Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 150
Текст из файла (страница 150)
ъът(сЬ сЬеппоасаЫе епхушеа, йе яцпа) ь!шеаг!у ашр66ес), апй Ьепсе оп!у 0.1 )тц ог 1ея оЕ сетпр!асе Ь пеейей. ТЬЬ Ееасиге В еарестацу ипрогсапс ъчЬеп а гоЬойс орегайоп В ыей со ргераге Ьипйгейа оЕ сешр!асеа ш япацег срлап66еа. ТЬе асапйагй асс)иепсшц Ыс гер!асеа йСТР ъчПЬ йеага-йбТР со гейисе це1 сотпргеаяоп (аее аЬоче). Рог ип1споъчп геааопа, сЬе ые оЕ йе йеаха сошроипт) аотпейитеа гели!са тп реа)с Ьгоас1епшц, ъчЫсЬ гегЬлсеа сЬе геат(аЫе !епцй оЕ аесрлепстпц стась. )ъ)ечегсЬе!ела, сЬе ачегаце геай-!епцсЬ ълй йуе-рпшег аес)иенс)пц Ьаа поъч геасЬей 650 — 700 Ьр ас >999о ассигасу ш 11-12-Ьоы типа (2400 ът чйсЬ 48-сит а1аЬ це1) оп йе АВ! 377 цесрлепсег (С. СЬеп ес а1.
1996). Ресат!ей ехрегипепса! Ргососо!а аге ргочЫей ъчтй сопчешепс птапиЕассигег'а Ыь йас сопсаш ац оЕ сЬе геацепса песеяагу Еог йуе-ргнпег аес)иепс)пц геасстопа. Оуе-Тегт(ла(ог оухЕетз А1сЬоицЬ сЬе с1уе-рптпег шейой ь ашсаЫе Еог ает)иенс)пц рго) есса сЬас ые ишчегаа! ргнпегя рго)есса сЬас гет)и)ге спасали-йеяцпей рпитега Ьесоше сшпЪегаоите апй ехрепяче Ъесаые еасЬ рптпег шыс Ье шой)- Вет) ш Еоиг аерагасе т1уе-!аЬе1шц геасйопа. Опе ъчау агоипт) сЫа ргоЫеш ь со ассасЬ йе Пиогеасепс т)уеа со т1Ыеохупис!еосЫеа сЬас Ьесопле шсогрогасес1 ас сЬе 3' епй оЕ сЬе ргос!нсь оЕ аетрлепстпц геасйоы (1..
1.ее ес а!. 1992; КоаепЫипт ес а!. 1997). ЕасЬ оЕ сЬе Еоот ййМТРа ь 1аЬе! ет1 ъчтй а й(ЕЕегепс с)уе 1ш)сей со йе шсгоцепоиа Ьаае ла а Пи)сег. Роиг сЬаш-ехсепяоп геассюпа сап сЬеп Ье сагпес! оис ълй сЬе аатпе ргнпег тп а япц!е сиЬе, араппц сопяйегаЫе 1аЬог апй соаС. Ву соптгаас со йуе-ргппега, т)уе-сегинпасог сЬетпьсгу Ьаа сЬе ас1сцйопа! асЬ'апсаце сЬас П е1иптпасеа поье апяпц (тоти ргешасиге сЬаш сегпнпасюп чййош аиепйапс шсогрогайоп оЕ йЫеохупис!еосЫеа. 1и Па еаг1тег РЬаае оЕ т1ече!ортпепс, с1уе-сегпнпасог сЬетпЬсгу Ьат) пта)ог ргоЫетпа геги1сшц Егош йе ассасЬшепс оЕ Ъицсу йуе пютейеа со сЬе йЫеоху сепшпасог ию!еси!еа. Весаые аиЬасгасе а(6пбу ъчаа а1сегей, и Ьесаспе песеяагу со сат!ог а арестбс аес оЕ с)уе-!аЬе!ей сегинпасога Еог иае ълсЬ еасЬ Р)ъ)А ро!уптегаае (1.. 1.ее ес а).
1992). !.1пЕогсипасе!у, йе тпсепясу оЕ сЬе яцпа)а цепегасей Ьу сЬеае ро1уитегааеешЪ- асгасе ра(та ъчаа Егысгайпц1у ипечеп, ъчЬтсЬ гес1исет) сЬе ассигасу оЕ Ьаае саП)пц апй!ишсес) йе танце оЕ геас1аЫе аесрлепсе (р!еаае аее Р(циге 12-11А). Риппц йе!асе 1990а, сЬта ргоЫетп ъчаа!агце1у ао1чес! Ьу йе ые оЕ пюг66ес! епхутпеа (р1еаае аее Р(ците 12-11В апт1 сцасыяоп Ье!оъч) аа ъчец аа Ьу сЬе шсгойисйоп оЕ орсипгает1 аеь оЕ пеъч йуеа апй!тп1сег аппа (Р)циге 12-11С,Р).
ТЬеае ипргочетпепь ргочЫес) с!еагег реа1с раиегпа, пйшгпа! тпоЪт!тсу аЬтбя апс) с!еапег яцпаПс Аа а сопаеъ)пенсе, йе срла1иу оЕ сЬе йаса Егоит сиггепс йуе-сегпнпасог аеъ)иепсшц Ьесатпе соптрагаЫе со геялЬь оЬсашей ытпц йуе-рпшега (КоаепЫиш ес а!. 1997; Нешег ет а1. 1998). Ас ргеаепс, съчо ась оЕ аесопй-цепегайоп т1уе сегпнпасога аге ачацаЫе. Опе шсогрогасеа сцсЫогогЬос1атшпе йуеа (йКЬойапнпе Тегинпасог, РЕ Вюауасепь); сЬе осЬег шсогрогасеа сЬе В)цРуеа (В(цРуе Тегпнпасог, РЕ Вюауасетпа). ТЬе ВтцРуеа аге ыес1 ш т1уе-рптпег аеъ)иепсшц (аее аЪоче).
ТЬеу сопсаш а Пиогеасеш ьошег аа сЬе с)опог с)уе апй Еоиг гцсЫогогЬойаиипе йуеа аа йе ассерсога. ВосЬ сегш)пасоса ъчог1с ъчеП чпсЬ АтпрПТат) ро!уптегаае Р5 (р!еаае аее Р)циге 12-11, Ьоноит рапеь). Сопчешеш сус1еает!иепсшц сопсцйоы аге поппацу ыет1, апй йе аесрлепс(пц геассюпа сап Ье сагпей оис ъчПЬ апу ртнпег апй ълсЬ а ъчЫе чапе!у оЕ сетпр!асеа (япц!е-асгапйес) Р)ъ)А, йоиЫе-а!таис)ет) РъчА, ог РСК-цепегасет) 12.98 Сйартет 12: Е7ИА Бет)иеис(иц Бет)иепс(пд Епхуитек Ха|ига!1у оссигппц ро1утегаьеь Ьаче Ееа|игеыЬа| аге ойеп по| ор|ипа! Еог ОХА ьеъ)иепсшц. ТЬе ге1ечапс апд деятаЫе ргорег6еь оЕ кет)иепсшц ро1уп|егакеь Ыс1иде (ТаЬог апд РдсЬагдьоп 1987а, 1989а,Ь, 1995)| ° Н18)л ртосекьиа|у.
Ртосеыпд|у В |Ье децгее |о ъчЫсЬ сЬаш ех|епяоп соп6пиек ЬеЕоге |Ье епхутпе д)ьюс!а|ек 1гои| а ргипег-сетпр1асе аппеа1шц сотпр1ех. Т7 цеъ)иепаке В |Ье и|ох| ргосеы|че оЕ йе сиггеп| сага!оц оЕ кециеве)пц епхуи|еь, ъчЬегеаыЬе К)епоьч Егацтепг В |Ье !еак|. ° Т)летшоктаЬИ)ту. Кеяыапсе |о шас6ча6оп ог д(ььос(атюп а| Ь|цЬ тетпрега|итеь В а июк| ипрог|ап| Еас|ог ш |Ье сус1е-кеъ)иепсшц геас|юпыЬа| аге |Ье Ьаяк Еог то|1егп ЫЕЬ-тЬгоицЬри| ье|Р|епс|пц. Тат( ро1уи|егаье ог ъапап|к аге |Ье оп!у ЕеаяЫе ор|юпь.
° Епсотротайоп оЕ пас1ео|Ые аиа!оць ьас)т ак дуе тетттатоть. ТЬе аЬ|рйу |о шсогрога|е апа!оць й а сп|- (са1 Еассог Еог йе д)деоху сЬаш-|егпппа6оп п|ейод. ТЬе е(йс|епсу оЕ сЬа|п |егпипайоп ълй еасЬ оЕ |Ье дуе-1аЬе1е|1 |еппша|огь тик! Ье яии1аг |о ачоЫ !оъч-ъ)иа1(ту дата ъч||Ь ипечеп реа)сь (ьее Р(циге 12- 11). Ептутеь кисЬ аь Ап|р!|Та|! Р5 ъл|Ь а ЫцЬ аЕЕ|в(ту Еог |Ье(г дуе |егпипа|огь Ьаче ап а|1чап|аце Ьесаые а птсЬ 1оъчет сопсепсга|юп оЕ |Ье дуе сепв|па|огь сап Ье иьед, ъл|Ь ьач(пцк ш Ьо|Ь соы апд еЕЕогт отйегъч(ке пее|1е|1 |о тетпоче |Ье ипшсогрога|ед дусь. ° Ехонис1еаке асйлйеь. Ро!уп|егаьеь ойеп Ьаче 3'-ехопис1еаье "ргооЕтеад(пц" апд(ог 5'-ехопис1еаье асблбеь йа| тетпоче КХА рптеть айег ОХА герйса|юп.
Весаые пейЬег асбчиу (к деягаЫе Еог ье|)иепс|пц, чапаи|к оЕ йе ро!утегаьеь ьЬои1д Ье ыед |Ьа| 1ас1| |Ьеье ас6чй|еь (е.ц., ТЬеппа1 5еъ)иепаье [Атпегьйатп) апд Атр!(Таь) ро1утегаье Р5 (РЕ В!оьуьтетк) ). Рог плоте шЕоппабоп ов тод)Елед йегиюк|аЫе ОХА ро!утегаьеь. Р1еаье кее ТаЫе 12-9 |п Рго|осо! 5. БетЕиеасЕпд Тетттрlа(ех ()пав! гесепйу, |Ье рита|у дата ш 1агце-кса1е кеъ)иепсшц орега6опь Ьаче Ьееп стад(тюпа! !у со11ес|ед иыпц дуе-рптпег ье|!иепсшц; дуе-|ептпа|ог ьесрлепсшц Ьак Ьееп те|1 оп!у |о 611 царь ог |о |1еа1 ъч(|Ь ггоиЫекоте гецдопь (Еой СЬеп е| а!. 1996).
Ноъчечег, оЬташшц "йп(кЬед" дата оЕ йе ЬлцЬеы циа!йу гет)и(геыЬа| а11 ье|)иепсеь Ье ас|!шгед ейЬег ш Ьо|Ь опеп|а|юпь ог ияпц Ьо|Ь сйет!к|пел. Сотпрапьоп оЕ йе геял!6 оЬ|ашед ышц Ьо|Ь сЬетпй|пеь ргочЫеь а сЬес)с оЕ лес)иепсе с)иа!!ту, Ьесаике |Ье рассегп о( еггогь Еог еасЬ сйет(Ыгу 6 ыиа1!у д(ЕЕегепт (СЬ~ьюе е| а1.
1997). ъъ|1|Ь гесеп| ииргочеи|еп|ь, Ьоъчечет, йе 1ея 1аЪопом |1уе-|егиипа|ог тпейод !к цга|Ьла1!у гер(асшц дуе-рптегк ш п|ок| 1агце-ьса!е кеъ)иепсшц рго)ее|я цес(иепсшц ъч(тЬ тъчо ье|ь оЕ дуе |еппша|огк, дВЬодапипе апд В(цОуе, соиЫ Ьесои|е а пеъч к|апдагд Еог |Ье асЫече|пеп| оЕ йе с(еягед "доиЫе сочегаце." В(цОуе сегпипа|ог ье|!иепсшц геасйоиь ъчог1| |чей чд|Ь а ъчЫе чат|егу оЕ се|пр!а|ел, (пс!ид(вц япц1еыгапде|1, доиЫе-ыгаи|1ед, апд РСВ-цепега|е|1 ОХАь, аь ъче11 аь ъчйЬ Ьас|епа! агт!Ес(а1 сЬгопюьоп|е (ВАС) с!опек ог цепопис ОХА Егацтептк аь !агце аь 5 МЬ (С. СЬеп ег а1. 1996; Нешег е| а1.
1998). ТЬе ор|ипа( ье|рлепсшц спид(бовь Еог чапоы геп|р!а|ее аге ц|чеп ш ТаЫе 12-22. А1|ЬоицЬ тЬе ш|епяту оЕяцпа1к сеида |о Ье 1оъчег ъл|Ь !агцег гетр!а|ее, Ьаье-са11шц |)иа!йу ге|паша ЬзцЫ Ьесаые йе Ьаье!ше по(ке В ьЬагр!у гедисед Ъу |Ье шсгеаьед Ьпцйтпекк апд ивргочед ьрес|га1 гею!и6оп о1 йе Вуек (КокепЫит е| а1. 1997). То соп|репьа|е Еог |Ье 1оъчег тпо1ап|у оЕ !агцег |етр1а|еь ш кес(иепс(пц геасбопь, шсгеаьед ргипег сопсепсгабопь (2-5х) и|ау Ье пьес!, апд йе геасйоп сап Ье и|аш|ашед Еог ап шсгеакед пшпЬег оЕ сус1еь. ТЬеке а1|егайопь епЬапсе яцпа! |п|епыбеь апд ргодисе плоте асс|пате, 1опцег геад-!епц|Ьь. Ору(тЕх(пд ЕЕте йеасЕЕоп цечета! о|Ьег Еассогь геташ ипроггап| Еог асЬ|еч|пц ор|ипа! гею!|ь ъчйЬ авто|васе|1 ье|рлепсшц.
° А1|Ьоицй тЬВ (ь а "1оъч-|есЬ" сопя|1ега6оп, й В спбса( |о ые |еп|р!а|е ОХА с1еап апд Егее оЕ апу соп|апипапп |Ьас ппцЫ |п|егЕеге ълй| рпп|ег аппеа!(пц. Рог РСй ргодисв ш раг|йи!аг, соп|аиипабпц о1)цопис1еотЫеь апд дХТРк сап Ье сопчеп|епс!у д(цеьтед Ьу Ехо115АР |геа|п|еп| (Нап1|е апд 'ъА|ш(с 1994; ъътег)е е| а1. 1994; С.
СЬев е| а1. 1996). ° Рот!оад(пц оп сар(цасу-Ьаьед аи|оп|а|ед ОХА ьециепсегк, катпр!еь тиы Ье Егее оЕ юпк аь |Леу |п|егЕе|е ъч|й |Ье е!ессгоЫпебс ш)есбоп ргосекь. Та)се крее(а! саге |о е!|иипа|е ехсеы |1уе-|еппша|огь Ье(оге )оад)пц ьап|р!еь оп це!ь ш Ьо|Ь сопчеп|юпа! апд ашои|а|ед ьес)иепсегь. ТЬ~ь В раг6си!аг!у ппрог|ап| ъчЬеп тетр1тае ОХАЯ ате 1этце, япсе теядиа) дусь сап та)се оЬьсите 1оъч-ттепя|у яцпаЬ (Нетет ет а1. 1998). 1гуогтат!оп Рапе!в 12.99 ТАВЛЕ 12-22 В18Руе-Тегш!па!от 5еВиепс!пд Сопс66опв Еог ъ/аг!оив Турев оЕ Тепър!атев М1сгоЬЫ! Ртъ/А ир со 5 МЬ М13/ РСК Ргойиссв Р1аяпЫ 2 — 9 1тЪ <10 !тЬ Тептр1асе сурев Турка1 яхев ВАС 200 )тЬ Кеас6оп пйх Тегпр1аСе РС4А (арргохипаСе!у) Вт8Руе Теппшасог М!х Рптпег 2-3 08 16 01 12 ршо1ев 40 и1 500 п8 16 и! 6 ршо1ев 40 01 30 п8 3 и1 3 рпю1ев 10 Ст! 400 п8 4 и) 3 рпю!ев 10 01 Тоса! чо1шпе Сус1!п8 сопг66опа 1пша! йепасшастоп Реп асига6оп Аппеа!ш8 Ехсепяоп Съ/ишЬег оЕ сус1ев 96 СП пиписе 96 СПО весопйв 52'С/10 весопйв 60'С/4 пипшев 25 95'С/5 ппписев 95 С/5 гшпшев 95'С/30 весоптЬ 95 С/30 весопсЬ 55'С/20 весопйв 55 С/20 весопйв 60624 пипитев 60 С/4 пипшев 96'С/1 пипите 96'С/10 весопйв 52'СПО весоптЬ 60'С/4 тп!посев 25-50 30-75 45-99 Кеас6оп с(еэп-Рр ЕсЬапо! ог Ьоргорапо1 ргес!РЬасюп С-50 5рип со1шпп уем уев уев уев по по уев уев Еоайсп8 оп 377 5еъртепсш8 Се1 Кевырепяоп чо! шпе Лоай!п8 чо1шпе Кеай-1еп8й (Ьавев) 2 н! 1 — 2 и! 550-750 2 р! 2 и! 500-600 3+ 01 1 01 7504 3+ Н) 1Ф 7504 Сопиеву ос ЕХ СЬеп.
° Ав ш!8Ьс Ье ехрессей, сЬе йея8п оЕ йе рпгпег ь спйса1. 1п Еепега1, сЬе ваше ги1ев аге овей со т1ея8п рптпегв Еог аисошасей вет!иепсегв апс1 Еог вет)иепс!п8 Ьу Ьапс1. 1и Ьпес, виссеввЕи! ргппегв сопявс оЕ а ип!т)ие вес!иепсе оЕ 16 — 25 пис!еосЫев (тЬе 1аг8ег йе сетпр1асе Р)ъ)Ав, йе 1оп8ег йе о1т8опис1еосЫев), чйй ап арргорпасе СС сопсеш апт1 а 1оъч ргет(ьроаиоп со Ео1й !псо весопс(агу всгиссиге (Вис1с ес а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
