Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 135
Текст из файла (страница 135)
СагейлИу геточе СЬе ырегпатапС Ьу акр!гат!оп апд СЬеп ъчаей Сйе реИеС о/ 0(4А чдСЬ 500 р| о/ 70% СЬапо|. Айег сеп1пйлйайоп а1 тах!гпцт яреед !ог 3 гЫпиСеь ас гоопт СегпрегаСиге, гепюне Сйе еирегаСапт Ьу аьри.а1юп апс| СЬеп аИоъч сйе гета)и!п8 еСЬапо! Со ечарога1е ас гоот СетрегаСиге. Оью|не 1Ье реИеС о! ОНА !и 20 и| о/ Н О.
Апа)ухе 1.0 р! о/ СЬе ргерагаСюп Ьу аеагою Ие! е|ес- орЬогеа!х апд йоге сЬе гета!пдег о/ сйе ргерагайоп ас — 20 С Ргогосоl 37 Огдеоху-гледгагед 5ег)иепегле Веосггопе с1ггл5 Восгеггорйоее Т7 Т)ИА РО1углегаее Е5ес)иелаее) 12.33 МАТБ51АЕБ т 1МРОКТАМТ АП 1Ье тасепа)е гесрнгес1 Гог нес)иенс!пц масЬ 5ес)иепаее непПоп 2.0 аге соп1аспес1 !п )с!16, ео!д Ьу 1)5В)АтегаЬагп Гаае 5ссепсе, мгЫОЬ Гпс1иде а с1есаПес1 ргососо) денег!Ыпа ТЬе геаиепсе апд есере иеес1 сп СЬе еес)иенс!па геасс)оп. ТЫЕ Гсй !6 !пна1иаЫе Гог Г)гас-С!те ог оссае)опа! бес)иепсеге, Ьис К 36 ЕХРепе!Те. Айег аа!п!пВ ехрепепсе, !С птау Ссип ооС Со Ье паОГЕ ЕСОПОПнеа! со рсисЬаее 5ес)иепаее неге!оп 2.0 Гп ЬиПс апд 1Ьеп ааеегпЫе ТЬе гегпа!п!па геадепы )осаПу, СА1)Т1ОМг Р)еаае еее Аррепд!х 12 Еог арргорпа1е Ьапд1!пВ оЕ та!ее)а16 тат)сесЕ ът!1Ь <1>. Войег5 апГЕ Ьо!ОЕ!Оп5 Р!еаее аее Аррепд)х 1 Еог сотропеп16 оЕ 61ос)с ао1иоопа, ЬиЕЕегь, апд геадеп15.
О1101е 6!ос)с 601011006 1о ЕЬе арргорпа1е сопсеп1гапопе. Е)еюлГхед дьддед ГГ О Все со)д) Г)ГГЬГоЯге)соl !7 00 глар дМТРь апд ддМТРЕ, хсос)с ао!0!Голе Г0.5 тм) оГ еасй оГ ГЬе Гоиг дМТРе алд ддМТРз Р1еаае аее йе шуаппадап ране) ап РКЕРАЙАТЮМ ОГ 5ТОСК 5ОШТЮМ5 ОГ дМТРЕ АМО 3331МТРЕ ГОК ОМА 5ЕТЕГ)ЕМС!МС. 5х ГаЬе/ГлВ тех!иге алд ддМТР ех1ельюп)гегттадол тгхсогеа ГддСТР ддТТР ддАТР, алд ддСТР) ТЬеае геасдоп пнхсигеа сап Ье аааетЫес) Ъу пих!п5 сЬе та!шиеа ОГ сЬе аа!исюпа ЕЬаъгп ш ТаЫе 12-5.
ГогтатГде-)оадглд ЬоПег <1> 5ес)оелаее дГ)и!Гол ЬиПег 10 гим Тпа-С! ГРН 7.5) 5 гпм сПйюсЬгеЬО! 0.50 трйп! Ьайпе аегнгн а!Ънпнп Всоге ас — 20'С 5х 5ес)иелаее геасдоп ЬиПег ил!В АЕАС!„ 200 тм Тпа-С) (РН 73) 100 гпм МПС! 125 тм МаС! йоге ас — 20'С. ТАВЕЕ 12-5 5х ЕаЬе1!па М1хсиге апс1 ППМТР ЕХ1епа)оп)Тест)пас)оп М1х1игеа Еог 5ес)иепаае Кеасоопа 5тоск 5оситюмь ос амтРЕ Аяо иамтРЕ !Асс тгосоме5 см р1) Отнеа ЙТАсеята ЙТАстсоя Мсхтиае аСТР аТТР с)АТР аСТР 0.5 тм 0.5 тм 0.5 тм 0.5 тм ссеСТР аг)ТТР с)аАТР 0.5 тм 0.5 тм 0.5 пгм г)66ТР 0.5 тм 5 М МаСГ НТО 1аЪеПп5 сЫСТР с)с)ТТР с)г)АТР с)с)СТР 15 160 160 160 160 955 10 334 10 334 10 334 10 334 15 160 160 !60 360 15 160 160 160 160 160 160 160 160 16 16 16 16 ТЬе 5х 1аЬе))гга шашге саисаша нгс1аЬе!еа ОСТР, ОСТР, аиа г)ТТР, еасЬ ас а саисеисгасюи аГ 7.3 шм. Йайа)аЬе1еа г)АТР Ь ааг)еа ас 5сер 7 са а Виа! саисеисгаиаи аГ -30 рм.
ГасЬ аГ гЬе с)ОНТР ехсеиа)ан!сегшснас)ан иихсигеа саисагна а11 Ганг ОНТРЕ ас а саисеисгасюи аГ 360 рм ана а янк)е г)ОНТР ас а саисенссаиаи аГ О 36 рм. ТЬе 5х 1аЬеПир ннхшге ана ехсеияаийеннгиасюи инхшгеа йаим Ье йареиаеа си 50 р1 а1Цнаь аиа асагег) !гати ас — 20"С. СТЬеи ае9неисснк шеи р)асса гЬас аге гюЬ ш 6С ягнсснге, нас Ьасе аиа!ар шсЬ аа 7с)еааа-2н ОСТР аг ОГ!Р гн Р1асе аГ ОСТР !Г наша 7-4еагас)СТР, яшр!у гер)асс сЬе СТР Ги аП йе ООНТР ехсеияанйегиииаиаи иихснгеа хай аи еишша1аг агнааис ас сЬе Ьаае аиа1ар ГГ няик 4)ТР ягЬяинсе 30 р) а1а 03 нгм аеас!с аа!аиан а! сПТР 1аг ОСТР нг йе Ех )аЬе!гнк ги)хшге аиг) г)есгеаае йе антенн! аГ НО са 940 р1.!и сЬе гЫНТР ехсеияаийегиниаааи инхшгеа санса!ясак й)СТР, й)ТТР, ана й!АТР, шЬгисше 360 р! аг а 0.5 шм яас)с 4РТР аа)нс)аи саг 46'1 Р.
Ги сЬе ехсеияанйегиниаиаи ннхшге саисасиснк 446ТР, тЬайше 320 р) аГ 0.3 шм асас3с аа1нпаи аГ 4!ТР Гаг с)СТР, Оесгеаае йе антенне аГ ООСТР са 3.2 р1, аиг) Оесгеаае йе га3шне аГ Нго Са 187 р!. Ргососо!3: Р(с(еоху-тес((агег( 5едиепсспе Кеасг(опс (Гс(пдВасгегсорЬа~е Т7 РИА Ро!утегасе (5ес)иепасе) 1235 1пссеас) ос шсегпа1 1аЪе1!пц ъч!сЬ !'сР)с)АТР, саггу оис сее)иене!па сч!ГЬ а 5' сср-!аЪе!ес) о!)хоппе!ос!с)е ргипеп 1п йь гасе, 2 Сс! (-5 х 10' српс; -05 пх) ос йе гайо!аЬе!ес) рппсег апс) 2 и! оГН О аге )пе!ис(- ес! 1п СЛе геас0оп гшхсиге сп р!асс оГ йе ип!аЬе!есс рпгпег (5сер 1) апс) (ссР)с)АТР (5сер 7).
А!1 осЬег перс геша)п йе сасне. ТЬе 5' сегпнш' ос о!)хоппе!еос)с)ес аге цепега1!у !аЬе!ес) Ъу сгапссег оГ (у-"Р1 Ггогп !уасР)АТР !и а геаес1оп саса1усес) Ъу ро!упие!ео0де )с!пасе. Рог с)еса!!с ос йе !аЪе!!пд геаес1оп, р!еасе сее СЬарсег 10, Ргососо! 2. Сес)$ссГссце5 апс! ссоЕог5 М(егоуиае госог ог ас)ар!ось Гог исе мсЬ 0.5-т) тсегоГиае сиЬес ог 5счспд-оис госог апд ткгосссег-р)асе ЬОЫег Ге.д., 5огча10, 1(пес( насЬ ро1узсугепе Гоат ог гиЬЬег расус прес!а! Ес!сс!рсссессГ Мсегоуиде сиЬеь (0.5 т0 ог МсегоЬсег р!а(ес ГГ(ех!Ые, ЬеарасаЫе, ьий 96 Гс-ьЬарес( сче(1ь оà — 300 01 еараессу) Р!еаье сее сЬе )пуогшас!оп ране! оп М!СКОТ(ТЕК РГАТЕ5.
СУагег Ьайь ог Ьеаг(па Ыос)сь ргеЬеагес) Со 37 С апс) 65 С метноо А сМРОКТА)ЧТ И'Ьеп вес)иене)пд с)оиЫе-с!ганс)ес) р!асгпЫ ОЬ)Ас СЬаС Ьаче а)геас)у Ьееп с)епа(игес) апс) аппеа1ес) Со а аес)иенс(пд рпшег (РгоСосо! 2), !дпоге йе Кгсг Нчо сгерс о! СЫс рго(осо! апс1 Ьеуп аС 5сер 3. 1. То а 0.5-ш! шкгоГнце снЪе ог чге!! оГ а пнсгоНсег р1асе, асЫ: с!па!е-с!ганс)ес) сешр!асс Вг(А (-1 )сц/и1) 1 и! о1!цопие!еоСЫе рпшег (-1 па))с!) 30! 5х 5еииепасе геассшп Ъиссег спаса)п!па ги! МОС1, ог МпС! Н,О Со!О и! 2. 1пснЪасе сЬе НРЬс1у с1осес) снЪе 1ог 2 ш(пнсес ас 65'С. Кегпоче йе снЬе Ггош йе счасег Ьай апс) а11оъч н со соо! со гоосп сешрегаснге очег йе сонгсе оГ 3 — 5 пнпнсея 5огпе спчея!цасогс ргесег со соо! йе аписа!!пс геаес1опс псоге с!осч!у очес сЬе соигсе ос 30 пиписес сп а ыпа11 Ьеа6пц Ь!ое)с ог Ьеа!сег ос счасег.
1п оиг ЬапсЬ, ЬосЬ с!осч- апс1 Гая-еоо1спс гес!шепа у)е!с) сессиепее оГ йе саше ссиа1!су. 3. )А(Ь11е йе ргнпег апс! сешр1асе аге соо1(пц, сЬасч сЬе 5х 1аЬе!шд анс! с)йЬ)ТР ехсепяоп)сегпнпаНоп ш(хснгес апс! гас(10!аЪе!ес) с!АТР. 5соге сЬе сЬасчес! со!нсюпс оп (се. 4. ТгапсЕег 2.5 сс! оЕ еасЬ сЫХТР ехсепяоп!сегпнпаНоп пнхшге спсо серагасе 0.5-ш! ш(его!нее снЪес ог шсо (пйч)сЬла1 арче!!в оЕ а пнсгоНсег р1асе со!ос-сос)ес) ог 1аЬе1ес1 С, Т, А, апс) С. ТЬе Ни)с) сЬои!с) Ье с(ерос!сес) ас а йор!ес оп сЬе сча!! оГ йе сиЪес ог сче!!с, пеаг йе гип.
5. Ма)се а ГсчеЕО)3 сИнсюп оГ сЬе 5х 1аЬе1(пд пнхсше сп ке-со!а Н О. А чо1шне оГ 2 р1 оЕ сЬе с)11нсес( !аЪе!(п5 пнхсш е )с гес)н(гес! Еог еасЬ сешр!асе сесрзепсед. 6. %!Осе 5ес)непасе сп ке-со!д 5ес)непасе й1нсюп Ьнйег, сч(сЬ ог сч(сЬонс асЫ(с(оп оГ уеая ругорЬосрЬасаье, ас с1еаспЪес1 аЪоче ш Масепа1я А чо1ише оГ 2.0 01, сопсашспа -З.О иши оГ 5ес)иепасе епсуше, !с гес)и!гес) Гог еаеЬ сегпр!аге сециепеей 5соге сЬе й!шес1 сосуде оп ке ас а!! с!шее. 12.36 СЬарсег 12: ОМА 5ег(иепс!п8 РугорЬоьрЬагаае 'ь иае6 Со ргенепС гебис()оп си Ьапб (п(епя(у 6ипп8 рго!оп8е6 спсиЬаСюп ос ьег)иеис(п8 геасбопя ТЬ(а гебисбоп осени Ьесаиье 0МА ро(угпегааеь 0пс!06(п8 5ег(иепаае) сап са(а!ухе а геас6оп Ьесъчееп (Ье Ьаае ас йе 3' сеггп)ииь о( а 0ХА сЬа)п апд ругорЬоьрЬасе 'юпхт (и во(и6оп.
ТЬе ргобисса ос сЬе ругорЬоарЬого!ус)с геасбоп аге а Сгее 6ХТР гпо!еси!е ап6 а 0(4А сЬа(п (Ьас 'ь поч опе Ьаае аЬогсег. РугорЬоьрЬого!уа)я чЬ(сЬ )а сЬе гечегье о( ро!угпег(хас)оп, иссосав ас ап (пь(8п(Исаи( гасе (и гповс 0йАаес)иепс(п8 геас6опя Ноч ечег счЬеп сЬе геасбопь аге (псиЬасед (ог а !оп8 6гпе ог ч)сеп 6(ТР Ь иье6 (и р(асе о( г!СТР, ругорЬоьрЬого!уа(а гпау Ьесогпе а ргоЫегп. 5(псе йе е0)с(епсу о( ругорЬоарЬого!уаь чапеа ассог6)п8 со йе пис!еосЫе ьег)иепсе ас сЬе 3 епс! о( 0ХА сЬа(пя йе )псепа(с(еа о( аогпе ьег)иепс(п8 ЬапсЬ аге гегсисег! счЬ)!е ойегь аге ипа((ессеи. ТЬе сопкес)иепС чапасюп (п Ьап6 (псепясу сап Ье ргечепсед Ьу иа(п8 Ь)8Ь сопсепсгас(опк о( сРЧТРа ог Ьу )пс!ис)(п8 уеачс ругорЬоя РЬасаье (п (Ье геассюп гп(хсиге (ТаЬог апд 8)сЬагсЬоп 1990; Расе! ес а).
1991; Ги!(ег 1992). То саггу ош сЬе !аЬе1сп8 геасс!оп, агЫ йе Со11очпп8 со сЬе !0-61 апиеа1!п8 геассюп оЕ 5сер 2: й!исес! !аЪе)га8 иихсиге ((гоги 5сер 5) 2 и! О.! М ййгойге(со! )и! !о-ыр)ИМАТР, (а-ир)6АТР, ог (а-'г516АТР 05 и! йТШег! 5еаиеиаке (-!.0 ии)Ь(и!) 2.0 и! М(х (Ье сошропепск оЕ йе геассюп Ъу 8епс1у саррш8 йе ьЫеа оЕ сЬе сыЬе ог пысгоЬсег р1асе апг1 сЬеп шсыЬасе йе геассюп Еог 2 — 5 пыпшеь ас 20"С. 5соге йе 6()исес$5гаиепазе гп (се; 6о пес а)!осч гс со счаггп со атЬсепс гоогп сегпрегашге. 5соге сЬе сопсепсгасе6 а!ос(с о( епкуисе гирр!)ед Ьу сЬе тапи(ассигег ас — 20'С, сс спау созе ас6чссу )Е гсоге6 !п ап )се Ьис)гас Сог Ьоигх Точ агг( сЬе еис) оЕ сЬе !аЬе1!и8 геасЬоп, ргераге со вес ыр йе сеппспасюп геассюпь Ьу ргесчагш!п8 йе 1аЬе1ег) пысгой8е шЪеа ог пысгосиег р1асеа со 37'С. ТЬЬ згер Ь строг(оп(! ТЬеп сгапаЕег сЬе 3.5 Сс! оЕ сЬе 1аЬе1!и8 геассюп со сЬе сча1)ь оЕ еасЬ оЕ йе ргесчаппес( 1аЬе(ег) ш!сгоЕы8е сыЬеа ог со сЬе кЫеа оЕ ргесчагшег) пысгойсег сче!)а сои(а!и!пц йе арргорпасе г))деоху сегиыиасог ш(хсыгеа (5(ер 4 аЬоче).
Р1асе сЬе ш(сгоЕы8е сыЬеь си а ппсгой8е ас гоот сетрегасиге (ыае арргорпасе госог ог аг(аргоса Еог 0.5-пс1 сыЪеа ог р1асе !пяте с(есар!!асей !.5-гп) сыЬеа), ог р1асе сЬе шкгойег р)асеь (и а сепспры8е ас шот сетрегасиге ес)ы!Ррес) чг((Ь аи арргорпасе аг1арсог. СепспЕы8е сЬе С, Т, А, апс( С сыЪеа ог р1асев Еог а Еечг кесопс(ь ас 2000 грсп со пых йе согпропепса оЕ сЬе геассюия 1пипес!(асе1у сгаиаЕег йе геас6опк со а Ьеасш8 Ыос)с ог а чгасег Ъай Еог 3 — 5 ш(иысеа ас 37"С.
5сор йе геас6опк Ьу ас)г)!пц 4 )с! оЕ ЕоппашЫе-1оас)!п8 ЬыЕЕег. 10. ТЬе геасс!опа шау Ье ксогес) Еог ыр со 5 с)ауь ас — 20'С ог апа!урнес! с)!гесс)у Ьу г1епасыпп8 8е1 е1ессгорЬогеяк (Ргососо!а 8, 9, ог !О, 11, аис1 !2). АЕ(ег Ьеас с)еиасыгас(оп (2 шшысеа ас 100 С) апс1 с!шс1с соо1!п8 оп ке, 1оас( 3 61 оЕ сасЬ оЕ СЬе С, Т, А, апс( С с еас6опз шго !пг)1- чЫыа1 ч е11ь оЕ а аес)ыепс!п8 8е1. 5ЕЕ~БЕМС1МС КАМСЕ Тйе геасйоп сопсййопа )и 1Ма ргогосо) Ьаче Ьееп орйгп!аес) го оЬ)а)п Гйе асс)оепсе о1 0МА 1у)пе ор )о 300-400 пес)еог!с)еа йот гйе 5' 1еггп)поа о1 гйе рпгпег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
