Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 140
Текст из файла (страница 140)
ТЬе тес!шгегпепг гог согпр1есе гепгоча! о! геядиа! РСК ргппегк паау Ье е!!ш!пагед Ъу аиЪя!гиг!п8 а 5' ЯР-гагбо1аЪе1ед о! !Копие!еог!де ргппег гог а-ЯР- ог а-'55-!аЬе!ед пис1еог!деа (Ргогосо! 6) !и сус1е-ьеииепс!п8 геасдопя ТЬ!к ргогосо! !а а пгог66садоп оу ап иприЫ!аЬед гпейос1 о! Х. 5ааача8е (1лГе ТесЬпо1о8!еа) гчЫсЬ !х ап е1аЬогадоп о! а гпегЬод ргеч!она!у риЫ!хЬед Ьу Еее (1991). ТЬе ргоседиге окей 5' ЯР-1аЬе!ес1 о!г8опис!еодс1е рпгпегк апд сап Ъе геас61у ас1артед Го ьег!сгепсе а чап'- е!у о! РХА сешр1асея гпс1исбп8 рипбес1 РХАя РСК ашр1г6сагюп ргодисга (СагогЬега ег а1.
1989; Миггау 1989), р1аяпиЬ гп Е. соБ Ьокга (КпкЬпап ег а1. 1991), 8епопнс РХА (Киапо апд КнЫ 1991), апс1 ЪастегюрЬа8е РХАз !п р!аг)иех (КпеЬпап еГ а!. 1991). Ап асЫгдопа! ргогосо! !ог сус!е ьеииепс!п8 чдй гпгегпа1 1аЪе!!п8 ог' сЬа!и-гегпипасед ргодись Ъу а-яр-, а-"Р-, ог а-я5-!аЬе!ед пис!еог!деа !х деаспЬед аг йе епд о!гЬ(а ргогосо!. Ргососо! 6: Сусlе 5ег)иенс!п5г Ра)еоху-тег(!агегЕ 5ег)иенс!пд Кеасггопь ()ь!пд РСК апг( Епс(-!аЬе!ег) РПгпеш 72.53 МАТЕВ1Аса СА()Т1ОМ: Р1еаье ьее Аррепг(!х 72 Еог арргорпа(е Ьапс(1(пд оЕ та!епа15 таг)сег( ту)!Ь <! >. Вийегь ап(1 ао1611оп5 Р1еаье ьее Аррепсих 1 Еог согпропеп(ь оЕ ь(осЬ ьо1и6опь, Ьи((егь, апд геаееп(5.
01!и(е 5(ос(с ьо1и6опь !о ГЬе арргорпа1е сопсеп1га6опь. с)с)Ь)ТР ех(епь(оп)(егт(па((оп т(х(игеь сГс)МТР ьо(ииопь оГ ГЬе Гоиг сГВЧТРь, еасЬ а( 5.0 тМ с)Г4ТР ьоГииопь оГ (Ье Гоиг сГМТРь, еасЬ а( 7.0 тм ЕОТА (0.05 м, рН 8,0) Рогтат(ЕЕе-!оаг)(пе ЬОГГег <1> тпь-с! Г7 м, рн 8.0) Епкуепеь ап(1 Вийегь Агпр!!Тат! С5 ог о(Ьег ехопис)еаье-с)еГ(с(еп( неть(опь оГ Тас) Е)МА ро(утегаье (5 иЫТь)ро 5х Сус!е-ьес)иепс(пд ЬиГГег 200 гпм Тпь-С! (РН 8.8) 25 пгм МОС! ТЬегтоь(аЫе 0МА ро!утегаье Рог аохке оп юЬгсЬ епгуше со иье, р!еаье ьее СЬоояп8 а 5еоиепс!п8 5уьгегп гп тЬе сЬартег !птгог)исгюп апг! ТаЫе 12- ! 9 !п ргогосо! 5.
ТЬгь ргососо) Ьаь Ьееп юпгтеп нг!ЕЬ Ашр!!Таг) С5 гп ш!пг), Ьы н но11 юогЬ тче1! Еог йеппоьгаЫе епаушеь ю!ЕЬ япн1аг ргорегиеь, )ь)ис!е1с Ас1!415 апе1 О1фопис!ео6де5 О!(еопис!ео((сГе Рптегь, гас!(о)аЬе)есГ а( (Ье 5 ' Гегт(пиь п4(Ь ь"Р ог ~~Р <1> То ргераге епй1аЬе1ед рпптегь, р!еаье ьее СЬартег 10, Рштосо) 2. Тетр!ате Е)АГА5 Р!аяпнЬ, соьппсЬ, ЬассепорЬа8е )., апг) ЬасгепорЬа8е М15 ОМАь, риг!Вгег( Егогп 1аг8е- ог япа!1-ьса!е си1гигеь Ьу апу оЕ йе гпетЬое)ь г!еьспЬее! гп СЬартегь 1 — 4, сап Ье пьес) аь тептр!агеь, ТаЫе 12-! 2 ьЬогеь ЕЬе апгоипи оЕ еасЬ гуре о( гешр1ате гег)и!гег) (р!еаье а!50 ьее ТаЫе 12-4). йрес1а! Е(161р)пепЕ М(сгоуиее ГиЬеь Г0.5 т!) ог М(сто(Г(ег р)агеь (ВехгЫе, Пеаоь(аЫе, пг(ГЬ 96 ()-5ЬаресГ и е!Гь оà — 300 р! сараи(у) ТЬеье р!агеь аге ага!1аЫе со!от-сое)ед апг))ог рте!аЬе1ее) С, Т, А, апг) б (р1еаье ьее йе шЕоппаОоп ране! опМ!СКОТ!ТЕК Р!АТЕ5).
ТЬегта! сус!ег ргоегаттесЕ пг(ГЬ сЕеьггесЕ атр)гугса((оп рго(осо! Р1еаье ьее 5(ер 5. ТАВЕЕ 12-11 г)ОМТР Ех!еппоп)Тегпнпа6оп М!х(игеь Еог ()ье 1п Сус1е-ьег(иепс)пе Кеаспопь аамтР Отнеа )!ехсемть ксаспоя 5тоск 5осит!оя от амур (7 шм) Аяо аамтР5 (5 шм) (Ая хгосимеь !я и!) тги5-сс ЕОТА м!хтиае астр дттР дАтР астр аастР гыттр гыАтР аастр (1 м, ен 8.0) (70 шм, ен 8.0) Н,О еЫСТР гЫТТР гЫАТР еЫСТР 20 20 20 20 80 10 10 820 20 20 20 20 — 160 !О 10 740 20 20 20 20 — — 120 !О !О 780 20 20 20 20 — — — 40 10 !О 860 Рирепье аь 50-0! а!(Оно!а; ггоге Егоаеп аг — 20"С. ТЬе гаиог оЕ еаМТРЫМТР ш йе Еоиг ехгепяопаеш!паина шаюгеь аге 20 ), 40 ), ЗО ), анг) ! О ! Еог С Т А апа С, геаресате!у ТЬеье гаиоь гтеге оргии!ген Еог геасионь сага!угеа Ьу АнгрЬТап С5 РМА ро!уп|егаге. )агЬеп нянь огЬег гЬегпюьгаЫе РМА ро)ушегаьег, гЬе гагюь пгау нее ! го Ье ге-орпш(аеа 12.54 СЬаргег 12г Р/4А 5ес/иепсгп5 ТАВОТЕ 12-12 Ап|оипгь оЕ 5/аг!оиь Туреь оЕ Тетр)агеь Йес)и)тес) |и Сус!е-ьес!иепс!пВ Йеасгюп5 Амоиьгт ое Риеинео Р)ч)А ЙГОи!аео тоа ЕАсн 5ет оь Роиа Рсоеоху5еоиенс!ого ЙГАстгоы5 ГемО!е5) ТУРе Ое темРЕАте РоиЫе-я!гипс)ес) р1аяпЫ РГЕА сцпц1е-игап4е|1 ЬассепорЬаце М13 РЬГА РоиЫе-ьггапс)ег) Ьас|епорЬаце )г РЬГА РоиЫе-ьггапг)ес) соыпЫ РЬГА 20-200 1-50 20-200 50-200 МЕТНО$Э 1.
Тгапьуег 4 Н! ОЕ арргорпаге ЕЫ)ч)ТР ех!епяои/!егш)паг)оп ш!х!иге !р!еаье ьее ТаЫе 12-11) ш!о 0.5-гп1 со!ог-сос)ес! ш)сгоуиВе гиЬеь ог шго 1пс!1УЫиа! сче115 оЕ а Ьеаг-ь!аЫе ш)его!1!ег р1а!е рге!аЬе1ес! С, 1; А, апс! С (Е.е., 4 Н! оЕ сЫСТР пих!иге 10!о гиЬе/ьче11 !аЬе1ес! С, 4 Н1 оЕ |ЫТТР пих!иге шсо гиЬе/яче!1 1аЬе1ес1 Т, его.). 5гоге гЬе гиЬеь/писгог)гег р!агеь оп ке. 2. То !Ье 5Ые оЕ еасЬ сиЬе ог яче11 асЫ: г)оиЫе-яггапг)ег) сегпр!асе РЬЕА 10 — 100 Ето!еь 1.5 рто1еь оГ 5' 'гр-епс)!аЬе1ес) рптес" ! 0 Н! 5х сус1е-яес)иепс)пц Ьи//ег 2.0 НГ НгО |о 5.0 Н) "1Е ия!пц а ьяр епс)-1аЬе1ег) рпгпег: 1 5 01 оЕ а ыап|1аг|1 ргерага6оп оЕ яяр-1аЬе1ес) оПцопис!еос)с)е сопса)пь -5.0 рпю1ея оЕ рпп|ег Гр1еаье яее сЬе рапе) оп АРРГТ1ОЫАЕ РЙОТОСОЫ СУСЕЕ 5ЕЕ)13ЕЬГСГЫС ЙЕАСТЕО)ч)5 Р5!ЕчСя РСЙ АЬЕР!ЫТЕЙ)ч)АЕ ЕАВЕЕГ)я)С ЪЧГТН !и-ьгЫЫТРь аг йе епг) оЕ йи ргоюсо1).
То гпашгаш йе ясо)сЬютеггу о/ ЕЬе согпропепи оЕ сЬе яес)иепс!пц геас|юп, |псгеаяе йе ап|оипс оГ |стр)а|е РЬГА -3-Ео!|1 130 — 300 Ето!ея) |ч/ГЬоиг )пс|еаппц йе гога! чо!ише о/йе геасНоп 3. Р1!иге ап а1п!ио! оЕ йе ргерага!Ып оЕ Ашр11Тас! С5 РХА ро1ушегаье сч1!Ь 1х сус)еьес)иеис)пВ Ьи)Тег !о а Йиа1 сопсеи!гаг)оп оЕ 0.5-1.0 ип)г/Н!. АСЫ 1 Н! оЕ йе с)1)игес! епхугие со йе яде оЕ еасЬ !иЪе ог гче11.
4. М|х йе геацепгь Ъу Е)1с!41пд ГЬе гиЬеь лй а Е)паег ог 5Ьа!4!па ГЬе писгошег р1а!е. 1Е песеььагу, очег1ау еасЬ геасйоп сч)ГЬ а с!гор оЕ 11КЬ! пипега! о11, сар ГЬе гиЪеь, апс! сепспйВе йегп а! 2000 грп| Еог 2 ьесопсЬ Еп а ш)сгоЕиВе ог Ьпейу ш а сеп!г)ЕиВе сч)ГЬ ш)его!)гег р1асе ас)ар!О Г5. Ма)се шге |Ьа| йе тшега1 о11 Ьая по| Ьееп ехроьес) |о 1Л| пгасПа6оп. 5исЬ ехроьиге сап саиье йе Гоггпасюп оЕ ро|епг 1пЬ|ЬГ|ош оЕ РСЙ.
Сус!е яециепс!иц со1ега|ея цгеа| чаг!аиоп ш йе агпоип| оГ |егпр!а|е )п йе ехгеияьоп)гегш!паг!оп геассюп. Егап| | Гепиошо!е |о яечега! Ьипг)гег) Ееппопю!ея оЕ чапаия |урга оГ ПоиЫе-яггапг)ег) ОНА чесиэгя Ьаче Ьееп гераггей |о погх чгец ГКгеи е| а1. !994). Ногчечег, йеге !я Пи1е ро|п| )п иппц пюге |Ьап 50 Ьпо)ея оЕшпр!аге ппсе |Ье сус1е-ье|р|епсшц геасиоп сопса|па оп!у -! ргпо1е аЕ гаг)го!аце!ег) оЬцопис1ео||це иЬояе сопсепсгаиоп члц Ьесогпе Пгпа!пц г)иппц |Ье РСК рЬаяе. А1йоицЬ риг)угег) РВА |ею р!апи у!еЫ йе Ьеи геш!и, сгице ргерагаиопя оЕ РВА |гогп Ьас|епорЬаце М | 3 р!ациея, ЬасшгюрЬаце Х р!а)иеь, апа ЫцЬ-сору-пшпЬег р!апп|а РНАЯ !п Ьассепа) со1ошея гпау а1яо Ье яециепсей а1Ъе|| ь й геаисег) етйаепсу ГКпйпап ес а!.
! 99 |; Кге|г е| а!. ! 994). Оиг ехрепепсе Ьаь йоч и йа| Егей!у цгагчп со!оп!ея апд р1аг)иея ргодисе |Ле Ьея| РВА яег)паосе. Рог ипхиогчп геаяопя, я|огаце оГ Ьас|егШ со!отея ог !апля оГ сеПя соп|а|пшц р!ациея ачегшцЫ а| 4 С Пгаьисацу гег)исая йе ап|оип| апг) г)иацгу оу ОНА яег)иепсе. ТЬ)я ргоЫегп сап Ье онегсо|пе Ьу пгеац щц йе со!ол!ея ог р!ациея оп ЙеьЬ ацаг р!а|ее Гр!саяе яее СЬаршгя | апа 2), Гоцопеа Ьу яег)иепс)пц оГ йе пеп со!оп!ея/р!ациеь. 12.5б СБареее12: УХА Бедиепе1п8 н .) о Р О с О О н Я "О й Р ОО оно "йо о ай о ОО с я ь=.
йОО С 'О и О й' о О И н с '" й .й „о н Р, онх с н о й О с а Н 1 О о н Р ~~о с Е л о н нО с с с о 1 3 "Е и с— о ЬО с о й д ю % М 1н ОО ю ю о О ОО с и с Э О О н с Е „о о н со" н Е аОО н~ Я О н Р." ,й ао й н 1ЯИ д л и о д Ой~ о к о ю м хЕ с о Е Е о о ) с о О с ОО ;й о о Ф н Е Е с о з й с' о,о и й с. Е н о з Ф '-О 'Я П о Е а о с о ОО Ф а й О с о Е о Я с. а й й Р Е н Р Е Е [ Я с 7. ' "о Е о н О.
с о ~'с з о Й ~.с О к о с 4Е ~з о о о с о йй Е ОО с н' о о с о о о- с НО -но й О с ОО .Я о й 'й нй с н .Е о 8д з ~" а И ~и 'О н н .с 1 ОО о о 'О Р, н о Е „ н с н х о и о ан Е 'а и с со аа Еа 8 е. р у с н Я х с 3 о О С Д О с с >'. о й дсо 8 Д н.й а н й Е >ОО и н н Е .с О О ас с с Е Ф 5 а й4 ю д С~ ыз ФФ ю Ю о О ОО с о о .с и Ф Б О о с с Е н о й О -.и Я И с о й й Р. о н о н о н ойн я и н о.й Е о Е Я о й с Я н н ОО "О О с а "о О.'1 О н о ОО„О .Х Я 'й .н н с д н й с о н 'ОЕ с со ~Ч ю Ю % о С хР, х О С н.
о о и с ;Я Е н з— н н д о аЕ Е н н д о Я н с о н й й ,Я о 1 о Н О .й .й О О "О с Я 3 М-- ОД н ,й н — о О н н о н н й н .й ~с Я а О а сн Е о х ан кй а е й й Я Е Я с о н— ,с й с Я о с Ф н х О ай о 'й .й й 3 о о .Ф о Я :Е 'е 'О н й с к О Я н Я О н О й с н Р. Е о с о н Е й Я Е н о н с О 1 н й о с о а 'й х н н о н йр о н .с н н О О н .с Я 'О 3 -и .Й ее х .Й „- да н о С "О с й о д н н о" Е н н Е 'С о Р н .й н о с Е Я а О с о и ФЮ с $ й о— н В н й Я Р О Е а н о н с Е 8 с с о о х 'с .й с и ЬО й О Р о Е н н Я .о н 'О й с н Р.
Е о с О н Р Е о.с а с о н х а 3 .с с Р н ко н ,Б Е н 1 .Е оЯ о й х н .й ,й о Е Б Е о с ао н .й " й о $ о й й 'Б Е Р, х н н' й Р н „Е Е с Ф н с ОО'Я н 'й н О"Д н н .с х о с Р,= Е З ао н й .й с з'Е о й о о н н о .О С и В Е а, Я с ОО о с й н ОО .й с "с н с о- Ф н с. Е с н о Ь й а. а о О ЕЕа' Р н Ф,Я с с о и Е-"Х о Ф-Е Е „а„ Е ЯЕ но„ ':Е о и о й ;Е.Е О с с с 3 с о й с Е Я 'Е с о с .с ОО й Е Е „. а х.й н 'я и .й с о О Ц аз о н й й н о н Р.'„ О й о н с "о О.
7. Е 'О ОО с н с НО Н 5 й О' о „ 'Е н и с Л о Р Е д ес Я о Е О ОО Ко .я с й И й н о н с о н айте х ~.Я н~'н с с Я.й М.й о' н н 3 н о 3 н а" ао й н 1ЕВ \ х .й О о а~ с с он ОО ОЕ Е С "О с й оас о О Ва 3 — о ас Я .й 'О с Рой р с Ф о ОО ОΠ— о -о С ОО О с с о с й н о н и й и Р, н Я н й Р.
Е Е Я н с 'О о 3 с 'НО О Я Е Р. о с \ н д Рго>осе! б> Сус!е Зе>!иепс1пу> Р>Ыеоху->пейа>е>! Яе>1иепе1пц Кепс>!оп» И1пд РСЯ ап>1 Епй-1аЬе1ей Ре>теее 12.57 О ) о Р 3 о Р. Я ) >О л о с М Я о Р .О ,О >Я .с~ о '» "О 3 О о 3, .О 3 од с Я Я„Р. о ОБо 3 -С С О о а„ Я 3 оБ»' Х 3 О )О О~О ~~Бп о со ОЯО о ХПФ Х О 33» Я )О 'О 3 о о О 3 с 'О О ») С 3 О О» о 'х 3 С Р, >О о Я Б 3» 3 3» а Р. Я Я но 3 .Я Я '3 Д ао Д 3 Д'с о 3 Р" О С Я ЯО-О» н»» с )3» Я Р 33 О 3» '.3 о Р, 3 "о .\ а»Б Я Р , с "О " с 3 3 .с о 3» Я' )- о \ дс "О 33 3» .с с о 3 О о с но Я 3 3' Д сс о Я о »С Я »Я .Ю о „с о Я с ) 3 -.с о».
)3» 3 с Я О о,, Я .Б йй-„ С,Р од Б о »Я 3 с »С о О» о с 'О»3» с с О С о с . 3' с ас о Я "о 3» с М Р. нс 3 Р. Я о с 3 .Б с 3» о с Й а о о с ~ 3~ О с с .- о с 3 ' ) .с 3Р 3» с с' .'- Я сс и х д х'я 3) Я с о »» с, Я „о о >.» о ос Я и 3, О а О»Я Я л.Я оБ 'и о О. соя» О'' с о 3 3» Р.С О 'П Оо Б о .,> о О о о а с о О о.Я Я <ю 3 и О 33» ос О' Я о ао с '33 с о 2 с 3» о Я >Б РОС»Я о .Х 33 3 ХОРА Р и 3 о с 3) х с М Я ,с О'о М с Ф о О 'О .6 .о:с 3 .с с с 3 3 33» с и с ОР. с Ж с о с 3 .С о о Я" с с О с с Я 'О 33 с,а о 3 .3» О 3 3 Л 3.» 3 с 3 С 33» с Б с о ~н с О» Х 3> 3 О о 3 с о с Я 3» о х .с я Я о »» Я Р с 3 Я =3 3 Я Я .3» о 3С а Я о о .х о с Я 3 О» Я 'с Я 3 3 Р, Я Я 3» 3) ) с б$ с 3 3, а,с 3 3 и Б с .О Я о ае с .с " и О 3,3.'» 4 о С .с Х ). Д Я Р. ~Я о 3 3 .О с с с с "с Б с 3 )3»- О О о Я х'хс» хоп с а»»Р» о асн О ас" Яс ЯД -4 "х О Я с с Б »с Я 3 -С С ОД о с а,„ РОЯР Яс> о С О О с '.о о.с с~„ К с я РС -Я РЯБ 33 Д с с ф "и о с Я $ ,с Б Я О \ О о .- аЯ 3 с о Я о ).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
