Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 129
Текст из файла (страница 129)
5ои|е а!|ю сопла!и а гЬегшоагаЫе ругорЬоарЬагаае |о аирргеаа ругорЬоарЬого!уяа апг! |ЬегеЪу гел)псе чаПа6оп ш Ьапъ) ш|епя|у. Р)па!!у, |Ье гпоге лепота лег)пепсег ъч61 пеес! |о ые аоше Еопп оЕ аигошагес) Ел!ъ)А- вел)иепс)пц Еас|1!гу пят 6иогеасепг л)егесгюп п|е|Ьо6я ТЬе аегчкеа оЕЕегег1 Ьу гЬеае Еас|1|6еа чагу ъч)л)е!у. 1п аоше, йе олега Ьппд !ог ша|1) |Ье!г сошр1егег1 аел)иепс)па геас6опа го |Ье Еас!1- Ьу Еог аерагагюп Ъу е1есггорЬогеа!а апг) сар|иге оЕ г!ага оп апгошагег) и|асЬ~пея 1п о|Ьегя йе Еас|!Ьу сагпеа ои| а11 агера оЕ |Ье вел!пепе!пВ ргосеаа Егои| |еп|р!а|е ргерага|юп со апа!уыил оЕ геял1|я 'ъъЬагечег |Ье аггапцешепг, |Ье лег)иепс!иа ргососо!а ъч!11 а!шпаг сег|аш1у Ье |1ебпе|1 Ъу |Ье Еасб)гу, Ьааед оп |Ье ехрег|ье апг) йе ес!шри|епс ача!1аЫе.
Мапу Еас|!|6еа ргоч!с!е а гапае о1' Ь!га (Ьошешаг)е апг1/ог сопипегс)а1) аг гел)исеъ) РПсеа |о |Ье|г ыегя ТЬи сЬарсег ь а согпрепсбшп оЕ !пЕоппа|юп аЬои| Е|ХА лес)иепс!пВ. ТЬе Елгаг аес6оп оЕ йе сЬар|ег с)еа1а сЬлебу ъч!|Ь йе епхушаг!с и|ейо|1 оЕ аегрлепс!пц апг) сопгаии ргогосо1а ъ)еасг!Ъ)пц йе ргог)исг!оп оЕ сешр1агеа апг! Рг)шега апг! йе аааешЫу оЕ аеъ)иепсшд геас6опя ТЬе аесопг! рагс Еосиаех оп йе сЬеинса1 гпегЬог) оЕ аеъ!иепс)пВ, ъчЬегеаа йе гЬ!гл) апл) 6па1 вес6оп деа1а ъч1|Ь йе роиг!па апгЕ гиии!па оЕ Е3!ъ!А вел!иепс!па це!я Согпригаг!опа! апг) гоЬо|к ааресгх оЕ зег)пепе!пц аге с!!асияес! ш йе ЕпЕогшаг!оп рапе!а а| йе епг) оЕ йь сЬарсег. Ргогосо!1: Сепетас!оп о1 а Е(Ьгагу о1 Рхаиг(от(у Очег1арртц ОНА 105егсх 12.11 ап6 )ас1схоп 1980).
Упс1ег йехе сопй6опх, йе епхуше дНР!ау5 чегу 1!сбе Еес!иепсе 5рес!ВсЬу апс1 с1еаче5 а11 гец(опх оЕ йе пю1еси1е (ехсерс Еог сЬе сегпппа1 пис1еос(6ех) ас ап ег)иа! гасе. А5 а сопхес(иепсе, сЬе Егацшепсх цепегасес1 Ьу 13Хахе 1 йцехбоп Ьаче а ге(а6че(у Ьгоай яхе йхсп'- Ьшюп. Оп1у а япа11 Егассюп оЕ йе Егацшепсх аге ихеуи! Еог с!оп(пц апг! 5ес!иепс!пц. ТАВЕЕ 12-1 МеСЬ065 СоггепС1у С)ае6 Со ГгацшепС РХА Еог ЦЬогцип цессиепс!пц МЕТНОР РЕО5 АМО СОМ5 (с е е е а е м с е 5 Нус(гос(упапнс юшсасюп аеас Ве9н!гез ге!абие!у !агце апюииь оЕ РХА (10-! 00 рц); Егацшеисс оЕ РХА йссг!Ьисеб очес а Ьгоад гаице оЕ яхея оп!у а яиа11 Егас6оп оЕ сЬе Егацшеиса аге оЕ а!еицсЬ сн!саЫе Еог с!оп!иц аиб сециеис!иц.
Вецн!гев !!цас!ои оЕ РХА Ье(оге хоигса6оп аи6 епйгерасг айегмагй РХА п1ау Ье дашацес) Ьу Ьуцгоху! гайса15 цеиегасед 6иг!иц салсасюи (МсКее ес а!. 1977). Решсицег (! 983) иеЬи!Насюи Васу аиг) 9шс(г; гецшгес оп!у яиаИ ашоииЬ о( РХА (05-5 рц) аид 1агце чо!ишеа оЕ РХА со!ис!ои; ио ргеЕегеисе Еог АТ-псЬ гец!опя 5!Ее оЕ Егацшеиса емцу сопсгоБед Ьу а!сепиц йе ргеяиге оЕ сЬе цаа Ыочбиц сЬгоицЬ йе пеЬи!!хегс Егацшеисс оЕ РХА 6!Есг!Ьисеб очег а паггосч гаице оЕ яхес (700 — ! 330 Ьр); ге9н!геа 1!цасюи оЕ РХА ЬеЕоге иеЬи!Ьа6оп аис) еийгерасг аЕсеглагс). Вог1епсегсЬ ес а1. (!994); Неицеп (1997) ссгси1асюи сЬгоицЬ аи НРЬС ршир Вецн!гес ехреияче аррагасна, !!цас!оп оЕ РХА ЬеЕоге юшсасюи, аи6 ! — 100 рц оЕ РХА; Егацшеисз оЕ РХА йкспЬисе6 очег а иаггом гаице оЕ 5!хес йас сап Ъе айиссеб Ьу сЬаиц!иц сЬе Яосч гасе; еийгерасг оЕ Егацшеисс ЬЕЕоге с!ошиц нос песеыагу.
ОЕЕиег ег а1. (!996) СЬеар, еасу, апд гецшгеа оп!у яиа1! апюииь оЕ РХА; Ьосчечег, сЬе Егацшенсь аге а !!и!е!нгцег (!.5 2.0 ЬЬ) сЬан ге9н!геб Еог аЬосцнп аецнеис!иц; гес)шгес !сца6ои оЕ РХА Ье(оге с!еачаце аи6 еисс-герасг айегмагй раяаце йгоицЬ сЬе опцсе оЕ а 28 цаице Ьуроцегш!с иеейе РачЬцюи (1959, 1960); цсЬг!есег чс а!. ( 1990) СЬеар, еасу, апд ге9н!гес по срес!а) еци!ршеис; оп!у яиа!1 аиюипь оЕ РХА песеяагу (0.5 — 5 цц); !!цагсоп оЕ РХА Ье(оге йцеаСюп беягаЫе Ьис епйгеран оЕ 6!цессес) РХА нпиесеыагу. Чаг!аЫе гасе оЕ 6!цесс!оп (гоги ехрепгиеис со ехрепшеис; еасЬ иесч ЬассЬ оЕ Сл)1 гиыс Ье сгЫЬгасей Епхупса6с с1еачаце раг6а! 6!цеас!оп ълСЬ йе гесгг!сг!оп еихугие СлР ГЬгцегаЫ ес а!.
(1992); С!ицпсЬ ес а1. (1996) 1))се сои!сас!оп, цеиегасеа Егацшепсс мЬЬ а ыЫе йсспЬи6оп оЕ яхея оп!у а яиа1! Ьассюп оЕ сЬе Егацшепь аге оЕ а сшсаЫе !еицй Еог с)ои!иц аид сециеис!иц; гецшгес еийгера!г аЕсег Йсачаце, 'чаг!аЫе гасе оЕ 6!цезс!оп Егош ехреписеис со ехрегииепс; еасЬ иеж ЬассЬ оЕ РХахе ! пшсс Ье са!сЬгасей Неачаце Ьу РХасе ! !и сЬе ргесепсе оЕ Мип Аис(егсои (198!) ()пав! гесепс1у, гехспсбоп епхушех счеге хе!6ош ихег! со цепегасе Егацшепсх Еог 5Ьосцип хе9иепс!пц. Весасье сопср!есе 6(цеас(оп оЕ 13ХА сч(сЬ а япц!е гехспспоп епкуше геаи1сх !п попочег!арр!пц Егацшепсх, херагасе 1!Ъгапех сопаспсссес1 Егош 6(цех!5 цепегасес( Ьу хечега1 сИЕегепс геяггс6оп епхупсех ъчои1с1 Ье песеааагу со ргоч(г!е очег1ар Ьесчгееп Егацспепь.
Рагба1 6(це56оп Ьах Ьееп ап ипассгас6че орсюп Ъесаихе гец!005 оЕ 13ХА счссЬ чегу Еевич гехспсбоп ясех счои16 Ъе ипс(еггергехепсе6 !п 5Ьосцип 1сЬгапех. Носчечег, сЬ(5 ргоЫесп Ьаа Ьееп хо!чес1 Ьу йе 615сочегу оЕ соп6(сюпх ипс1ег счЬ(сЬ сЬе епхуше Сч()1 си!5 13ХА ас сЬе хес!иепсех РуССРу ап6 РиССРи, Вепега6пц Ыипг-епбед Егацшепгх (Хза ег а!. 1987; Р!Скцега!6 еС а1.
1992). ()пс(ег йехе "ге!ахи" сопдЬюпх, йе епкуше (1065 а росепба1 с!еачаце ясе ечегу 16-64 Ьахех !п РХА. Е)ХА Егацшепь оЕ -1 1ЕЪ оЬса!пес1 Ьу рагба1 йце56оп оЕ сояшс1-яхег1 ЕЭХА5 сч!ЕЬ Си)1 сопсаш !папу росепба1 ясе5 ап6 5Ьосч !(сс1е гергехепсабопа1 Ьсах (СгпцпсЬ ес а1. 1996). ТаЫе 12-1 хшпшапхе5 сЬе хсгепцсЬ5 ап6 ъчеа1спеааех оЕ сЬе чапоих шейо65 чье со цепегасе очес!арршц Егацшепсх Еог 5Ьосцип хег!иепс!пц. 12.12 СЕсаргег 12: РХА Бег1иепете Мапу аяресся оЕ РЬ1А яегсиепсша Ьане Ъееп аисогпасей Еог ехапср!е, сЬе ияе оЕ гоЬоск ъчог!гясас!опя 1о аяяешЫе й!г!еоху-шег!!асег! яег1иепсспд геасссопя апгс йе аисошас!с геайпа ап11 сгапяЕег оЕ Есиогеясепс!у саддег! яегсиепсе со согпри1егя.
Рог а ген!есн оЕ сЬеяе аг!напсея, р1еаяе яее йе !пЕогшаг!оп рапе! оп АССТОМАТЕ0 СЗП1А 5ЕС2ССЕП1СС ЧС. ТЬе Ео!!осу!па ргососо1 г!еясг1Ьея 1Ье !011!а1 ясааея оЕ яЬосаип яег!пепе!па, Егош яЬеаг!па оЕ сЬе сагцес РЬ1А со еясаЫ!яЬшепс оЕ а 1!Ьгагу оЕ Егаашепся сп а ЪассегсорЬаде М13 чессог, ап11 оис11пея ссно шесЬог!я — яопссассоп апгс пеЬи!1хасюп — со Ьгеа11 а г!оиЫе-ясгапгСесс сагдес Р!уА шсо очег1аррспц рсесея апсс со ро11яЬ йе гаацед епгся сн11Ь РЬЕА ро!ушегаяея. ТЬе Егаашепся аге йеп Егасссопасег! ассогсс!па со яске Ьу ааагояе це! е1ессгорЬогеяя.
АЕсег гесонегу йош йе це1, йе ЕгаашепСя аге 1!дагег1 снсй СЬе РЬ1А оЕ а Ъасгег!орЬаае М!3 с!оп!па нес1ог. ТЬе ргоссисСя оЕ йе 1!пас!оп геасссоп аге !псгог!исег! спсо а яшсаЫе я1га!и оЕ Е. со!1, апг! а 11Ъгагу оЕ гесошЬ!пап1 ЬассегсорЬаде М! 3 с!опея 1я еясаЫЕяЬесс. Япа!е-ясгапг1ег! РЬЕА сешр1асея аге йеп ргерагес1 йогп спйнЬЕиа1 с!опея агоснп ш а 96-сне!1 Еогшас, еяяепсса11у ая г!еясгсЬесс Ьу Хо1!о апг! СЬеп (1994).
рсдиге 12-2 111иягасея сЬе ясеря !пчо!чегЕ сп гапг1ош яег!иепсспа. ЯЬЬяег1иепс ргососо1я с!еясгсЬе Ьосн с1опея яе!ессегс ас гапгсош Егош 1Ься 1!Ъгагу аге ияег! ая сешр1асея 10 с1!г!еоху-шейасес! сЬа!и-сегпипаиоп яег1иепс!па геассюпя апг! Ьонн сЬе РХА яегрсепсе Ея сошр!есе11 апг! аяяегпЫес1. рогКу Спе сагде1 0ССА о1гоо1апие Спе 1агде1 011А Ьу Ядв!юп сгадгпепс Спе сагдес 01СА Ьу воп1ов1юп ог пеЬо1иа1юп опюегвв1 рпгпег гера!г 1пе 1епп1п! о1 1гадгпеп1еб 0НА апб о1опе Спе сгвдгпеп1в <п1о а вЫ1аЫе о1оп!Пд нео1ог вецоепсе Гпе 1гадгпеп1в о1 сагдес 0ГСА озпд оп~негев! рпгпег ! ! ове а оогпросег ~): 1о аввегпЫе ~.:) ~ ~ .
'апб ввдп ~ ~ага~~па:ивсе~бава: .; па~ . вецоепсев о1 1пе Падгпеп1в о1 свгдес 01СА НСС1КЕ 12-2 ТЬе вегасе Еог КапсСопс Бе иепсгп Р!еаяе яее Сехс Еог сСега1!я. ртогосо! 1с Сепегапоп о)'а Е|Ьгату о3 Валс|от!у Очет|арр(пе РХА 1пгегь 12.13 МАТЕК1Асй САИТ1О1Чс Р!еаае атее Аррепг|!х 72 Еог арргорпасе Ьапс||!пе оЕ та!ее!а!а шаг|тес| чч|!Ь <!>. Войег5 ап(1 йо!о6оп5 Р!еаае атее Аррепс|!х 1 Еог сошропеп!а оЕ а!ос|с ао!п!!опа, Ьп(Еегх, апг| геадепса. 01!псе ьсосЬ ао1поопа !о |Ье арргорпа!е сопсепсгаоопа. Агпгпоп)ит асе!аге (70 м) АТР Ор6опа!, р|еаае аее 5гер 1.
Е!Ьапо) С(усего! (3!ел)е, 700% Н О (с3е(оп(кес3 с((а!33)ес3) 1РТС АЕВС)г Ха С! РЬепоl (ха!ига!ее( и4(Ь Тг)а ас рН 7. 6) <! > РЬепо1ссЬ)огоЕогт Л:7, ч)ч) <! > РоlуесЬу(епе В|усо! (ЗО;8 и)ч РЕС 8000) <! > Орсюпа1, р|еаае вес поте со пер 1. РоlуесЬу1епе 8!усе) (2056 сч(ч РЕС 8000) т 2.5 м ХаС) ТЕ (рН 7.6) 70х ТМ Ьи33ег 0.5 м Тпа-С| (рН 8.0) м Ь(8С) ТТЕ Ьи33ег 0.588 Тпсоп Х-100 ш ТЕ (рН 8.0) Х-Ва! Епкупсе5 апд Войег5 Васгег(орЬаВе 74 РХА 1(Вахе Вас!от(орЬаВе 74 РХА ро)утегаье Васгег(орЬаВе 74 ро)упис)еог(с3е 3с)пахе К1епочг ЕгаВтепг о3 Е. со1с РХА ро1утегаье 3 Се15 АВагохе Веп (си о 7% апс! опе О. 77') Р03уасгу)ат(с3е Ве) (пеигга), 5 ро)уасгу3ат(с3е) <! > ог АВагоье Ве( (0.8,4 lоъч-теагпВ-ротс аВагохе) )х)ос!е|с Асн15 апд О11еопос!ео641е5 Вассег(орЬаВе Х ог фХ774 РХА сlеачег3 (о согпр)епоп и43Ь А|01 (7 РВ т а чоlите о320 р! о3 ТЕ (рН 7.6) АЕсег гп8епюп, гешоче сЬе геьспссюп епгупсе Егош сЬе ЕсЫА Ьу епгасс!оп гч!сЬ рЬепоесЬ!ого(огш.
Кесочег йе ЕсЫА Ьу ргесгрпасюп и!сЬ ейа,о| апг( В!яо1че ш ТЕ (рН 7.6). ТЬе 668епеа ЕсЫА сча! Ье оаед со сЬес1с сЬе ейк!епсу оЕ!!Еас!оп оЕ сЬе г(ерЬоарЬогу1асег(, 1!пеаг!гег3 чессог аа г|еасг!Ьег| !и 5сер 13. ТЬе г3!Ееасес( ЕсЫА Ь пос геоо!тес( !Е сопппегсса! ргерагасюпя оЕ чессог аге ыес1. РХА х)хе тат!сеть Арргорпасе яае шаг(сета аге, Еог ехапср|е, Ега8шепся Еепегасег( Ьу й8еасюп оЕ рНС!8 ог р()С19 Е)Ь)А сч(й 5аиЗА1, ог сЬе 123-Ьр 1агЫег ао!г| Ьу 1Ые ТесЬпо!о8!еа, ог фХ(74 Е)МА 8!Ееьсег( чай Нее|В (34есч Еп8)апс3 Вю!аЬа).
сЕХТР хо!и((оп сопгаттВ аИ Еоиг гЕХТРа, еасЬ ас 2.0 тм 12.14 СЬаргег 12: 1)ХА Бедиепс(пе ТагВе( Р)ъ(А Таг8ег Р)ъ)А В ньнаВу ргерагед Ьу сВВеь6п8 а гесопъЫпапг сопьггисгед гп а ЫВЬ-сарае!гу чесгог (е.8., соь- шЫ, ВАС, РАС, ог Р1) ъчЬЬ а геялсгюп епхугпе гЬаг доеь пог с!еаче ългЬ!п йе с!опед ье9непсеь. 'гуЬегечег роьяЫе, нье а геялсдоп епхугпе гЬаг Вепегагеь соЬеяче гегпппь. ТЫь япгр!ъВеь !!Ваг!оп о! гЬе риг!Вед гаг8ег Е)ЫА !пго сопсагегпегь (5гер 1). АЕгег ге!еаье Егош гЬе чесгог, рнп(у йе гаг8ег Р)4А Ьу е1ессгорЬогеяь гЬгонВЬ а Ве! сая ъч!й !оъч-гпе11!п8-гешрегагиге а8агоье (р!еаьь ьее СЬаргег 5, Ргогосо! 6 ог 7).
Ръяо1че йе рнпВед Р)4А ш ТЕ (РН 7 6) аг а сопсепггагюп о! 1 ш8)пд. СЬес1г йе !пге8лгу апд гесочегу оЕ йе рнпйед Р)ъ(А Ьу апа1ухй8 ап а!ирюг (50 п8) Ьу а8агоье Ве! е1есггорЬогеяя Мейа ЕВ ог 2х УТ тегВит слога!л!лВ 5 тм МВС!а Тор аВагоье УТ аВаг р)агеь Сеп$г!Еще5 апд КРТог8 Сепгг!ЕиВе сараЫе оЕ ьр!лп(пВ с)еер-ъне!! т!егор!агеь апсЕ агапе(аггЕ т!сгоШег р!агеь а( 3000 гргл Рог ехагпр!е, ВесЬпап СРК сепгпгп8е еъ)и!Рред ъчнЬ а "Мкгор!ы" саглег ог а )онап Моде1 СК 422 ес!шрред ъчиЬ а ьъч!п8-онг го!ог (М4 гуре) апг1 писгор!аге адаргогь. прес!а! Ецо!ргпеп1 Реер-чне!! т!егор!агеь, Вс(ь, апс( сара ТЬе ъче!!ь ьЬон)д Ьаче а 1 — 1.2-ш! сарасну апд Ье сараЫе оЕ чдгЬьгапдш8 сепгг!Ен8аг!оп аг 3000 грш.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
