Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 132
Текст из файла (страница 132)
ТЬе ес)и!Ртепс аис1 регвоппе1 тес!шгес1 со Ееед аид тапа8е сЬеве детдсев аге Ьеуопд йе теасЬ оЕ тоя асадеиис 1аЬогасопев. Носчечег, 70По аид СЬеи (1994) Ьаче девспЬед а гоЬтьт апд гергодис)Ые тейод Еог СЬе 8гоччСЬ апд ргерага6ои оЕ яп8!е-всгаидед РХАв 6от Ьассег!орЬа8е М13 с1опев 8гоитп ш а 96-итеП !опиас.
ТЬе сетпр1асев ате гет)и!гед си 1аг8е пшпЬегв со вас!вуу йе арре6сев оГ Пиогевсепсе-Ъавес1 аисотиасед РХА вес)иеис!п8 тасЬ!иев. 12.20 СЬпргег 12: 0ИА $ег)иепст5 250 гоо и ос о е с ЕЗ 15О се с е е е еа ',,„1ОО а се ао < о 50 о 0 2.5 5 ?.5 10 Сепдео о1 ОЪ(А 1о Ье еецоепсеб (КЬ) 1000 о 750 о Ф с а е Е о Ф Я е 500 Е о а ос < о 250 0 0 10 20 ЭО 40 Сеп01П о1 ОГ(А 1о Ье еецоепсеб (ХЦ НС()КЕ 12-5 Арргох!та1е МигпЬег ОТ 5ег(иепсее ТЬа( Миег Ве аеас! !гол Капдот1у 5е1ес1ег! 5иЬс1опее 1о АсЬ!ече 95% Сочега е 01 а 0оиЫе-51гапдед 5ег!иепсе ТЬе ЬЬеогегка( пипъЬег о(еег)иепсее(Ьа( гпия Ье геаг((гоги гапг(ого!у ъе(есгег( 50Ьс(опех го асЬ1ече 955 сонегаде о( ЬогЬ 5(гапг(5 о( а еег(иепсе В.е,, (оиг- 1о ях(оЫ еег(иепсе гег(ипг(апсу) !п а 5ЬО(гип еег!иепс(пц рго)ес1 15 г(ер!сгег( (ог 0-1 0-(ъЬ гагре(5 (гор) апг( 0-40-(ъЬ (агре(5 ГЬоггогп).
ТЬеъе гоиВЬ е511гпа1ее аге 5Ьоъчп (ог геа65пц еег(иепсее ъчПЬ напоие ачегаце !епВГЬ5, Рго)есг гег(и!геееп(5 ъч(11 чагу ннПЬ ОЬе еег!иепсе сопърояВоп апг( сопър(ех(1у о(1Ье 1аг5ег 0МА апг( ъчпгЬ ОЬе ргееепсе о( гереа1ег( еег(иепсее. МоСе (Ьаг ОЬе пигпЬег о( еиЬс(опее гегрлгег1 15 Ьаеег( оп ОЬ(а(п(пд еег(иепс(пд г(ага (гоги 50Ьс1опех (Ьаг ас(иа((у сои(а(п ееагпеп(5 о( гЬе гагце1 0МА — по1 (гоги еЬоее соп1а(п!пц нес1ог 0МА ог соп1агп!па1!пц 0МА. (Аг!ар1ег(, ъч(1Ь реппьегоп, (гопъ В(ггеп ег а(. 1997.) рог 5Ь015ип аег)иеис(иа рго)еспп й !5 гписЬ гпоге ейк(епг го дгоъч 1Ье Ъасгег!ОрЬаде М13 гесошЪъпап(5, 96 аг а гппе, гп япа11-еса(е Ьас(епа! си!1игее Вгоъчп гп йаг-Ъоггошег( ъче!!5 ш йероеаЫе ггауе ог !и г((ероааЫе 10Ьеа аггауег! 10 Ъохея А!! ОТ 1Ье 50Ьаег)иепг 5(ере гоно!че0 ш ргерагагюи оу 5!па!е-5(гаиг(ег( 0ХА гепър)агее сап Ье сагг(ег( оиг ш 1Ье еагие гогшаг.
М(п(ш!гша 1Ье ъчог)г гпчо!чей (и ггапауег оу с!опее 6ош опе 5(ер го 1Ье пехг айоъче опе !иче51!магог го ргераге 960 ог пгоге РМА гепър!а1ее 01 1 г1ау (р!еаае еее ао)!о апъ! СЬеп 1994). Ртотосо1 1: бепетаттои оуа ЬтЬгату оЕКап|Еои!у Очег!арртщ 13)ъЕА 1иветь 12.21 18. Рог еасЬ вес оЕ96 с1опев, Епоси1асе 100 тп! оЕ 1.В те61ит ог 2х т'Т те|1шгп 1п а 500-пй Яав)с ъч)сЬ а яп8!е со1опу оЕ а вшсаЫе Р' вСга)п оЕ Е, со!| (е.8.
ХП-В1ие, ХЬ1-В!ие МКГ, ог РН5аГ).!псиЪасе сЬе си1сиге Еог 6-8 Ьоигв ас 37'С ъч)сЬ а81сас)оп ас 300 грп| ог ип61 К епсегв сЬе еаг1у 1о8 РЬаве оЕ Вгоъчй. 19. А|Ы М85О со йе си1шге со а Впа1 сопсепсга6оп оЕ5 тМ. То ша!пса|и Ьа!аисе аит) вуиииесгу ъ)иг!п8 свист!Еи8ас!ои, и Ь Ьея со 8гоъч ЬассетюрЬа8е М | 3 с!оиев |и ечеи-иишЬегеь! пш!Вр!ев оЕ 98. М8' шсгеавев йе у|е!|! оЕЬассепорЬа8е М!3 аиъ! е1|иииа|ев п|исЬ оЕ сЬе авуисЬгоиу Ьеичееи |Ье 8гоъч|Л гасе оЕ |С!ЕЕегеис с1оиев ЕКеъс|су аиъс МсКеипеу 1996). Арргохииасе!у 80 п|1 оЕ сеНв аге ге|си!ге|С со 8гоъч еасЬ вес оЕ 96 ЬассепорЬа8е М| 3 с!опев. 20.
Ь)ве а пш16сЬаппе! р)рессог со сгапвЕег 0.8-тп1 а!н)иост оЕ сЬе се1!в со 1061чЫиа! сиЬев )п а 96- шЬе Ьох. 21. ъътеапп8 81очев, иве всеп1е соосЬрк1св со сгапвЕег 1пс!ЕчЫиа! ъче11-верагасес1, со1ог1евв Ьассе- гюрЬа8е М!3 р1а|!иев |псо еасЬ сиЪе оЕ йе 96-сиЬе аггаув. 5саЬ йе соойрк1| шсо йе п|Ы- т)1е оЕ а р!ас!ие ап6 сЬеп с!гор сЬе соосЬрк)с |псо |Ье си1|иге сиЬе, 22. То ачоЫ сопЕияоп, 1еаче сЬе соойрк1|в ш сЬе сиЬев ип61 аП 96 сиЬев ш сЬе Ьох Ьаче Ъееп |поси1асе|1. 23. '|А|Ьеп сЬе 1авс р!ат)ие Ьав Ьееп рк)се6, теточе сЬе соосЬрк)св, ап6 веа! сЬе Ъох. ЬаЬе! сЬе Ьох апд р1асе 1с |п ап огЬ|са1 вЬа)сег вес ас 250 — 300 грт ап6 37'С.
Кереас 5серв 20 ап6 21 ав пеед- егЬ 1псиЬасе сЬе !пЕесте|1 сиИигев Еог 8-12 Ьоигв. ЕЕ сЬе си!сиге| аге !исиЬасе|Е Еог >|2 Ьоигв, сЬе ргерагаиопв оЕ всп8!евсгаиъсеъ) се|ар!асев |иву Ье сопсаштиасеъс со а в|8шйсапс ех|еис Ьу Ьассег!орЬа8е М | 3 ъсоиЫе-всгапъсеъс гер!!саиче Еопи РХА апъс/ог сЬготпово|иа! РХА.
ТЬеве РХАв, ъчЬкЬ ог!8!ивсе Егоп| !уве|! Ъассепа! се!!в, шсгеаве сЬе оррогсип|су Еог гиьргитии8 ъсиг!и8 |Ье |Е!ъсеоху-вециепс!п8 геассюп. Ьоп8ег |псиЬаиоп 6гиев а1во рточ|8е оррогсип|6ев Еог ъсе!ес!оп ап|С Еог геаггап8еп|еис оЕ с!оиеъс ве8шеисв оЕ РХА. 8Ьогс !псиЬаиоп рег!о|!в аге йегеЕоге йе !|еу со виссея чАсЬ сЬ|в шесЬоъс. Рстт1Е1са6оп РЕ М13 О!ч)А8 24. Кетпоче сЬе Ьохев Еготп сЬе |псиЪасог апд ре1!ес сЬе Ьассепа! се118 Ьу сепспЕи8а6оп аг 2400д (3000 — 3250 гргп 1п а сепспЕ08е ет)и)рред члсЬ а писгор!асе адарсог) Еог 20 п6писев.
А гиавсег всосК оЕ ЬассегюрЬа8е М ! 3 с!опев сап Ье шатсе Ьу пияи8 23 тъ! оЕ 8098 8!усего! чА|Ь 30 и! оЕ еасЬ оЕ сЬе вирегиасапь. М!х сЬе ю!и6оив ъче!1 Ьу р|реп|п8 ир апъс |Еоъчп апъс |сиге сЬе а|сЬича! р!асев ас — 80'С. ТЬеве р!асев четче ав а юигсе оЕ |пЕессю|ь ЬассепорЬа8е !Е а|с|с!с!оиа! ргерагасюпв оЕ сегир1асе РХАв аге ге|!шгей ТЬь Ь сЬе !авс ро!пс |и сЬе ргососо! ас ъчЫсЬ агсЬ!ча1 в|ос!|в сап Ъе ваЕе!у шасси. ггош й|в ро!ис оп |и сЬе ргососо1, сЬеге ь а !и8Ь ргоЪаЬ~!!су оЕ сгоысоп|апииа6оп Ьепчееп сиЬев. ТЬ|в |спев пос тиассег Еог РХА ве|Сиеис!и8 Ъис Ь ипассерсаЫе Еог агсЬ|чв! в|ос!|в. 25.
Ьтве а пт16сЬаппе1 ртреиог со СгапвЕег 120 р1 оЕ 2098 РЕС 8000 |и 2.5 М ХаС! со шсВчЫиа! сиЪев ш а ЕгевЬ 96-сиЪе Ъох. 26. Саге1011у гегпоче сЬе сиЬев Егот йе сепспЕи8е; иве сЬе пш16сЬаппе! Р)реиог со сгапвЕег 0.6 гп! оЕ еасЬ вирегпасапс со а шЬе сопса)тп8 сЬе РЕЫХаС! во1исюп. А тМРОКТАХТ Ро пос сс!всигЬ сЬе ре!!ес оЕ Ьассепа! се!!в |сит!08 сЫв втер. спс!ияоп оЕ Ьассепа ъч!!! ВгавВсаПу геыисе йе т)иа!!су оЕ РХА вет)иепсе оЬса!пей. 27. Р!асе а 96-тиЬе сар очег сЬе сиЬев сопсашш8 йе ЬассепорЬа8е виврепяопв апд РЕС/ХаС! во!шюп. Ма1|е вите сЬас а 1и)иЫ-с18Ьс веа1 Ьав Еогтед, ап6 йеп пих йе тю!исюпв Ьу |пчетс- Ртогосо! 1: степетаг(оп оГ а Г.Гйтату оГ лхапгГоил!у Очег1аррГпе РГТА Гплегтл 12.23 ЕТЕКЬ|АТ35(Е РКОТОСОЕ: РКЕРАКАТ|ОЬ$ ОЕ 5МАЕЕ |х|Е)МВЕК5 ОЕ |х|СЕЕ-5ТКАМРЕ33 РМА ТЕМРЕАТЕ5 ЕКОМ ВАСТЕКЗОРНАСЕ М13 'ь рго(осо| ь ап аЬЬгеча(ед неге(оп о1 Рго(осо| 4 |и СЬар(ег 3.
Р|еаье ге1ег 1о Рго1осо| 4 1ог тес|и(год гиа(с|5. Ме1Ьог3 1. (посн|а1е 5 пл| о12х УТ плейиги |и а 17 х 100 инп (иЬе ъчТЬ а я|пе|е со|опу о1 ап арргорпа(е Е' ь1га|п о( Е. сой (е.д., ХЕ 8|ие-1, 33Н5иЕ'). |псиЬа1е 1Ье си|1иге онеги$8Ь1 а1 3TС чл$1Ь а8$1а1(оп а1 300 грил. 2. Тгапе(ег 0.1 ги| оГ 1Ье сийиге |п1о 5 гп! о1 2х уТ гпесйигп соп1а(и|па 5 гпм Ме5Ол $п а д|ерояаЫе 30-гп! сеп(г(Гиде 1иЬе.
1псиЬа(е 1ог 2 Ьоиге а( 37'С чд(Ь ч(8огоиь а8$(а((оп. 3. 03!и(е гйе 5 гп! сиИиге |п1о 45 гп| о1 2х уТ плег$вгп соп(а(и|не 5 гим Ме5О4 апд дьрепье 1,5ги! а$(г|ио1ь |п1о аь гпапу е1еп3е 13 х 100-гиги (иЬеь ае ГЬеге аге р|аг|иее 1о егоч. 4. ()ье ь(еи|(е (оодлр(с|се ог а саеп|е пеед!е (о |посйа(е еасЬ (иЬе хч1Ь а зерага(е Ьас(ег(орйаце М$3 р|аг|ие. |псиЬа1е(йе (ийеъ |ог 8 — 12 йонга а1 37'С тМ1Ь ч(догонь ай|(а1(оп. 5.
Тгапх(ег — 1.2 гп! о1 еасЬ си|илге 1о а ьерага(е из|сто(иде 1иЬе апс$ сеп(г)Гиде 1Ье 1иЬеь а( гпахнгвгп ьреед Гог 5 ги(пи(ея а1 гооиз 1еилрега1иге. Тйе гегпа(идет о1 еасй сн|1нге саи Ье х1огч| аид нях$ ал а гнал!ег ь1ос(г. 6. Тгапе(ег ехасду 1 гп! оГ еасЬ ялрегпа(ап1 (о а йееЬ гп|сго(иее ГиЬе сои|а(п(пе 200 и) о1 207' РЕС 8000 (и 2.5 м Ь)аС$. М|х 1Ье хиерепь|опе Ьу $пнегйпц (Ье (иЬеь ьечега|йгпев ОО )НОТ РОЯТЕХ( |псиЬа(е 1Ье (иЬеь Гог 15 — 30 ил(пи1еь а1 гоопл 1егпрега1иге. 7. Кесочег 1Ье ргес|р$(а1ед ч|гие ратйс|еь Ьу сеп1г$1иеа1)оп а1 гпах|гпигп ьреед 1ог 10 гп|пи1ев Кегпоче енелу Газ( с(гор о1|йе гврегпа(ап( йоги еасЬ (иЬе Ьу саге1и! азр|габоп, 8.
Кееиьрепд (Ье ьгиа3! хчЫ1е реПеВ оГ Ьас|ег|орйаце рагйс|егйп 100 и! о1 ТЕ (рН 8.0) Ьу чоиех|пц. Оо по( ргосеед ипй! (Ье рейеа Ьаче согпр|е1е|у д(ерегьед. 9. Адд 100 р| оГ рЬепо| ес|и$$$Ьга1ед $п ТЕ (рН 8.0). М|х (Ье рйаьеь Ьу ногах)пе ичсе 1ог 30 ьесопдв 5ерага(е 1Ье рйаееь Ьу сеп1г$(ица((оп 1ог 3 ил|пи1ее а1 гоогп (еплрега1иге |и а пл)сгойлде. 10. Тгапх(ее 1Ье иррег ас|иеоиь рйаье (о а Ггеей пл(сто(ице (иЬе апс$ гесочег (Ье е(пе|е ь(гапдед ОНА Ьу ргес(р((а(юп (15 — 30 ил|ге(еь а1 гоогп 1егпрега(иге) хчПЬ 2 чо!огоев о1 е1Ьагю! |и 1Ье ргееепсе о1 0.3 м ход(- игп асе1а(е (рН 5.2).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
