Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 147
Текст из файла (страница 147)
А1йощЬ ъчед8е Ве1а е1е8апс)у очегсо|пе йе Ъапд-арассп8 ргоЫеш, йеу аге дссски!с со ропп геъ)и!ге крее|а!саед Ве! арасегя апд оссеп сгас)ъ ироп дгу|п8. Апо|Ьег |песЬод ог гедис)п8 сЬе арас)п8 Ьесъчееп япаПег Р)ъ)А Сга8шепса апд шсгеаяп8 йе ярас)п8 Ьесъчееп!аг8ег РМА гга8шепса 1а со 1псгеаае рго8геаяче1у сЬе юшс сопсепсгасюп 1п сЬе 1оъчег 1апоеПс) рогдоп ог сЬе Ве1. ТЬе чо1са8е сагг)ед сЬгои8Ь йе 8е1 десгеааеа ъч)сЬ )псгеая |п8 юшс асгеп8|Ь, ъчЬ)сЬ саиаеа йе РХА со пи8гасе пюге ь1оъч!у аь П !саче!а апо|ПсаПу сЬгои8Ь йе Ве1.
ТЬеае ао-саПе|1 юшс 8гаеПеп| 8е1а ъчеге шП|аПу ивед Ъу В1881п еС а1. 11983) апд ъчеге гогшед Ъу дгаипп8 а ро1уасгу!аш|де 8е! |ю1исюп ог'1оъч юпк асгеп8й шсо а р|рессе УоПоъче|1 Ьу а аесопд |ю1исюп ог" ЬъВЬег юпк асгеп8|Ь. Опе ог гпоге ЬиЬЫеа ъчеге йеп риПед 1псо йе р|рессе со ппх йе съчо ао1ис)опа ас сЬе 1псеггасе апд |ЬегеЪу сгеасе а "Вгад)епс" Ьесъчееп сЬе ехсгешеа ог" юпк ьсгеп8|Ь.
ТЬе гогшас)оп ог' сЬе юпк 8гаеПепс Ьу сЬ)а ргоседиге ъчаа д)гС)си!с со сопсго1, ъчЬкЬ 1п сигп 1ед со ашогагПо8гарЬа сЬас огсеп геаешЫед |Ье |)шПа ог' а рогсирше гасЬег сЬап ап огдегед 1аддег ог" Р)ъ)А Ъапдя тг.вз Рго1осо! 11 Еоад!пц апд Капп!пц 0МА-ьес~иепс~пц Се!ь не вет5 ое невтео Оь)А еаасмент5 сенеклтео вч тне енл мат!с ог сЬеппса1 шегЬодя оЕ 0)я)А яея)пепсшВ аге геяо1чед Ъу е!есггорЬогеяя гЬгопаЬ 6пп депа!ог)па ро1уасгу1ашЫе Ве18. ТЬе Еоцг геасгюпя (Ся, А, Т, апд С) ш а яесрлепсша яег аге 1оас1ес1 !и!о ад)асеп! 1апея оЕ а ро1уасгу!апгЫе ае!, со тчЬдсЬ а 1агВе сштепг !я ЕЬеп арр11ед. ТЬе пеВаг!че)у сЬагВед 0)я)Ая пщгаге апойса11у аг гасея гЬаг аге де!егпппед Ьу гЬе)г я)кея. А гурка1 депагог!па ро1уасгу1агпЫе Ве! Р611 геяо1че 0Ь)А Егацшепея ш ЕЬе !5-400-ппс1еогЫе я)ге гапае.
Рог а йяспяяоп оп !Ье рЬуяса1 Ьаяя оЕ 0ХА шочешеп! ЕЬгопВЬ Ве1я, р1еаяе яее гЬе шЕоппа6оп рапе1 оп ЕЕЕСТКЕСАЕ МОВ!ИТУ ОГ 0)Я)А. МАТЕК!АЕЬ СА!)Т!Ойя Р!еаяе яее Аррепйх ! 2 Еог арргорпа!е Ьапд!!па оЕ япа!епа!я пяаг1сед ипЕЬ <! >. ВоЕЕег5 апг! Ьо!6Е!оп5 Р1еаяе яее Аррепйх ! Еог сояпропеп!я оЕ я!ос!с яо!о6опя, ЬиЕЕегя, апд геааеп!я.
06о!е я!ос!с яо1обопя 1о ГЬе арргорпаге сопсеп!га6опя. 0.5х ТВЕ апдуог !х ТВЕ Се!5 Репа!ос!п8 ро!уасгу!атате Ве! <!> Ргерагед ая деяспЬед !и Ргогосо! 8, 9, ог ! В. Ь)ос!е!с Асп!5 апе! О!коппс!еоЕ!е!е5 ОНА яесЕиепс!п8 геасг!опя <! > Саггу оог гЬе геасг)опя ая деяспЬед )и Ргогосо1я 3 — 7. прес!а! Ег!о!рптепЕ Аисота6с тясгор)репог !20 РИ ТЬе ппсгор!Репог яЬоп!д Ъе евгдрред яч!гЬ Ваг сарзПагу р!Репе дря !е.в., Ми!6-Р!ех г)р, КеясагсЬ Ргодпсгя )пгегпаг)опа!) ог огЬег !оайпв меч)се !р!саяе ясс гЬс раас! оп ЕОАОВЧС 5Е(~Г)ЕНС!)ЧС СЕЕ5 Ео!!очдпв 5гер 8). 12.85 72.86 СЬаргег 12: Р)|)А 5едиелсте ВиПбо8 Ьглбег сйрз !5-ст )ел8й) Пче !о зечел рег 8е1) Се) гетрегагиге-глол|уоллд ззггрз ТЬезе згпрз аге гЬеггпосЬгопис !ир||б с|уз!а! 1Т1Х) шгПса|оь гЬаг сЬапее со1ог аз |Ье сегпрегагиге о! |Ье ее! пзез биппе е!есггорЬогез|я Тешрегагиге-пюп!гоппе згпрз аге зо16 Ъу зечега! сопппегс!а! со|прап!ез, !пс!иб!пе В!оЪНЫгга)сег.
П из!пе ап е!есггорЬогеяз аррага|м |Ьа| Ьаз а Ъш1г-|п гЬепиа! зепюг, |Ье 8е! гешрегагиге-пюп!гоппц япрз аге пог пеебеб, Раз)еиг р!ре!!е Р!азбс-сочегеб те!а) р)а!е Ор|юпа1, р1еазе зее 5|ар 2. Ро|чег рас)г сараЫе о! Йе)!чег!л8 > 75 И) а1 сола)ал! ро|чег Мое| ро|чег рас!сз сап Ье зе| го бе!!чег сопяапг чо!гаее, со|ыап| ро|чег, ог сопяапг сшгеп|, ш||Ь аи|огпабс сгозючег.
А рогчег рас)с е|!шрреб чбй пш!6р1е зеь о! оиг1ег зос!сеь апб сараЫе о! бе!!чеппе -300 Чг ог сопз|ап| ро|чег а| ир |о 7000 Н сап еая1у Ьапб!е пчо ог йгее зег)иепс!пе Ве1| япшпапеои|1!. 5са)ре) !!7!ег) ьтй йзрозаЫе Ыаде ТЬе зса1ре! |з |ьеб го гепюче йе саре !гош гЬе зег)иепс!па ае! |по16 апб зоп|египез го зсгаре геябиа! ро1уасгу1агп|бе !гоги йе |ча1!з о! гЬе !оаб!пе |че!!.
5ег)иелс!л8 8е) )ал)гз Малу суре| оу е!есггорЬогеяз аррагагизез аге сопипегсиб!у ачабаЫе. А11 ГоПо|ч йе зап|е еепега! без!еп, Ьш |Ье апащешепс о! гЬе е!азз р!агез апб зрасегз б!|Тегз з!!еЬг!у угош гпапи!асгигег со гпапи!асгигег. Мозг сопипегс!а! бечкез |чог!с ие!! апб йе сЬо|се о! шапиГасгигегз !з !агае!у а регзопа! опе, Ноччечег, |че гесопипепб гЬе ригсЬазе оу бечкез |ч!|Ь Ьшп-|п иге|а! р!а|ее. ТЬезе р!а|ез, |чЬьсЬ аге ия|- а!1у а!шпшшп, гпз|пЬиге Ьеа| апз!пе угош е!ее!пса! геязгапсе ечеп!у асгоя йе зигГасе о!гЬе ее1, |ЬегеЬу ргечепг!пе "зпи!!пе" агг!!асгз аг йе ебеез о! |Ье ее!.
5Ьаг)гз гоой сотЬ !0.4-тгл 7Ыс)г, ъч)й 32, 64, ог 96 !ее)Ь, дерелд!л8 ол йе сарае|)у о|'7Ье 8е) аррага)из) !| ь еьепба! |о гье |Ье загпе зЬаг$с'з |оо|Ь согпЬ гЬаг |чае меб стиг!пе гЬе сазг!пе о! |Ье ее!. 5упл8е !70 ге) ало) 22-8аи8е Ьурог)егт)с леег))ез И)а!ег Ьай зе! ас 85'С ог Ьеас)л8 Ыос)г зес а! 700'С ТЬе |чагег Ъа|Ь |з ге|!и!геб оп1у !у |Ье зег!иепс!пе геасбопз |неге сагг!еб оиг ш гпкгошег бьЬез, ТЬе Ьеаг!пе Ыос)г Ь гег!и!геб К |Ье геас|юпз |неге сагпеб ош ш ш!сгоГи8е шЪез. МЕТНО0 4 И/АКЫ!ЫС Ьагие чо!!апез аге раззеб йгои8Ь РЫА-зег!иепс!пи ие!з а! зиЬзгапба! атрегаиез.
Моге йап епоииЬ сиггепс 'ь изеб !и йезе ие!з го саизе зечеге Ьигпз, непгг!си!аг ПЬлПабоп, сепгга! гезр!гагогу аггея, апб азрЬух!а бие го рага!уяз о! йе гезр!гагогу гпизс!ез. Ма1е зиге йа! йе це! Ьохез изеб 1ог е!есСгорЬогез!з аге чче!1 Ыя|!а!ес1, йа! а!! Ьи))ег сЬатЬегз аге сочегеб, апс! йа! йе Ьох 'ь изес! оп а згаЫе ЬепсЬ гор 7Ла! ь бгу. А!|науа гигп о77 гЬе ро|чег 7о 7Ье Ьох Ье)оге загпр1е !оаб!па ог б!згпапг!!пи гЬе ие!. 1. 1)зе батр рарег !очче1з ог а ччес зропие со ш)ре а|чау апу бпеб ро1уасгу1агп1бе)игеа !гоги йе ои!ябе ог йе ие! гпо1б.
Р|рессе зенега1 гп1 ог 1х ТВЕ Ьи!Тег а!опи йе !ор ог" йе япаПег ог поссЬеб д!азз р1асе апб з1ои!у гегпоче йе согпЬ |гол це1. Си! йе е1ессг!са! саре чч!!Ь а зса!ре1 апб з1пр П !гоги !Ье Ьопогп ог' !Ье Ее! |по!б. Ро лоз геточе йе гаре угот йе згбез оу йе ее!! 2. А!!асЬ !Ье Пе! пю16 !о йе е1ес!горЬогез!з аррага!из чч1!Ь ЬиПбоц Ь1пбег сПрз, р1аз!!с-соаь еб 1аЬогасогу с1атрз, ог, 1п 1Ье сазе ог" е1ес!горЬогеПс бен1сез ъч1!Ь ЬЫ1ью зсгечч е)агпрз, ассогб1пи !о гпапигас!игег'з 1пз1гис!!опз. ТЬе япаПег ог по!сЬеб р1аСе зЬои16 Ъе |п еПгес! Ргогосо! 11: Еоаг((пе апс( Аппп!п8 РЫЛ-ьег(иепст8 Се!з 12.87 сопсасс ън(сЬ йе е1ессгорЬогеяа с!еч(се.
ТЬе 1аг8ег, пппоссЬес1 р1асе аЬоп!д Гасе сЬе 1пчеас1- Васог. 11 сЬе 8елсе сСоеь пос сопса!п а спеса! р1асе со йъспЬше Ьеас рго8псеъС 8ш!п8 е!ессгорЬогеяя с!агпр а гпеса! р1асе со сЬе 8е1, А р!асс!с-сонегед а!юшпшп р!асе, спс со сЬе каное ясе аъ сЬе пппоссЬе8 51ая р!асе ъногСъа ънеП апъ1 ъне18Ьь чегу 1ссНе. 3. И1 сЬе пррег апс! !оънег геьегчо(га оГ сЬе аррагаспа ън(сЬ йе арргорпасе ЬпЕЕег. ъ ОК 5ТАМОАКО ОК ЕОКМАМ!ОЕ-СОМТА!М!!ЧС СЕЕ5 а. И! йе пррег апс1 !оънег ЬиЕЕег геьегноиь ън)сЬ 1х ТВЕ. Ма)се апге сЬас йе 1ече! оЕ сЬе ЬпЕЕег ш йе 1оънег сЬатЪег В ънеП аЬоче сЬе Ьопот оГ сЬе р1асея ТЬе 1ече! оГ йе ЬпЕЕег сп йе пррег сЬатЬег аЬоп!6 Ье ъчеП аЬоче сЬе !ече! оГ сЬе пррег ес(8е оГ йе аЬогсег ог поссЬес( р1асе апс1 Ъе ш йгесс сои!асс ъниЬ сЬе Ве!. Ь.
(1ае а 10-т1 аупп8е НПед ънсй 1х ТВЕ со ппае йе сор оЕйе Ве1. Ма1се сшге йас ехсеаа ро1уасгу!апсЫе апс( пгеа аге геточеН Егогп сЬе Ве1. 1Г песеааагу, пае а аупп8е пеес!!е со асгаре ой' апу ро!уасгу!атЫе аскЫпц со йе ц!ааа р1асея Кеточе а)г ЪпЬЫеа ппс!ег йе Ьоиот оГ йе 81ааа р)асеа ш сЬе!оънег геаегчо(г пяп8 а Раасепг рсреие. с. АпасЬ йе е1ессгос(еа со сЬе е1ессгорЬогеа!а аррагасиа апс1 сЬе роънег апрр1у. ТЬе сасЬос1е (Ыас)с!еас!) аЬоп16 Ье ассасЬес( со йе пррег геаегчо(г апс! апис!е (гес) 1еас!) со йе Ъоссот. АиасЬ йе Ъш1с-сп сЬеггпа! аепаог (1Е ачаПаЫе) ог сегпрегаспге-пюпПопп8 япр. Кпп сЬе Ве! ас сопасапс ънаСса8е (50 — 70 нъс) Гог -45 тшпсеа ог ппГП йе сеисрегаспге оЕ йе Ве1 геасЬез 45 — 50'С.
Тпгп ой' СЬе роъчег аирр1у апс! с(1асоппесг йе е1есСгодея ъ ОК ЕЕЕСТКО$ЛТЕ СКАО!ЕМТ СЕЕ5 а. И1 сЬе пррег геаегчо(г ън(СЬ 0.5х ТВЕ, апс( йе!оънег геаегчо(г ън(сЬ а ао!псюп сопяасш8 оЕ 2 чо1птеа оЕ 1х ТВЕ р1па 1 чо!шпе оГ 3 м аогПшп асесасе (р1еаае аее Ргососо1 10). Ь. ъъсааЬ сЬе ънеП ънПЬ 0.5х ТВЕ апс( гегпоче пгеа/ро1уасгу1атЫе аа НеаспЬед аЬоне.
Есо пос рге-гпп е!ессго1усе цгагПепс Ве!я 4. 1пспЬаСе СЬе т(сгоЕп8е СпЬеа сопСа(п(пц СЬе аес)пепсшц геасг(опа Еог 2 т(ппгеа си а Ьеаг(п8 аррагаспа пес ас 100'С. 1Е сЬе геас6опа Ьаче Ъееп сагпед опс 1и а ппсго6сег р1асе, гесиоче сЬе сочег Носи йе р1асе апс1 Ноас йе ореп р1асе 1и а ъчасег ЪасЬ Еог 5 т(ппсеа ас 85'С. 5. с'ъЧп1е йе спЪеа ог р!асез аге икпЪайп8, 66 а 10-сс аупп8е Есссес( ън(сЬ а 22-Вап8е Ьурос(ег- ппс пеесПе ънПЬ 0.5х ог 1х ТВЕ, аа арргорпасе. 5с!шгс йе ТВЕ ЕогссЫу асгоаа йе апЬтег8ес1 1оагПп8 сшгЕасе оГ йе Ве! со гепюче апу геспасп(п8 пгеа апс( Гга8тепса оЕ ро!уасгу1атЫе Егот йе 1оасПп8 агеа. СопНпце ас)ц(гс(п8 ппГП по пюге пгеа сап Ье аееп 1и СЬе!оагПп8 агеа.
Ссгеа кпсс)с!у ййоъеа !гого йе 8е! апсС ън11! геспасп аа а спьЬюп ас йе Ьопопс оу сЬе ъне1! ог ъ!ос. ТЬе пгеа сыЬюп, Ьесп5 оГ 648Ьег сСепясу сЬап сЬе аесСпепссп8 геаспопя ънс1! сСсар!асе сЬе геассюпь Ггосп сЬе Ьаае оу йе ъне!!. 11сар!асеспепс геъп!ь ю ап ппечеп пп8гасюп оу сЬе РгъА Ега8спепса спсо сЬе 8е1 ап8 йъсопсоп сп йе ъесгпепсе!аъЫег.
6. Сепс1у шаегс йе аЬаг)с'а соой сотЪ (сеей с1оънпънагс() шсо сЬе 1оа61п8 а!ос. РпаЬ йе согпЬ доъчп пп61 йе рошса оГ йе сеей )пас репе!гасе йе апгЕасе оЕ сЬе Ве1. 7. ТгапаЕег йе т(сгобс8е СпЪеа ог ппсгойег р1аСе Ггогп СЬе ънагег ЬаСЬ ог ЬеаНп8 Ыос1с Со ке. Кеер сЬе аатр!еа ас 0"С пп61 сЬеу аге 1оас(ес! опсо йе Ве1. ( сшс)с-сооПп8 со 1оън сеспрегасше гесагсЬ гепаспгаНоп оЕ сЬе сегпр1асе апс( гасПо1аЪе1е6 асгапс!я Ргогосо| 1|: Е,оаг||пВ апг) йипп|пВ РНА-гег)иепс|пч Се!3 12.В9 ТАЗ| Е 42-21 М|дгайоп Ка|еа оЕ Маг!сег Руеь СЬгоиВЬ Репа!ос!иВ Ро|уасгу|аш|Ве Се!е Хусеяе Суапос РЕ' РОсуАскусАм|Ое Сес Ваоморнемос Всие |и е!еогго|уго Пгайеиг 8о|х, ЪгоиюрЬеио| Ъ|ие т|8гагех ргоагеябчо|у тоге о|ого!у ах и ггоче|х аиобгсаПу ГЬгоиЕЬ йе Пе|.
М|8гобои оыоибоПу сеоооо ъчЬеи |Ье Пуе иеагх |Ье Ъоиоги оГ |Ьо Пе| ТЬо ху|еие суаио| ггосг щ8 Пуе ЪоЬочох т о яии|ог Гойюи. Тур|ооПу, о|ос|горбогеях и соибииод ииб| йе ху|еие суаио| Пуо Ь ио|Ьт 5 — |0 ст о| йе Ьопоиг оГ йо Пе! аид ГЬе ЬгоиюрЬеио| ЪПио Пуе Ь ог йе Ьоиот, 'ТЬе итиЬогх аге йо орргохииаге ягоо о| РВА Пи иис|еобдох) ча|Ь ыЬ~сЬ ГЬо !об|со!од гиайог Пуе ъчП! сот|8гаге |и а огоиПога ГУЪ|А ыоиеис|и8 Пе!. 9. ТЬГЬеп а11 оЕ СЬе аашр1ек Ьаче Ьееп !оас|ес|, соппесг |Ье е1есСгос)еь Со |Ье роъчег рас1с апс! СЬе е1ессгорЬогеа(8 аррагасиа| сасЬос!е (Ыас1с) со сЬе иррег геаегно(г апс1 апог!е (Тес!) |о |Ье Ьо|- |ош геаегно!г. Кип ЕЬе Ве! а! ЕиЕВс(епс сопасапс роъчег со ша)псаш а сегпрегасиге оЕ 45-50'С.
Се1 5(хе (сш) Роя ег (ТЧ) 'чо!Га8е ( ч') -|700 -2-3000 20 х 40 40 х 40 40 х 40 (е!ессго1усе Вгайеис Пе1) 75 -2|00 ТЬе гиие гецшгег) со асЬПече орбша| гехо1шюи оЕ |Ье хегргеисе оЕ гисегехг пшх| Ье г)есегпииег( егир|гссаПу, Моппог йе рго8гем оЕ йе е!ес|горЬогебс гии Ьу ЕоПоъли8 йе пг|8габои оЕ йе гиаг1сег г)уех ш |Ье |оппашЬ4е Пе1-|оайи8 ЬиЕЕег (р1еахе хее ТаЫе ! 2-2 ! ). 35-40 55-75 1О. Ререпйпд оп |Ье йасапсе Ьесъчееп ЕЬе вег)иепсе оЕ шсегеас апс1 сЬе 011Вопис1еос|с)е ргипег, арр1у а весопь! 1оайпВ оЕ ЕЬе вес)иепсшВ зашр1ев со а зсапг)агг! ог Еогшаш|г)е-сопсашшп г)епасиг(пВ ро1уасгу1аш|г)е Ве1 -15 ш|писеа аЕСег СЬе ЬгопъорЬепо! Ыие |и СЬе 6гаг ееС оЕ аашр1еь Ьаа ш|Вгасег) |о ЪЬе Ьоиогп оЕ |Ье пе! (1.5-2.0 Ьоига). ТЬе аег)иепсе оЬса|пес) Егош |Ье Вга| !пайпс ъч(11 Ье пюге йьса1 со сЬе рг(гпег, ъчЬегеаа |Ьас ОЬсашеь! Егош |Ье аесопг) !оайпВ яг!11 Ье пюге ргохппа1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
