Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 148
Текст из файла (страница 148)
ТЬе 1епВСЬ оЕ геас)аЫе вес)иепсе сап Ье ехгепь!ег! Ьу -35огЪ Ьу ге1оайпВ |Ье аашр1еа |псо а ЕгеаЬ ьес оЕ 1апеа 2 Ьоига аЕсег ТЬе аагпр1ее ъчеге Вгас 1оаг!ег). а. Тигп ОЕЕ |Ье роъчег аирр1у апг! Жасоппесс сЬе аег)иепс|пц аррагасиа. Ь. Гъер1асе |Ье Ьийег |и |Ье сор апс! Ьоссош гееегчо|гя с. Репа|иге |Ье загпр)ек Ьу Ьеас)пВ аа с)еасг)Ьес! ш 5сер 4 аЬоне. й 1оаг) сЬе аагпр1ея е. Гъесоппесс |Ье ьег)пепе|па аррагасиа со сЬе роъчег вирр!у.
Е. Кип |Ье Ве1, аз ЬеЕоге, ас зиЕ6с!епг сопасапс роъчег со гпа|пса|п а сешрега|иге оЕ 45-50 С. А1|егиапче|у, ехсепг) |Ье !еиПГЬ оЕ геаг|аЪ|е хегргепсе Ьу гер1асш8 сЬе Ьи((ег ш |Ье 1оъчег сЬапгЬег ъч!ГЬ а Ъиусег сошрохег) оЕ 2 раггх |х ТВЕ аиП | рагс 3 м хойши асесасе аг аи арргорпасе хга8е ш |Ье е1есггорЬогеис гип (р1еахе хее ргососо! |О). 11. Ас сЬе епг! оЕСЬе гип, Ео))оъч ЕЬе ргосес!игее с!еасг!Ьес( |и ргососо1 12 со йяпапС)е |Ье Ве! апс1 регЕосш аи|огайоВгарЬу. 596 боб 8оо |Ооб 20о/о 35 29 26 |2 8 |30 |06 76 55 28 Рго1осо! 12 Аи1огайоцгарЬу апд Кеад~пц о1 5ес~иепс~пц Се! ь ОК ГС)ХТНЕК 1НГОКМЛТЮН ЛВОС)т ЛССТОХЛОЮСяЛРНу, РЕГЛ5Е КГГГВ Со СЬе с!!аспас!оп сп Аррепйх 9.
МАТЕР!АЕЯ СА!)Т!ОЫс Р!еаае атее Аррепд!х !2 Гог арргорпасе ЬапсП!пе о! тасепа!ь тагЬес! ип!Ь <1>. Вссттегв апд Ьо!сс6опв Р!еаае атее Аррепс1!х ! Гог сотропепса о! асос1с ао!иС!опа, Ьи!!ега, апд геаеепСа. О!1и!е аСосЬ ао1ис)опа Со сЬе арргорнасе сопсеп!га!!опа. Се!д!х)пе яо)идоп Гпнх т гИе огдег ьИомп) <1> 300 ш! от шесЬапо1 2А 1сеега о! Н О 300 сп! о! 5!асса! асяс ас!с) Кайоас6сге Сотпросспдв Кад)пасс!ие !п)с ог СИетГ!ит!пеьсепс таг)сегз < с > Р1еаае аее Лррепйх 9. КеиьаЫе а!сегпадееа со гайоаспхе гп1с аге сЬепи!шпспеасепс спаг1сега ача11аЫе Ггош 5сгасацепе ГС!оцоа).
ТЬе псаг1сега сап Ье иаес! пш16р!е дспеа апс! аЬои10 Ье ехроаес1 со Виогеасепс 1!цЬс )ыс рпог Со а пеъг гоипсС о! аигогайохгарЬу. Се!5 РЬ)А вес)иепс)пе ее)а Ргерагес! апс! гип ая с)еасг!ЪесС ш Ргососо!а 8-11. Ьресса! Ецосргпеп$ АисогадГоегарИу саахессеь Гте)а), ярппе-!оадед 35.6 х 43.2 спс) ЕпИапс!пе ьсгеепа Гаа арргорпа!е). Тсчо 1агхе епЬапсес) са1сппп сипхасасе ксгеепа Ге.В., ЫВЬсеп!пВ Р!ы, Риропс) аге пеесСесС рег 61ш. Се! дгуег аеС аС 80оС. ТЬе Ве! 0гуег аЬои!0 Ье соппессес) ч!а а сгар со а часииш ауасеш. Л4у)аг ьИее! Г-5 сгп !агеег !Иап сае ее! т !епесИ апс! ЬгеадсИ) ТЬе Му!аг аЬеег Ь иаес! Со )сеер йе Ве) 11ас с)иг!пх вгу!пВ ипс)ег часишп. с2.90 Ргогосо! 12г Аигогас(106гарЬу аиг( Яеас((пХ о) $ег(иепс(пИ бе(л 12с91 5агап Иггар 5га(л!еах Ыее( теса(араго(а ог ьса1ре1 Тгау Еог Е)х(пе йе ее( ТЬе сгау лЬооЫ Ье -5 сш 1агсег йап йе Ие! ш 1епсгЬ апг( ЬгеайЬ.
УУЬастап ЗММ СН)Е рарег (ог ес(ива!епг) УУЬастап ЗММ рарег (ог ес(и(ча!епг) Х-гау Е)(т (Ь!ие хепх(с(че 35 х 43 ст) Рог ЯР-1аЬе1е6 РНА, псе а допЫе-ябед 61гп апсЬ ал Х-Ошаг-АК (КоИаЦ ог ВюМах МВ (Кол(ах). Рог ллр- апг( лл5-1аЬе!еИ РЖАВ ше а л!пИ1е-ьЫег( 6Ьп лпсЬ аз ВюМах МК (Ког(а(с). Х-гау ЕИт ргосеыюг )ч1ЕТНО0$ 1. Ас сЬе епсЕ о( сЬе е1ессгорЬоге6с гип (Ргососо! 11), сигп оЕЕ сЬе роччег апс1 с(1хсоппесс йе лес)иепсш6 аррагагих Егот йе рочгег расЕ с)1хроае оЕ йе е1есггорЬогеых ЬиЕЕег апс( СЬеп геточе йе Ие! гпо!с( Егот сЬе аррагасия 2. 1.ау сЬе Ие! пю!с( бас оп р1аас(с-Ьас)сес( ргосес6че ЪепсЬ рарег лч(сЬ йе ыпа1!ег (погсЬес() р1аге иррегтохг. А)1олч ЕЬе Ие! со соо1 со (37'С ЬеЕоге ргосеес)106.
3. Кебиче апу серпа)п)пИ р(есеа оЕ Ие1-хеа1ш6 саре. (Ле ЕЬе епс( оЕ а гпеса1 арасп1а со ргу арагс йе р1асех о( йе аппо)с) ь1очч!у апс( цепс!у. ТЬе Ие1 ьЬои!с( гегпагп асгасЬес( со йе !опИег (попа!1!сои)гег)) е)аах р1аге. А ЪЧАИЬ!(Ь(С ЪСгеаг ха(егу И)аллея С)аха р!агеа чЫИ оссах(опаИу сЫр с!иг(пИ ГМа ргосес!иге. И!иге СЬаг СЬе лиг(асеа о( СЬе И!ахх р!агех йаг счеге !и сопсасг КИй йе Ие! гпау Ье сопсагп!па!ел) чий гас!!пасс!ч1су апг) аЬои!д Ье ггеасег) арргорпасе!у. И йе це! ас!Ьегех Со ЬоСЬ р!а!еа, гер)асе СЬе рагиаИу с$1х1ос$6ес), япаИег ог погсЬес! Р1аге Ьас1с оп СЬе Ие1, !пчегс йе р1агея апс1 Сгу арап. 1( йе Ие1 гегпа(пх хсис!с, ЕоИочч йе Ие!-Их!06 ргосес!иге с)еаспЬсх) 1п 5гер 12 о( гйх ргососо1 го Иоас йе Ие( 06 опе оЕ ЕЬе р)асея 5герл 4 — 13 оЕ сйл ргососо1 лпау Ъе оппгсег( 6 йе ргог)пссл оЕ ЕЬе ле0пепс(пС геасиопл аге 1аЬе1ег( чЫЕЬ л'Р, Еог ехяпр1е, гЕ ЕЬе епхугпаис леопепс(пс лгал рг(шел( чбй л'Р-1аЪе1ес1 оИИоппс!еогЫе рпгпег ог ЕЕ [а-ллр)г(НТР лгал (псогрогагег( ИпппИ ехгепьюп оЕ ап цп1аЬе1ег( ргппег А геасИпс о( 20 — 100 срк счЬеп а пппппошсог Ь пьес( го агап ЕЬе гпгЕасе оЕ йе Се! лпсИсагез ЕЬаг гп61сгепс гасбоасичлгу Ь ргелепг го Еогесо г(гу!пс.
Еп сЬЬ сале, сочег гЬе Ие! гч!ЕЬ Вагап ЪЧгар, ша)се саге гЬас ЕЬеге аге по чгг(пЫея лпаг1с йе опепсаиоп, апг) сИгесг!у ехроле гЬе Ие! (лиИ аггасЬегЕ со !гав И!ам р!аге) со Х-гау 61лп. ТЬЬ ргосейлге Ьал сЬе 61лаг(чаи!асса оЕ гу(пс пр Ие! е!есггорЬогеял р(алел г)пг(пИ апгогагбоцгарЬу апг( г(оел пос улеЫ Ьапй ЕЬас аге ал сЬагр ог ал 1пгепле ал гЬоле оЕ а дг(ег( Ие!. 1п агЫ(г(оп, гаг(юасиче ИпЫ гепгЬ со оохе Еголп ЕЬе Ие! гЬлппИ ехроеаге го Х-гау 61лп. НаИпс солпе гЬ~л Еаг, г(о пог га1се ялсЬ а г(йс Еог ЕЬе ла(се оЕ лач(пс а сопр1е оЕ Ьоигл лчог(с.
ТЬе гаг)1о!аЪе!ег( ргогЕпссл оЕ Махаю-Сл!Ьеп леулепсшс геасг(опл аге ИепегаИу пог 1аЬе!ег( гпЕ6- с(епс!у со Согесо Йхшс апг) г)гу(пс. 4. 'члгЬеп сЬе 61ахх р1асеь Ьаче Ьееп аерагасег), сис о!Та Ьоссогп ог сор согпег оп сЬе аЫе оЕ(Ье Ие1 йас ччаа 1оас)ес1 6лгхс. ТЬ(а 1апйпаг1с хегчеа со опепс йе Ие! с)иг106 аиЬьес)иепс лпатри1а6опя 5. УИх йе Ие! ш Ие1-6х(пп ао!исюп (пгесЬапо!/асяс асЫ; р1еахе аее Магег(а(а). Вегрлепсшс Ие!л лч(гЬ 'лр ог 'л5 лЬоо16 Ье Ихег) ЬеЕоге дгушс.
ТЬ|г ьгер Ь оргюпа1 Еог Ие! с 1аЬе1ег( счлГЬ л'Р. Ногчечег, 6хагюп 1шргочел геао1огюп, зоплеишел епЬапсел йе яспа! г(ег(чег( Егопл !оч апюппь оЕ гагЕ(оасг(ч(гу, апг( еИпппагез ЬлИЬ сопсепггаиопл о( пгеа ог ЕоппагпЫе Еголп йе Ие1. Рлхагюп Ь а!ао а 1алс геьогг Еог гепюч(пИ а Ие! йаг 1г ппрокяЫу кспс(с го Ъой р!алел оЕ сЬе пю1й 12.92 СЬаргег 12с РЫА Бес!иепгспе 10. 13. Тгапауег сЬе ае1 (соаесЬег ъч!сЬ Ьа хиррог6пц ц1аха р1асе), со а хЬа11оьч сгау сопса!и!пВ гпесЬапоЬасе6с асЫ хо1исюп.
Р!х йе де! Еог 30 ш!писех ас гоош сешрегасиге. Ро пос аи!гасе йе 601с1 ъчЬ11е сЬе де! !х Ье!па Вхей ТЬшпег ае1с аге 6хед псоге сарЫ1у, сЪк1сег псоге с!оъч1у, А хе! 0.2 пип сп сЪ|с1спея и Бхесс сп 10 пиписея а ае! О.б поп сп сЪсс1спея гесСцсгес -1 Ьоиг. ТЬе саше ЪассЪ оЕ 6хасюп йшсС сап Ъе исесС со 6х ъечесас де1я 1Е сЪе хе! сЪоъчс яаос оЕ сСесасЬспа Егопс йе ьиррогсспа 61ая р1асе, сочег 6 ъч1сЬ а рсесе оЕ с!!ЕЕ р!асс!с песипх Еача!!аые Егосп таоу ЪагсСъчаге с!очес) со ргечепс йе ае! Егош ессарспа апсс Еосшспа а сгшпр1есС тая. АЕсег 30 пиписея 1!Ес йе и1аха р!асе чегу, чегу з!оъч1у Егопс сЬе Вхасюп хо!ис!оп.
Тгу со 1сеер сЬе р1асе Ьопхопса1 ипс1! гпозс оЕ сЬе Вха6оп ао106оп Ьах с)гашес1 аъчау. 1.ау йе р1асе, ае! х16е иррегшохс, оп а хсас)с оЕ рарег сосне!я В!ос ехсеах Вха6оп зо!ис!оп Егогп йе д1аъа р1асе ъчаЬ К1шъч)рея Тгу пос со соисЬ йе сшгуасе оЕ сЬе це! ъчЬЬ сЬе К)шъч)рея Кепюче ъчг)пИех апс) Ыеш!хЬеа Егогп йе Ве! Ьу цепс!у сагехяпа Ва ясгуасе ъч)сЬ у!очес! Впаегя Ргераге а р)есе оЕ "ъАсЬагшап ЗММ СНК рарег (ог ес)и!ча1епг) йаС 1а а11КЬС1у !агах (2 — 3 сш) сЬап сЬе це! сп Ьой 1епВЕЬ апс! ъчЫсЬ. Но!6 сЬе рарег сп а Ьоъч зЬаре апс) соисЬ йе сепсег оЕ сЬе Ьоъч со сЬе сепсег оЕ йе це!. Ьес йе рарег ЕаП цепс!у опсо йе хигуасе оЕ сЬе ае! апс! йеп арр1у аепс1е ргеххиге ао сЬас йе ае! Ьесошеа Впп1у ассасЬес) со сЬе гоиКЬ аигуасе оЕ йе рарег.
НоЫ йе рарег ш р1асе ъч)сЬ опе Ьапс! апс! р!е)с ир йе аиррог6пц ц1ахх р!асе ъч!сЬ сЬе осЬег Ьапд. Е си)сИу 61р сЬе хапс)ъчкЬ очег апс!!ау 11 с!оъчп оп йе ЬепсЬ сор ъч)сЬ сЬе 01аах р!асе Еасша иръчагд. Сепс1у аерагасе сЬе ЗММ СНК рарег Егогп йе а)аах р1асе Ьу 11Ес)па йе р1асе иръчагд. ТЬе Ве! чу!11 а6с1с со йе ЗММ СНК рарег аа сЬе 01аха р1асе 1а ри)1ес! аъчау. Ьау сЬе ЗММ СНК рарег (ае! иррегшохс) оп съчо р)есеа оЕ ъАсЬасшап ЗММ рарег оЕ сЬе хаше яке. Сис а рсесе оЕ Яагап чъсгар х1!ВЬс1у 1опцег ап6 ъчЫег сЬап сЬе це1 апс! 1ау сс оп сор оЕ сЬе ае!. Тгу со ачоЫ сгеахеа апс) ЬиЬЫея ТЬ|в яер 1а гпоге еая1у ассогпр!саЬес1 ъч!сЬ йе Ье1р оЕ апойег регвоп.
Но!6 сЬе согпегх оЕ йе Вагап ъъсгар апс! Рий ошъчаг6 ьо йас 6 1а с)аЬ11у хсгессЬей Еоъчег сЬе асгессЬе6 Вагап 'ъъсгар опсо сЬе хигуасе оЕ сЬе ае1. Опсе сЬе Вагап 'чъсгар Ьаь соисЬес) сЬе де!, с)о пос ассеспрс со гешоне !с, япсе сЬ)х сап саихе сЬе це! со сеаг. ТЬе Е)ас епс) оЕ ап аКагохе де! сошЬ, а Кипъч)ре, ог а р!асс сагс! сап Ье ихес) со гешоче апу ЬиЬЫех оЕ асг сгаррес! Ьесъчееп сЬе ае! ап6 ъчгар. А!сегпассче!у, ссгессЪ апс1 саре ап арргорг!асе1у с!хесС рсесе оЕ Бахаи Ъчгар со йе ЪепсЪ, епсиппа йас йеге аге по ъчпп!с!ея ТЪеп спчегс сЬе ае! апсС р!асе Еасе сСоъчп оп сЬе хагаи Ъчгар. 1ухе а рарег сиссег ог хЬагр расг оЕ ас1ххогх со сгип а11 сЬгее р)есех оЕ ъъсЬасшап рарег ап6 йе вагап ъ'ъсгар со арргохппасе1у йе хаше яге аа сЬе ие1.
Р1асе сЬе хаос!ъч)сЬ оЕ рарег, ае!, апс! вагап Ъ'гар оп сЬе це1 с!гуег, ъчпЬ йе р1ах6с ъчгар иррегшохс. !Зхе а хЬеес оЕ Му1аг со !сеер сЬе хапбъч)сЬ Е!ас Иоппии 6гу)пК. Р011оъч!па йе швсгисс!опа оЕ сЬе гпапиуасыгег оЕ сЬе Ве! с!гуег, с)гу йе де! Еог 30 — 60 пиписех ипс)ег часишп ас 80 С.
Ргуспа сЪе ае! гейлсеа сЪе с)сяапсе сЪас гасбоасбче рагссс1ес шисс сгаче! Ъейэсе Ьсссспа сЪе Х-гау 61сп, йегеЪу спсгеаяпа сЪе сепябчиу оЕ с!есесссоп. Кегпоче йе це! Егогп СЬе с!гуег апд рее! оЕЕ йе вагап чъггар. ТЬе дпе6 це! аЬои!д Еее! япоой со йе соисЬ апс) пос хск)су. А с!шс1с гешес)у со ас)с)с!песа га со шгп а роъчс)егес)1асех а1оче шхЫе оис апс! иае йе са1сшп роъчдег оп йе шаЫе оЕ сЬе ц!оче со с)иас йе де!. То оПепс йе ае1, ассасЬ а япа1! ас!Ьеыче 1аЬе! шаг)сес! ъчпЬ гас!!оаес!че ог сЬеш!1иш!пехсепс !п)с со йе ЗММ СНК рарег 1п сЬе аррасе сгеасес) Ьу си!с)па сЬе Ьояош согпег оЕ сЬе Ве! (Зсер 4). Ргососо! !2: Аисогог)го5гарЬу апг! аеас)т~ оГ 5ег!иепсгп5 бе)г 12.93 Т 5. 1п а с)аг)сгоопс, р1асе йе с)г!ес) Ве1 (Ве! хи1е ир) !п а арг)пц-1оадес) гпеса1 саааессе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
