Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 146
Текст из файла (страница 146)
ТАВЕЕ 12-19 АсгусатЫе 5осиВопа Еог Оепагигсп8 Се18 8~~«о Сес 10««Сес 4«г' Сее 6;б Ся Асгу1апгЫс:ЬЬ ю1ипоп !459«! 10х ТВЕ ЬиЕЕег Н,О Слгеа 8.9 т! 10 гпс 45.8 т! 42 8 13.3 т1 1О гп! 41.4 тс 428 !7.8 т! 10 гп1 36.9 тс 42 8 22.2 т! 10 т1 32.5 т! 428 Ргососо( ЕЬ Ргерагаттоп оу Реттатигтпц Ро!уасгу!атЫе бе!т 12.79 15.
А|Ы 50 ф оЕ ТЕМЕ(л со |Ье це1 ю1исюп апс1 азч|г! сЬе ао1ис!оп цепт1у Со пих йе геацепся Роиг йе це1 во1исюп шсо |Ье шо16 сПгесс|у Егош йе Ьеа1|ег !и ъчЬ!сЬ К Ьаа Ьееп ргерагес1 (аа аЬозчп !и Р!циге 12-9). А1сегпа6че1у, с(гаьч -40 тп1 оЕ йе ао1иПоп !псо а 60-сс Ьурос!епп!с тупице. Оо пос як1с а!г ЪиЬЫеа |псо |Ье тупице! Сошрагед из|тЬ ро|уасту|атпЫе Пе!т отед то гето|че рготе|пя а шаы|че ашоипт оЕ ТВМЕГз Ь ые6 то сасс теПиепс|пц Пе!а. ТЬе !агце агпоипт оЕ ТЕМПО ептигет |Ьат ро|упкт|аасюп зчц! оссит тарЫ|у ап6 ип|Еопп|у тЬ|оифюит |Ье |агце ыгЕасе агеа оЕ |Ье Пе!. Весаите сЬе гасе оЕ ро|ушепта6оп |с тешретатиге-берепбепс, сооцпц |Ье це1 то!ит!оп аПо|ча пюге 6ше Еог сас6пц йе Пе!.
Вхрепепсеб Пе! роигегь сап ойеп сатс тито ог |поте 40 х 40-стп Пе!т Гтотп а япц|е Пе! то!из|оп Ьу |исПсюит ргесоо|шц. Ъчот|с ав Пи|с|с|у ат роя|Ые Егош Ьеге оп|част! Ьесаиье |Ье Пе! ю|и6оп М!! ро|ушепте гарЫ|у. Ро|утпепта|юп сап Ье арргес|аЫу т|оиец Ьу ришпц |Ье Пе! то!из|оп оп ке, а Ьооп Гог |пехрепепсе6 Пе! роигегт! 16. АПои а йш ягеагп оЕце1 ю1шюп со Яоъч Егош йе Ьеа1сег ог тупице !псо сЬе сор согпег о(сЬе це1 тпоЫ ъчЬПе Ь016(пц йе шо16 ас ап -45' апц1е то сЬе Ьопгопса! (Р1еаае аее Р|циге 12-9). ТКО(ЛВЕЕВНООТ!|ъ(Ст А!К В()ВВЕЕ5 То аноЫ ргодис!пц а!г ЬиЬЫеа, йе ю!ицоп гпиас Пои |и а сопс|пиоиа ссгеатп. ° СЧЬеп ияпц а ьуг|пце, цгадиаПу |оъчег йе гпо!д то а Ьогыопта! Рос!т!оп ах |С !а у|Песа, И%еп йе тупице ь пеаг! у епзрзу, геГ|1 |! зн|СЬ це! ю|и6оп апд с)и|с|с!у геьигпе роиппц йе це!.
Та1се саге йа! по а|г ЬиЬЫеь Еогш апс| йас йе ю|исюп ш!цгатеь в|еЫу сои агс! тЬе тор оЕ тЬе це! пюЕЬ ТЫъ шочегпепт сап Ье ЕасППасес! Ьу 6|6пц йе це! аъ Пекг|Ьед апс! ПП|пц йе пзоЫ ат а сопасап! гасе. ° |Е а|г ЬиЬЫеь Гопп ччЬПе роиппц йе це|, 6!т йе пзоЫ ю йат йе |ече! о( йе ассу!аш|6е ю|итюп геасЬев йе |ене! оЕ йе ЬиЬЫе. Ъсгз|Ыис|с, йе а|г ЬиЬЫе чиП Еиае ъий 6|е шепьсиа о( сЬе ассу!аш|де ю!ис!оп. П тЫь с$оеь пот Ьарреп ароптапеоиа!у, сгу сарр!пц йе ц!аъя ВиЬЫеа |и йе иррег рог6оп оГ |Ье це| сап югпес!гпеа Ье гпочес! Ьу сарр|пц |Ье ц!аъъ р!асеь ог Ьу !паетт!пц а |Ып красет (ЬиЬЫе Ьоо|с) апс! ЬегсПпц йе ЬиЬЫес со а рос!!|оп и4зеге йеу ъч|П по! взег|еге ъчгй йе пз|цгат|оп о( йе (||ПА сапзр!еъ, ТЬе |апет ю!ит!оп 'ь рось!Ые оп|у ъчЬеп йе ЕЫ! и4сПЬ о( сЬе це! ь пот со Ье иьед Еог |оасПпц аапзр!ея Стп!еаа йе а|г ЬиЬЫеа сап Ье гпонес| ои| о( йе ъчау, йе ргерага6оп гпиат Ье с|опе очес аца|п.
ТЬе ргеаепсе оЕ ЬиЬЫеь 'ь а яцп йат |Ле це! р!атеа нчего пот с|еапес| ЕЬогоицЫу Ье(оге йе пзо|с| и ах аъаегпЫеб. 1 7. 1.ау йе пзо1с| с(озчп оп |Ье сев!-сиЬе гас1| (аее Р|циге 12-9). ТЫс рот|т|оп|пц гедисет |Ье Ьубгостатк ргеяиге ас тЬе Ьасе оЕ сЬе шо!д апд ргечепи !еа|ст апс| Ьозч|пц оЕ |Ье Пе! р|атея 18. 1пипесПасе1у Епаегт сЬе(!азттт(е оуа аЬаг)с*а соой -05 спз тпсо сЬе це1 ао|иПоп. !пает! Ьо|Ь епсЬ оЕ йе сошЬ капто йе Пи|с( со ап ес!иа1 с(ерсЬ ао йас сЬе Пас аигЕасе Ы 1ече1 ъчЬеп йе це1 ь атапсПпц из а чегска| рояПоп.
|Е апу а|г ЬиЪЫеь аге МяЫе пеаг |Ье со|пЬ, т!озч!у геп|оче |Ье соп|Ь Ггош |Ье Пе!. ЪЧ|ре |Ье асгу |а|пЫе то|итюп Етотп сЬе тшсасе ос |Ье соп|Ь ап6 |Ьеп т!оъч|у гештегт |Ье согпЬ капто йе це!. 19. С1атпр йе ссппЬ |псо роясюп ияпц ЪиП6оц Ъ|пс!ег сПря ТЛе сЬе гетпа!пзпц асгу1ашЫеЬшеа ао1исюп ш йе Ьурос!егш!с ауппце/р|репе со Еопп а Ьеас! оГ асгу1ашЫе асгоаа |Ье сор оЕ сЬе це1. АПои сЬе це1 со ро1утпепхе Еог ас 1еасс ! 5 ппписеа ас гоотп сетпрегатиге. 20. ЪАгааЬ оит йе 60-сс тупице ао СЬат П с(оеа пот Ъесоше с1оцце6 ъч|й ро1ушепхес( асгу1атпЫе.
А ЧЧАК|ъ|с|ЧС А агпац апзоипт оГ ипро!упзепсе6 асгу|апзЫе 'ь ге!еаьед Пиг!пц знаьЫпц. Ънеаг ц|онея 21. АЕсег |5 пиписеа оЕ ро1ушег|хас|оп, ехапппе йе це| Еог йе ргеаепсе оЕ а цсИ!егеп Ппе )ия ипс(егпеатЬ йе Пас ьиг(асе оЕсЬе сошЬ. ТЬЫ |а а яцп йас ро|упзепсаПоп ы оссигппц аась- 12.80 СЬарсег 12: ТЗИА $едиеппп6 Тассоп1у. ъъгЬеп ро1утепхас!оп !к сотр!есе (-1 Ьоиг айег сЬе це1 ъчак роигег(), геточе йе Ьи!1г(оВ с1(рк.
А Сгъ(АК)ъ(1)ъ(С А кгпаН агпоипс о( ипро(утепаег( асгу(атЫе тау Ье ге(еакед, 'ъъеаг 6(очек. 22. ТЬе Ве! сап Ье икег( (ттег((асе!у (р!саке кее Ргососо! 11) ог ксогег1 Тог ир со 24 Ьоигк ас гоот сетрегасиге ог 48 Ьоигк ас 4'С. То ргечепс г)еЬудгас!оп г)ипп6 ксогаВе, )еаче сЬе саре (п р1асе апд киггоипг( (Ье сор оу сЬе Ве! ип(Ь рарег соъче1к г(атрепед ипсЬ 1х ТВЕ. Сочег (Ье рарег Соъче1к ъч)й Вагап ъъггар.
Т)о пос геточе СЬе сотЬ аг йск кгаае. ТИОС)ВЕЕВНООТ1)ь(С: ЕЕАК1(ь(С СЕЕЬ Ееа(ъаце о( СЬе Не) ко!и(юп (гот йе Ьоиогп о( СЬе то(д кеетк Со Ье ап (печНаЫе раг( о( а кег(иепсег'к Н(е. 5ечега( те(Ьобк аге ача)аЫе со ргечепс (еа)где. ° Абг) ап ехсга Ьапг( о( ксгессЬаЫе саре агонии (Ье Ьопогп о( йе 6(акк р(асек, ТЬь гетег)у ь а)ко ики- аНу ейес6че и Ьеп о)с1ег р(асек и!(Ь сЫррес1 согпегк аге икес1 (п йе гпоЕЕ ° беа( йе ебнсь о( сЬе р(асек и !(Ь гпо!сеп 3% (ъчгч) абаоке. ТЫк арргоасЬ )к гпекку апг1 гес(и)гек копъе аг6кбс са1епс.
° )гьегс а р(ак6с красег !псо йе ореп красе ас (Ье Ьопогп о( (Ье то)6, кеа( ик((Ь саре, апг( (Ьеп с(апр (Ье р(асек собебсег ин!Нс ЬиВВоц сНрк. (Мосе; А Ьи66о6 сНр кЬои)6 Ье икед оп сЬе Ьопопь о( (Ье Не( аппо)д оп(у исъеп (Ык Нкпс красег 'ь!и р1асе; ойепчке, йе Не) и61 чагу кННЬ(!у )п (Ыс)гпекк, ъчЫсЬ )п Сигп сап саине е1ес(горЬогебс аЬпоггпа(Шек апг! сгас(г йе 6(акк р)а(ек.) ° 5еа( йе Ьопот о( йе р(асе ик(Ь а кспр о( 6(сег рарег апг( нпргебпасе ъи(Ь сага(уаег( асгу1агпйе (ъъгаЫк апс( К!пкпепе 1 966).
ТЫк )к а гпекку апс( )аЬопоик ргосебиге. )Аге гесогппъепс( СЬа( (очек(16а(огк оке ъчЬ)сЬечег о( СЬеке гпе6юбк СЬеу Нпгу Со Ье гпокС геНаЫе илй (Ье раг6си)аг суре о( Не) то!6 (Ьас 'ь ачаНаЫе. 0о пос Вес 6(ксоигабед 6 йе Нгкс це( (еаЕк. Мокс 6гкс- 1 Л Ь ( — 300.
МСЬ ргасбсе, а пса)оп(у о( Сарес) цд пю!с(к ъч61 по( 61 пос НепегаНу Ье песеккагу со Но со цгеас (еп6(Ьк со кеа! РГО1ОСО! 9 Ргерагабоп о1 ОепаШппц Ро!уасгу!атйе Се!ь Сопела!папу ГоггпагпМе д квг окк1но рковгем 1н ОЬ!А веОокнс1нс 15 тне ркеврнсе оу сомркг551онв 1и !Ье зег)иепсе саизед Ьу зесопдагу з!гисгиге 1и йе Е7!ч!А. А яшр!е апд з!га18Ь!Еогзчагд гпейод го е!ппшаге зесопдагу зггис!иге дипп8 е1ес!горЬогеяз 1з !о шс1иде Еоппаш)де ш !Ье зег!иепс1п8 8е1 !Е7еш!п8ег 1983). Ропиаш)де 8е1з аге раг!1си!аг1у азери! апд а1гпоз! а песезя!у ччЬеп зес)иепсгп8 13Ь)А !ешр!асез ийгЬ а С!С сопгеп! >55ага.
МАТЕК!АЕй СА!)Т!О!з): Р!еазе зее АррепсПх 72 Еог арргорпа!е ЬапдПп8 оЕ та!епа1з тагкед зч11Ь <! >. ТЫз рго!осо1 гег!и1гез аП оЕ !Ье геа8епгз Па!ей 1и Рго!осо1 8, р1из: роггпагп1де 7700уз) <! > МЕТНО0 1. С1еап апг1 аззешЫе 81азз р!а!ез Го Еопп а 8е! шо1й аз йезспЬег1)п 5герз 1 — 8 оЕ Ргососо1 8. 2. Сочег !Ье зчогЬ)п8 агеа оЕ гЬе ЪепсЬ чч1!Ь р1азПс-Ьаскед рго!есдче рарег. 17 ь а!гааз! ипразейЫе са раиг зегрзепсгпк 8еЬ зч17Ьаиг йпрр1ив асгу!ашгйе за!идаиз апса гЬе ЬепсЬ.
5агае гпчездвагагз р!асс а!агке йече1ар1пв ггау аи гЬе ЬеисЬ га сап!ага сасазггарЬгс зр11Ь. 3. 1и а 250-ш1 яде-апи Паз)с, ргераге а зеоиепс!п8 8е1 зо1иПоп сопсаппп8 ГЬе дез!гед сопсепи акоп оЕ асгу1агпгде аз зресгйед гп ТаЫе 12-20. ТЬе чо1шпез 81чеп ги 1Ыз !аЫе аге зиЕП- сгепг !ог а яп81е 40 х 40-сш зес!иепс1п8 8е1 апд сап Ье ргорогг1опаПу ад)из!ей го ассогпгподаге япаПег ог 1аг8ег 8е1з.
А !МРОКТАЬ7Т ТЬе ргерагагюп оЕ йе 8е! гпия Ье сошр!е!ей зч!1Ьои! !п1еггир!!оп !гоги !Ь1з ро1п! опзчагй. 4. СошЬ!пе аП оЕйе геа8еп!з апг1 йеп Ьеа! йе зо1иПоп ш а 55'С ъчагег Ьай !ог 3 пипи!ез !о Ье1р д)ззо1и!1оп оЕ йе шеа. ва!иЫ! иасап ау игеа Ь ап епйагвеппгс геасгюп гЬаг ргасеейз з!азч1у ип1еы ап ехгегпа1 заигсе аЕ Ьеаг ы изей. 12.81 Рго1осо! 10 Ргерага6оп о1 Е!еского!у1е Сгасйеп1 СеЬ д снлалстеяьт|с гклтс|аг ог 5тлнолао, съенлтс|8|нс с осчлсхчслм|ои сес5 иаед со геено)че сЬе ргодисса ог' РХА-аес)иепс|шщ геасс)опа )а сЬас |Ье красе Ьепчееп йе Ьапда ог |Ье РХА )а 8геасег ас |Ье Ъоссош ог йе Ве1 сЬап ас йе сор ог'|Ье 8е!.
Рго8геядче!у Вгеасег ьерагаПоп оъ Ьапда а1оп8 йе 1еп8сЬ ог' сЬе 8е1 гейессь сЬе 1о8агссЬшк ге1асюпаЬ)р Ьесъчееп сЬе 1еп8сЬ ог а гга8шепс ог РМА апд Ьа пюЬПиу Ы |Ье 8е1. ТЬе геаи1с 1а сЬас геъчег Ьааеа сап Ье геад ггош сЬе аисогадс- о8гарЬ. ТЬе Ъапдв а| йе Сор аге сгоъчдед ъчЫ!е СЬоье а| СЬе Ьоиогп аге арагае. 5ечега! шесЬода Ьаче Ьееп дече!оред со очегсогпе сЬ|а дгаъчЬас)ъ оЬаегчед ш аеъ)иепсш8 Ве)а ог сопасапс сЬ)с)спеял шс1иеПп8 сЬе роипп8 ог" "ъчед8е 8е1а," ш ъчЬкЬ сарегед арасега аге иаед со сакс ро1уасгу1агп|де Ве! а йас аге сЬк)гег ас йе Ьоссош сЬап ас |Ье сор (Ап|юг8е апд ).аЬе)с 1984; 01яоп ес а1.
1984). ТЬе рго8геаа|че шсгеаье 1п СЬ)с)ъпеаа рег ишс 1еп8й ог" сЬе Ве) геаи1сь ш а чо!са8е Вга|Пепс а!оп8 йе!еп8й ог" сЬе Ве!. Весаиье йе е1ессгорЬогеск п|оЬППу ог Р)ъ)А сЬгоиВЬ ро1уасгу1аш|де Ве)а )я со а Пгя арргохипаПоп, а 1шеаг 6|пес)оп ог" сЬе е1ессгк Пе1д ог чо1|а8е ВгагПепс !Сап|от апд 5сЬипше! 1980; Я|ееп апд 5еед 1988; 5! асег ес а1. 1998; 'га8ег ес а1. 1997), СЬе пщгаПоп ог" йе Р)ъ)А йгощЬ ъчед8е 8е!а 1а а1оъчег 1п СЬе СЬк)ъег (апоеПс) рагС ог СЬе Ве1 апд гаагег ш йе СЬ|ппег (саСЬоеПс) рагС. ТЬе пе| е)Тес! )а а сошргея)оп ог" йе зрасш8 Ъесъчееп Ьапда ог Р)ъ)А 1п |Ье 1оъчег рагс ог" |Ье Ве1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
