Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 134
Текст из файла (страница 134)
О ог ТЕ ЕрН у.б) < ! > 5ес)иепаье геаспоп ЬиЕЕег Се!5 АВагохе Ве! ЕО.ВЖ сч)ч) !ь)ос!есс АснЬ апс! О!!коппс!ео6с!е5 О)ЕВопис)еоС)с)е рг)тегх О!)цопис1еос!с)е ргипега игег) со вег)попсе с)епасигесС г)оиЬсе-гсгапдес) ОС)А сешр!а!ей аге Егеоиепс!у !оицег 120 — 30 иис1еосгаес) йап рпшегс поппа1!у исес) Еог гег)иепс!п5 г!п5!е-ссгапс)ес) сегир1асея Ьоп5ег рг!шест Всче гсге со Еечгег агпрассиа! Ьапй ччЬеп игесС ичсЬ г)епасигег) ВоиЬ)е-гсгапг)ег) ОЬ)А сешр!асея Гог а !1сс оЕ "ипсчегьар ргппегс сЬас Ь!пб со чессог ьеоиепсег иргиеаш оЕ йе сагцес гехсои, рсеасе атее сЬе !пуогшас)ои репе! оп ОЬС! ЧЕК5АЕ РК)МЕК5 ш СЬарсег 8.
Р!еаге а!зо атее йе Епуоппабоп рапе1 оп РКЕРАКАТ1ОН ОЕ 5ТОСК 5ОЕОТ!ОЬ)5 ОР ОЕ!СО)ч)ОСЕЕОТ1ОЕ РК)МЕК5 ЕОК О!ч)А 5ЕОС)Е)с)С1!ч)С ас сЬе епс1 оЕ сЬ!г сЬарсес Р)аътЫ ЕЗЕ4А, с)охес) с)гси!аг, с)оиЫе-ьСгапг)ес) Ргераге р!аяпЫ О)чА Егоги япа11- ог 1агхе-сса1е си!сигег оЕ Ьассег!а (сее СЬарсег 1) ог ассогс)!и5 со сЬе ас)йссопа! Ргососо1 ас сЬе епс) оЕ сЬ1ь рюсосо1; 5 РВ оЕ ОЬСА Ь гег)и!гес) Еог еасЬ яп оЕ Еош гес)иеиссп5 геасбоиг Ес)ЙА, сЫО, г)с)с, аисс с)ВТ). прес!а! Ес!осрпсепТ Огу гсе-ейапо! Ьай <! > ЯаСег Ьай ргехеС Со б5'С МЕТНО0 1. Тгапауег -5 СсВ оурип6ес) р!аяиЫ Е)!ч)А со а 1.5-гп! ппсгоуиае сиЬе.
Ас1)иас сЬе чо1шпе со 50 р! чч!ЕЬ Н,О. АсЫ 10 р1 о1 ЕгеаЬ1у ргерагес1 2 Ьс !ч)аОН)2 шм ЕТ)ТА ао!ис!оп. 1псиЬасе сЬе пихсиге Еог 5 шсписеа ас гоосп сегпрегасиге. 2. АсЫ 30 р! оЕ 5 м апппопшш асесасе апс! ппх сЬе сопсепсх оу сЬе шЬе Ьу чогсех!пВ. 3. АсЫ 45 р1 оуес!ш!!Ьгасес! рЬепо1 апс1 пих сЬе сопсепсь оуйе сиЬе Ьу чогсехспа. 4. АсЫ 135 Сс! оу сЫогоуогппаоагпу! а!соЬо1, пшс йе сопсепса оЕ сЬе сиЬе Ьу чогсех!па, апс) сЬеп керагасе йе рЬасеа Ьу сепсп6лцапоп ас сиахппшп ьреес) Еог 15 пиписеа ас гоот сешрегасиге !п а ппсго6сВе.
Ргогосо12: Ргераг(п5 Е)елагигег( Тетр1агеь Еог 5ег)иепс(ло бу Р(г)еоху-тег)(агег( С)гаги Тегттаг(оп 12.29 5. СагеуиПу геиюче сЬе иррег ас(иеоих рЬахе со а ЕгеаЬ иисгойВе шЬе апс) ргессрПасе йе 0ХА Ьу йе адсППоп оЕ 330 р! оЕ !се-со!д ейапо1. М)х сЬе сои(ел!а оЕ сЬе сиЬе апг) р1асе и (и а г)гу ке — ейапо1 Ъай Еог 15 пиписея 6. Кесочег сЬе г(епасигес(0МА Ьу сепспЕииасюп аС гпахиишп хреег) Еог 15 ш)лисео ас 4"С ш а т(сгоЕиае. 7.
Уегу сагеЕиПу г(есапс йе хирегпасапс сч(сЬоис сПяигЪспц сЬе 0ХА реПес, ччЬ(сЬ гпау ог гпау пос Ье ч(яЫе оп сЬе яг)е оЕ йе сиЪе. 8. КесепспЕице йе сиЪе Еог 2 ьесопг)х апг( геточе сЬе !ахс сгасех оЕ есЬапо! сч!(Ь а г(гаччп-оис ргрессе Пр сч(сЬоис с))ьсигЬ(пП йе 0ХА ргессрПасе. 9. АПоьч сЬе ргесгриасе со й'у ас гоот сепсрегасше апг1 гехихрепг) йе 0ХА ис Н О ас а сопсепсгасюп оЕ 1 рП/р!. 10. Аппеа1 сЬе рппсег 0ХА со сЬе с1епашгес1 сешр1асе, ияп5 5 рВ (5 р!) оЕ аПсаП-г1епашгег1 р!ая ш)г)0МА Еог еасЬ хес оЕ Еоиг Е)ХА аег)иепс(пц геассюпх (с.е., 1.25 рВ с(епасигег) Е)ХА Еог йе геасПоп солса(пшВ йе сЫА геасПоп, 1.25 рВ Еог сЬе геасПоп солса)п)пк г)с)6, есс.). 5ес ир аппеа1шц геасс)опа ах ЕоПосчя а))га!$-г)еласигег) РХА 5 0 рП ((л 5 р1 Н,О) ОМЗО ('орПооа)) 2.0 р! 5е9иелаее геассюп Ьийег 2.0 р! ее9иелс(лц Ргилег !.0 р! ($0 лц) НО со ! !.0 р! 'Р)еаее атее сЬе рале! ол ТКООВЕЕ5НООТ)МС т Ргососо! 4.
Неас йе иихсиге со 65 С 1ог 2 пиписеа апг) йеп аПочч П со соо! 51очч!у со гоогп сешрегасиге. 5(оге йе аппеа1ес( хашр1ех оп ке ип61 сЬе е1опВасюпгсЬа(п сеппшасюп геасПопх аге хес ир. 11. Ргосеес) со 5сер 3 (и Ргососо1 3. ТКООВЕЕ5НООТ!МС А ргоЫет солчлол!у елсоилсегег) )л хес(иелс)лц с)оиЫе-а(галс(ег) р)ахтМ 0МА сеглр1асеь 'ь йе арреагалсе о1 Ьалг)а ас йе хате роя!)ол )л сччо ог тоге )алев о1 йе ьециелолц де!. ТЬеье ЬалсЬ аге 1гег!иелПу тоге (лселье йал ЕЬе ЬалсЬ )л йе аисЬелис хегсиелс(лц )аг)г(ег алг( аге иаиаПу саыег1 Ьу солгал ПлаПол о1 СЬе ОМА !егор)аге лей хЬол 0МА алс) КМА одопис(еог)дев СЬаг асг аь лолхреаПс рг(теса )л сЬе ОМА-хег)иелс)лд геасиоля ТЬ)ь ргоЫегл сал Ье ьо)чег) Ьу лВогош риг)Есас(ол о( сЬе р!ахт(с)ОМА ргюг со с1еласигасюл.
Моге гаге! у, йене ЬалгЬ, югле с(теь саПег( ВАГ(5 (Ьалг)х (л аП соиг )алек), гегю(С Егот ргоЫеть гч(ПЬ г)елагигаиол. ВАР(.а сал гюглеиглев Ье гег)исес) )л )лгелх((у алс) Егег)иелсу Ьу (С ) ям(сЫлд Со йе (аьгег г)елагигагюл ргогосо! (р(еаче аее СЬе рале( ол А00!Т!ОМАС РКОТОСОО КАР!О 0ЕМАТОКАТСОМ ОГ 0ООВСЕ-5ТКАМОЕ0 0МА) алг1 (2) солчеп(лц йе с(оаег( с)гси!аг ягрегЬеПса! р(ахт)с(0МА со!(леаг то(еси(еь Ьу г))аеас(ол сч(сЬ а геьгг(сиоп елхуте (еуал5 алс) 5ог()а 1 991). Ало(Ьег хо)ис(ол со сЫх ргоЫегл 'ь со иве а ггР-)аЬе)ее) рлтег (л (Ье ОМА-аег(иелс)лц геасс(олх )л р!асе о1 а гаг()о)аЬе)ег( с$МТР (ьее Рго(осо) 3). ВАСТЕК!ОРНАСЕ ).
ТЕМРЕАТЕ5 ЕОК 0МА 5Е(4С)ЕМС1МС ОМАа с(олег( (л Ьагхег)орЬа5е ). сал Ье ьег(иелсег) еххелг(аПу аз г(еасг)Ьес( (л СЬВ ргогосо1. Ночгечег, )тргочеП гехи!Сч аге оЬСа(лег) П СЬе Ьасйег)орЬаце 0МА 'ь ПтС с(еачес) чч(СЬ геЯлсПол елхуглеь СЬаС ге(еахе йе сагцег 0МА Когл сЬе чессог ьегугелсея ТЬе с1олес$0МА 'ь йел риг)6ег) Ьу це1 е!есСгорЬогеяя ехггасСюл сч(СЬ рЬело1, алг) ргес(р(сас(ол ией ЕПсало( (хее СЬарсег 5, РгоСосо! 3). Арргохпласе!у 3 рВ о1 ОмА )пьес ь ихег)1ог еасЬ вес о1 ьециелс)лц геасПо ля А!сеглаьче(у, ьглаП ( < 3 — 4 Иэ) )лаеих сал Ье аглрИес$(гогл а Ьассег(орЬаце Л чессог Ьу РСК ия)ла одопис!ео6г$е рг)теса СЬас Пал)г сЬе (льегс(ол ясе. ТЬе атрППегс ргог)исс сал Ье риг)Пег( алг1 хиЬ)ессег( со 0МА ьег(иелс)лц.
Ргососо! 2: Ргераг/пИ Оеиасигед Тетр!а/еь Рог Бет(иепстИ Ьу Р/деоху-тед/а(ед Сйалп Тегтлпадоп 12.31 А001Т1О!ъ(АЕ РКОТОСОЕ: РОК!И(САТ!ОХ ОЕ РЕА5М10 0(ъ/А ИКОМ 5МАЕ05САЕЕ СОЕТОКЕ5 ВУ РКЕС1Р1ТАТ1О!ъ( СА/1ТН РЕС САОТ1О!ъл:Р!еале тее Арреигйх 12 Iог арргориа1е Ьапдйпй о( птасепаЬ тат)лед ъчйЬ <! >. Адд!1!опа( Ма1епа! ь А//га//пе !уьь ьо/и/юп / А/гаИпе !ул/л ю/иасап !I А!УаИпе |уль юйаюп П гйои!д Ье /гетву ргерагед апд илед ас гоогп сеилрегасиге. А//га//ие !ул/4 ло/ирои П!, ке со/д Агитоилит асеIа1е (7.5 М) О/ъ/аъе-йее К/ъгате /юргораио! /ъ/аС! (4 м) РЬепо/гсЫогоуопп <! > Ро/уесЬу/епе е/усо! (73% ълуч РЕС 8000) (! > Ргосе/пате К (70 гпВ/т/) ТЕ (РН В,О) Тегглулс Вго(Ь Ме(Ьос| 1. Сгоъч 5-гп| си!сигея о/сгапь/оггпед Ьассепа |и Тегг!Ис Вго)Ь р!ца сйе арргорпасе апИЬюйс (аее АррепсИх 2) очегп|фс а1 3 TС ъч!1Ь Мдогоиь аега1юп.
Е. соИ йга!пл ОН5а аид ХО-Вме аге Гйе рге/еггед Ьолск 2. Тгапйег 1.5 гп! о/ сйе онеги!фс си|сиге со а гпгсгойлйе сиЬе апд гесочег сЬе Ьассепа Ьу сепсг)йл8ас)оп ас гпах!гпигп ьреед /ог 1 гп|писе. Кеточе сйе гврегпасапс апд гер|асе |1 ънйЬ апосЬег 15гп| а!к|ио1 о/сйе очегп|ф1 си|сиге, Сепсп/ц8е ас тах|гпипт ьреед /ог 1 т!песе. 3. Кегпоне аИ о/сйе еирегпасапс Ьу аьр|гайоп апд геюерепд сйе Ьассеиа| реИес |и 200 и| о/А!Иве !ух!а ю|ийоп ! спаса!п!п8 5 т8/т! !уюгугпе.
4. Адд 300 р! о( а !геьЫу ргерагес| ю1исюп о/АИтаИие )ух!а ю!ис!оп И апс| гп!х Ьу )пней!пе сйе сиЬе лечег- а| Игпев ТЬе ю!исюп ейои|с| с|еаг 1о степь рагепсу. ОО /НОТ С ОКТЕХ. 51оге сйе 1иЬе !п )се !ог 5 т)посев. 5. Адд 300 р! о! АИлаИпе |уйа ю!цсюп 18 апд т)х Ьу !инеи)п8 сйе сцЬе аечега! сипев 6. Сепсг|йл8е сйе сиЬе ас плахптвгп ьреед /ог 10 т!посев ас гоогп септрегасиге. Та!дпе саге пос со д(асигЬ сйе реИес о/ Ьассепа! деЬпв сгапйег 1Ье юрегпасапс со а /геей пдсгойлВе 1иЬе. 7. Адд ОНаъедгее КЫаье 1о а Ипа! сопсепсгадоп о(25 ркгт!. 1псиЬасе 1Ье сиЬе/ог 20 т!посев а1 37С. 8. Ехсгасс |Ье ргерага1юп ъисЬ 400 р| о/ сЫого/оггп: Воагпу! а|соЬо| (24:1), сгапйегпп8 1Ье ас(иеоца рйахев 1о (геяЬ СиЬеь Ьесъчееп еасЬ ехСгассюп. Сопдпие сйе ехтгасС/опт ипд! по пюге гпасепа| 'ь чеИЫе ат СЬе !пседасе. 9. Аод ап ел|па! но1игпе о/ !юргорапо), гп|х Ьу ножек!пу, апд Сйеп гесочег СЬе ргес!р!Сасед ОЕ(А Ьу сеп- сг!/цИас!оп а1 тах|гпипт ореад (ог 10 т!гвсеь а1 гааги Сеплрега1иге.
10. Кегпоне сйе ялрегпасап1 Ьу акр!гас!оп апд сйеп ъчаъЬ сйе реИес о/ р!азт!д 0ХА апс| сйе Вдел оНЬе сиЬе ъч!1Ь 70% есЬапо!. Айег сепси!(цйасюп а1 гпахипипт яреед (ог 3 ил|плиев а1 гоопт сегпрегавге, гегпоне Иле гврегпасаис Ьу аар!гас!оп апс| сйеп аИоъч сЬе гета!и!п8 есЬапо! со енарогасе ас гоогп септрега1иге. 11. (Одопа!г (/ле оп/у лу(Ье !еие(Ь ог с/иа/лууо/лес/иеисе оЬ(алпет! /гопт гесеиС пдилргерагадоил о/р/атт/д Олъ/А Ьат Ьееи ииалс/лтаоогу) Оью!не 1Ье реИе1 |и 100 р! о/ ТЕ (рН 8.0), адд 7 р| о/ ргосе!пахе К (70 гпмнп!), апд |полЬаСе Сйе геастюп йлг 20 гп!посев ат 37'С.
ЕхСгаст Сйе ю!цт!оп ъч!1Ь рйепойсЫого/огил апд гесочег сйе ОНА Ьу адд!пе 50 р! о/ 7.5 м агпгпоп)цгп ас1е1асе апс| 300 р| о/ е1Ьапо!. Кеточе сйе ирегпасап1 апд аИоъч Сйе !аас пасек о/ еСЬапо! Со ечарога1е ас гааги 1ептрегасиге. ОьюЫе сйе реИе1 !п 32 р! о/ Н О апд сйеп ргес!рйа1е 1Ье 0НА Ьу адд!п8 8.0 р! о/ 4 м !ъ)аС! апс! 40 и| /13% РЕС 8000. М!х сйе соп1епь о! Ейе 1иЬе Ьу !инеи!ие !1 хенега! 1!тел апс| сйеп йоге сйе сиЬе /ог Ьоцг оп |се. Кесонег 1Ье р)алт!д О/ъ(А Ьу сепсг!Илеайоп ас гпах! твгп ьреед /ог 15 гп!посев а1 4'С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
