Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 136
Текст из файла (страница 136)
Кеаг)!пц о11йе ьег)оепсе с)овес го ог йл~йег аи ау йот Гйе рптег сап Ье 1асй)1а)ес) Ьу 1йе 1ойоиа)пе гпод!йсаг!опа; 0ь1апсе о) гагцег 0МА йот 5' геггп)поь о1 рпгпег ()и иос)еог)с)еь) Мосййсагюп о1 Ьаа!с ргосег)оге 0йоге !айейпе гп)гааге, ргерагег) а1 51ер 5 аЬоь е, Ьу а 1асгог ой 10. На)ие 1йе йпе 1ог )псоЬайоп о1 Ьогй )айейпц апс1 егаепаюиггег- пайоп геасгюпа 0ае МпС1, !и ро!угпепхайоп геасйоп.
0ке рпгпег )айе)ед аг йа 5 Геггп!иоа иа)1Ь 1юР!АТР ог [гаР]АТР (р)еазе атее Сйар1ег 10, Ргогосо! 2). Моппа! геасгюп сопгй)!опе 20-100 10 †3 0ае 1оог 1г пеь Гйе поппа) сопс гагйо!ао1оре )п Гйе )аЬейпе геасг 0ооЫе гйе 1)гпе ой )псоЬагюп о > 400 Ргогосо! 3: Вгс)соху-тес)гагес) Вес)иепс)пе Яеасг)опт й1ггпе Васгеггорйаее Т? 0НА Ро1утегаяе (5ег)пепите) 12.37 12.38 СЬареет 12: ОХА Кедиепет~ н О а о х ОО н с с о 'а н о. О О О м н о О о н .с Й Я О Р С о О О а ОО О 'о с ;О н а Я о о к .Я я "о -О с с с о О О с ОЯ о и О' н С н Е О О Я Дав о М ОО О о и с н о с О О а с о н > н Н О с о О О с с Я О н ОО, .С с -нха о о „ Е Р .М с а О С о О Н с н О о н с с,с о Я-< Я Со. О с- О .- с.
О < ОО о о о О н О с о н н о Е ОО О ,Я а .Я'й о н с с .с О с н о н О ОО н Я с Я о-Я о О. Я Ю ООО "' с С с о Н „О О О с С Р О с О о ю Э и Ф с Э с ое Э ОО с 'й Ой с и с Э о о Э НО < Е а "о Э с Э Е х о Э о 'а ОО с с Э а < х с о Е Е о с с х Е Э о о с 'о ХО ° о о,'Б 8 а с о с Я .с о .с н О с ОО О о Я Я Ю к Д О" Е и .й .с О а и Я о юн М, о у Р о о О о д 4Я .И 'ас с о с с о Е н с Л о Н ОС о,я Е ООС Я О Е,.о Е ЯаЯ а с. о о О н' ОО с Я О Я Рс О Р Ю ю с Ю а .о Р о. о о„ О о а о Е ,С О н Р О с Х О н н О о Е й с 'с Е с О С О н с о Р н с о с о о О с О н О С ОО и О Р с О ОО О О с НО 2: оо сЛ ео С Р „ОН с а ОН с ~л Е~ оа Е РО .5 ОЕ 'О ОН О фо Я с о с .О с Е с Е о о 'с с Е о н о с ОО с .Я О О н с Я н О н а-Е О ОО „ о О О*", О, н .Я О Е О .с -о о с о с о Ю с с Я ОО с «О .Я ОО с о о о Ю Л О Е О О О, Я О о н с Е о ОО Н с О Рс Р н 'с О с Р н С с ' с н о сР о а .с с о О ОО с Е .о 'о О ) О с с о й О и с с о О 'с О НО ОО .С о о О ОО Н с ОО 'О.
Ю ц НО с С с Д о РΠ— Я О ОО с О с а л х ОО Я с 'й О в а„.. зо а- ОО н ~ .0 х „Е ню ОО О о,я 0 с 'О Р с д" о с с н ОЯ о и н Е Ь О н О о с с а о с О с "ОО О О Я О о с О н о .с О О Е О о, н ОО с Я с ОО О у Ю С 3 О НО О ОС О --'о о О Оо а „ыО ХО о н .РР с Д о Е н О О Р . С,~ т. ЕО Е Ооо о с Р О .Я 'Е с о х ОЕ О с о Р, .с 'Е о 'о < Е О О о. Е н о с ,~. Р н 0 О Р хО с 2 О О Йо о' ОО НО НО 'о о о О с с а о с о с Я о.
Я с О -Б н О 'О О О О .0 н он 0 .с О "Ю ОО Е и ЕРг ;РО о О О н Е, Он СК .я яо н ОН 3 „-О о .с Я~ С НО Рго!оео! 3: РЫеоху-тейп!ее! ОеО!пепе!п3 КеаеВопз (Те!пд ВаееепорЬаде Т7 РИА Ро!утетазе (БеО!иепазе! !2.39 ,О О О и \ О О О О' )О о О Е о и "О О О с о- О О йО и с с О О ,О О Е с О о- О „Е а О С о 'О О оа Е и о ОС и О о Я а Я о с и О „Е с й - а Е- 'аЕ О О. О. о Х с,о О ) .с ) Е ОО с о о— с о и О О О с о О О иО Е и О с О ) .О .ОО 'О О о о .с а) о с с О О ЙВ с М а о о ООО о с о Я,Е О О сд ии О с и 'О с О О с ОО аИ .М О~,~ З и 'О с о О О— с о ОО „М О с О О ОО .О .8 с О ,О о О О О.
.с .с с о о о О, О Е Е о О иО О О О а о с Е с о 'с о Я х Я с с и о О О с с с .Я а' О о с .с о а и .с О и ДЛ о Е:Б О, аЕ О О .с 'Е О О ОЕ "О о ю и О О с Е О. о с О Я Е 'ОО О О - о ОС Я С О с— о ) О" О и- О О ) 'й с ос О Я „ и ОT сои — с О, о о и О ОЕЕ о Я о О и О ОО О и с а" О, Й с с .О с— с О О ОО ' О Я о 4Е О с и "О с с о о и и и О «О и ОО и 'й О о ОО ОО о с дй Е )О д и ОЕ о З с и О ) .с— о о О О СО с с с о О .О с .с о О и 3~ О и и О 'с я и с о О и .О с и .О 'О с .с О о с о 'ОО О о и С О о' и .о О и' С "ОО и и с о о и Ое' Л о О, О < Е Д О с и О О ОО и с О о ) 'с О с Е о О О О. Е .с О с и а О ОГ ОО )О Я с о и О с е 4 о О с О' Ю О .О с о О О о Д иО й а ОО с )О Иа ) и ) с ) о .
и с я ОО ОО Я < о и О с о О Я Е с о О) О ОО О о 'Е .ф Е;сп с о О ) -О— и ) с )О 0 О с о О СО с с О О с < 8 О и с иС о .П .О .с ОаЯ О и а ). о с О и „с и о Е о с О и О, с Д О с и о ОО а О .с Е "- а З с с и о и ьс о с й о О ОС ОР" С и с О )О х с а -Я .О О О Я .с О. о О и и О О и ООО О с а 'й Е о .с О и о с с .- о ) о о Ц О ОЕ и с о' О с :о о иО о о о о .Е о 8 о .О -О О О, й с О и С ОО О. ОО' ОО )О и )О с о с О О .Е О о ) .с О О Е ) о О Ж О и а .О о О о ) О с Я О с О Е— о ц а О .О ,е о О Е О Е О.
к О "О ОО Д ОС О с аЛ <~ Ои о а \ и ;Я' О ОО о Я'. О;О йО аю о а ~~ О с о о О. с а О а с ОО Я ГО Я Я с и с .О )О Ж с 0Меоху-гпейа1ед 5ес~иепс~пц Кеас6опэ 0ыпц 1Ье К!епоч~ Ггаупеп1 ог Е. сой 0МА Ро!угпегаье! апд 5~пд1е-ь1гапс1ед 0МА Тегпр! а1еь нгн тне нххт снл!н-терм!нлт!нс РМА хет)ссгнс нс мгтнов5 счете г)ече1орег) Ьу 5ап8ег апг) со1!еа8иез (5ап8ег ет а!. 1977Ъ, 1980), оп1у опе аштаЫе РЬ)А ро!ушегаае тчаа ача)1аЫе — йе К1епотч Ега8шепс оЕ Е.
со)т' РЬ)А ро!ушегаае 1. ТЬь епхуше теса!па сЬе аЬт16у со ро1ушет!ке т)ХТра )п а сешр!асе-арес)6тс шаппег Ьш 1ас)та сЬе росепс 5'-3' ехопис1еаае оЕ сотпр1есе ро1утпегаае 1 (р1еаае аее йе тпСоппаСюп рапе! оп ТНЕ КСЕСчОЪЧ ГКАСМЕХТ ОЕ Е. СОС! РОетМЕКАБЕ с). А1сЬои8Ь ехсепяче стасса оЕ РЬ)А ает!иепсе счете десегпппед ияп8 сЬе К1епотч Ега8шепс, Ь аооп Ъесаше оЬчюгь йас сЬе епхуше тчаа Еаг Еготп !т)еа! аа а саса1укс Еог ает)иепссп8 геассюпя 1с тчаа пос Ы8Ыу ртоеегь!че, сои!И пос сгачегке ге8!опа оЕ йе сешр!асе йас счете ПсЬ )п аесопт!агу атгиссиге, 8геаС1у ргеЕеггет) Со иае г)ХТРа гаСЬег СЬап дг)Ь)ТРа аз гшЬкСгаСеа, счаа ат!чегае1у айестет) Ъу йе сопсапипапь йас Егет)иепс!у ахи!сегасег) сЬе РХА ргерагасюпа оЕ йе Ьгпе, апг) сои1д тчог)с еЕЕтс)епс1у оп!у оп яп8!е-асгапт)етс РХА сегпр!асеа.
Чт!сЬ якЬ а аес оЕ Ьаптс)саря Ь ь Ьагт$- 1у аигрг)яп8 йас 1аг8е-аса1е зег)иепс!п8 рго)есь по 1оп8ег ге1у оп сЬе К!епосч епкуше. Тот!ау, сЬеве рго)есь аге шегеаяп81у паст!ей оис ияп8 сЬетшоасаЫе РЬЕА ро1ушегааеа апт) тпог)1Ететс чегяопа оЕ ЪасСепорЬа8е Т7 РЬ)А ро1угпегаае. Ь)ечегсЬе1еая йе К1епотч Ега8шепс ь а611 чету гьеуи1 Еог шапу япа!1-аса1е ает)иепс!п8 рго)есь счЬеге яп81е-кстапг)ег) РХА сешр!асеа аге ачат1аЫе апг) !оп8 геатЬ аге пос тес!шгей 8исЬ рго)есть !пс1ит)е чет16тсасюп оЕ пшсасюпя сопустшас)оп оЕ сопасгисся апг) ршро!пнп8 сЬе сетпипт оЕ г)е!ес)опя ТЬе К)епоьч 6а8шепс асс!1 Ьаа а ЕаиЬЕи1, Ъис а81п8, сосене оЕ аиррогсета тчЬо Ье!!ече йас йе епкутпе Ьак ап аЪ|16у со сарсиге аег)иепсеа Егош ге8)опа оЕ с!опетс РХАк йас аге г)1ЕЕтси1с со ает)иепсе тч)сЬ осЬег РЬСА ро!утпегааея сттЬу йь аЬои!д Ъе ь ип)спотчп, Ъис т)1ЕЕегепсеа тп сетпр1асе тес)и)гешепс аптс гИЕегепсса! вепянчну со аесопг)агу асгиссиге аге роаяЬт1тнея ТЬе епкуше тчог)са Ьея оп яп8!е-асгаптсет) РХА сешр!асея тчЬеге ген-!еп8сЬа оЕ -300 — 400 Ьааеа сап Ье ехрессей Репасигей г)оиЫе-асгапт)етС РЬСА сетпр!асеа аге а Еаг птоге т)оиЬсЕи! ргороясюп.
ТЬеге са по 8оод геагюп со иае йе К1епотч Ега8шепс со аег)иепсе г)епасигетс р1аапигс РХА тчЬеп сю шапу Ьеиег а1сегпасгчеа аге ачат!аЫе. ТЬе Ео!1осч)п8 ргососо!, ат)арсетс 6ош 5ап8ег ес а1. (!977а, !980), с)еасг)Ъеа Ьотч со иае йе К!епочч епкуше со ает)иепсе яп8!е-асгапг)ег) РЬ!А сешр!атея 12.40 Ргогосо142 Р(деоху-тейа(ед Бег(ггепс(пд йеасг(оггь 1Л(пе ЕЬе К1епогч Ргадтепг 12 41 ТАВЕЕ 12-7 ддМТР Ех!епыоп)Теггп1па6оп М(х!игеь апд СЬаье М1х(игеь Гог К1епочч 5ес(иенс!ПВ 5ТОск 5Оеиг!Оп5 Ог дмтрь (1 пгм) 5ТОск ьоснгзопь Ог ддмтрь (5 пгм) Отнех КГАсеыгь КеАсгюн (Ап ЧОеимеь 3п р!) (Ап ЧОгимеь $П р!) Тшь-С! ЕОТА М!хтиае дСТР дТТР дАТР дСТР ддСТР ддТТР ддАТР ддСТР (1 м, РН 8.0) (10 пгм, РН 8.0) Н,О ддСТР ддТТР ддАТР сЫСТР СЬаье дАТР 30 10 1О 10 10 1О 10 745 675 580 750 5 100 — 100 !00 5 — 100 !00 100 — 100 !00 100 — 5 245 245 245 245 100 1О 1О 10 10 10 10 25 25 880 М)Ц'Е ИАЕЦУ САНТ!ОМ: Р!еаье ьее Аррепспх 12 Гог арргорпа!е ЬапсП)ПВ о( гпа!епа1ь тагЬег( ипЬЬ с! >.
Войет5 апд Бо!66оп5 Р!еаье ьее Аррепспх 1 Гог согпропепп о( ь!ОСЬ ьо(и6опь, Ьи((егь, апс! геаВеппп Е61и!е ь!Ос(с ьо!П6опь !о ЬЬе арргорпа!е сопсеп!га6опь. дАТР (0.7 тм) Оргюпа1, р!саче 5!ар 4. Регопееед д(5777(ед Н О ЕРТА (70 тм, рН В.О) Ех(епь(оп((егт(па((оп т(х(игеь апд сЬаье гп!х(иге ТЬеье геасгюп пшсгигеь сап Ье аяегпЫед Ъу пнхгп8 ГЬе хо!итсь (!и р1) о( ГЬс гаосЬ ьо!и6оиь о( дМТрь апд сЫМТРь, аь ьЬопп !п ТаЫе 12-7. Еогтат(де-(оад(пц ЬОГГег <1) ТМ ЬОГГег 100 тм Тпь-С! (РН 8.5) 50 гпМ МВС1, Тгй-С! (7 м, рН 8.0) Еп2упее5 апд Веьйее5 К)епочч ГгаВтеп( ОГ Е.