)иепс!08 оЕ еасЬ оЕ !Леве с!опев опе Ъу опе. ТЬе ВАС с1опев аге вет!иепсей Ьу а ъче11-евсаЫВЬей вЬос8ип тпейой сЬас ивев гапйош с1опш8 оЕ 1-2-1тЬ Ега8шепсв, Ео!1оъчей Ьу йе весртепстп8 оЕ епоиЕЬ ваптр1ев со сочег сЬе саг8ет ге8!оп гапйотп1у. 'ъъг!сЬ тпсгеавес! вет!иепс!п8 сЬгоиЕЬрис, сЬе шаррш8 ргосея сепсЬ со Ьесотпе а Ъосс1епес1т. Ноъчечег, гесепт вет)иепс!п8 арргоасЬев Ьавей оп а ъчЬо1е-Еепотпе вЬос8ип арргоасЬ ( ъъгеЪег апй Муегв 1997; ъгепсег ес а1. 1998) Лаче виссея6т1!у сЬа11еп8ей сЬе сгас66опа! с1опе-Ьу-с1опе всгасе8у (Сгееп 1997).
ТЬтв мгасе8у Ьав Ьееп ыей ав ап а!сегпайче со ЕшвЬ сЬе Ншпап Сепотпе Рго!есс апй со шоче аЬеай чйй пюре апс1 осЬег соптр!ех Еепоптев (Еог пеъчв герогс, вес Репи!в! 2000). ТЬе сесЬптса1 й!ЕЕегепсе 1тев ш йе Еасс сЬас сЬе ъчЬо1е-Еепотпе вЬос8ип арргоасЬ Еог а 1аг8е Еепотпе 11)те сЬас оЕ сЬе Ьшпап гет)и!гев сЬе "яппт1сапеоы" аыетпЫу оЕ вогпе 60 пп11юп вет)иепсе геайв (-500 Ъавев еасЬ), ъчЬегеав тЬе Еоппег всгасе8у (птаррш8 Ео!- 1оъчей Ьу вет)иепс!п8) ге1тев оп йе аыептЫу оЕ а Ееи сЬоивапй геасЬ ас а сипе. ТЬив, шсепве аг8шпепь 12.100 Осаргег 12: РХА $ег)иеистП ашоп8 сЬе ргоропепь оЕ сЬе съчо арргоасЬеа Ьаче Еосиаей оп Ьюеа аисЬ аа сошрисш8 сараЬлПсу, Пар-6П1п8 ргоЫепла, апс! соас еЕПслепсу.
ХечегсЬе1еаы 6 Ь ПепегаПу а8геей сЬас а ъчЬо1е-Пепоше аЬощлп арргоасЬ сап гарЫ!у 8епегасе пеъч йаса, а1Ьеи ш ап ойеп усачев!агу Еогш, со Еасл1иасе Еаасег йасочегу оЕ поче! Пепел. ТЬе юссея6л1 арр!каслоп оЕ сЫа ыгасе8у и йерепс1еис оп ЫПЬ-роъчегей сошрисега апй юрЬЬП- сасес$ юйъчаге сЬас сап й181с)хе с1аса с)иаПсу ъчЬл!е соплрапп8 апс1 шассЫи8 сЬе геай 6ош Ьось епй оЕ еасЬ оЕ сЬе ии$6опа оЕ лес)иепсш8 ааплр!еа.
1в сЬе геа! ъчог1й, аЬос8ип арргоасЬеа а!ао ша)се иае оЕ а чап'- е!у оЕ пларрш8 шЕогшас)оп 6опл с!опеы Певеа, апй 8евеск шаг)сега, аП оЕ ъчЬ)сЬ Ье1р со аяЬс аааешЫу. РигсЬегпюге, ияп8 Р$4А аашр1еа !гоги пш16Р1е шйчЫиа1а чйП П)се!у гею1с ш сЬе йасочегу апй сага!о81пц оЕ пиПюпа оЕ ро1угпогрЬлс ясеа. Ву еаг1у 2000, а Пгоъч)п8 пишЬег оЕ ас)епйаса Ье1лечей сЬас а соплЬлпасюп оЕ сЬе шар/аес)иепсе апс$ аЬосулп асгасе81еа ъчаа сЬе орйпла! арргоасЬ (аее РеппЬ1 2000).
Рговрес18 ТЬе !аас $5 уеага Ьаче Ьгои8Ы аес)иепс)п8 лпасгшпепсасюв апс1 сЬепиягу со а рошс сЬас сги!у арргоасЬеа ЕиПу ашогпавс аес)иепсш8 $Р1еаае аее $68иге 12-10). Ассоплрапуш8 ипргочешепь ш Ъаае-саПлп8 ао6- ъчаге, аяешЫу аойъчаге, апй сеплр1асе ргерагайова Ьаче рго8геаяче!у ягпрППей ЪосЬ сЬе аеоиепсш8 орегаслоп апй сЬе 1асег еййп8 ргосеяеа. Аа а гею1с, сЬе 1шисш8 Еассога Еог пюас! аг8е-аса1е рго)есь аге сЬе ригсЬаае апй ир)сеер оЕ гпасЬ!пеа авй сЬе соас оЕ геа8епь гасЬег сЬап сЬе шчо1чеплевс оЕ а 1аг8е пшиЬег оЕ ЫПЫу аЫПей регюппе1. !пчеа68асога аЬои1й сЬиа Ье 6ее со саггу ош сЬе саа)са Еог ъчЬлсЬ ашопласей аеъ)иепсш8 ъчаа шчепсей лп сЬе 6гас р1асе — со Ыепс)Еу Пепел, гсчес сЬепл со РЬуяса1 плара, сЬаае !Пепл со сЬе!г ечо1исюпагу гоопи апй сЬагс сЬелг ог8ав)хасюв, рассегпа оЕ ехргеаяоп, апй Ью1оуса1 6лпсиоп.
М$С$хОТ!ТЕРЕ Р'хАТЕЯ ТЬе согпропепь оу ПЫеоху-илейасей Р)ъ)А аеърлепслп8 геасйова сап Ъе аяеплЫес1 ш сЬе ъчеПа оЕ Ьеас-геяя сапе писгос)сег р!асеа ъч)сЬ 96 1)-аЬарей ъчеПа оЕ -300-И! сарасПу. АП асера оЕ сЬе юЬаесрлепс геасслопа— Егопл лшсла1 аппеа!ш8 оЕ ргипега апй сегпр!асе со асЫПюп оЕ Еоппапис$е-йуе асор пихсиге — сап сЬев Ье сагпей оис ъысьоис сгапауегг)п8 сЬе геасйов сплхшгеа со ЕгеаЬ сиЬеа ог р1асеы Мкгос)сег р1асеа аге еарес)а1- 1у ча!иаЫе ъчЬеп аечега! леса оЕ лес)иепс)п8 геасйопа аге регуогшей япш1савеоиа!у, ТЬе чапось согпропепь оЕ сЬе геасйоп сап Ье сгапаЕеггей со сЬе ъчеПа ийсЬ 8- ог 12-сЬаппе! пш!йсЬаппе! р)рессога ю ейк)епс1у сЬас 96 аеъ)иепсш8 геассюпа сап Ье сошр1есей чйсЬ еаае ивсЬш 1 Ьоиг. Весасье сЬе лпйпййиа! соли ропепь оЕ сЬе геасйопа аге йеЬчегей аа йгор1еса со ЕЬе ъчаПа оЕ сЬе ъчеПы аП 96 геасйопа сап Ье асагсей яиш!сапеоиа1у аипр1у Ьу сепсп6луп8 сЬе р!асеа ш а аъч)п8 оис госог ес)шррес$ ъч)сЬ р1асе Ьо1йега.
ВосЬ Пиогеасепс апй гас$юасслче !аЬе!а сав Ъе ассопипойасес1 $5писЬ ес а1. $993). ТЬе ЕоПоъчсв8 аге сЬе сЫеЕ ргоЫеша. ° Неагзяд г)ле иисгоьгег р)все йипп8 сЬе аппеа!ш8 асер, ао сЬас сЬе ЯиЫ лп аП оЕ сЬе ъчеПа оЕ сЬе р1асе Ь сЬе хапае, !с Ь ипрогсапс со иае писгос!сег р!асеа сЬас аге йея8пей Еог иае!п сЬегша1 сус!ега апй аге сЬлп епои8Ь со ЕассПсасе гарЫ сгапауег оЕ Ьеас лпсо апй оис оЕ сЬе р1асе. 1псиЬайоп ас 55'С $сЬе аппеаПп8 яер), 37'С 1$6е ехсепыоп-сегшшас)оп асер), ог 85'С !сЬе йепасигас! оп асер) сав сЬеп Ье сагпей ош лп а сЬегша! сус!ег ог Ьу ршсЬаяп8 ог сопасгисйп8 а Ьеаслп8 Ыос)с сЬас сап Ье ассопипойасей 1п а асапс$агй шос$и!аг Ьеасш8 ишс ! Еъоор ес а!. $990).
5ессиеллс)п8 геассюпа ъчеге Ьеасей ш еагПег с$ауа Ьу Поаслп8 ореп писгошег р1асеа, Исе агшайаа, оп сЬе аигЕасе оЕ ъчасег ЬасЬа. ТЬ)а ъчаа 6лп Ьис 1ес1 со сопсапллпасюп оЕ гпапу ъчасег ЬасЬа Ъу гайоасспйсу апс$ сЬе гшпас)оп оЕ шаву аеулепсш8 геассюпа Ьу Поос)- ш8 ог ечарогасюп. ° Сопйеилаьоп апй ечарогаьоп. Хоъчайауа пюас Ьеайп8 йечсеа апй сЬегша! сус1ега аге сьиаПу ес!шррей чйсЬ Ьеасес1 сочега, ъчЬлсЬ Вгеас1у гейисе ечарогайои апй сопъ1епаасюп.
Бчарогайоп сап Ье ЕшсЬег гейисей Ьу сочег!в8 сЬе р1асе ъчПЬ 5агап ъъггар ог ивй а ъчеП-6иш8 р1ааьс 1Ы $е.8., Ра1соп 3913; Вессоп Рк$апюп). ° Сгоя-совсаиипаг1ои оу иеИя Саге6л1 ЬапсПлп8 Ь гес!шгес$ со ргечепс ассЫевса1 сгапаЕег оЕ ПиЫ Ьесъчееп й)ЕЕегепс ъчеПа. 1с Ь Ьеас со аеа1 сЬе р1асеа Еог сЬе шиап8 апс1 асога8е асера ъч)сЬ р1ааск р1асе аеа!- еь апс$ ргеааиге-лепя!)че 61гп $Ра1соп 3073; Вессоп РкЫпюп). ° Сепсг)Еичаг)ов. А сепспуи8е 6ссей ъч!Пъ а госог сараЫе оЕ аиррогсш8 писгосьег р1асеа апй сараЫе оЕ ареей ир со 4000 грш 1а геъ)и)гей.
ТЬе госог сгауа аЬои!й Ье ъчеП-раййей ъч)йл гиЬЬег ог ро1уяугепе Еоапл. 1«туотта6оа РапеЬ 12.101 ТНЕ КЕЕС)Очс( Г$4АСМЕ1ЧТ ОГ Е. СОЕЕ 01ЧА РОЕТЕ!!АЬЕ ! Е, соП Р)4А ро1угпегазе 1 (Ро! 1), ап ептуше сепсга1 со Р)«(А герцсасюв апд герасг (КогпЬегц апд Ва1сег 1992), Ь с!еачес1 Ьу пп16 сгеасгпепс «чПЬ зиЬсццяп шсо пчо Егацшепсз, йе 1агцег оЕ «чЬкЬ, сошрпяпц гезЫиез 32с« — 928, Ь (спосчп аз сЬе К1епосч Егацшепс. ТЬе РНА ро1ушегяе апд 3'-«5' ехопис(еазе ассоц 6ез оЕ Ро1 1 аге сагпес1 оп сЬе К1епосч Егацшепс (Впи1ац ес а!.
19Е«9; К!епо«ч авд Неппшцьеп $970; К1епо«ч апд ОчегцаагйНапзеп 1970), счЬегеаз сЬе 5' — «3' ехопис1еазе ассоц!у оЕ сЬе Ьо1оептуше Ь саге!е6 оп сЬе япацег апс(по-сегпипа! Егацшепс (геяс1иез 1 — 325), «чЫсЬ Ь папсе!ея (Еог геч!еи«, р!еазе зее )оусе апд цсецх 1987; р!сазе аЬо зее ТаЫе $2.23). ТЬе пис!еосЫе зес)иепсе оЕ сЬе Ро1 1 депе Ь (спосчп (!оусе ес а1. 1982), апд йе зецшепс оЕ Р)4А епсодспц сЬе К!епосч Егацшепс Ьаз Ьееп с!опе6 шсо чапоиз ехргезяоп чессогз.
1.агце ашоипсз оЕ сЬе ргосеш Ьаче Ьееп ргерагес1 ЬосЬ Еог сопивегсы1 ригрозез апс1 Еог ЬюрЬуяса1 ап6 ЬюсЬеписа1 зсийез, шс1ийпц Х-гау сгузсацоцгарЬу (е.ц., р!еазе зее 1оусе апс1 бг(псПеу 1983; Рапдеу ес а1. 1993). $)зез оЕ К1епои«Епхутпе тп Мо!есо!ат С!оп(пд ° Р!11«пц г)ге гесеяе«Е 3 ' гегттт' стев те«$ Ьу г)гцезг$оп оЕ Р)«ЕА и 1тй гезгпс6оп епхутез.
1п шапу сазез, а япц1е Ьи(уег сап Ье изе6 Еог ЬосЬ с!еачаце оЕ Р14А «ч(й а геяпссюп епгугпе ап6 зиЬзе«)иепс ППшц оЕ гесеззе6 3' сегвиш. ТЬе епйЕ«П!пц теас6оп сап Ье сопсгоПе6 Ьу овпссшц опе, пчо, ог сЬгее оЕ сЬе Еоит 6)ч(ТРз Егош сЬе геас6оп апс$ йегеЬу цепегасшц рат6ацу ВПес1 сегпиш йас сопсаш поче1 соЬеяче епсЬ. ° ЕаЬе11пц Йе 3 ' сепптг' о1 Р)«ЕА 1«"ацтептз Ьу тпсогрота6ои о1 та«1(о1а(«е!е«Е «Е)с)ТРз. 1п цепега1, сЬезе !аЬе1шц геассювз сопсаш сЬгее ип1аЬе!е6 6$«(ТРз еасЬ ас а сопсепсгассоп сп ехсезз оЕ сЬе К ап6 опе гайо!аЬе1е6 с1НТР ас а Еаг 1о«чег сопсепсгасюп, «чЫсЬ сз ишаПу Ье!о«ч сЬе К,„. ()пбег сЬезе сопйбопз, сЬе ргорогсюп оЕ (аЬе! сЬас Ь !псогрогасе6 шсо Р)4А сап Ье чету ЫВЬ, счев йоицЬ сЬе гасе оЕ йе геас6оп гпау Ье Еаг Егогп шахппа1.
ТЬе ргезепсе оЕЫцЬ сопсепстасюпз оЕ сЬгее ип1аЬе1ес1 6ЫТРз 1еззепз сЬе роза!ЬП!су оЕ ехопис1ео1уск гешоча1 оЕ пис!еосЫез Егогп сЬе 3' сегпипгь оЕ сЬе сегпр1асе. «С«ЬкЬ оЕ сЬе Еоиг а-1аЬе1ес1 ЙЬ)ТРз ь асЫе6 со сЬе геасбоп с1ерепсЬ оп сЬе зес(иевсе апс1 пасте оЕ йе Р(«(А сегпип), Песеззед 3' сеппшс сап Ье 1аЪе!е6 чбсЬ апу 6$«(ТР «чЬозе Ьазе ь сопср1егпепсагу со ап ипра!ге6 Ьазе ш сЬе ргосгийпц 5' сегпипия ТЬегеЕоге, гайоасбч!су сап Ье 1псогрогасе6 ас апу роябоп гбсЫп сЬе геЪш!с сепгипть Перепйпц оп сЬе сЬо(се оЕ гайо!аЬе1е6 6Ь(ТР. То епзиге сЬас аП сЬе гайо!аЬе!е6 вю!еси!ез аге сЬе загпе!епцсЬ, Ь гпау Ье песеяагу со согпр1есе сЬе епс1-Е«П(пц геасс1оп Ьу саггуспц оис а "сЬазе" геассюп сопсашшц ЬсцЬ сопсепсгасюпз оЕ аП Еоиг ип!аЬе!ед дНТРз. В1ипс-епс$е6 ап6 ргосгийпц 3' сепгиш в«ау Ье 1аЬе1ес$ ш ап ептуша6с геассюп сЬас изез ЬосЬ 6оша!пз оЕ сЬе К!епо«ч Егацшепс. Бгзс, сЬе 3' — «5' ехопис1еазе ас6чцу гепючез апу ргосгийпц сацз стоп«сЬе РИА ап6 сгеасез а гесеззе6 3' сегпипия ТЬеп, ш сЬе ргезепсе оЕ ЫцЬ сопсепсгасюпз оЕ опе та6!о1аЬе!е6 ргесигзог, ехопис1ео1у6с Пецгаба6оп Ь Ьа!апсеб Ьу шсогрогабоп оЕ га6!о1аЬе!е6 65)ТР ас сЬе 3' сегпвпия ТЬЬ геасссоп, счЬ«сЬ сопзЬЬ оЕ сус1ез оЕ гепсоча1 ап6 гер1асеспепс оЕ йе 3' сеппспгь Егош гесеяес$ ог Ыипс-епс$ес$ Р)4А, Ь зогпесппез сацес$ ап ехсЬапце от гер1асегпепс геассюп.
ТЬе зрессйс асссчйез сЬас сап Ье асЫечес1 чбсЬ йь геассюп аге шобезс Ьесаизе сЬе 3' — «5' ехопис1еазе оЕ сЬе К1епо«ч ептуше Ь гасЬег з1ицц(зЬ, езрессаПу оп 6оиЫе-зсгапде6 зиЪзсгасез. Т4 Р)4А ро!угпегазе сагпез а п«оге росевс 3'-«5' ехопис!еазе сЬат ь -200-Ео16 «поте асссче сЬап сЬе К!епосч Егацшевс апс$ ь сЬе епгуше оЕ сЬоссе Еог сЬь суре оЕ геассюп. ТАВЬЕ 12-23 Р(чтз(оп оЕ Е. сой Ро1 ! «п(о Гипс!(опа1 Роипаспз Еягчмлтк Ризсстсоя Ромлт Ро!угпепхабоп ог 6$4ТРз СагЪоху-сепшпа1 Поташ (46 ИЭ) (гезЫиез 543 — 928) Еховис!ео!ус!с йцезсюп оЕ Р(4А ш а 3' — «5' йгессюп Сепсга! с1ошаш (22 1сР) (гез!6иез 32б-542) Ехопис!ео1у6с йцезсюп оЕ РНА ш а 5' — «3' йгес6оп Апвпо-сегпипа! Йота!в (гезЫиез 1-325) ТЬе Яж с«го цогпагаз совзисисе йе К!еаоч«оаявепс ос росушегазе С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
