Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 138
Текст из файла (страница 138)
Аъ а йпа! гю|ийоп (о аесопдагу я(гис(иге ргоЫегпа, яейиепсе а (еплр|асе иа)пй апо(Ьег 0ЯА ро(угпегаяе еисЬ аъ 5ес(иепаъе (Рго(осо! 3) ог а |йегпюягаЫе 0(ъъА ро(угпегаае (Рго(осо! 5). 11 ргоЫепь ге)а(ед (о аесопдагу ъ(гис(иге |и (Ье (егор(а(е реги а(, |йе аддй(оп (о (Ье сЬа| и (еппепа6оп геасйолль (а( 5(ер 4 |и Иле рт(осо! Язоне) о( 0.5 )лй о1 а)пц(е-а(гапдед 0МА-Ь|пд Е. сой (е.ц., 058) иаиайу ейгп|па(еа (Ье сИйсийу.
6 яиц)е-а(гапдед 0МА-Ь|гкйпд рго(е|п (ыляед )пд геасйопа гпиа( Ье |псиЬа(ед ъч(йь рго(е)паъе К (0.1 68(геасйоп) 1ог 20 гп(пи(еа а( 65'С 1огплаплк|е-3оагйпй Ьийег (5(ер 8 аЬоче). ТЫа сгеаипеп( айоъча дъе 0(ъ(А со епсег |йе асх(иепс чеп(а агпеаппц о1 Ьапдю Рго1осо! 5 0Ыеоху-гпейа1ед 5ес~иепс~пц о1 0МА Оыпц Тао РМА Ро!угпегаье ы лов!тюы то тннк мохе улм!ПАК КОРЕ !ы РСЮ, 1ЬегшоагаЫе ГЗХА ро!ушегаас5 Саи Ье пасд ги р1асе оГ 5ег)пепаае ог 1Ье К!епочч Гга8шепг го сага!ухе сопчепгюпа! йдеохуппс!еогЫе-гпейа1ед, сЬа)п-гегш!иаг!08 аег)пепе!08 геасгюпх !1пп!5 ег а!.
1988). ТЬе аЬ!1Ьу го саггу ош !501Ьеги!а1 сЬа)п-гегпппагюп геасг)опа аг е1еча1е(1 гешрегагиге !70оС) гес1псеа ргоЫеш5 аааос)агед чч!1Ь ипяпагсЬег1 аппеа1(п8 оГ РПшега аг 5рппопа Ыпд!08 ягеа ш 1Ье гегпр1аге Гу)ч)А апд Гас!11- гагеа аег!пепе!08 оГ Гешр!агеа ПсЬ ги аесопдагу 51гпсгпге. Ноачечег, ГЬеге аге аогпе йаасЬ апга8еа. ТЬегшоагаЫе ро!ушегааеа оГ1Ье ЕЛА ро1у!пегаае 1 Гапп!у Ге.8., Таг)) апд 1ЬегшоагаЫе епкушеа епсодед Ьу Агс(гаеа (е.8., РГ(г) сага!ухе гЬе шсогрогагюп оГ ддМТР5 аг а гаге 1Ьаг !а аг 1еа51 ггчо огдег5 оГ ша8шшде 51оачег 1Ьап 1Ье гаге оГ шсогрогагюп оГ дХТР5 !Р1еаае аее ТаЫе 12-8).
!и адд11!оп, гЬе еГГ(с)епсу оГ !псогрогаг!оп оГ а дд)ч)ТР аг а рагг)сп1аг яге !а айессед Ьу 1Ье 1оса! 5ЕГ)ПЕПСЕ ОГ ГЬе гегир!а1е 13)5)А.!пче51!8агога ЧЧЬо Ьаче паЕд Таг) ЕЗУСА ро1ушегаае Гог 51апдагд аес!иепсш8 )сиочч 1Ье соиаес!пепсе5: Ьапд-го-Ьапд чаг)агюп Ги !пгепягу оп апгогайо8гарЬ5 оГ 5ег)пепе!08 8е15, Гад!08 оГ Ьапда Ггогп ГЬе Ьоиоги го ГЬе гор оГ ГЬе апгогайо8гарЬ, апд 5Ьадочч Ьапда !и 1осагюп5 (чЬеге попе 5Ьоп1д Ье. ТЬеае ргоЫеша сап Ье а11еч!агед Ьу пяп8 8епег!са!1у еп8!пеегед чегяоп5 оГ 1ЬегшоагаЫе ГЗХА ро1ушегааеа 1Ьас 1ас1с 5'-33' ехоппс!еаае асг(ч!(у апд сага!ухе ГЬе !исогрогаг)оп оГ ддМТР5 ач)гЬ Ы8Ь еГГ(с)епсу (р!еаае аее ГЬе йасп55юп оп СЬоояп8 а 8ег)пепе)п8 Вуагеш ш 1Ье сЬаргег паггодисгюп апд ТаЫе 12-9 аиг1 Р18пге 12-6).
Но!чечег, ГЬеае пюд(Т(ед епкушеа аге ге!а!!че1у ехрепяче апд аге Ьеаг геаегчед 1ог пае !и сус1е аес)пепе!08 ъчЬеге ег)па!!гу оГ Ьапг1 пиепягу !5 тес)шгед го оЬга)п !оп8 геадя 'га(1!д-гуре Ти(1 ГЗХА ро!уигегаае гешаша а паерп! а11егпаг!че со 5ег)пепаае ччЬеп ргоЫегп5 сапаед Ьу ипяпагсЬш8 оГ РПпгега ог 1споссу 5есопс1агу 51гпсгпге5 1еад го агпЬ(8поп5 геяг105 ги геайп8 5рес!Тгс ае8шеп15 оГ 5ег)пепсе.
ТАВЕЕ 12-0 Ве1аНче ЕГВс!епсу от 1псогрогаяоп от д(а(ТРа апд ддЪ(тра Ьу Атаг) ЕЗДА Ро1угпегаае ЙАгго Ог !а(сокрокАт!Оа( Ог д(а(ТРагдд(ч)ТРа 2500:1 200:1 2400: 1 30,600:1 Нага ггопг Чапе(ег Наго ег а1. ( (ору х отаг( ИЫА ро1упгегаае, геЪ!сЪ!ас(са гхе 6гя 235 апггпо аг!г(а оу гае гег!г(-гуре епгугпе апг( ь аееопа о( 5Ъ3' ехоппс!еаае аспягу, и ао!4 Ъу АпгегаЪагп. 12.45 12.46 Сйарсег 12: РХА 5е((иенский ТАВЕЕ 12-9 Мод(Г(ед ТЬеттоясаЫе РХА Ро1упзетаяея 34((дс!у (3зед со Са!а!ухе Сус!е-яес)иенс)пй Кеас6опя МАме Ами 5ОРРпек 5гкистике РКОРЕКТ!Е5 Тай РХА ро1успегазе (пиптегот юигссз) 832-апппо-асЫ ргосеш счиЬ а дейксед гпо)еси1аг тая оЕ 93.9 1сР (Еавуег ес а1.
! 989). АкпрВТас) С5 (сус!е зес)иенс(п8) (РегЫп-Е!гнет) !.ас)сз сЬе 5ч3' ехопис1еазе асичйу апд зЬотчз а ягопй ркеГегепсе Еог дХТРз очет ддХТРз аз зиЬзсгасез. Атрй- Тат) С5 и юед Гог сус1с зециепс(п8 чдсЬ епд-1аЬе1ед рптегз ог тчиЬ гасйо!аЬе1ед дХТРз. Аптр1кТас) Р5 (йиогезсепс зеоиепсш8) (РегЫп-Е1тег) Отед Гог йиогезсепсе-Ьазед зейиепс!п8. А К1епотч-1Рхе чапан! оГ Тай РХА ро!угпег- азе сЬас 1ас1сз сЬе 6гзс 278 гезЫиез оГ сЬе ич!д-суре епхупте (Вагпез 1992). К1епсат)1 (АВ РерсЫез, 5с.
1.ошз, МЬюип) Тат)иепазе (5ссепТесЬ Согр, 56 1 ошз, М(запит() А К1епотч-1Рас чаиапс оГ Тат) сЬас!ас1ся сЬс йгзс 272 геядиез оГ сЬе Р616-суре епхупте апд сагпез а роспс пшсасюп (Р667У) йас гедисез сйе ргеГегепсе оЕ ил!д-суре Тас ро1утстазе !ог дХТРз очег тЫХТРз. 1.ас)сз сЬе 5'-3' ехопис1еазе асичиу оГ сЬе счч!д-суре епхупзе. Роса пос геас61у ассерс йиогезсепс апа1ойз оГ дХТРз аз зиЬзсгассз, 'ччЬеп юед )п согпЬшапоп счиЬ а сЬеппояаЫе ругорЬозрЬасазе, и ргодисея Ве!з аз Ьеаи- ИЕи1 аз йозс оЕ 5ет)иепазс !п дуе-ргнпег зейиепсш8. ТЬекто5ес)иепазе (АтегзЬат) 5счсга) ойет тнод!йсд тЬспноыаЫс ро(ушсгазсз атс шатссссд соннпстс(айу, с.8., ТацЕХРКЕ55 (Оепрас Со., ОК) анд 5саи(ТЬстш (Еркспмг 8!осссппо)огсз). Ману оГ спсяс нюсййсд снтугпсз гсястнЫс К!снсачс (п ясгитшгс анд ргорстс)ся. Мисасед ГЬегпюяаЫе епхушея ате с(и!с(с(у тер)ас!ик тч!!д-суре спхушся аз йе РХА ро!утпсгаяея оЕ сЬокс !и д!деоху-секш!пасок яес)Оспе!ик.
Весаияе пшсасес1 ГЬеппояаЫс епсукпея схЬтЬтс кедисед йзсппипайоп Ьесзчееп с!ХТР5 апс1 сЫХТРя, сЬе тасюз оЕ ГЬеяе пчо деохупис!еосЫез !п йс ГЗХА-яес(иепс!пк тсассюи пшяс Ье сЬапйед Егош ЕЬояе тссопипепс1ес1 !и ТаЫе 12- !О. ТЬе тпапиуасснгетя оЕ йеггпоясаЫе РХА ро!угпеказез изиа1!у ргочЫе тес!рея Еог !аЬе!!пк ппхея йас аке орсипа! Еог йетг рагскп!аг епхушс. !и (Ье аЬзсисе оЕ ш!отшайоп Воти ЕЬе тпап- АтрВТат) С5 и пос а с1е!ебоп пптсапт 1ЕКе пюзс осЬег пюсййсд РХА ро!утегазез. !пяеад, и сопка(пз а яп81е ротпс пниасюп (646Р) сЬат е1иптпасез ехопис!сазе ас6чиу счЬйе гесасшпй йе ргосезячиу апд ехгеп- яоп гасе оГ йе счт!д-суре сптутс. АгпрВТат) Р5!Йе АШРВТат) С5 сопка(пз а ро(пс пшсастоп (О46Р) сЬас е1пшпасез ехо- пис1еазе асслчсу.
АШРВТац Р5 а1зо сагпез а ро(пс ~Шсасюп (Р667у) сЬас гедисез сЬе ркеГегепсе оГ Р616-суре Тай ро!утеказе Гок дХТРз очек ддХТРз ог йиогезсепс апа!ойы А К!епотч-16се чат(ат оГ Тай сЬас 1ас1сз сЬе йгя 278 гезЫиез оГ сЬе ячйд-суре епхугпе апд сакс)сз а рошс пшса6оп (Р667у) йас гсдисез йе ргеуекепсе оГ счч16-суре Тай ро!угпегазе Еог дХТРз очек ддХТРз ог йиогезсепс апа!ойы Тай РХА сагпез а росепс 5'-3' ехопис1еазе асйчиу (Еоп81еу ет а!. !990) апд сап сака!уае сЬе тпсогрога6оп оЕ дХТРз, дРТР, сПТР ш РСВ (Кп(ие! апт( Ртсагд 1993; 5!иррЬаий ес а1. 1993) апд ддХТР ш зециепстпй геас- Иопз; ргеГегз т1ХТРз ю тЫХТРз ог йиогезсепс апа!ойз аз ялЬзсгасез Ьу а Еассог оЕ -10з (ТаЬог апд В!сЬагдзоп 1995) апд Вепекасез и81у 1аддсгя ш сус!е зейиспстсй сч(сЬ ЫВЫу чапаЫе спсепысу Ьеьчееп ад)асепс ЬаптЬ (3тозз ес а! ! 997), ТЬе зсгиссше оЕ сЬс сгусаййед епхуте Ьаз Ьееп де6пед (р!сазе зее сЬе тпЕоппасюп рапе1 оп ТАО РХА РОРУМЕКА5Е тп СЬартег 8).
Еас1сз сЬе 5 ч3' ехоппс!сазе асйлсу оЕ сЬе тчйд-суре епхуте. Тойейег яч(сЬ Тас)испазе (апд ром!Ыу ТЬегпю- зейиепазе), и и сЬс пюзс Ьеас зсаЪ!е оЕ сЬе РХА ро!у- гпегазез Ьис Ь ас)спите!едйед то Ье шЕепог со Таоиепазе Еог сус! е зет)иенс(п8. ТЬс зсгиссше оЕ сЬе сгуяа!1Ьед епхуте Ьаз Ъееп де6пед (Кото1сч ес а!.
1995). Гас(сз йе 5ч3' ехопис1еазе ас6чиу оЕ сЬе ич)д-суре епхутпе. Еййссепс!у саса1ухез сЬе тпсогрога6оп оГ дХТРз, ддХТРз, апд йиогезсепс депчайчсз ш сус1е- зет)иенс(пй геасйопз (Стозз ес а1. 1997). Веиег яисед со шсегпа( 1аЬе!ш8 сЬап тапу осЬег кЬеппозсаЫе РХА ро!утегазез. Рттосо1 5: Р[деоху-тедуатед 5ег)иеистч ОГВХА Иуи8 Тас! 0ХА Ро[утегате 12.47 5'-3' ехопсс!еаае бота!п 3'-5' ехопос!еаае богпа|п ро!у!пегасе бап!а!и ОЙА Ьпип9 и9~' апб биТР 5~об!п9 928 328 Всое О!4А ра!утегаее ! абе о! с!еачаре 4о репегаге те К!епап гга9!пеп! Таб ОКА ра!уп!агапе В О е 832 П 8! 829 Атр! Тац СВ хеегх 829 Агпр!!Тар ЕВ 554 К!ее!ар! хееи 554 Тацоепаее хеегх 580 Тбеппо Вероепаае Е!С1)КЕ 12-6 5[тот[иге оГ ТЬетто5[аЫе 0ХА Ро!утега5е5 Соттоп!у 05ед т 0ХА 5е иепс1п А11 о[ йе йеппоегаЫе ро[угпега5е5 115[ед [п ГЬе д[а8гат аге гпод!Т!ед чег5юп5 о( Таг) 0ХА ро[утега5е, ъчЫсЬ ВЬаге5 ЕЬе дои!а)п 5[гостите апд трапу о( йе то[1[5 соп5егчег1 атпоп8 а8 0[4А ро[угпегаее5 о[ ГЬе ро[угпегаае 1 !уре.
[п [Ье д[а8гагп, [Ье сопеегчед тог!15 [п йе 3 -«5' ехопис!еаее г[ота!и аге тагЕед !и Вотан пип4егаВО ТЬо5е [п йе ро!утега5е дота[и аге пуаг1сед !и иррегсаее АгаЫс сЬагастег5. ТЬе пип4Ьег5 аЬоче йе д188гат5 де518паге рагдси[аг апппо асЫ геядие5. ТЬе яте5 апд па[иге ОЕ ро!пг тига[!Оп5 аге шаг[сед идй ап аггочч. Рог а дееспргюп о[ ТЬе ргорегде5 о1 ТЬеае ГЬегтоетаЫе 0ХА ро[утегаее5, р[еаае 5ее ТаЫе 12-9, (О!а8гагп5 г[гачч!и [гого дага !и Вагпе5 [1992], Туапдег Ногп ет а[. [19971, Чуаупе Ватпее 1птегпет 5!ге [Ьпр!ууЬагпе51лчи51!.еди7 — ччаупе!1, апг[ 1Ьегагиге ргочдг[ед Ьу сопупзегс!а[ сопзрап[е5.1 ° Оепа(итаг[оп оугЕои[у!е-бгтапт[етЕ РХА гетр1агет (тЕ песе55агу) апд аппеа
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
