Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 127
Текст из файла (страница 127)
(1977а) апт1 тЬе сЬеписа1 децгас1абоп шетЬот1 от" Махатп апд 661Ьегт (1977). А)тЬоицЬ чету д!ц тегепт 1п рппс)р1е, йеяе ичо тпетЬодя ЪотЬ цепегате рори1а6опя от о!тцопис1еотЫея йат Ьец!и Пош а Пхед рошт апд тегш!пате ат а рагбси1аг туре от'гея!дие. 1п йе яппр!еят саяе, тоиг рори1а6опя аге сгеатед тЬас тепшпате ас А, С, С, апд Т геядиея, геяресбче1у. ТЬе теппша6оп ротпь аге пис1еотЫе-ярес!ттс Ьит оссиг гапдош1у а1опц тЬе 1епцтЬ от' йе тагцет Р)ъ)А. ЕасЬ от тЬе !оиг рори1атюпя тЬегетоге сопяяь оц а пеятед яет от" Егацшептя ъчЬояе!епцтЬя аге детепгппед Ьу тЬе д!ятг!Ьит!оп от" а рат6си!аг Ьаяе а!опц тЬе !епцй от йе от!ц!па1 РХА. ТЬеяе рори1а6опя от" тгацшепь аге геяо!чет1 Ьу е1естгорЬогея!я ипт!ег сопсцтюпя тЬас дЬсппипате Ьепчееп шсцчЫиа) 12.4 Отиртег 12т РХА Вет)иепст8 РЫАа 6(йег(п8 лп 1еп8й Ьу аа 1йт!е аа опе пис!еотЫе (5ап8ег ап6 Сои!кои 1978). 14тЬеп тЬе тонг рори!атюпа аге 1оабет( !псо ат()асепт !апет оЕ а тес(иепсш8 8е!, йе огт)ег о( пис!еотЫеа а1оп8 тЬе РЫА сап Ъе геа6 гйгест!у (гпмнп ап 1ша8е от'йе 8е1.
Т!те 0Ыеоху Ме$!тот! о1 0МА Бег!оепс!пе ТЬе 5ап8ег тесЬпнрле иаеа соптго11ет1 ауптЬеяа от" РЫА то Вепегате (га8шепта тЬат теппшате ат арес16с рошь а1оп8 тЬе таг8ет тес)иепсе. ТЬ(а Ыеа ог18(палее) тч)тЬ Кау Ътти от'Согпе11 ()п)чегяту, тчЬо наес) рагба! гера)г (п йе ргеаепсе оу опе, ттчо, ог тЬгее т)еохупис1еоаЫе тпрЬоарЬатез (т(НТРа) то ает)иепсе йе 12-пис1еотЫе соЬеяче тегпнп1 от ЪастепорЬаце Х РЫА ( т'тти апс1 Тау1ог 1971; Ти апс(ттти 1980).
тттиа Ыеа от рагба1 гера)г га (отша!1у ет)и(ча1епт то йе "ш)пиа" апп от а ьЬогт-1тче6 тесЬпп)ие )тпотчп аа тЬе "р!ы апт( пнпы" тес)иепс)п8 тесЬп)с)ие (5ап8ег ет а1. 1973; 5ап8ег ап6 Сои!топ 1975), ъчЫсЬ ъчаь тЬе )шшес)1ате Гогетиппег от" йе ситгепт т(Ыеоху-шее)(атет! сЬа(п-сегпнпа6оп шейод. 1п йе соигае от" (п чйго ехрег)шепта то ргераге Р14А сор(еа оГ Ь18Ь арес16с га6(паст)ч)ту, 5ап8ег апс) Ь)а со!!еа8иеа пот)сей йат йе яге о( певуч!у ауптЬеяхет( РЫА сЬа(па тчаа тгет)иепт1у !ела йап ишт 1еп8й. Ргешатше тепшпатюп Вепега11у оссшгет1 ас тЬе геят1ие тпнпесйате!у ирягеатп от" тЬе яте ат тчЬ(сЬ а тат)(оас6че пис!ео6с1е аЬои16 Ьаче Ьееп тпсогрогатей ТЬ)а апогпа!у оссиггед Ъесаые тЬе сопсептгатюп оЕ тЬе гас(1о!аЬе1ед пис1еотЫе ш йе геасбоп тчаа Еаг 1оъчег тЬап тЬат от" тЬе отЬег йгее ип!аЬе!ет! пис!еотЫея ТЬе 3' ептЬ от" тЬе геаи!6п8 пнхтиге от рготЬлсп тЬегеЕоге соггеаропт1е6 то тЬе роятюп о( тЬе пис1еотЫе тчЬоае сопсептга6оп тчаа !нпт6п8.
Ву саггуш8 ош Еоиг ьерагате геастюпа ш ъчЬ(сЬ еасЬ от" тЬе пис!ео66еа тчаа!ншбп8 ш тып ап<! аерагатш8 йе тонг тета от" сгипсатет1 Ега8шепта ассогт(1п8 то тЬетг яхе, 5ап8ег апт! Ыа со!1еа8иеа тчеге аЫе то Вепегате а геат)аЫе РЫА ает)пенсе (5ап8ег ет а1. 1977а). А)тЬои8Ь тЬе р1ы апт1 пинна тесЬп(с(ие ъчаа а!отч апт1 (пассигате, й ъчаа ыес1 аиссеаабл1- 1у то т(етегш(пе а1пювт а11 от'тЬе 5386-пис1ео6йе ает)иепсе от" ЬастепорЬа8е фХ174 РЫА (5ап8ег ет а1. 1977Ь). ТЬе р1ы апт) пнпы аутлей тчаа ап нпрогтапс ас1чапсе Ьесаиае й ттгат деаспЬед (1) йе ые от" а аресгйс рпгпег !ог ехтепяоп Ьу РЫА ро!ушегаае, (2) Ьаае-прес(6с сЬаш теппшатюп, апт1 (3) тЬе ые оЕ ро1уасгу!аптЫе Ве1а то 6ьсг(ш(пате Ьеттчееп яп81е-атгапбет) РЫА сЬаша сййепп8 1п 1еп8тЬ Ъу а яп81е пис!еотЫе.
Нотчечег, йе р1ы ап6 йе попы геаст(опа тчете потогюы1у ипге1таЫе, апт! й тчаа айчауз сййки1т то Вет а11 1оиг от" тЬегп то тчог1с яппйапеоы! у, аа тЬе тпетЬос) гет)и)гей С!еаг!у, а йлгйег ас(чапсе тчаа гет)и)тес) 1т пис!еотЫе тес)иепс)п8 Ьу соптго11е6 ауптЬеяз от" РХА тчаа то Ъесоше ргасбса1. ТЬе Ьгеа)стЬгои8Ь саше тч(тЬ тЬе 1птгос1истюп от" 616еохупис1еоят1е тпрЬоарЬатеа (сЫХТРа) — пис!еоят(е апа1о8а йат (1) сои!6 Ье аиЬа6титет( 1ог йеохупис!ео6с1еь ат гапт!ош роя6опа тЬлпп8 тетпр!асе-6(гестет) соруш8 о( а РЫА атгап6 Ьу а РЫА ро1ушегаае апт) (2) сои!6 ейктепт1у Сегпнпате РМА зуптЬеяа ш а Ьаве-арес(ттс шаппег (р1еаье атее Р18иге 12-1) (5ап8ег ет а1.
1977а). Ву ияп8 тЫХТРа соггеароп61п8 то тЬе сопчептюпа1 пис1еотЫе Ьааеа ш ьерагасе ауптЬетк геасбопя (оиг рори1абопа о( о1!8опис!еотЫеа сои!6 Ье 8епегатет( тЬат тепптпате ат ечегу роябоп ш йе тегпр1ате атгапд. ТЬе РЫА ЬапсЬ тп йе теист!опа сои!6 Ье 61ьр!ауед Ьу 8е! е!естгорЬогеяа апт) йе РЫА ает)иепсе с)ес)исет! тгош тЬе огт(ег от Ьапс)а (п тЬе Еоит 1апея 5о тче11 6Ы тЬезе сЬаш тегш(патогв тчог)с тЬат Ьу тЬе Ъе8(ппш8 от'тЬе 1980я тЬе 5ап8ег шетЬот) Ьаб Ьесогпе тЬе тпетЬос1 оЕ сЬо(се (ог РЫА лет)иепс)п8 — а роябоп н ай!1 оссир(ея ТЬе С!тетп!са! Ме(!лот! о1 0МА Бег!оепс!щ 'тчЪегеаа тЬе ЙЫеоху-шет((атет! сЬаш-тегш(па6оп шетЬот( 8гетч!о81са1!у (готп 5ап8ег'а еаг11ег тчог1с оп рготелп апс1 КМА ает!иепс(п8, тЬе сЬепнса! шетЬот1 от" РЫА ает)иепсш8 тчаа с)1ьсочеге6 ассЫепта1!у ш Чта1тег СВЬегт'а!аЬогатогу (р!еаае аее С61Ьегт 1981).
1п тЬе 1ате 1960ь, апт! еаг!у 1970я Сл1Ъегт'а тчог)с Госиьей оп тЬе тптегасбоп Ьепчееп тЬе 1ттс гергеааог апт) йе 1ас орегатог тп 1птгог)исгтоп 12.5 ОНА ро!утпегаае ОН Н з пуп у! теплое ОН Н ОНЯ ро!утпегаае Н Н 3' ауагоаео Н Е!Сс)1)Е 12-1 Теггп!пат)оп оЕ 0)У)А 5 птЬеяа Ь )псог огат)оп оЕ т)г)йТРа !А) 0Н)А ро)угпегаае-сага)угет) еатепйсатюп оЕ йе поппа! г)ХТР иа!)Ь тЬе 3'-теггптпа! пас)еотЫе оЕ 0йА.
ТЬе геасВоп, тчЬ)сЬ ехтепг)а тЬе )епВ)Ь от' )Ье рптпег Ьу а а!па)е пвс)еотЫе, сап Ье гесаррю)атеВ арпб! а)! оЕ тЬе Ьааеа )п тЬе сетпр1ате атгапд !пот аЬоип) аге ратгег! илй йе пеи4у еупйеягег1 атгапт). (В) Соггеаропт))па геастюп иой а гЫ)4ТР тчЬ)сЬ )ас)та а 3'-Ьуг)тоху! геаЫие. ТЬе т)т)МТР сап Ье )псогрогатет) )пто йе агоиа)па сЬа)п Ьу 0)НА ро)угпегаее, и Ьеге )т аста аа а теггп)па)от Ьесаиае )т )ас)та )Ье 3'-Ьут1гоху! агоир гег)п)гет) Еог Еогптатюп о) Епг)Ьег 3' — э3' рЬоарЬот))еатег Ьопг)я чЬго.
Не )ао1атет) )Ье ЕгаВшепт оЕ 0)х)А рготестег) Ъу йе гергеыог апг) иог)сет) опт Ьь зет)пепсе Ьу сору!пц йе 0ХА што тг)х)А апг1 )Ьеп арр1ушд йе гесЬО!т)пеь оЕ В)х)А аег)пепе!пд г)ече1орег) )п лапает'а 1аЬогатогу (б!1Ьегт апс) Махаш 1973). ТЬ)а арргоасЬ ъчаа тгапаЕогшед иЬеп Апт)ге М)гкаЬе)гоч, а йпя)ап ас)епт)ат, ч)ятег) Нагчагт) тп 1975. ТЯтог)с)па ат тЬе 1пзтЬпте оЕ Мо1есп!аг Вю1оцу, Асах)ешу оЕ Вс)епсе оЕ йе 13.о.о.й. ш Моьсотч, М)ггаЪе)гоч Ьат) аЬотчп йат Ь!пг))пц оЕ Ьгяопеа апг) апт)Ьюттса то 0Ь)А соиЫ шЬтЬтт ше)Ьу!а)топ оЕ рпПпеь Ьу т))тпетЬу1ап!Еате. Не игВес) х т1Ъегт то Етпт) опт итЬетЬег Ьшг))пц оЕ )Ье гергеааог соиЫ Ыос)г шейу!атюп оЕ )Ье орегатог 0)х)А апг1 то Ыепт!Еу и ЬЫЬ Ьаьез ш тЬе ает)пепсе и еге рготестед. РиПпВ с))асыяоп оЕ тЬ)а ргоЫеш тч))Ь МтгкаЪе)соч, А1ап Махаш, апт) )ау Сга!1а очег а!ппсЬ, с 1!Ъегт Ьаг) йе Ыеа йат п!тппате1у Ьесаше йе Ъаяа оЕ тЬе сЬеппса1 тес)пепси тесЬшс!пе.
1Е а 0)х)А ЕгаВшепт соиЫ Ье 1аЬе!ег) ас опе епг) тч)тЬ а гаг))паст!че рЬоьрЬате Вгопр апт) )Ьеп апЪ)естег) то раут)а! т!еагат)ат)оп тч)тЬ Ьаке-арес)Етс сЬеппса1 геастюпя тЬе роятюп оЕ еасЬ Ъаве ш тЬе сЬаш сопЫ Ье г)етегш)пег) Ьу тпеаапг)пц тЬе Й)атапсе Ьети ееп тЬе 1аЪе!ет) епг) апг! йе рошт оЕ Ьгеа)где.
Ву 197б, тт и аь с! еаг )Ьат йе тпе)Ьос) соиЫ Ье пает! то 1осате аг)еп!пе апг! Впап)пе геыт!пег )п аЬогт Етаашепта (-40 пис1еотЫев) оЕ 0)х)А. КпотлпВ йе 1осатюпа оЕ тЬе ь ю рпгше Ьааеа оп еасЬ оЕ )Ье пчо сошр1е- 12.б Сйартет 12: О!чА Бег!иепстд тпептагу ктгапт!к оГ Ет!к!А, опе сои!й тп рппстр!е, т!ет!исе а сотпр!ете Ел)к!А кес)иепсе.
ТЬе пехт уеаг лчак крепт !п 6ече!ор!пВ ЙНегепт!а1 шетЬот)к то с!еаче сутояпе апт! йупипе геясЬлек апт) тЬик то роя6оп тлчо руппиеПпе Ьакек !и а ЕЛКА кет!иепсе. Ву 1977, Махатп апт! СПЬегт ччеге аЫе то риЫ!кЬ а декспртюп оЕ йе сотпр1ете кет!иепс!пВ тесЬпщие !Махаш апс1 Я1Ьегт 1977). Рготп тЬе с1ате оЕ йтк Ягкт риЫЫабоп ип61 тот)ау, йе сЬеписа1 шетЬот) оГ кет!иепсшВ Ьак ипт!егцопе а сопбпиоик кепек оЕ гейпешепт апт! ипргочептептк.
ТЬе пшпЬег оГ Ьаке-крее!Пс с!еачаВе геасбопк Ьак шсгеакей апс! тЬе!г еГГтс!епсу ап6 сПксппипабоп Ьаче цгас!иаПу ппргочет! со йе рошт лчЬеге 200-400 Ьакек тпау Ье тоибпе!у геат1 Егош йе ро!пт оГ 1аЬеПпд. Нолчечег, попе оЕ йеке Ешргочешептк Ьаче Ьееп киГЕтс!епт то каче сЬеппса1 кес!иепстпа Гготп т1есПпе. Тохк сЬеписа1к, 1агие апюипгк оЕ гас!!оас6ч!ту, кет!иепсши ие!к йат чтете котпетнпек ашЬтаиоик ап6 аП тоо оЕтеп ии1у, апт) птокт гесепт1у, тЬе 1ас1с оГ аитошатет! шетЬот)к то ргераге епт)-!аЬе!е6 тетпр!алек Ьаче аП соптпЬитет1 ыцпНсапт!у то йе есПрке оЕ йе шейот1 Ьу йе сЬаш-сепшпатюп тесЬп!т!ие.
ТНЕ ЫМСЫ МЕТНОО ОЕ ОМА ЬН~Е)Е ЧСПЧС Вт ОПЭЕОХт-ЧЕО!АТЕО СНАНЧ ТЕткМ! ЧАТЮМ ТЬе Вгкт цгоир оЕ рготосо1к !п тЬ!к сЬартег 6еа!к лч)тЬ тЬе ргас6са1 акрестк оЕ йе сЬаш-сетш)па6оп шетЬос! оЕ ЕлЬ!А кесрлепс!пц. ТЬтк штгот1исбоп с1експЬек тЬе лепета! Рппстр!ек оЕ йе шетЬос1 апс1 йе ктгатеа)ек сопипоп1у икет1 то Ьппд кетрлепсшц рго)естк то Егштюп. Сетлега! Рптлс!р!е5 А куптЬетк о1туопис!еот!с!е рптпег !к аппеа!ес1 то а к!пц1е-ктгапт)ет! Ел!к)А тешр1ате. Роиг т)тТГегепт кес!иепс!пд геастюпк аге кет ир еасЬ сопла!и!пВ а ЕлЬ!А ро1утпегаке апт! йе Гоиг потша! т!ХТРк.
Опе оГ тЬе ргесигкогк ог, тп коше сакек, тЬе рпшег !к !аЬе!ет) гайоасбче!у лч!тЬ л'Р, 'лр, ог кк5 ог лч)тЬ а попгасПоасттче Пиогексепт тац. ТЬе Еоиг геастюпк а!ко сопташ а япаП ргорогтюп оГ а 2',3'-сЫЫТР тЬат сатпек а 3'-Н атош оп йе с1еохупЪоке тпотету, гайег тЬап йе сопчептюпа1 3'- ОН цгоир. 1Г а тЫХТР тпо1еси1е !к !псогрогатет1 !пто а агоччтпц ЕЭ!к)А сЬаш, тЬе аЬкепсе оЕ а 3'- ОН цгоир ргечептк Еотшат!оп оГ а РЬокрЬосПектег Ъопт! лч!тЬ йе киссее6!пВ Й!к!ТР: РигтЬег ехтепяоп оГ тЬе цголч!пи сЬа!и !к ипрокяЫе. ТЬия ччЬеп а япаП апюипт оГ опе оГ йе т!д!к!Трк тк !пс1ит!ет! чч!тЬ йе Еоиг сопчеп6опа1 6ХТРк !п а геас6оп пихтиге Гог Ел!к!А купйеяк, тЬеге !к сотпретПюп Ъетччееп ехтепяоп оЕ йе сЬяп апс1 !пЕтес)иепт, ЬШ Ьаке-крее!Пс, теппша6оп (р1еаке кее Р!Вите 12-1). ТЬе ргот!истк оЕ тЬе геас6оп ате а рори1а6оп оГ оПаопис1еотЫе сЬа!пк лчЬоке !епатЬк аге с)етегш!пе6 Ьу тЬе сПяапсе Ьетчтееп йе 5' тепп!пик оЕ йе ргппег ике6 то !ш6асе ОЫА куптЬеяк апс1 тЬе ятек оЕ сЬаш тегпипатюп.
1п а кет!иепс!пд геасиоп сопла!и!пи сЫА, Еог ехатпр1е, йе тепшпа6оп ро!птк соггекропт! то аП роятюпк поппаПу оссир!ет1 Ъу а с1еохуат1епоку! гение. Ву иапо тЬе Гоиг с1Нетепт <Ы!к1ТРк !и Гоиг керагате епхушат!с геастюпк, роро!атюпк оГ оПВопис!еотЫек аге цепегасе6 йат сепшпате ат роятюпк оссир!ет! Ьу ечегу А, С, С, ог Т ш тЬе тешр1ате ктгапт1. ТЬеке рори1абопк оГ оПВопис!еотЫек сап Ье керагасе6 Ьу е1естгорЬогеяк, апт! тЬе 1оса6опк оГ еасЬ Ьапс1 сап Ье аксегта!пег! Ьу аитогагПоцгарЬу ог йе епикяоп оЕ Пиогексепсе. ЪттЬеп йе Еоиг роро!атюпк аге 1оат!ет! !пто ас!)асепт !апек оГ а кес)иепсшц Ве1, тЬе кет!иепсе оЕ йе пелч!у куптЬек!хе6 ктгапт! сап Ье геад тп а 5'-3' опептатюп Ъу саПтпд тЬе огс1ег оЕ Ъапбк Егош тЬе Ьоттош то йе тор оЕ тЬе ае1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
