Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 149
Текст из файла (страница 149)
Сочег йе Ве1 ю!сЬ а аЬеес оГ ипехровес) Х-гау 61пс. С1оье йе саахессе. ЕасаЫ!аЬ ап аисогасбоВгарЬ Ьу ехрогбп8 сЬе де1 со сЬе 61гп Гог 1б — 24 Ьоигз ас гоот сегпрегасиге ог -80"С. ТЬе Вгпе гес!шгес! Гог а регГесс ехроаиге оГ а аеоиепс!п8 8е! саппос Ье ргейссег! сч!сЬ ассигасу.! Г ечегусЬгп8 Ьаа 8опе чесу чае!! с)игспц сЬе аессиепс!п8 геаспоы, ! 6 — 24 Ьоигя шау сигп ош со Ье соо !оп8 Ьу а Гассог оГ 5 ог пюге. !и !еаа Гогсипасе с!гсшпьсапсеа, сопа!с)егаЫу !оп8ег ехроаиге гпау Ье геци!гей ТЬе гпа!ог апп ас сЬ!ь ро!пс Ь со са1се а Ьгас 1оо!с ас йе 8е1, со аее сГ йе зегсиепс!п8 геассюпа Ьаче 8опе чге!1, апс! со иае сЬе !псепа!су оГ йе Ьапда аа а 8и!с)е со аес ир опе ог пюге ас)ЙС!опа! ехроаигеа.
16. Рече1ор сЬе аисога61о8гарЬ ассогс)1п8 со сЬе гесопнпепс1а6опа оГ сЬе псапиуассигег оГ йе 61сп апс) геас) йе аес)иепсе оГ СЬе Р)х)А ах с)еасг)Ьес) ш СЬе !пуоппа6оп рапе1 оп ССЕА0!ЬСС АН АС!ТОССАОЮСйАРН. Ргот а Ьоо)с Ги!! оГ тухгег!оиг р!ссигеа йеу Геагпег! аЬоиг йе игег оу Ьа!г апг! ед5гЬе!!г апг! )есег апг! игогта ЬегЬг апг! йе Ь!оогГ о!а гегГ-ЬаГтег! таи. ТЬеурагпгег! Ыас)г йе сча!1х оу йеп гоот апгг Йеп Ьипдргсгигег Йеу гпГррег!)гот Йегг Ьоо)гп а!сЬетгТгг 1аЬг)ихгарогегГ сч!ГЬ тог!е!г о) Р)чА апгГ йе гЬгее-йтепг!оиа! гггисгиге оу Ьето5!оЬГи. ТЬегг ГогЬег сигиесГ йгг аиг! гип!!5Ьг тго сете; счаг йаг а!сЬету ог сЬет!гггу! Егйег оие т!5Ьг гипс йеп. Во!айоп гпго)геег)от.
Апг! го оу соигге гЬеу ггийегГ ЬгосЬетгаггу т со!!е5е.... Апс)геа ВаггеСС, ТЬе МагЬиг5 5!агеева 1п 5!Вр Еечег. 12.94 СЬаргег 12: Р)ъ(А Бег(иепстч Л|)ТОМЛТЮ ВВ|А ЬЩЕ) НЧСПЧС Ргогп гь шсер6оп, йе ЯЫеоху сЬалп-сегпппа6оп плесЬос1 о( 1)ХА зег)иепс(п8 (5ап8ег ес а1. 1977а), ъч|сЬ епхупла6с геас6опз сагпег| оис |п аулеоиз зо!чепсз ас гпойегасе сегпрегасигез, ъчаз ап оЬсйоы сапсПдасе сог аисопса6оп. Ву йе еаг1у 1980з, сЬе йече1оргпепс оЕ аисогпасей зег)иепс(п8 ъчаз ъчеП ипйег ъчау, ияп8 РВА то1еси!ез!аЬе1еъ| ъч|й Яиогезсепс ||уел гайег йап йе сгасПсюпа1 гасПо|зосорез (5ппй ес а1. 1986).
Ву йе п|Ыд!е оЕ йе йесайе, аисотасей Яиогезсепс зес(иепсегз Ьай Ьееп йече!прей лп ъчЬ|сЬ сЬе ргойись о(ЯЫеоху-зеПиепслп8 геас6опз ъчеге зерагасей Ьу Ве! е!ессгорЬогеяз, дуе пю|еси!ез ъчеге ехсПед Ьу а!азег Ьеагп, апд сЬе Яиогезсепс я8па!з ъчеге агпр!гЯей апй с|есессес1 Ьу РЬосопш16р! сег сиЬез (ог а ССР салпега ш!асег гпос|е!з) (Еог гечлеъчз, р!еазе зее СЬеп ес а!.
1991; Нип1сарП!ег ес а1. 1991; СЬеп 1994). Весаые Яиогезсепс я8па! з сои1д Ье десессед апд ргосеьес| соп6пиоиз|у, Ве|з сои! д Ье гип Еог 1оп8ег 6тез апс1 гпоге с1аса сои1й Ье соПессей. Сопсрисег зойъчаге Ыеп66ед еасЬ пис!еосЫе Ьазес| оп сЬе сПз6пс6че со!ог (епизяоп ъчаче1еп8сЬ) оЕ еасЬ д(ЕЕегепс дуе, со Ыепс|Еу (саП) еасЬ Ьазе ассогсПп8 со сЬе йаре оЕ сЬе Яиогеясепс реа1с апй сЬе сПзсапсе Ьесъчееп зиссеьлче реа1сз. Ечо!ос|оп оЕ ЕЬе Тес|лип!оду ТЬе ечепь 1еасПп8 со сиггепс аисотасед зесрлепсш8 сесЬпо! о8у аге зшптапхед ш Р)8иге 12-10. ТЬе роъчегри| |трасс оЕ сесЬшса1 а|Ь апсез оп зег)иепсш8 еЕЯс|епсу ь ечЫепс Егот сЬе ппргочетепс |и сЬе пшпЬег оЕ загпр!ез (апй ачега8е геай-!еп8сЬ рег заплр!е) йас сап Ье асЬ|ечед сп 1 ъчее1с Ьу а з)сП!ей, с|есПсасес| |пчез68асог. )ид8ей (гоп| со||ау'я зсап|1агйя сЬе сарас|су оЕ аисотасей зесрлепсегз ачал|аЫе ир со 1990 ъчаз 1очг, апй |1аса ъчеге ойеп чапаЫе апй роог сп грлаПсу (Маг6п апй Рач)ез 1986; СЬеп ес а1.
1991; Нип1сар|Пег ес а!. 1991). Ноъчечег, сЬеге ъчаз а Вгеас 1еар Еогъчаг|1 ъчЬеп РСК ъчаз Ьагпеяед со йе с|Ыеоху псесЬой ш "сус1е зег)иепс(п8" (СагосЬегз ес а1. 1989), а ргосея йас!шеаг!у агпрПЯез я8па!з ап|1 сЬегеЬу Пгеас!у аи8тепсз йе зепя6ч|су оЕ зес|иепсгп8. Ас|г66опа1 ипргочетепь |п с1уе сЬетЬсгу апд тосПЯсасюпз оЕ Е)ЫА ро!угпегазез Ьаче Ьееп а ЕигсЬег зоигсе оЕ епоппоы рго8геь сЬгоиПЬоис сЬе 1990з. Аз а сопзес)иепсе, сЬе гасе оЕ зег)иепст8 Ьад лпсгеазед -30-Ео!й Ьу 1998, ю сЬас а яп81е шчез68асог лп а ъчеП- ег)и(ррей 1аЬогасогу соиЫ ЬапсПе 500 затр!ез а ъчее|с ъчиЬ ап ачега8е геас1-1еп8сЬ оЕ 650 Ьазез рег заплр|е. Ву сЬе уеаг 2000, сЬас гасе Ьа|1 Ысгеазед Ьу апойег огс|ег оЕ гпа8шсийе ш Ь|8Ь-сЬгои8Ьрш ЕасП|6ез ес(и(ррей ъчлсЬ сар|Пагу-Ьаяей зес(иепсегз апй гоЬо6с соо!з.
|шслаПу, сЬеге ъчеге съчо та) ог |урез оЕ соплтегсла! сысгшиепся ЬосЬ оЕъчЬлсЬ ыес| Пе| е! ессгорЬогеслс зерагассоп оЕ Р)4А Ега8тепсз, опе ияп8 яп8! е-йуе Еоиг-|апе зерагасюп (Апзог8е ес а!. 1987), апс| сЬе осЬег ияп8 Еоиг-йуе яп8)е-1апе зерагасюп (5ппсЬ ес а1. 1986). Весаые оЕ сЬелг Ь|ВЬег сЬгоиПЬрис, Вгеасег сопязсепсу, апс| 1оъчег зепябчсу со е1ессгорЬогебс агИассз, йе яп81е-1апе шзспппепсз Ьаче Вгаг1иаПу Ьесоте йе арргоасЬ оЕ сЬолсе. ТЬе сиггепг з!аЬ Ве! гподе1 АВ1 377 аиСотагед зег)иепсег, ъчЬЫЬ допипасей йе согптегс|а! таг)сес дипп8 йе!асс 1990з, Ьаз а сарас|су оЕ96 затр1ез рег гип, ъч(сЬ съчо со Еоиг гипз а дау (|1ерепсПп8 оп сЬе геад-1еп8сЬз йеягей). СарП!агу-Ьазей ег|шртепс с1е!гчегз ях со е(ВЬс гипз а дау ъчЬ|!е е!ппшас(п8 сЬе сейоы Ве! ргерагасюп ап|1 затр1е!оасПп8 зсерз.
Сар|Пагу е!ессгорЬогеяз (5ъчег|Поъч ап|1 Сезсе!апд 1990; 5пий 1991; уап ес а1. 1996; РобсЬ| 1999) а!зо оЕЕегз осЬег ас|чапса8ез очег сгас66опа! з!аЬ Пе! зузсепсз. ° Весаизе еасЬ сар|Пагу ь чегу япаП ш сПатегег (50 — 100 |ип), ЬеаС ПепегаСес1 йипп8 е! есггорЬогеяз сап Ъе гарЫ1у й)зз(рагей. Чегу Ь|8Ь чо!Са8ез сап СЬегеЕоге Ье арр1|ей Со асЬ|ече зерага6оп оЕ СЬе рго|1исЬ оЕ зег)иепсш8 геасбопз ш а зЬогсег репой оЕ йпе. ° Весаые еасЬ загпр|е В!оас|ей лпсо а йзсгесе сар|Пагу, сЬеге ь по пеег| Еог шпе-сопянпш8 сгасЫп8 оЕ |апез оп Ве! ипа8ез.
Аз оЕ еаг!у 2000, СЬгее 9б-сЬаппе!, опе 8-сЬаппе!, апй опе 1-сЬаппе! сар|Пагу-Ъазей зег)иепсегз ъчеге ачайаЪ|е (Во8ы! ачз|су 2000): Ме8аВАСЕ (96-сЬаппе!, Мо|еси! аг Тгупат(сз, СаИогша), АВ! 3700 апй АВ! 310 (96-сЬаппе! ап|1 1-сЬаппе!, гезрес6че!у; РЕ Вюзузгегпз), 5СЕ9610 (96-сЬаппе1, 5ресгги-Мед|я, РеппзуЬаша), апд СЕО 2000 (8-сЬаппе!, Вес1ипап Сои1гег, СаИогша). ТЬе АВ1 3700 плоде! Ь а1зо ег)и(ррей ъчПЬ ап ашотасей !оадег, репп66п8 >6 гиы а дау ипассепйей Ьу ап орегасог, ог а сараЫПсу оЕ >4000 яатр1ез а ъчее1с. 1пс!исПп8 йе ген!сапс зач)п8з ш регяоп роъчег, йь псасЫпе сап гпсгеазе зегрлепсш8 еЕЯслепсу Ьу сеп(о!д |гогп сЬе орегассопз ияп8 ргеиоы гпойе1з апй Ьаз сЬе росепда! со гейисе йе созс рег ЯшзЬед Ьазе Ъу а согпрагаЫе Еассог.
)и~опта!!оп Раве!з 12.95 [ !940 ~ ( низа ( 1985 ) Ме1вспег: Овоочегеб ОНА Аче!у: Ргоровеб ОНА аа воепедо Мазепа!х ила!зов апб Спа1с ОМсочегеб ОоиЫе Не11х З1гиогиге Наиву: Зециепаеб Уеавг 1ЯНААгв Рпчпеб вуп1Певв апб 2-О е!ес!гароогевв !.евв ОНА гервгеб '( \970] или! Зе11иепсеб Х Сопев1че Епб СНА Спагп 1егпхпабоп апб апегпгса! бедгаба1юп Ро!увсгу!апл!бе де! е!ес1горпагевз ивеб !а верага1е ОНА 1гас1з ЕГГ101епоу (вапгр!езурегвопгвеех х ачегаде геаб !епдя) Запрег! ОМеоху Теггп1папоп ЗВЬесп Спеппоа1 Оедгабадоп ( 1977 ~ Меав1пд: М13 С!оп!пд Веииепсгпд геасгюп сопбюопв ареал!геб Амоггеб весиепсюд в!га!ерев сече!ореб апб сопгри!ег-аяв1еб ба!а Папбвпд Ьедап 1980 20 х 1 00 Ьр Нооб е1 а14 Рая!а1 Аиготадоп Аи1оюа1еб 1юагевсеп1 веаиепсгпд !пв1гигпеп1в ивеб РСП зепиепсгпд !п1гобисеб "Суа!е вециепс!пд" бече!ореб 30 х 250 Ьр Ся'~Я) г ЛЕ Ашота1еб Зег1иепаегв 1тргочеб Веиег веииепсгпд епгугпев бече!ореб Орппчгеб аиогевсеп1 буе ве1в сгеа1еб Нгда-1Пгоидари! 1ооя вЮ гоЬопс орега1юп ивеб [ '!997 ] Сотр1е1е Зециепсе Ое1еггп1пеб: 3 сегеввве Нигпап сагопювопле 22 С.
е!едапв -20 Ьас1епа! депоюев Огозоразв и спогега Ниплап сиюпювлпле 21 Ргаюевога Ьиплап депогпе Е(С()КЕ 12-10 0)ч1А 5ег)иепс!пе НгМогу Соиг1езу о( ЕХ СЬеп. МеЕЬог(5 !п АОЕогпаЕег( 5ег(иепс!пе ТЬе Ео!!оиг!05 йзсияюп Ь Ъазсг1 оп 1Ье зреслбсабопз оЕ ЕЬе АВ! тог)е! А01отагег( 5ег)иепсег, 1Ье ег)шр- тсп1 сиггепг!у изес( Ьу !поз! зег)испо!05 Еас!116ез. ОЕ соигзе, зег)иепс!Од е(6слепсу Ь аЬо йгесг!у ге!а1ег) го 1Ье па1иге оЕ 1Ьс ЕуххА зиЬзггагс. 1п сапега) ргас6сс, (9ХА пю!сои!ез ЕЬаг сопгалп тоге гсрс66чс зс!)испсс !гас)сз ог Ьоплоро!уплсг зегрлспсс с1сплепгз, ог Ь!5Ьег СС сопгсп1, гег)и!гс тоге ъчог)1 (ЕХ.
СЬеп ег а!. 1995). ч(7ЬЬ!и а з!05!с рго)ссг, югпе гсрбопз а!ю гспг( го Ьс пюге ггоиЫсзогпс. То зо!чс зрсс!6с ргоЫстя зечега1 пюй6сагюпз о( 1Ье 1106еоху тегЬог!Ьаге Ьсеп г(счс1орсг) ш 1Ьс раз! г(ссаг(с. Еог схатр! с, ЕЬе изе оЕ пис1еоггбе апа! 058 зисЬ аз шояпе ог беага сотроипй сап Ье1р сбпипаге "цс1-сотргсзз!оп" ргоЫсплз ()епзеп ег а!. 1991), лп лчЬ!сЬ а зег)иепсе !гас! Ь сопсеа1сг) !и а з!пц!с ипгезо1чсг) Ьапй 1Ье !пс! ияоп оЕ ругорЬозрЬагазс го г)есотрозс 1Ьс ругорЬозрЬагс ассити!агсг( бшш5 сЬаш е!опца6оп ргсчепь ЕЬе 1оя оЕ реа)сз ("т!зз!пц реа)гз") гази!6!15 Его!О гсчсгзс ро1улпсгазс гсасгюпз (ТаЬог апг) К!сЬагг(зоп 1990) ! ЕЬс агЫлгюп оЕ з!051е-зггапг(-Ь!пйп5 ргогешз го зегрлепс!05 гсасгюпз ппргочез 1Ьс грла!лгу оЕ 1Ье г)ага ргос)иссг( Ьот ЕЛ)х)А гсгпр!агсз спг!сЬсг( ш !оорш5 зггисгшез (СЬеп ег а).
1991); апд, 6па1!у, 1Ье ыс оЕ 466сгспг с!оп!05 асс!ага ргочйсз ап а!гсгпа6чс пгЬсп а рагиси1аг М13 с1опс ы ипзгаЫе (СЬеп апг( 5есЬигц 1985; СЬ!яое сг а1. 1997). Мапу оЕ 1Ьсзе чапагюпз Ьачс Ьесп !пса!рога!ос( !пго сшгспг аиготагег) зег)испс!Од ргогосо!з, раг6си!аг!у аз рагС оЕ схгепячс рго)есгз. 12.96 СЬартег 12т РХА цет)иеистиц Оуе-Рг(тег БегЕиепс(пд 1п ает)иепсшц ъчтй йуе рптпега, Еоиг аерагасе геасйопа аге сагпей оис Еог еасЬ РЫА аашр!е, еасЬ геасИоп сопсатшпц а йццегепс с!уе-1аЬе!ей ргипег. ТЫа аес оЕ Еоиг геасйопа Ь тЬеп пнхей апт1!оайей тисо а яиц1е сЬаппе! Еог це! е!ессгорЬогеяа (5писЬ ес а).
1986; 1.ее ес а1. 1997). ТЬе аеъ)иепс)иц геацепс '"Ыс" Ьаа а лес оЕ 1оиг ргнпегя еасЬ сопсашшц а й(6егепс йуе шсогрогасей шсо ап оПцопис!еосЫе, суртсаПу 17-20 Ъааеа ш 1епцсЬ. 5епяйхПу сап Ье ипргочей апй яцпа( ииепясу епЬапсей Ьу ияпц "епегцу стана(ег" (ЕТ) рпшега сЬас саггу съчо аерагасе йуеа (!и ес а!. 1995; 1.ее ес а!. 1997). ТЬеае ЕТ рпитега суркацу сопсатп а япц1е йопог йуе, ъчЬкЬ сап Ье еая1у ехсбей Ьу сЬе агцоп топ 1ааег. ТЬе йопог йуе стана(ега сЬе епегцу со опе оЕ Еоиг аесопйагу (ассерсог) т(уеа, еасЬ ъчиЬ а сцайпсйче еиняйоп арессгшп. Соитрагей со сЬе еаг!пк япц1ейуе рпспег аеь, йе ЕТ ргипега сур(сацу ргоч(йе сЬгее- со ЕоигЕо!й асгопцег яцпа1а ()и ес а1. 1995).
АшегаЬаш апй РЕ Вюауасеита аге съчо чепйога о( йуе-ргипег геацепса. АтпегаЬаит (ЕТ рптпег Ыс) ргочЫеа йе съчо с!уеа ассасЬес) ас съчо й(ЕЕегепс Ьааеа, аЬоис 6че пис1еосЫеа арагс; РЕ Вюауасепь (В(цРуе-ргипег Ыс) ргочЫеа йе съчо с)уеа соппессес) Ьу ап апнпоЬепготс асЫ!тп1сег (сЬе ао-сацес1 В)цРуе), Ьой ассасЬет) со сЬе 5' епт1 оЕ йе рптпега. ЕПЬег Тат) ро1ушегаае, Т7 Р)4А ро1ушегаае (Бег)иепааес ТаЬог апй КкЬагйаоп 1987а, 1995), ог ТЬегию 5ет)непале (Реече апс1 Рицет 1995) сап Ье иаей, Ьш йе Тат) ро1утпегаае пштапт (е.ц., АтпрПТат) Р5 Егош РЕ Вюауяень) Ь Егет)иепйу ыей шп1ег сус!е ает)непсшц сопгцсюпа.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
