Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 142
Текст из файла (страница 142)
прес!доеду рго!Ппа1!пд с!еанаде аоесербЫе пагодеп 51огпе. а1 сугое!Пе. 1о с!еачаде. 905С р!Репи!пе (1 м ~п Н20) Ь иееб 1о с)еаче!Пв *идаг рпо5рпа1е спа!и о1 ОМА а1 гье *ае о1 гье спепчса! гпоб!Пса1юп 3' Т и А А С С Т А и 5' НСБКЕ 12-7 5е иепоп Ь Фе Махапз-С11Ьег! Ме(Ьод о( СЬегп(са! Ве гада6оп ТЬе о1!8опис!ео1Ые )п 1Ы5 ехагпр)е (5' САТССААСТ 3 ') (5 аиЬ)ес1ед го ТХе сЬегпка) с1еана8е геас(юпа (Сч С-ГА, ТЕС, С, А>С). ТЬе гееи!6п8 Ргобис15 о( еасЬ о! 1Ье геасбопа аге ееРага1еб ЬУ е(ес1гоРЬогеые (Ьгои8Ь а бепа!иг(08 асгу!ап!Ые 8е) апд н)аиа!(хек Ьу аи1огаб)08гарЬу, апг) !Ье (Ье оп8)па) аегр!епсе 15 беге!го(пей (гоги !Ье "!аббе!а" о( о!(8опис!ео(Ые ргодис(5. Рог де!а(15 о( йе сЬеп!Пигу о( йеае геасгюпе, р)еаае еее 1Ье ассогпрапу(08 (ехг апг) ТаЫе ! 2- !5.
1п счету саае, йе геас6опх аге сагпе!1 ои! цпг!ег сагерц11у соп(го11ес1 сои(!!6опа го епхцге (Ьа! оп ачега8е оп1у опе ог" йе гаг8е! Ъааеа гп еасЬ РХА ию1есц1е !5 !иос66ед, 5цЬаег)цеп! с1еача8е оу а рЬоерЬогбеыег Ьопд аг!)асеп! го йе с!аша8ег! Ьаае Ъу Ьо! р!рег!6!пе у!е168 а хе! 01 епй 1аЪе1ег! ию!еси1еа ччЬоее 1еп81Ь5 гап8е Ггош опе го вечега! Ьцпг!ге!) пцс1ео1Ыее. ТЬе р!Репсбпе !8 гегпочес1 Ъу еиЬег ейапо1 ргес!риа6оп ог часцши г!гу!08 ог а сошЬ!па6оп 01 Ьо)Ь. ТЬе епй 1аЬе!ег( пю!есц1еа аге геацарепг(ед, г(епагцгед Ьу Ьеабп81о 90'С !и а Ьцйег сопгапбп8 909'о ГогшагиЫе, апг! (Ьеп аерагагег! Ьу е!ес(горЬогеыа гЬгоц8Ь а ро!уасгу!агпЫе 8е1. ТЬе РХА еег)цепсе сап йеп Ъе геас! (гош ап ацгогаг!!08гарЬ ог йе аеоцепс!п8 8е!.
Рог а пшиЬег ог геааопх (е.8., (Ье цае оу ир аа а гаг!!01аЬе1, (Ье 1омг ерес!6с асбчиу оу епй1аЬе1е11 РХА, (Ье ыагг86са1 сЫпЬ- ц6оп 01 с1еача8е ыгеа, апс1 (Ье 1циЬа6опх оу 8е1 гесЬпо!о8у), 1Ье гап8е оу (Ье Махаш-Я1Ьегг ше(Ьог( !8 1е55 1Ьап (Ьаг ог 1Ье 5ап8ег п!е(Ьод. ТЬе п!о51 1Ьа! сап Ье ехрессег! (гош а хе! 01 Махаш-б6Ьегг геасгюпа !8 -250 Ьааее ог'аег!цепсе, Ье8!пп!08 10 — 15 Ъаееа Егош 1Ье гагбо!аЬе1ед епй СЬепгка1 хег)цепс!08 01 1аг8е !гас!5 оуРХА ге!1 оц! 01 гачог !и йе 1а(е 19808. ТЬ!8 ччаа 11ие го гччо ипргочегпепга !и еихугпа6с аег!цепс!08 оу РХА: (Ье !и!го!)цсбоп ог" РХА ро!угпегааеа га!1ог-шас!е гог еес(цепс!08 геасгюпа, апг! 1Ье арр1!са6оп оу ашоп!а6оп (Ьгоц8Ь гоЬобсе апс1 Ргогосо! 7: СЬет!сп! 5ег)иелс!л8 12.бЗ ()ногехсепсе-Ъахег( хес)неисшв шасЫпея Ву сои!гает, !Э!(А хецнепсшв Ъу гЬе сЬеписа1 ше(Ьод гешашег) !аЪог-шгепяче.
Нечет(Ье1еы, сЬеписа1 хес)непсшв ге!а(пх опе с1еаг ас)чапгаве: 17 епаЫеа хег)иепсшв го Ьев(п апутчЬеге ш (Ье сагвег ОЬ(А ччЬеге а геягкВоп яге сап Ье 1аЪе1ед ог ап епг)-!аЬе1ес! Егавшепг сап Ье ргог(нсег) Ыа РСК.!и асЫиюп, йе гагвег ОНА сап Ъе оГ апу 1епвгЬ апс1 сап Ъе гайо1аЪе1ег1 ш а пшиЪег оЕ ччауь, г)ерепе(108 оп йе па!иге оу йе !египт оГ ГЬе ОНА (Р1еахе атее Р(внге 12-8 апг) ГЬе Рапе1 оп АРР!Т!ОХАЕ РКОТОСОО РКЕРАКАТ!05( ОГ Е(ЧР-ЕАВЕЕЕР РМА РОК СНЕМ!САЕ 5К)РЕ5(С!П(С аГ ГЬе епг( оу ГЫх рго(осо1).
ТЬе ьег)непсе оЬга(пес( (и гЬ(х ччау сап Ье пьем аз ап епггу роги! го 8епегаге о!18опнс1еогЫеь гЬаг сап Ье ихег( го ргпие еикушаг(с хег)непсшв геасНопя 1п аг(йг(оп, йе сЬеписа! ше(Ьод сопппнеь го Ьаче а сгнс(а1 го1е ш ехгаЫгаЬгп8 йе ьециепсе оу 0118опис1еог(с1ея ш йе Еипсгюпа! йяес(юп оЕ ггапьспрНопа! сопсго1 явпа18 (е.в., гпейу1аНоп (пегбегепсе аххауя Сагеу апг1 5гпа!е 2000), апд ш (Ье Ыеп66саНоп апс1 сЬагассейгапоп оу (Ьеье гев(опх (и ппасг се!15 (вепопис Еоогрппипв; С1шгсЬ апд б(!Ьегг 1984).
ТЫ5 ргогосо! 15 Ъахег) оп йе с!асяс Махапг апг( С11Ьегг ргосес)иге. 1пчехщагога аге епсоигавед го геад йе 1исЫ апе( согиргеЬепяче ггеаВхе Ъу АПап Махапг апг! ага!(ег С(1Ьегг (рнЫ(ьЬед ш 1980), Ьеуоге саггу(пв ош (Ь(з ргогосо1. МАТЕК!АЕй САНТ!ОЫ: Р1еаье атее Аррепг)1х 7 2 (ог арргорпа1е Ьапг!1108 о( та1ела18 таг)еег! чч!!Ь <! >. Впйег а тчЬеп 1ншее 5 апс! Ьо!!76005 Р!еаье атее Аррепйх 7 !ог сотропеп!х о! ь!осК ао!и!юпя Ьи((егх, апг! геавепгя 011и!е х!осй хо!п(!опк !о (Ье арргорпа!е сопсеп!гаВопя Асевс ас)с( (7 м), вехИ!у сИигег) Егот 8)ас)а! асег)с ас)с( (7 7.4 м) < ! > Ейалоl (аЬьо)и(е) с)7(7)ег) Го — 20"С. О(те(Ьу!хиИаге (ОМ5) (99;0) (Со)с( lаЬе! 99;4 Егот А)г)г(сЫ < ! > ОМ5 (70'/ ч)ч) (л ейало) <!> ОМ5 Ьиууег 50 гпм юйнгп насосу!аге (рН 7.0) < ! > ! шм ЕРТА (рН 8.0) ~ чЧАКМ!МС ЧЧеаг 8!очек апг( а таь(е тчЬеп тче!8Ып8 ьоРЫ юйнт сасог(у!а(е апг( 8(оче Ьапд(!08 ОМ5 Ьн((ег.
ОМ5 5(ор хо!и()ол !.5 м еойнш асееаГе (РН 7.0) 1 м 8-гпегсаргоегвапо! <! > 250 08)ш! уеаег гв(4А ЕОТА ВЕ5 м, рН 8.0) Еогталнс(е <!> Еогтат(г)е-!оас)7л8 Ьиууег < ! > Нус)гаг(ле (95;0) <1> 5гоге Ьуг(гах1пе (Еаягпап Коаа(г) ш япав а1евноь !и пвЬ71у сарреа шкап(нве гнЬеь аг — 20'С. Нуг)гаг(ле 5(ор сю(ипол 0.3 М ьойнпг аеееаее (рН 7.0) О.) гпМ ЕРТА (рН 8.0) ! 00 рвйп! уеаег гКХА ХаС! (5 м) (чаОН 0.2 ГЧ) сол(а(л(л8 7 тМ ЕОТА < ! > Р(рег(с)(ле (7 м) !л Н О < 1> ТЫе ьо1нвоп еЬон!г(Ье (тееЫу гпаг(е Ьу пнхшв ! чо!шпе о(р(релйпе (70 м; ЕЬЬег) ннгЬ 9 чо о(Н О (и а 8гаг(нагео 8!ая су!шоег.
12.64 СПаргег 12г Е)!1А Бедиелс(лц Р(рег(г)!ле Еогтасе Л М) Ргерагег) Ьу аг)!иьссп8 а 4чй ю1исюп оЕ Еогпис асЫ сп Н О со РН 2.0 чпй 10 М р)репйпе. 5ог)!ит асесасе (3 84, рН 5.2) Се!5 Ро)уасгу(ат(г)е ьедиелс(лК де! <1) ТЬе ргос)исса оГ Махали-Сс1Ьегс ьедиепсгп8 геаспопь аге июа1!у апа1угег) оп бай ог 898 с)епасипп8 ро1уасгу1агпЫе 8е!ь (р1еаье ьее Ргососо) 8). Мпс!есс Ас1е!5 апе! О!коппс!ео11е!е5 5а)тол ьрегт РА)А (7 тфт!) гл Н О 5Ьеагес) ьа1гпоп ьрепп Р)4А Ь сЬе шасепа! сгайпопа11у пьес) аь сагпег гп сЬе сЬепска) ьедиепс)п8 шесЬой !п Гас!, а!гиоя апу РЫА мчН легче сЬе ригроье едиа1!у лче1!.
5Ьеагес! ьаЬиоп ьрепп РНА сап Ье ригсЬаьед Егопс сопипегс1а! ырр1сегь (е.8., 518гпа), ог К сап Ъе Вепегасес) си йе !аЬогасогу аь г)еьспЬег) !и СЬарсег б, Ргососо1 10. Тагдес РА)А, гаг((о)аЬе(ес( <1> Ргераге ас 1еаьс 5 х 10ь сргп оЕ РЬСА, аьупииесгка!1у епс)-1аЪе!ес( пссЬ ллр апс) йььоЬеа ас а сопсепсгаИоп оЕ -5000 срш(81 !п Н О (р!еаье ьее сЬе рапе! оп АРР1Т!О)ь)АЕ РКОТОСОЕи РКЕРАКАТ1ОН ОЕ ЕНР-ЕАВЕЕЕР РЬСА ЕОК СНЕМ1САЕ 5ЕОРЕЬСС1ЬСС).
ТЬе РЬСА ю1ибоп юшг Ье Егее оГ ьа1с. СЧЬеп сЬе грлапспу о( гайо!аЬе!ес) РЫА Ь 1ипаш8, и Ь роьяЫе со ссесегпипе ап шсашЬг8иоы РГЕА ьедиепсе Ьу саггусп8 ош оп1у Гоиг (С, С+Т, Аго, апс) О) оНЬе Вче геассюпь гсеса11ед си сЬе ВоъчсЬагс. уеаьг ЕКХА (! та!т!) гл Н О Бресса! Ецп1ргпеп1 Ргу !се — ейало! Ьай <1> Едисртелг Гог Сегел)соч соил!(ле (ьее Аррелг)(х В) Гсе-иагег Ьай М)сглупа гиЬеь С1еача8е геассюпь аге Вепега1!у сагпесс оис сп ьсапс)агс) 15-гп! ш)сгоуи8е шЬеь. ЪЧЬеп ьедиепс)п8 а пшпЬег оГ РЫАь ас йе ьагпе силе, иье ЙКегепс со1огеа ш)его(и8е шЬеь со Тасс!пасе сЬе Ыепбйсасюп оЕ еасЬ Ьаье-ьрес)6с с1еача8е геасбоп. 5огпе спчеьб8асогь ргеГег со ме я!коласа шбея Ночгечег, сЬгь ргесаисюп Ь иппесеььагу гТ саге ы са)сеп со епялге йас а!1 о! сЬе гайоаспче РЬСА В йььо1чег) а(сег еасЬ ргессрссасюп яер, Гог ехасир!е, Ъу ияп8 а ргрессе сср со го!1 а Ьеагс о( Ьсл((ег очег йе епбге сппег югЕасе о( сЬе сиЬе, ог Ьу Ы8огоы апа ехсепяче чогсехгп8.
Ко!агу часиит ечарогасог Рог ехашр!е, а 5ачапс 5реес(час. Клипс! Ьай ГаСИ ИЬГП ЬСГЕНг-ГЕОИгп рГЕЬЬиГЕ р)аСЕ Еог ехаплр!е, КеьеагсЬ Ргог1исп 1псегпабопа1, Ориопа!, р!еаье ьее гаер 4. 5едиелс(ла ее! аррагагиь алг! роиег рас)с Р!еаье ьее Ргососо1 1 1. Яагег Ьай ог Пеаг!лК Ь(ос)с ргеьег го 37 С алг! 90 С МЕТНО0 1. БиЬ)есс сЬе гадю1аЪе!ес) РХА со йе Ьаье шойуссас!оп ргосес)игеь оис!!пес) ш йе ЯосчсЬагс ш ТаЫе 12-1б. 1с Ь июа1!у роьячйе со с)есегпнпе ап шпаЬс8иоы РЬСА ьедиепсе Ьу саггулп8 оис оп!у Еоиг (С, С+Т, А+6, апг) О) оГ ЕЬе Вче геасбопь г)еса)1ес) сп сЬе ВосчсЬагс.
2. Кеьиьрепс) еасЬ оЕ йе Еоиг ог Е)че 1уорЬ11гхес1 РХА ьагпр1еь солса!п)пц йе Ьаье-пюс11(1ес) РХА Ьу чогсех)па чч(сЬ 100 Сс! оГ 1 М р!рег)с)1пе. Рсрепйпс Ь иьег) со с1еаче сЬе ьи8аг-РЬоьрЬасе сЬаш оГ РЬСА ас сЬе ясеь о( сЬешка) гпойбсаПоп. Ргоеоео! 7: СБет!еа! Бедиепет~ !2.65 Д Е Х а ".Ка с д 1 г» О й о СО' о х Л г ю Ю Ю О с о г й с с с я Е м м с О «о х Е "с о й Я г «й ~ Е г» Х г» < м .о с с е гЕ а «й Е н с а о гЕ аь о „ ь О- О й» о О с О Я „г» Е о .ОО «Е с О с с б с О. о й .с « о Е ге о с о о с 3 смО .,» о О л < х Е .о Я 'Й -Ц с. г» .с с «й С» г с й с О ЕО Е м о с г» ,О ~ч л О с о й о С .О й Ф с с о ае о а ах о Е й 'о с с с с с с О о » Е .о— < о О г1 3 с с Е м о « .О о с 'Я .Е о .,» с г г» м О ,Ь \1 < Х Ха Д й й о .О Я Я с.
с .г м О Е м м О с о «Я О О Ь \ Ф н с ЕО Е м м й о с с «» О Е е о "а~ О с о «™ оф й. Я Я ах ос Е о с с й О .с «. г» с с г» о о Б г» < о О Я с Е й й «» .с х Ф с с а м «. , с «й е О с о а о й г» Я о Е о х «с Х с . о х «й ."Я О.Е о а о й г» м Я "о Я о х Е г о аы ХК о о „ «й Е с <О Х д "о о »- г» о с "Е о с с мО .,» о 4 < ! 'г Е йй ,С г» со с Ос о Я й Е -Е Е Е Е с О", <О О г с «й с» гс й» Ф Ф н й О б с Ф м а й О «й О ге О г» о гс с О л. с Яо с й й й аа с й 4 о -с г» о 3 Ф О Я Я ь' "'Е с а о с О с с Е м ,О с г б Ф с ЕО Е м,, м й о йс «й о сс " гй м Е о с Е а'» й с а г» ОХ "» аЕ Е й» с с 'с Е г» "с Е »- о 3ь »Я г» .с а о О.
О й .Е « о Е ге < <ХД Х' а йо й г» ОС о о с о с Ф Ю ма с < с о о с о О, о «» Д ОО .» г» с О г й с с 'ЕО Е м й о о со " гй О х Е о 2 Ь с. с с < й "о й о С '" О о й 3 с о х йаЕ с 'о й с О о й с о «Е а й х О й» й с Е « .О Е а 'о а с-" о й ,"«.О Е х с 'с о О о с ",. Е о .,» с й» .о о С» о Фй с Я с Э с ОЭ Ю Э .О О Е о сг о .с с с о г» с 1"- о с .с о й о Й го г г4 ьы 3 йо «й о О Е "о с О г» х а- Е Е гг С с о "О ЕЬО .Ег!о о о х мгЕ Е О «О г» г» о й» г» м »со гр о «мЕ й О.
о О. :Я '$ .о о О, о Е Я о й «»,с с о Я- с а — с 'а о о .с о'Е Е~ .о с -8 о о о« „о х й о 'с .о йй Я гЕ г о «й «й с 'Я с О о е О с Е «й «й о „ О~ 'Я с ог со Е о йог « б й й й о Еф ° Ь Ь й -о с а й о о с 3 о й» а„„ о о «й й Я м ООО~О Ргогосо1 73 СНетка! Беуиепсрпц 12.67 33 с= - о о Э ) а о -3 ср .а о о Я О ,а ос а ь .О .С,Я 0 О Я .с м н з од З ЕХ вЂ” "О О 3 Д, 3 «\ д аа'я .а о а Я с ;Бас с Я о ср о э и \ Э > Б ььо с Б с— а аф о Э' Я ь Э 0 ОД д.а '3 а о со 0».
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
