Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 128
Текст из файла (страница 128)
Рп плеть 1п епхушабс кет)иепс!пВ геастюпк, рппипд оГ Ел!к!А куптЬек!к !к асЬ!ечес1 Ьу тЬе ике оГ а купйепс оПцопис!еот!т!е сошр1ешептагу со а креслПс кетрлепсе оп тЬе тетпр1ате ктгапд. 1п шапу сакек, тЬгк Еисгойисйоп 12.7 сетр1асе сз оЬсашей аз а яп81е-ягапс1ес1 Р)н)А пго1еси1е Ьу с1отп8 йе саг8ес Р!ч)А Ега8тепс шсо а ЪассепорЬа8е М13 ог РЬа8етсд чессог (р1еазе зее СЬарсег 3). Ноччечег, «Ез а1зо розяЫе со изе сЬе Ва«8ег тесЬод, а1Ье«чч(сЬ зопсе 1озз оЕ ейк(епсу, со зес!иепсе с1епасигес1, с)оиЫе-зсгапдей РХА то!еси!ез (е.8., йепатгей р!аяпсй РХА). 1п есйег сазе, сЬе ргоЫет оЕ оЬсас«1«8 ргнпегз сЬас аге согпр1егпепсагу со ап ип)споснп зес(иепсе оЕ РХА Ез сЬеп зо1нес1 Ьу ияп8 а "ип(негза!" рптег сЬас аппеа1з со чессог зессиепсез Пап!и«8 сЬе саг8ес РХА. Ртчегза! Рпгпегз аге суркаПу 15 — 30 пис1еосЫез ш 1еп8й апд аге ачаПаЫе Егот а!аг8е пшпЬег оЕ сопипегсса1 согпратез.
1п ас(йсссоп, тапу сотратез зеП рптегз йас Ьаче Ьееп йея8пей со аПочн зес!иепсш8 оЕ саг8ес РЫАз с1опей спсо а напесу оЕ геяпссюп з(сез 1« й(ЕЕегепс чессогз. Рог десаПз оЕ ргппегз сЬас аге сопипегс(аПу анас!аЫе, р1еазе зее АррепгПх 6. Тессср!аЕе8 апг! Яга$еуе8 Опе оЕ йе гйгсиез оЕ сЬе 8а«8ег тесЬой оЕ зесрсепсш8 сз «з аЬс!«у со ассопнпойасе спапу й)ЕЕегепс сурез оЕ РХА сетр1асез апд тапу сурез оЕ зес!иепсс«8 зсгасе81ез. Рог ехатр1е, сегпр!асез сап Ъе: ° $т81е-зстаийей В)нА Езо1асей Егот гесотЬгиаис М13 ЬассепорЬа8ез (р1еазе зее СЬарсег 3 апс1 Ргососо1 1). АЬегпа6че1у, я«81е-зсгапс1ей сегпр1асез сап Ье Вепегасес) зупсЬескаПу 1« азупппеспс РСКз (!пп(з ес а!.
1988; ЪЙ1зоп ес а1. 1990) (р1еазе зее СЬарсег 8). ° ВоиЫе-зггаийей р1азтЫ ВЬЕА сЬаг Ьаз Ьееп йеиагитей Ьу Ьеас ог а1Ьа11 (СЬеп апй $ееЪиг8 1983) (р1еазе зее Ргососо1 2). ° ВоиЫе-зггаийей РСЯ-атр1фей ВХА йеиагигей Ьу Ьеаг ог аЕЬа11 (СуПепяеп апй АПеп 1993; Као 1994) (р1еазе зее Ргососо1 2). ° ВоиЫе-зггаийей ВХА й18езгей снсгЬ аи ехопис1еазе го ехрозе а з(и81е-зггаийей гетр1аге (Н18исЫ апй ОсЬтап 1989; Е. 1.ее ес а1.
1992). ° РоиЫе зсгапйей ВМА йепасигей Ьу Ьеаг йигси8 сус1е зедиепс(л8 (Миггау 1989) (р1еазе зее Ргососо1 6). Расед ъчссЬ йезе розяЬП(ссез, П сз «прогсапс со йене!ор ап очегаП ягасе8у сЬас са(сез Епсо ассоипс сЬе яхе оЕ йе геЬПоп со Ъе зес)иепсей сЬе асс«гасу гессшгей оЕ йе зес!иепсе, сЬе пас«ге апс1 апюипс оЕ йе сетр1асе гес!шгес(, апй сЬе гезоигсез ачаПаЫе. РСК-Ьазес1 тесЬойз Ьане йе асЬ апса8е оЕ Ьу-разя«8 сппе-сопзипип8 зсерз оЕ с1отп8 апс1 рип6сабоп оЕ сетр1асе РХА апс1 аПоМ«8 пис1еосЫе зес!иепсез со Ъе ссесегтшей Егогп сгийе сетр!асез, Еог ехатр1е, 1узасез оЕ си1- сигей сеПз, н(гизез, ЬассепорЬа8ез, апд Ъассепа.
ТЬезе тесЬойз аге йегеЕоге к!еа1 со йесегпппе йе зес!иепсе оЕ а зрессбс геЬПоп оЕ Вепоппс РЬСА (е.8., ап спсПнЫиа! ехоп оЕ а тапипа!сап 8епе). Оп сЬе ойег Ьапд, зЬос8ип 1гЬгапез сопзсгиссей ш ЪассегюрЬа8е М13 аге ргеЕеггей Еог 1аг8е-зса1е рго!ессз юЬеге сЬе 8оа! сз со ассипш1асе!оп8 сгассз оЕ чсг81« зес)иепсе. н(гсиаПу аП оЕ йезе 1аг8е-зса1е рго!ессз аге сагпес1 ош 1« зес)иепс1«8 Еассопез ег)шррес1 сн(сЬ аззег«Ыу 1шез оЕ гоЪо6с дечкез апг1 ашотасес1 гпасЫпез со рег(опп еасЬ зса8е оЕ йе ргосезз, Его«с ргерага6оп оЕ я«81е-зсгапйей сепср1асез со Ьагчезсш8 оЕ сЬе пис!еосЫе зес!иепсе.
Ву сопсгазс, соп6ппасогу зег!иепсш8 (е.8., оЕ тисапсз 8епегасес1 Ьу о68опис1еос(с(е-те«!а!ест пшса8епеяз) ойеп гессшгез по псоге сЬап опе зес оЕ зес!иепсш8 геасс(опз со чепЕу сЬе огс1ег оЕ пис1еосЫез ш а 1оса1 геЬПоп оЕ опе оЕ йе схо зсгапйз оЕ РЬ)А. А)сЬоиПЬ зег!иепсш8 оп сЬ(з япаП зса1е сап Ье ятр1е апс1 еп!оуаЫе, тозс!аЬогасопез сойау Ъиу РХА-зес)иепсш8 Ес(сз апй изе аисотасей гпасЫпез таспсашес1 ш шз6си«опа! соге Еасс1с6ез со сапу оис сЬе(г РХА зес)иепс1«8.
Аз а сопзес!иепсе, йе 1аЬогасогу ойеп Ьаз!с!бе тоге со с1о йап зе«1е а гпопсЫу ассоипс ш огс1ег со езсаЫ(зЬ а пис1еосЫе зессиепсе. !2.В С) ртет 12л ЕтХА 5еуиепстп8 СЬоо5!щ а $ецоепс!щ Ьуйетп ТЬе ша)опту от" йоиЫе- апй япц!е-зтгапйей 13Ь)А тешр1асез сап Ъе вел!иепсей ейтЬоит Вгеат й]т"- 6си1ту ат пюйегате тетпрегашгеь [37"С) Ьу епхушеь арес!а1!у та!1огес1 то тЬе таа]с [е.8., 5ет!иепаае).
АЬоит 1088 от" тетпр1асея Ьолчечег, ргевепс ргоЫеша тЬат геаи1т тот тЬе тпохт рагс !тою: ° Т]те Ьахе сотрохтт!оп оу" т)те гетр!ате. ТЬе ЫВЬег тЬе СС соптепт от тЬе сетпр1ате, тЬе Ь!8Ьег !тя ротепйа1 то тогш 1спопу ьесопйагу аттис!отел тЬат оЬьтгист РЬе рааааце от" П!чА ро1улпегааея Весаиае ьесопйату аттис!отел аге 1еаа лтаЫе ат ЫВЬ тешрегатиге, сус1е лес)иепс!пц ог ЫВЬ-тешрегатиге !аойлетша! лес]иепс!п8 !а тЬе ргетеггей тесЬпн!ие тог СС-т!сЬ сешр!атея ° Лте Ьахе лет?иеттсе оу т!те тетр1ате. Сус1е-лес]иепс!п8 геаст!опт аЬои!й пот Ье иаей то ьет!иепсе тешр1ате 1)Ь!Ав яларестей от" сошашш8 а гереайп8 лет!иепсе, !ог ехаплр1е, а й]пис1еот!йе гереат.
5исЬ ге8!опт ойеп ргойисе Ьапйа тЬат аге ЫВЫу чапаЫе ш тптепяту лп аП !опт сЬаппе!а от" зес]иепс!п8 Ве1я ТЬ!ь ргоЫеш сап аошетипеь Ье а1!еч!атей Ьу ияп8 5' яр-1аЬе!ей о1!Вопис1еот!йеа со ргппе ЫцЬ-тешрегатиге !аотЬетша1 от сус!е-ьет!иепс!п8 геасйопя Ргет]иепт1у, гере!!т!че !гасо уте!й с1еапег ьет!иепсеа ш геаст!опа сата1ухей ат !олч тетпрегашге Ъу епхушез аисЬ аь Бес]иепаае ог тЬе К1еполч тга8тпепт оу Е. соП Ела ро!утпегаье 1. ° Т!те агиоиттт оу тетир!ате. Сус1е лет]иепс!п8 тч]тЬ !ь ]п-Ьш1т ашр116сатюп от я8па1 !а тЬе шетЬой от сЬоке лчЬеп тЬе сешр!ате 13Ь!А !а ш аЬогт вирр!у.
Епд ЕаЬе]]щ ог !п1егпа] Кайо!аЬе][щ? Епй-1аЬе!ей о1!Вопис1еот!йе рпшегь гейисе тЬе !тес]иепсу апй !псепяту от лес]иепсш8 агт!гас!я шоат от тчЫсЬ аге саиаей Ъу попьрес!6с рпппп8 Ьу тга8шепта от' сопташ]пат!п8 ЕтХА ог КХА. ТЬеае тетш!па!!у 1аЪе1ей ргипега аге ргетеггей лчЬеп лес]иепс!п8 13ХА тешр!асез тЬат сепй то Вепегате шеаау зет)иепс!п8 1аййегя тот ехашр1е, лес]иепс!п8 иприге 1)ХА ргератайопа тгош Ьастепа1 со!оп!еа ог ЪастепорЬа8е М13 р1ат]иея ог 1аг8е 1)ХАь, якЬ аь Ьастег!орЬа8е ). апй сояшйя 'тлтЬеп ияп8 епй-1аЪе1ей ргппегя а!1 1)Ь)А сЬа!пз Ъесоше !аЪе!ей то ап ес]иа! ехтепт ге8агй1еха от" тЬетг!еп8тЬ.
ТЬе штепяту от тЬе Ъапйа ]а тЬегелоге ес]иа1 тЬгои8Ьоит тЬе Мю1е 1еп8тЬ от тЬе 8е1. 5ес]иепс!п8 1аййега оЬташей тготп геасйопь ргипей Ьу 1аЬе1ей о118опис1еот!йеь аге тЬегетоге тат еаяег то геай тЬап 1аййега ргойисей ш сопнепйопа1 вел)иепс!п8 геасйопа сопла!и!п8 ип1аЬе1ей рг!шегх апс1 гасбо!аЬе!ес1 йХТРя Рт]тпегь сап Ье 1аЬе!ей ат тЬелг 5' епйа Ьу тгапьтег от тЬе у-РЬоярЬасе тгош [у-'лр]АТР ог [у-л'Р]АТР ш а геасйоп сага!угей Ъу Ъастег!орЬа8е Т4 ро1упис!еотЫе Ыпаье. 1аЪе!!п8 лч!тЬ 'лр геьи1о ш котлет ехроаиге липеем апй соло!ея рег геасйоп тЬап ллр. Но мечет, РЬе лчеа]сег ]5 рагт!с1еа епипес1 ггош "Р Вепегасе ьЬагрег Ъапйа с]ипп8 аитогай!о8тарЬу, лчЬкЬ ]а ап айчапта8е ччЬеп!оп8ег геайа аге гет]и!гей.
1п айй!т]оп, ргппегь апй лет]иепс!п8 ргойисть 1аЬе!ей тч!тЬ л'Р аийег 1ея гасбо!уис йатпа8е апй сап Ъе яогей тот аечега! тчее)сь ат — 20 С. [а-лл5]с1АТР !а ап апа1оц от йАТР ш тчЬкЬ а аи!лиг а!опт гер1асеь а попЬпйце оху8еп атогп оп тЬе а-РЬоьрЬате. ТЬе 1олмег епег8у от" тЬе ]3 рагт!с!еа епиией Ьу лл5 аЬагрепь тЬе ппа8е от' Ьапйа оп вес]иепс!пц Ве1з (В!88!и ет а1.
1983). Аз лч!тЬ ллр, тЬе 1оп8ег Ьа!т"-1!те от' лл5 а11оиъ тЬе тай!о!аоторе апс1 тЬе сотпр1есес1 лет!иепс!п8 геаст!опт то Ье а!отей тог ьечега] дичее]сь лч!тЬоит с1аша8е. [[у-лл5]АТР !а пот а 8оой аиЪьтгате тог ро!упис!еотЫе Ыпазе апс1 !а тгапатеггей !пегбс!епс!у то 5'-Ьуйгоху1 8гоиря) 1пггог!исг?оп 12.9 ЮЬ!сЬ Епхуглле? ЪйисЬ Рго?осо!? ЮЬ!сЬ К!?? А 6гаг-гппе лег)иепсег ъчЬо ъчапга |о ые 1оъч-гешрегагпге Ьо|Ьеппа1 !ЗА аел)пепе!иа ъч!|Ь гасбоас6че ъ))ъ)ТРа ог гагбо1аЬе!е6 рг!шегз аЬоп!с) ргоЬаЫу 1оо1| по 6|гйег |Ьап йе 1|ба ао!г! Ьу !25. ВюсЬеписаь сопса!п!пц Вес)иепаае, чегяоп 2.0. Ел)се )г)га аирр!)ел) Ъу шапиЕасгигега оЕ ойег епхушея Вел)непале )с|!а сои|а|и а!пюя ечегулЬ)пц гел)и)гес) Еог ьойеппа! лес)пепе)пц, Егогп а |ешр1а|е Ел!ъ)А Еог ые аа а роя6че соп|го1 со аега оЕ сошргеЬепяче г!1|)асг!с !пягисгюпя А гпе|Ьог) |о аел!иепсе иа!пд 5ег)иепаае ь г1еасг!Ъе|1 !и Ргогосо1 3.
Клга ргоч)ь!е а Еааг апг) еаау ъчау |о ца!п аоше ехрепепсе апс! сопЕлг!епсе, Ьц| |Ьеу аге |оо ехрепяче Еог гои6пе ые. ТЬегеЕоге, |Ье саяла1 аел)пепсег ъчЬо цепегагеа япа1! пшпЬега оЕ |ешр1агев Егош 6|пе |о г)ше аЬои1д сопя|1ег гер1ас!па |Ье чапоы сошропепга оЕ йе 66| ъч!|Ь Ьогпешаг)е геацепь апд Ьиу!ид ш ЪиПс йе епхуше(а) илес) го сага!)~е ае|!иепс)па геасьопя А| аоше ро!иг, ъчЬеп ргерага|юп оЕ сешр1агеа Ьесошеа а сЬоге, йе ае|)иепсег шау ъчап| |о аъч!ГсЬ го сус1е лес)пепе!пд (Ргогосо) б), адаш ЬеВ!пп)пд ъч)ГЬ а ЫГ.
Неге |Ье сЬо!сеа аге |папу ап|1 чапе|1, Ьи| |Ье г)ес!а!оп ашот |Ьеш ъ)ереплЬ оп йе ачабаЫе |1есес6оп Еас)1!6ея 1Е а сгас6|юпа1 гагбоас6че десесг!оп аувгеш Ь ые|1, а )с)г сопла!п!пц а |ЬегшоагаЫе епхуше епВ!пеегег) |о гепюче 5' — 3' ехопис1еаае ас|п6|у аЬои!г! Ъе аг)елрласе. ОЬчюы1у, 6 ъчоп1|Е Ье Ьепег |о ые ап епхуше саггу!пц а шигаг!оп |Ьа| аЬо!ЬЬеа |Ье ргеЕегепсе Еог шсогрога6оп оЕ |ЕНТО очег гЫ)ъ)ТРа (Еог ехашр1еа оЕ гЬеае ию|66е|1 епхугпея р1еаае аее ТаЫе 12-9 ш Рго|осо! 5). Ноъчечег, |Ьеае епхушеа аге а| ргеаепс а!ап!Елсапг!у июге ехрепяче. А)! оЕ йе епхугпеа 1!агег! ш ТаЫе 12-9 сап Ье оЪса!иег) !и )ол 1опп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
