Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 130
Текст из файла (страница 130)
Ап ехагпр1е В 96-ъче!! Йаг-Ьоггошед ВюЫос1с (РВМ 5сгеп66с, 5ап Еегпапь!о, Са(!Еогп!а) апд сара (ЧЗНед-Т! Рь-Сочег, ()!ьгег Всгеп66с; огдег йгонВЬ Вахсег !пс., Мсбаъч Раг)ъ, !11!по!ь). Ап а1гегпа6че В ЕЬе Вес)нпап 96-гнЬе Ьох еъ)и!Рред ъчЬЬ гнЬеь В!сед чдй а опе-ргесе! гд апг! а сар. Тъчо Ьохеь ъч!гЬ 1гдь апг! опе сар аге геъ!и!гед го ргераге 96 М13 сепър!агеь. МгсгоВГег р!агеь (96-нне!1, Е((гес( ъньТИ !!с(ь) Р1еаье ьее йе шЕогшагюп рапе1 оп М! СКОТ!ТЕК РЕАТЕ5. Ми!Е!сИалпе! ргреоог (8 ог 72 сИаппе!ь) МиИВиЬе ног(ех т(хег ВВнег Еаре (ЗМ СогрогаВоп) ог ес)и!на!епг ТЬе гаре пшьг Ье сараЫе оЕ еЕЕесг!п8 а ъчагег68Ьг ьеа! асгоя гЬе 96-гнЬе Ьох.
ТЬе КхЬ НнВЬеь Со. (Ьгър:днълч.гьЬнВЬеь.сош) д!ьгг!Ьогеь гЬВ ЗМ ьдчег саре ъп гЬе Рпаед 5гагеь апд Мехко. 5оп(сагог ог 7ъ)еЬиВхег Р1еаье ьее Аррепд!х 8. Рог ьошса6оп, нье е!йег а пнсго6р ргоЬе ьопкагог ог а сир-Ьогп юшсагог.!п гЬВ ргогосо), ъче гесопипепд а снр Ьогп юп!сагог (е.8., Неаг Зуьгегпь пюде1 ХЕ2015 ългЬ а СЕ4 сир Ьогп ргоЬе) Еог гъчо геаюпь: (Ц ТЬе РЬ)А В сон!а!пег! гп а япа1! чо1шпе (20-25 Н!) ългЬъп а гп!сгобъ8е гнЬе апд (2) гЬеге а по сопгапнпаноп Ьу а гпега! РгоЬе Ьесанье гЬе ргоЬе оЕ ЕЬе снр Ьогп юпкагог доеь пог гонсЬ йе РВА ьо1?6оп. Рог пеЬн!!хаг!оп, люса(у а д!ьроьаЫе йегарен6с пеЬн1гаег (!Р1 Месаса! Ргоднсгя нюде! 4207) аь деьспЬед ш АррепсВх 8.
ТООЕИ77!сйь УУагег Иа1Иь ргеьеГ Ео 76 С, 37оС, 68"С, алс( 80оС '47ес$ог5 апд Вас1ег!а! Яга!п5 Васгег(орИаВе М73 нес!ог Е))ъ(А, ес)и(ррес( Еог Ыие-ънИг!е ьсгеел(лВ, 1теагсеед, И!илг-епг)егЕ, апг7 с(ерИоьрПогу!агегЕ Чесгог РЕЕАь оЕ гЬВ гуре шау Ье рнгсЬаьед геаду-гпаъ1е Егош ьечега! сошшегсга! чепдогь, 01Ьегъч!ье, ргераге гЬе чесгог РНА аь г1еьспЬед ш гЬе аддаюпа! ргогосо! ь аг гЬе епд оЕ гЬВ ргососо1. Е, со!! сотре1ет се!!ь оЕ ап арргорла1е ь(га!л (е В., ХЕ!А'-В!ие, Е)Н5аЕ') То оЬъа1п а!!Ьгагу гЬаг сочегь ЕЬе гаг8ег РЫА со гЬе Вгеагеьг дерй, ъг В ъгпроггапс гЬаг гЬе еракгепсу оЕ !галь(ес6оп оЕ К соВ Ье аь ЫВЬ аь роьяЫе (>1Оь ггапьЕесгапп)р8 оЕ с1оьед сггсп!аг чешог РВА).
Ргерага6опь оЕ сопърегепс Е. соП йаг сап Ье !галь(оппед чдгЬ ЫВЬ еракъепсу гпау Ье рнгсЬаьеь! геадушаде Егош ьечега! сопипегс!а1 чепдогь ог шау Ье ргерагед аь деьспЬед ш СЬаргег 1, Ргогосо1ь 23 — 26. 1Е ап е1есггорогабоп аррагашь В ачаг1аЫе, ъче гесопнпепд няп8 ргерагагюпь оЕ е!ессгосопърегепг Е. соВ, Ьесаые оЕ гЬе!г ЬгВЬег еЕВс!епс!еь оЕ ггапьЕоппаиоп. Ртотосо! 1т Сепетастоп и! а ЕЕЬтату оЕйапс(опт!у Очет1арр(п8 РРЕА Ептеть 12.15 МЕТНО0 Ье!Ифа11оп РЕ йе Татре! 0ЫА 501Е-1!Вас!оп Ы тес(и!тес( со епаиге сЬас аес)иепсеа ас сЬе епс)а оЕ йе саг8ес Р)ъ)А аге ас(ес)пасе!у гер- гевепсес( ш сЬе роро!а!(оп оЕ Ега8шепса иаес( со сопасгисс йе !гЬгагу.
1. Тгапа(ет 5 — 10 $$8 оЕ сЬе риг)Есес( саг8ес Р)ъ)А (аее Масег(а!в) со а ЕгеаЬ ш(его(и8е сиЬе апс( асЫ: 1псиЪасе йе пихсиге !ог 4 Ьоига ас 16"С, апс( йеп шасНчасе сЬе 1!Ваае Ьу Ьеас(08 йе пихсиге Еог 15 ш!писеа ас 68'С. 1Е сЬе сагхес РХА Ь Ыиис-еиссегс, )ис)иъсе РЕО ш сЬе геассюи со !исгеаъе сЬе еЕЕтс)еису оЕ $$8ас)ои. С)ае 05 ЪЧееь ииП Еог соЬеяче сегинш, аит)2.0 ЪЧе!ь иииз сот Ыиис сепи!и!. 5ои1е сопииегсса! $$8аве Ьи((его соисаш АТР.
ЪЧЬеи ияи8 ъисЬ Ьи(Еегя сЬе айа)с)ои оЕ АТР Ь иос точи!гесс. 2. АсЫ 175 $$1 оЕ ТЕ (рН 7.6), апс1 риПЕу йе 1г8агес1 Р)ъ)А Ъу ехггасСюп ъч!СЬ рЬепоЬсЫогоЕоггп. Кесочег СЬе 1!ВаСес$ Р)ъ)А Ъу ргес!р!Саг)оп ъчЬЬ 3 чо!ишеа оЕ еСЬапо1 ш СЬе ргевепсе оЕ 2.0 М ашпсошшп асесасе. АЕсег сепСПЕи8асюп ас псахипшп ареес) Еог 5 пнпйеа ш а ш!сгоЕи8е, ъчааЬ сЬе реПес ъч(сЬ 0.5 гп1 оЕ 70ото есЬапо1 ас гоогп сегпрегасиге апс1 сепсг(Еи8е а8агп. 3. Кешоче аа пикЬ оЕ йе аирегпасапс аа роаебЫе апг$ а11оъч сЬе 1аас сгасеа оЕесЬапо1 со ечар- огаге ат гоош Сегпрегагиге. Р!аао!че СЬе Р)ъ)А ш 25 $$1 оЕ ТЕ (рН 7.6) ш а писго(и8е СиЪе. РтаупепЕа!!ос) оЕ ЕЬе Татце1 0ЫА ТЫв атер ъчаа аъ(арсеъ) Егош В!ггеп ес а!.
(1997, рр. 419 — 422 ъч!$Ь реппьяоп). 4. Рга8шепс сЬе саг8ес Р)ъ)А !псо ае8шепса 0.8 — 1.5 1сЪ |п!еп8й Ьу аоп!сас!оп ог пеЪи1)хасюп (р1еаве аее ТаЫе 12-1). ТО РЕАОме)ъ)т тне 0$ъ)А Ву 5Оь)ссАт)О6$ (РсеА5е 5ее Г)О)3!се 12"3) а. Р1асе ке ъчасег гп йе сир Ьогп оЕ сЬе аоп!сасог. 5ес сЬе аопкасог роъчег аъч!ссЬ со оп, сЬе сппег со Ьо!й апс1 сЬе роъчег аеи!п8 со 10. Арр!у съчо 40-аесопс) ри15еа, апс( а11оъч сЬе аоп!сатог со ъчагш ир. ТЬе ссе ъчасег Ье)ра ргечеис 4еиасигассои оЕ сЬе Р)4А. Ес Ь а4ч)ааЫе со гер1асе сЬе ссе ъчасег Еи сЬе сир Ьоги ЬеЕоге еасЬ ъашрсе ь юшсассс1.
Ь. Р1асе сЬе сиЪе сои!а(п(п8 йе Р)ъ)А ш йе ке ъчасег аисЬ сЬас йе Ьоиогп оЕ сЬе сиЬе !а 1-2 пип аЪоче сЬе Ьо1е гп йе сепсег оЕ сЬе сир Ьогп ргоЬе (р!еаае аее р!Вите 12-3), апс( аошсасе йе Р)ъ)А. ЕяаЫЬЬ сЬе аррторпасе соисВсюиь Еог юшсабои (сЬе роъчет аессси8 аисс сЬе ишиЬет аиъс 0игабои оЕ ри!ъеа) Ъу воиссасси8 а сечс аашр!е оЕ РЬ)А аиъс аиа!уаси8 сЬе таоиста аа ъсезсг)Ьеъс ш 5сер с!.
Рог шоъс РЬ)А загар!ея съчо 6-аесоиъс ри!аеа ас а роъчсг аесби8 оЕ 3 суртса1!у ргоЙисе Егахшеись оЕ 500 — 2000 Ьр. $0х ЪассегюрЬахе Т4 РХА $$8аае Ьи(тег 5 тиМ АТР 30ата чттч РЕО 8000 (ориопа!) ЬассегюрЬахе Т4 РХА $$8аъе Н,О 2.5 )т! 2.5 р! 5.0 сс) 0.5 — 2.0 ЪЧе)м ишь Со 25 р) 12.1б СЬаргег 12: О)ъгА пег)пепси Ьыгег с!аги ргоЬе сер !се-ъгагег ! ОХЛ яагер поги ргоЬ сепгег Ьо! аггаспеп Со сои!го! Ьпп с. Сепсг)Епце йе сиЪе Ьг!еЕ)у со со1!есс сЬе яошсасег! РХА яашр!е ас йе Ьопогп оЕ1Ье шЬе апг! р1асе Ь оп ке.
й Апа1уге 1 Сс1 оЕ йе юшсасес1 Р!ъ)А яагпр1е ъч)сЬ сЬе арргорпасе аппо!есп!аг-ъче!аЬс шагЬ- егя Ьу е!ессгорЬогея)я сЬгопВЬ а 0.796 ацагояе це1. Кеер сЬе геша!пс!ег оЕ сЬе РХА оп ке ъчЬс! е 1Ье це! )я гиии!пц. 1Е сЬе с)ея!гег) я!хе гап8е оЕ яЬеагед РХА Ьая пос Ьееп оЪсагпей яопкасе сЬе яашр!е а8аш пяп8 а!сегес( сопгВпопя. !Е сЬе я!ге гап8е Ь ассерсаЫе, ргосеег) ъч!сЬ епгс-герагг оЕ йе РХА ая оеясг!Ьес) гп 5сер 5. со еплсмехт тне 01ЧА Ву хеВРЕ!2лт!Ох (рееА5е 5ее Г!Рс)ае 12-4) яо1ис!оп апг! р1асе Ь Еи 1Ье пеЬ01!гег спр. 5-ш п8 200 р! 1 ш! со а Впа! чо!шпе оЕ 2 гп1 Ь. Р1асе сЬе РХА яашр1е !и ап !се-ъчасег Ьа1Ь апс) пеЬп!!ае пя!пд йе егпр)гка)!у десегшшес1 орс!иса! сопс!11!опя.
ТЬе я!хе ЬЕ сЬе РХЛ Ега8шепся Ь г)есегш!пес) ргппап!у Ьу йе ргеяпге оЕ сЬе пссго8еп 8ая. рог ехашр!е, а ргегепге оЕ8 ря (0.56 Сг8)сш ) сур!саПу яЬеагя сояпЫ РХА гпсо Ега8шепся оЕ 1000 — 2500 Ьр. ТЬе орбпъа! ргеяпге апг) !еп8ЕЬ оЕ сппе Еог пеЬЬ!!гас!оп яЬоп18 Ье еясаЬ- 1!яЬег) егпргиса1!у Еог еасЬ суре оЕ саг8ес !ЭХА ъчЬеп сЬгя шесЬос) Ь Вгяс пяей Ая ъч!ЕЬ юпкасюп, сЬе ые ЬЕ ап !се-ъчасег ЬасЬ ргечепь ъ)е8гас)ас!оп оЕ сЬе РХА апс( Ь йегеЕоге ппрояапс Еог 8епегабп8 аи ечеп <1папЬшюп оЕ РХЛ Ега8шепс ягея. с. Р1асе сЬе пеЬ01!гег Еи а яшсаЬ!е сепсг)ЕЬВе госог апс! сояЬЫп Ь ъч!1Ь рсесея оЕ ясугоуоаш.
Сепсг!Еице ас 2000К (1000 грш си а сепсг(Епце ес)п(ррес) ъч!(Ь а писгор!асе ас)арсог) Ъг)е()у а1 4"С Со со!!есг йе РХА яашр!е аС йе ЬоССогп оЕ СЬе пеЪЬ1псег сир. а. Ргераге йе Ео!!оъч!пц РХА РХЛ яашр! е (Егош 5сер 3) 10х ТМ ЬЬСТег (рН 8.0) яеп1е 10096 81усего! яеи!е НЕО ЕЕСС)ССЕ 12-3 Спр Ноги 5оп!са(ог Еог Вапг(ош Гга пъеп1аНоп оЕ РХА ТЬе спр Ьогп апасЬгиепс Еог а Неас 5уясегпя юп!сасог 'ь с(ер)ссес) ъч!й а яатр1е спЬе !и р(асе, ТЬе сор Ьогп ип!с, и ЫсЬ сопса!ия а )агае Ьоги ргоЬе, 'ь ассасЬес) со йе яопкаСог соппо! ипп апг! Е!Пег) ъч)СЬ 'ке ъчагег Ье(оге йе яагер)е ь яоп!сасег). Турка)!у, СЬе яагир1е соЬе 'ь ЬеЫ !и р)асе Егопь аЬоче Ьу оя!пц а Ьигес с)аиър апс1 а г)пВ ясаис).
А!сегиабче! у, а спЬе Ьо1ссег сап Ье ЕаЬг!сасес) (гоги 1Е44исЬ р(аяс!с апгс пяес1 со ЬоЫ пр со е!аЬс соЬея Еог япъо!сапеопя ргосеяя!па. (Вег)гаъчи, ъч)сЬ регш!яя!Ьп, Егопь В(ггеп ес а1. 1997.) Ршгосо! 11 Сепегапои оуа Е!Ьгагу оЕРапгЕот)у Очег)арргпК ОХА Епгегп 1217 ореп1пд 5Е51еб мхй р!а511с сар гепючаае 11и ЕЕ!5 Е!СЕ!КЕ 12-4 НеЬи!!хег Еог РЫА Гга шепга1юп 50101ЮП ге ггоп1 142 д спагпЬег Р14А 50!НВОП 51рпоп 142 1гогп гапХ д.
РЕРЫе 1Ье ЕЗУСА аагпр1е ш1о Еоиг ес)иа1 а!щиога ш 1.5-031 писгоуице гиЪеа, саггу ои1 яапдагг1 егЬапо! ргесгрпагюп оЕ йе Е3)х)А, апд дгу ЕЬе 13ЬЕА реПега ипдег часишп. е. 13!5501че еасЬ ЕЗЬЕА реПег ш 35 р! оЕ ТЕ (рН 7.6), апд апа)ухе 1 р1 оЕ йе 5Ьеагес1 13ХА чч!ЕЬ арргорпа1е пю!еси1аг-чче!ПЬЕ шаг)сега Ьу е1есггорЬогеяа ЕЬгоицЬ а 0.706 ацагоае це1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
