Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 137
Текст из файла (страница 137)
сой РАГА роlутегаье 7 (5 иппь)рВ Арргохнпаге!у 2.5 иши о( сигу!не аге гнои!гед Гог еасЬ ьег о( Гош гпдеоху ьег)иенс!п8 геасгюпь. ТЬе К!сио!ч Гга8теп! и 8еиегаВу ьирр1!ед гп а ЬигТег соигашш8 5047ч 81усего!. ТЬе очегеигЬияаьбс ые оГ ЕЬе епгугпе гп ьег(иенс!и8 геас6опь и!ау саине гаьгогВоиь ш ьес(оепс!П8 8е1ь, Ьесагие ОГ гпгегасгюпь Ьепчееп 81усего! апд Ьогаге юпь ш ТВЕ, апд ГЬе папдаЫ Ьийег иьед го рош апд гнп ))МА ьес)иеисгп8 8е14 (р1саье ьее ГЬе раис! оп ТКО()ВЕЕ5НООТ!МС а! ГЬс епд оГ ЕЬгь ргогосо1). )ь)ос!е!с Ас!(Ь апд О1!допеьс!ео6(!е5 дМТРь, ддАГТРь, ь(ос(с ьо(и!гонь ОГ др(ТРь (7 тм) апд ддр(ТРь (5 пгм) гп Н,О О! цопис(ео((де ргппег !'ье а! а соисепггадоп оГ -0.5 ргпо!е(р! (-3.3 р8)пз!) ги Н,О. рог а 1иг о( шичегьа! рпгпегь ГЬаг Ьгид го чесгог ьес)иепсеь иригеапг оГ ГЬе гаг8ег ге8!оп, р1еаье ьее ОЬе !п(оппагюп раис! оп ()М!ЧЕК5АЕ РК!МЕК5 ш СЬаргсг 8 апд ГЬе !п(оппаиоп раие1 оп РКЕРАКАТ!ОМ ОЕ 5ТОСК 5ОЕ()Т!ОМ5 ОЕ ОЕ!СОМ()СЕЕОТ!ОЕ РК1МЕК5 ЕОК ОМА 5ЕЕ(!)ЕМС!МС аг гЬе еис1 о( ГЬЬ сЬаргег.
ТЬс гадоь о( дд)4ТР дЬГТР ш гЬс схгснчюнаспншагшн ннхгшсь агс 30 1, 25 Г, ан4 25 ! Гог дСТР дТТР анд дСТР гсьрссачс!у !н гас аисшмсд ьсанснсшь гсаснон, ГЬе гаио оГ ддАТР:дАТР и -45: !. О!ьрсиьс ннхсигсз аь 50-р! а!Мнои аид ноге Ггогсп ас — 20 С. 12.42 СЬпрсег 12: Р/з/А 5ег]иеис!иП Тетр!а Се 73/з/А, з/иа/е-зсгапг/ес/ сле ас а сопсепсга6оп оЕ -0.05 ршо1е/тс!, юЬссЬ ы егСшча1епс со -0.15 00/и! оЕ ЬассепорЬаце М13 япа!е-зггапг)ед ЕсЬЕА.
ТЬе сопсепсгасюп оЕ япх!е-зсгапбе6 7374А гп япаП-зса1е ргерага6опз оЕ ЪассепорЬахе М!3 гесопгЬгпапь чапез Егош ОЗ5 со 0.5 ИП/ш1, Перепб!пц оп сЬе роюсЬ гасе оЕ сЬе рагс!си1аг ЪассепорЬаае. Опбег сЬе сопйбопз поппаау гье6 Еог зег]иепс!пх, сЬе сеиср1асе ЕсЬСА и ргезепс сп ехсея. ТЬегеЕоге, япаП чапасюпз гп сЬе аспоипь оЕ сешр!асс асЫе6 со 6!ЕЕегепс зеь оЕ зегСиепсша геас6оиз до пос еепегаау аЕЕесс сЬе г]иаПсу оЕ сЬе тези!ся Ьоюечег, р1еазе зее сЬе рапе1 оп ТИОС/ВЕЕ5НООТ!74С ас йе еп6 оЕ сЬе ргососо1.
ссайоас6сге Сопсроппес5 !а-ззР!г/АТР 13000 С!/тто/е, 7 0 тС!/т/) <! > ог (а-ззР!с/АТР 13000 Сс/тто!е, 70 тС/т0 <1) ог /а-зз5!г/АТР 17000 С!/гпто!е, 70 тС//т! <1> ог 5' згР-/аЬе/ег1 о/!попас/еос!г/е рптег <1) 1пзсеаг1 оЕ шсегпа! 1аЬеПпх юиЬ ]яр] ЙАТР зеоиепс]пх гпау Ье сагпег1 оис ю]сЬ а 5' зср1аЬе!е6 оППопис!осЫе рпгпег.
1п сЬь сазе, 2 И! 1-5 х 10з срис; -0.5 па) оЕ сЬе гайо!аЪе!е6 рпгпег ап6 2 р1 оЕ Н,О аге шс1и6е6 сп сЬе геас6оп иихшге си р1асе оЕ сЬе ип1аЬе1е6 рписег 15иер 1) ап6 ]зср]ПАТР ]5сер 4). АП ойег яерз геисасп йе загпе. ТЬе 5' сепшш оЕ оППопис!еосЫез аге депегаау 1аЬе!е6 Ьу сгапзЕег оЕ !у-зср]- Егопс [7-"Р]АТР ]и а геас6оп саса1ухег! Ьу ро1упис!еосЫе Ыпазе, Рог гсесаг1з оЕ йе ]г!паз!па геас6оп, р1еазе зее СЬарсег 10, Ргососо! 2. СепЕгсГще5 апд ссоФог5 М/сгоЕиае госог ог аг/арсогз Еог изе счгсЬ 0.5-т/ т/его/иее ГиЬез, ог 5зчгид-оиг госог аис/ т!сгос!Еег-р/асе Ьо!с/ег Ее.д., 5огга!0 !тег/ сч/7Ь ро/узсугеие гоапс ог гиЬЬег раг/3 Ьресса! Ецсссргпеп$ М/его/иее сиЬез' 10.5 т0 ог М!сгос!сег р!асез ЕГ/ех!Ые, Ьеас-зсаЫе, и гй 96 Е/-зЬарег/ зче!!3 оЕ -300 и! сарасау Р1еазе зее сЬе шсогшасюп рапе1 оп М!СКОТ!ТЕК РСАТЕ5 МЕТНО].г 1.
ТгапзГег йе Го]]ою]па со а 0.5-тп1 ппсгоГпае сиЬе, ог ъче]1 оГ а ппсгосаег р1асе: яике-зсгапдед сеиср!асс 7774А 10.1 Сса/Сг1) 5 Сгс оППопис!еосЫе рпгпег 11 Сса/ш!, -! 60 ршо!ез/ш1) 4 и! ТМ Ьийег 1 Сс! 2. С1озе йе сор оГ йе спЬе ог зеа1 сЬе ппсгойег р!асе апг] аппеа1 йе о!]Попас]еосЫе рптпег со сЬе сетр!асе ]3]ч]А Ьу спспЬасЫП йе геас6оп ппхспге Гог 5-10 пшплсез ас 55"С. 11 песеззагу, сЬе аписа!е6 сегпр1асе ап6 рписег исау Ъе зсоге6 Еог зечегас исопсЬз ас -20 С. 3.
МеапюЬ]]е, 1аЬе1 Гош. пнсгоГпПе СиЪез ог Гопг сопг!Пиопз юе!15 оГ а 96-сче!1 6]зрозаЫе ппсго6Сег р!ате сч]СЬ СЬе!еССегз С, Т, А, апг] СП СЬеп агЫ 4 Сс! оГ йе арргорпаге сЫХТР ехСепяоп/сегпппа6оп ппхсцге со еасЬ спЬе (].е., 4 Сс! оГ гЫСТР ппхспге со спЬе/юе]1 ]аЬе]ег] С, 4 Сс] оГ гЫТТР ппхспге со сиЬе/юеП 1аЬе1ес1 Т, есс.). Ргососо)4: В!деоху-тед)асед 5ег)иепсгпдйеаспопа Е)аспч йе Иепои Ргадтепс 1243 4.
Р1асе сЬе аппеа1ед рпшег-сешр1асе ао1шюп !гош 5сер 2 оп ке апд агЫ; !и-пр1дАТР ог !а-"Р1дАТР ог !ее~5)дАТР ! 01 К)епочч епгугпе 1-2.5 ип!и) ! Р) 0.1 тМ дАТР !!Е !а-'ср! ог !а-"Р] Ь иаед) 1 и! ог Н О ЬЕ )ана5)дАТР Ь иаед) 1 р) 5соге сЬе асос1г ог К1епоъч епаугпе ас — 20'С; до пос а1!огч сс со ъчаггп со атЬгепс гоогп сегпрегашге. ТЬе епгуте тау !оае асдчпу |Е асогед гп ап ке Ьис)гес Еог Ьоига.
5. ТгапаЕег 3 )с! оЕсЬе пнхсиге Егош 5сер 4 со сЬе ига)1а оЕ еасЬ оЕйе С, Т, А, апд б сиЪеа ог со йе ядеа оЕ пнсго6сег сче1!я Е)о пос а11оъч сЬе гад)01аЬе1ед пнхсиге со сосне Епсо сон!асс сч!сЬ сЬе ддХТР ехсепяопгсегш)пас!оп пнхсиге. ТЬе йшд аЬои1д Ъе дероаиед аа а дгор!ес оп сЬе гча11 оу йе сиЬеа ог гче1!а, пеаг йе ппс, 6. Р!асе сЬе спкгоЕи8е сиЬеа ш а шкгоЕи8е (иае арргорпасе госог ог адарсогь Еог 0.5-ш1 сиЬеа ог р1асе шяс1е десарЬасед 1.5-гп! сиЬеа), ог р1асе сЬе пнсгошег р!асеа )п а сепспЕи8е ес)шррес! иг)сЬ ап арргорпасе адарсог. Сепсг)Еи8е сЬе С, Т, А, апд б сиЬеа ог р!асеа !ог а Еесч аесопда ас 2000 грш со пнх йе сошропепса апд шдсасе сЬе ехсепяопгсегш!пас)оп геассюпя !псиЪасе сЬе геас6опа Еог 10 — 12 ш)писеа ас 37'С.
Ехсегса)оп)сегпипас)оп апд сЬаае геаесюпа гаса!уаед Ъу сЬе К!епогч епаугпе гчог)г ециаПу гче!1 ас сепсрегаюгеа гап8)п8 !гоги гоогп сегпрегасиге со 37'С. 7. АЕсег 9 — 11 ш)писеа оЕ 1псиЬасюп, сгапаЕег 1 )с! оЕ йе сЬаае пнхсиге со сЬе яде оЕ еасЬ С, Т, А, апд С шЬе ог ъче!1. Во пос а1!осч сЬе сю!06оп со а!Ые шсо сЬе ро1угпепхасюп геас6опа. Ъйзеп а соса1 оЕ 10 — 12 ш!пи!ее Ьаа е1араед, сепспй8е йе сиЬеа!Р1асеа Еог 2 ьесопда со )псгойке йе сЬаае пнх )псо сЬе ехсепяопг'септнпас!оп геассюпа. 1псиЬасе йе геасдопа Еог ап адд)С!опа! 10-12 ш!пи!ее ас гоогп сегпрегаплге.
8. АЕсег 9 — 11 ш)пи!па оЕ йе аесопд )псиЬас)оп, сгапаЕег 6 р! оЕ ЕогшашЫе-1оад!п8 Ьийег со сЬе а!дев оЕ еасЬ С, Т, А, б сиЬе ог лче11. АКа)п, са1се саге сЬас сЬе ао1ис)оп доеа пос а1Ые долчп спсо сЬе геассюп. Ас сЬе епд оЕ йе шсиЪа6оп репог1, сепсг)Еи8е йе сиЬеа ог р1асеа со асор сЬе пес)иепс)п8 геасс)опа. 9.
ТЬе Е)ХА пег!иепс)п8 геасс!опа плау Ъе асогед Еог ир со 5 дауа ас — 20 С ог апа1ухед д)гесс)у Ъу г)епасипп8 8е! е1ессгорЬогеа!а (Ргососо!а 8, 9, ог 10, 11, апс1 12). АЕсег Ьеас депасигасюп !2 ш)писеа ас 100'С) апд г!шс1с соо1)п8 оп ке, 1оаг1 3 )л! оЕ еасЬ оЕ сЬе С, Т, А, апд С геасс)опа спсо йе !пд)чЫиа! ъче11а оЕ а пег)иепсш8 8е1. 12.44 Сйиргег 12: 0)ъ)А $ег)иепс(пй ТВОЕ)ВЕЕ5НООТ3(ъ(С АlййоиИЬ д(деоху-гпед(а(ед аейиепс)пд ъи(Ь |йе К1епоьч 1гайтеп( иеиайу цоеа агпоо(Ыу, й 'ь Ьагд|у енег рег1ес!. Гог ехагпр|е, И 'ь гюгпейгпеа песеа лагу (о ад)па! (Ье га|ю о1 дд(9ТРх (о с|6(ТРв ! п |йе сЬа|п ехгепяоплсЬа)п сегпипайоп геасйопа со гпахипые |йе агпоип( о1 |п1огпла(юп (Ьа( сап Ье оЬ(а|пед. Миге зепось ргоЫепь (Ьа( соплргогпье (Ье г(иай(у о1 |йе 0(ъ(А аег)иепсе сап Ье ао(чед Ьу ад)иъ(гпеп(з (о (Ье (есЬЫциеа сьес! (о ргераге (егор(а(ея ог Ьу зтай айега(юпа |и |йе сопдй(опа иаед 1ог сЬа|п ех(епъ(оп(сйа(п (еггп(пайоп геас- 3)опа ог ро|уасгу1агп)де це! е(ес(горЬогеаВ.
Ап |плрог|ап( Ига( а(ер 'ь (о де(еггп(пе ъчЬе(Ьег (Ье ргоЫегп В ауасегпайс И.е., айесь ай жрлепс(пй геасйопа) ог ъчЬе(Ьег 3( 'ь (етр(а(е-арес(йс. И (Ль сййегепсе 'ь по( (гпгпед(а(е(у оЬч(оиа 1гот а сопзрапгюп о1 (йе геъийа оЬса(пед (гопл л|гйегеп( (егор|а(еъ аел)иепсед оп (йе аагпе дау, й сап Ье гар(д(у аасег|аспед Ьу саггу)пй ои( лег)иепс(пй геас((опь ъч|(Ь а гейаЫе сегпр|а(е (!.е., опе |йа( Ьах Ивеп Иоод гехи((а ргеч(оих!у ог опе (Ьас В ылррйед аъ рагс о1 а согпгпегс(айу ргодисед яегйлепапй 'к(0.
ТЬе пюаг сопипоп (уреа о1 ауагегпайс аег)иепс(пц ргоЫепь аге йа(ед |п ТаЫе 12-6 |п Рго(осо! 3, (оае(Ьег ил|(Ь виййеа((опт 1ог ао)ч)пй (Ьегп. Нуйеп ргоЫепь о1(ЬВ (уре агье, й В ойеп иле(и! (о иве (Ье геайеп(а ргоч)дед |и согпплегс|а! аес(иепс(пй (д(а (о )деп(3(у (Ье де(есйче согпропеп( о1 лйе сЬа|п ех(епа(оп(сЬа)п (еггЫК па(юп геасйоп. Тетр|а1е РгоЫета ТЬе чаъ( гпа|оп(у о( (егор(аге-арес|йс ргоЫепь Ьаче опе о( (Ье (о иг сап аеа | ь(ед Ье(оъч. ТЬе д(артюх((с аугпрсогпь о( еасЬ ог'(йехие ргоЫегпа апд ъиййеайопа 1ог роаъ(Ые ао(одопа аге Мед (п ТаЫе 32-6.
° Ргелепсе о1 соп1ат)пайпс РА)А (иаиайу Ьас|ег|а! сЬгогпоъогпа! 06(А) |и (Ье ргерагайоп. ° Ргекепсе пуго)диаl РЕС ог ЫаЬ сопсепиайопа о1 Е0ТА |п (Ье ргерагайоп. ° Еоъч сопсеп(га6опл о1 гетр|аге 0)ъ|А |п (Ье сЬа|п ех(епа(оигсЬа(п (егпйпа(юп геас(юпю ~ ° Айзепсе оЕа рг(тег-Ьтдуп(3 ллге. ТЬВ ргоЫегп аг(ъев сйейу ъчЬеп асх(иепс)пй с|е3ейоп гпигап(а цепега(- ес! Ьу д(аеа(юп ий(Ь ехопис(еаае 1И Вее СЬар(ег 13, Рго(осо! 9). Юссааюпайу, йлеае де(е((опх ех(епд Ьас1с )псо (Ье рплпег-Ыпд(пй гей(оп, (ЬегеЬу ейгп)па((пй (Ье аЬ|й(у (о оЬийп 0НА лсх(иепсе.
ТЬВ ргоЫегп сап аогпейгпеа Ье соггес(ед Ьу иъ(пц а рпгпег согпр|еплеп(агу (о аег)иепсеа (Ьа( йе йлг|Ьег ира(геагп о1 (Ье (агае( 039А. йесопдагу Ягис1иге РгоЫета Ией(опх о1 Ь~ИЬ аесопдагу а(гис(иге (е.ц., Ьогпоро|угпепс иасЬ апс| райпс1гопис аес)иепсеа) |п а 0МА (егпр|а(е сап 8(че гье (о ыгопй а(ор аейиепсеа лйа( арреаг аъ Ьапда |и ай 1оиг сЬаппе!а о1 (Ье лсх)иепс(пц Ие! аи(огад(оцгарЬ. ТЬеъе гей|опа аечеге(у |гпреде |йе ргодгегь о1 |Ье 06(А ро(угпегаъе апс| аге ойеп епсоип(егес! ънЬеп ияпй (Ье К|епоьч 1гай пепи ТЬе Илга( ъо(и((оп В (о |гу хейиепс)пй (Ье о(Ьег в(гапд о( (Ье 0(ъ(А Апо(йег гю|и(юп 'ь (о саггу ои( (Ье аег(иепс(па геасйопа а( 50 — 55'С (Согпег е( а|.
1985). Айегпа6не|у, адд а Ьосы о1 К|епоьч (0.5 ипй |п а чо|игпе о1 ) .0 и!) ас 5(ер 7 (о гер(еп(аЬ |Ье епхугпе (Ьа( ъчая (пасйча(ед диг)пц (йе (егпипайоп геасйопа апд гю епЬапсе ех(епъ)оп Ьеуопс! (Ье Ыос)ь. й ь роаяЫе (о иае гИТР |и р|асе о( дСТР (о гедисе аесопдагу а(гис(иге ргоЫегпю 6 (ЬВ гпоъййса(юп 'ь песеааагу (Ьеп ялЬай(и(е гпапйапеае йлг гпайпеа)игп |п (Ье геас6оп Ьийег (о епЬапсе (Ье аЫ й(у о1 (Ье К|епоьч епгугпе со и61йе (Ье апа)ой (ТаЬог апд И)сйагдаоп 3989Ы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
