Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 131
Текст из файла (страница 131)
Кеер йе геша!пдег оЕ йе ЕЗДА аг 4"С хчЬПе ЕЬе Пе! !5 гипп!пп. !Е 1Ье дех!гегЕ яхе гапде оЕ 5Ьеагед РЕЕА Ьах пог Ьееп оЪга!пей 6адгпепг йе хагпр15 адат нх!ПВ а!1егед сопгагюпх. ЕЕ йе яхе гапде Ь ассергаЫе, ргосеед чдй еп11-гера!г оЕ 1Ье РХА 55 гЕехсг!Ьед !п 51ер 5. ТЬе гегпиш ргог1исед Ьу пеЪи1пеадоп апд аошсагюп аге Ь!еЫу ЬегегоВепеоия сопяадпц оЕ Ыипг-епдед апд Егауед епда, чч!й апд чч!ЕЬоиг рЬоарЬаге геаЫиеа. Весаиае оп!у а Егасгюп оЕ гЬеае пю1еси1еа сап Ье гераггес1 Ъу ЕЕЬЕА ро1угпегааеа, ЕЬе еЕПс!епсу чдй ччЫсЬ ЬудгоагадсаПу аЬеагед 13ЬЕА сап Ъе с1опед ш Ьас1едорЬаце М13 чесгога !5 цепегаПу 1очч. Ноччечег, 5 — 10 рц оЕ аоп!сагед, герыгед, апд 5!ке-ае1есгед гагКег ЕЗДА КепегаПу уге!да аечега! ЕЬоиаапд гесошЬгпапс с!опеа.
5. То йе ЕгаПшепсед ЕЗЬЕА Е-25 р!) агЫ: !0х Ьасгег!ПРЬаде Т4 РЬЕА ро!угпегахе Ьнпег 2.0 шя ю!Ш!оп оЕ Еонг ЙЬЕТР5 Ьасгег!ПРЬаде Т4 13ЬЕА ро!угпегахе Н,О 4.0 р! 4.0 р! 5 нши го 40 РЛ !псиЪаге ЕЬе геасдоп Еог 15 пипшеа а! гоош гешрега1иге, апд ЕЬеп агЫ -5 ишга оЕ ЕЬе К!епоъч ЕгаВшеп!. Сопдпие шсиЬадоп Еог а Еигйег 15 пипигеа а! гоогп 1ешрегагиге. ТЫ5 геасгюп н555 пчо РНА ро!уп1ега555 го герак 1Ье 6ауед епй оЕ 1Ье РЬЕА Егадгпепгх цепегагег! г!Пппд Ьудгодупагп! с 5Ьеаг! ПВ. Васгег!ПРЬаце Т4 РЬЕА ро!уп1егаге са151укех 6!Впд оЕ гесеыегЕ 3' гегппп1 апд йе ехопнс1ео!Рдс гепюч51 оЕ ргоггнд!ПВ 3' гепп1пн ТЬе К!еп01ч Егарпепг ргочгде5 а хесопй гпеапх го Я1 гесехгед 3' геггп!ПЕ Р!еахе гее йе юЕоггпагюп рапе! оп Т НЕ КЕЕС ОЪч ЕКАСМ ЕЫТ ОЕ Е.
СОЕ! РНА РОГУМЕКАВЕ !. А ч!5соиа РНА 50!нг!оп соп1а!и!пе а!усего! !5 р!асед !п 1Ье пеЬН!Ыег. ТЬе пеЬН!!гег !5 аиасЛед го а и!!госдеп гап!г. Ргеая1ге Егогп 1Ье и!Егоаеп епГег!па 1Ье сЬагпЬег аурЬопа йе РХА ао!одоп Егогп йе Ьоиогп оЕ йе сЬатЬег 1о йе гор. ТЬе 50!НПоп ех!55 1Ье ярЬоп апд 'ипрас15 оп а япаП р!ах!го сопе анарепдег! пеаг 1Ье 1ор оЕ йе сЬагпЬег, йна 5Ьеаг!пп йе РХА. !сера!г, Р!3одр!3огу!а6оп, апе! Ь1ке ае!ест!оп о1 Р!ЧА Р51А ао101юп ехпа 110п1прпоп апи попа очегйе 142 аа П впгега аПб 1гпрас15 оп р1аапс СППЕ 12.18 СЬаргет 127 ГГХА $ес)иепс!08 6.
Риг!Еу гЬе РЯА Ьу ехсгасВоп юЬЬ рЬепоЬсЫогоГопп. ТгапаГег !Ье ас(пеопв (иррег) рЬаае го а ЕгевЬ сиЬе, апс) ас1)пвг (Ье 5о1иооп со 0.1 М )х(аС!. Ресонег йе Р)х)А Ьу ргесгрЬапоп ъчЬЬ 2 чо1шпеа оЕ есЬапо1. ЖааЬ ГЬе ре1!е! Уч!ГЬ 70аха есЬапо1. 7. Кео!550)че йе ргесгр!гагес( Г)ХА ш 25 Н! оЕ ТЕ (рН 7.6). В. СошЪгпе !Ье ЕоПоипп8 гп а ш!сгоЕО8е спЬе; Егаашспссй РЬГА 23 н! гох ра1упис1саВс1с Ыпахе Ьи0сс 3 н! 20 шм АТР 3 н1 Ьасссг!арЬаве Т4 ра!уиис!сасЫс Ыпахе ! ипЬ Вассах!арЬаве Т4 ра1упис!еасЫе Ыпахс сага!уссх сЬс рЬахрЬогу1аВоп аЕ ГЬс 5' ссгпиш аЕ йе Ыипс-спйсй РЫА Есаашспгх.
ТЬЬ ссср Ь пас гпапйагагу, Ьис, !и гиахс сахсх,!сайх га пгагс сй)с!спс 1!Еасюп аЕ ГЬс Егавшсигх га ГЬе чсссаг. 9. 1псиЪасе !Ье геасС!Оп Еог 30 ппписеа аС 37"С. 10. РОПЕу сЬе Ега8шепса оГ Г))х)А оЕ ЕЬе с)еягес( ыке (О 8 — 1.5 1сЬ) Ьу е1есггорЬогеяа гЬгоиВЬ а 1осчше!Вп8-сешрегашге а8агоае Ве1 (0.8ага) ог 5ага пеисга1 ро!уасгу!оп!с)е Ве1 (аее СЬарсег 5). Та пашпорте ГЬс рохяЬг1ггу аЕ сопгапипаооп, 1санс хсчсга1 1апсх сгиргу Ьспчесп ГЬе Егавшепссй сагвег РЬГА апй сЬе ша!сси!аг-хчс!ЕЬГ шаг1ссгх. ТЫх Ь ехрсс!а!1у ипрагсапс МЬсп иягщ Ышнепйсй !)ЫА8 ах шагасгх з!псе йсхе аге 1гвагей га ГЬс чсссаг !3ХА югй пшсЬ ЫЕЬсг еЕЕс!сосу ГЬап йе хЬеагсй гагвес РВА. 11. Кесочег ЕЬе !аг8ес Р)х)А Егопг ГЬе Ве! Ьу опе оЕ !Ье гпе!Ьос(5 с)еасг!Ъес( ш СЬарсег 5.
ГГ!550!Уе йе риПВес1 Р)х)А !п 25 Н1 оЕ ТЕ (РН 7.6). 12. СЬес1с ЕЬе !псеВПсу апс) гесонегу оЕ сЬе рпггТгес) Р)х)А Ъу апа(ух!08 ап а)!с)иос (1.0 Н1) Ьу е)ессгорЬогея5 сЬгопВЬ а !ага а8агоае Ве!. Е!шГ!оо Го ЧесГог 0ХА 13. 5е! ир а аеПе5 оГ се5( ВВайопа сопса!шп8 50 п8 (-0.01 рпю1е) оЕ )!пеаг!гег) апс) с)ерЬ05- рЬогу1асес( чессог Г))5)А апс) !псгеа5!08 сопсеп!Та!!Опа оЕ Ега8шепсег), Ыипс-епс)ес), РЬо5- РЬогу!агес1 гагВег РЫА (р1еаве 5ее ТаЫе 12-2). ТАВЕЕ 12-2 Теа! Е!Вабоп Кеасбопа оЕ РерЬоарЬогу!а!ес( Чес!Ог РЫА Т4 Р(ь)А 307а РЕС ТТРе ОГ Г)п!А 10Х ЫСАТСОМ АТР (5 спм) Е!ОА5е (ОРт!ОмАЕ)' Тпве А В С Н,О (н1) Вогееа (Н!) (н1)ь (ЧЧе!55 ()м!т5) (Н1) 2.0 *А = 50 ив аЕ Еисаоьсй, йсрЬахрЬасу!асей чсссаг (!и а ча!ишс аг 2 и!); Е =. 20 ив й Ьассспарьавс Х 0МА аг ФХ! 74 ау 0мА с!сачей ю сашр!сйаи я!ГЬ А!и! (!и а ча!шис аГ 2 Н!); С = Есавгисигсй, Ыииосийсй, РЬахр!югу!агсй Сагвсг 0МА. ТиЬсх 4, 5, 6, аий 7 хЬаи!й сап!а!и ГО, 20, 50, сий! 00 ив аг яхсхс!ссгсй, Гсавшсиссй Сагвсс 0МА, гсхрссйчс!у (100 ив агяхсхс!ссгсй Ггаяисии = -О! Ргаа!с).
85агис саииисгс!а! !!Еахс Ьисссгх сап!а!и АТР. НЧЬсп ияив хисЬ Ьисссгх, агав йс АТР 'ТЬс сгасгсису аг !щаиап саи Ьс 1исгсахсй Ъу аййпв РЕС 8000 (3088 я/ч) га а саиссигсасюп аГ 588 !и ГЬс Еиа! !щапап иихшсс (хсс СЬсрссг г, Ргасаса! гч). !с Ь иирагсаас са ясгш ГЬс хгаса ю!ибап аЕ РЕС 8000 га гаага ссшрсшгисс ЬсЕагс аййав и ах ГЬс !ахс сатрапсис аГ йс !щасюи гсхсг!аих.
0ХА сап ргсссраасс ас са!й гсшрсгасигсх Ьаш ю!ипаих саиса!иищ РЕС 8000. 5.0 6.О 3.0 3.0 3.0 3.0 + 3.0 !.0 !.о 1.0 !.О !.О !.О !.0 !.О !.0 !.0 !.О !.0 1.0 !.О 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 !.6 1.6 !.6 !.6 !.6 !.6 !.6 Ртотосо! 1: Сепетат(оп о1" а!.тЬтату о7 Вапдопс(у Очет1арр!пе РХА 1пвегь 12.19 14. !псгос1исе а1прлоь оусЬе севс 68ас!оив (исо сотресепс Е.
со6 оусЬе арргорпасе ягаш Ьу е1ессгорога6оп ог сгапвЕоппа6оп (р1еаве вее СЬарсег 1, Ргососо!в 23 — 26). Р1асе сЬе Ъассепа ои тпейа сои!а!и!и8 !РТА апс1 Х-Па1. 1псиЪасе йе р1асев очеги!8Ьс ас 37'С. ТЬе ригрове оЕ сЬтв всер Ь со 6пй а сопсепсгасюп оЕ Ега8шепсей саг8ес РХА сЬас пйпишхев сЬе пшпЬег оЕ гесогпЬ!папь сопса!пш8 аг66сса1!у Говей саг8ес Ега8шепсв, тчЬкЬ сап сатир!касе авветпЫу оЕ йе 6па! РХА вес!иепсе. ЪттЛеп весссп8 ир а 1аг8е-вса!е 1т8асюп геасс!оп (5сер сб), ачоЫ ияп8 васигас!п8 9иапидев оГ саг8ес РХА; тпвсеай, гье ап апюипс оЕ саг8ес РХА сЬас ргойисев а тпойевс тпсгеаве (-5-Ео!й) сп гЬе пшпЬег оЕ гесотпЬ!паис с1опев очег Ьас(с8гоипй. 15. ТЬе ЕоПоъпи8 дау, соиис сЬе ишпЬег оГ Ыие аид со!от1евв р1ас)иев.
ТЬе пшпЬег оЕ гесогпЬспапь оЬсашей чйсЬ Гга8шепсей, Ыипс-епйей саг8ес РХА вЬоп1й Ье -соЕо1й !отчет сЬап сЬе пшпЬег оЬсашей тч!ГЬ ап еци!часепс агпоипс оЕ Ыипс-епйей РХА ргерагей Ьу гевсгксюп с68евдоп (е.8., сЬе А!и!к68евсей 2 ог фХ!74 РХА ыей тп сЛе спида! севс !!8ас!опв). !Г сЛе уте!й оЕ с!опев ь !отч, сгеас сЬе рте рагасюп оГ РХА Ега8шепь виссевяче1у тч!сЬ са!Е а1!са!!пе рЬоврЬасаве апй пшп8 Ъеап пис1еаве, апй сЬеп гереас яерв 5-15 оГ сЬтв ргососо1. рог ргососо1в оп сгеадп8 РХА вч!сЛ С!р апй пшп8 Ьеап пис1еаве, р!еаве все СЬарсег с, Ргососо! 20. 16. 5ес ир а 1ат8е-вса1е 68ас!оп геасбои ив!п8 сЬе ииттши агпоипс о16а8шепсед, Ыиис-еидес1 саг8ес йас ълП усе!д викс!еис гесотпЪсиапс с!опев со сотпр)есе сЬе вет)иепс!и8 рго!есс аид сгаив(опи Е.
сой чч!ГЬ сЬе 68асед РХА. 1исиЬасе сЬе р1асев очегш8Ы ас 37'С. ТЬе 8оа! ь со сочег сЬе саг8ес Гга8шепс гйсЬ ас !еавс а бчеЕо!й гейипйапсу оЕ гесоптЬспапс с1опев. р!8иге с2-5 вЬогь 8гарЫса! р1оь оЕ сЬе арргохипасе пшпЬег оЕ с1опев сЬас шыс Ье ве9иепсей ю асЫече 95ва сочета8е оЕ а йоиЫе-всгапйей саг8ес РХА. 17.
ТЬе ГоПоипи8 с1ау, соПесс сЬе р!асев аис1 всоге сЬе теви1с!и8 сгаивуоппаиь иис1ег йе арргорпасе сопйсюив ии61 тес)и!гед. Ргераге сетир1асе РХАв Егоис а вепев оГ !ийчЫиа1 со!ог1евв р1ас!иев ав с1евспЪес1 ш СЬарсег 3, Ргососо! 4. Р!с(г апй ргора8асе гесоптЬтпапс Ьассег!орЬа8е МГ3 р!а9иев ав вооп ав ровяЫе (р!еаве вее йе рапе! оп рсСК!ХС РСАГ2С365 ш СЬарсег 3, ргососо! 2). 5!псе сЬе ЬассегсорЬа8е рагск1ев ЙКгье сопвЫегаЫе сбвсапсев сьгои8Ь сЬе сор а8аг, р!ат(иев 8готчп Еог ехсепйей репотЬ оЕ сапе (> ! 2 — !а Ьоигв) ас 37'С ог всогей Еог а Гевч йаув ас 4'С Егециепс!у Ьесопте сопсаш!патей. ВосЛ сЬе спсепясу апй пшпЬег оЕ Ьас(с8гоипй Ьапйв тпсгеаве счЬеп всп8!е-всгапйей РХАв ргерагей Егопт о1й р!ациев аге чьей сп вециепс!п8 геасйопв.
СгочИЬ о1 КесопсЬ!пап1 С!опе5 о1 Вас1епор!саде М13 1и а 96-1оЬе Готтпа1 1ийчЫиа1 со1ог1евв р1ас!иев, рк1сед ав девспЪес1 ш СЬарсег 3, Ргососо1 2, гпау Ъе 8гоити ш 2-ис! Ъассепа! си1сигев си 15-ти! сиЪев. ТЬе гесотЬ)паис чи.ив рагбс!ев саи сЬеп Ье гесочегес1 апс1 РХА рип6ед Еготп еасЬ ГпйчЫиа1 си1сиге (СЬарсег 3, Ргососо!в 3 аид 4). ТЬе сетр1асе рип6сасюп ргоседиге Ь в!осч аид иисч!е!ду, япсе оп!у оие ог ьчо доаеи с1опев сап Ъе ргосеввес1 ас а сипе. Лат8е-вса1е вет)иеис!иц рго!ессв суркаПу тес)и!ге тапу сЬогьапсЬ оЕ РХА сетр1асев.
Ргерага6опв оЕ яи8!е-всгаидед РХА ятр!у саппос Ье ргодисед ш а спие!у аис1 есоиоиис ГавЬ- юи Ьу тейосЬ сЬас тес)шге ехсгас6ои сч(сЬ ог8аик во1чепь апд ти!с!Р1е сеисг!628ас!ои всерв. 1ивсеас1, тпавв ргос1иссюп оГ Ъассег!орЬа8е М13 сетр1асев Гог 1аг8е-вса!е вес)иепс(и8 ПеиегаПу тичо!чев рип6са6оп оЕ ЬассепорЬа8е раг6с1ев ог яи81е-всгапдед РХАв ив!п8 61сгабои (Ерегоп 1986), та8иес!с ЬеасЬ (АЫегсои ес а1, 1992; ЪЧаЫЬет8 ес а!. 1992; Насч)с(ив ес а!. 1994), ог рагата8ие6с рагск!ев (Рту ес а1. 1992; ЪП1воп 1993) си соп!ипсбои счПЬ гоЬо6с дечссев (е.8., р1еаве вее Магс1Ь аис1 Кое 1989; 5иисЬ ес а!. 1990).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
