Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 145
Текст из файла (страница 145)
г2.74 Ргосого1 8: Ртератапоп о/ Еуепатиг!пе Ро!уаету!аттде Се!з 12.75 Ап а!сегпа6че, Ьис нюте ехрепбче шейой оЕ ртерапп5 йе асгу!атпЫе зсос)с ю1исюи ы со ршсЬазе а ргешсхей росчйег о/ асгу!ашЫе:Ьсз Егош а сошшегсса1 шапиЕассигег (е.5., Вю-Кай) апй со гесопз6сисе сЬе инхсиге ъчсЬ Н,О.
ЯаЬс1ттей, ргепихес) ю!исюпз оЕ асгу1атпи)е;Ьтз аге ачас1аЫе /гонт Насюиа! Р)аВпозс/сз, Айапса, беог5)а. СЬеарег Пгайез оЕ асгу1апсЫе апй Ьсзасгу!ашЫе аге ойеп сопсапнпасей гйсЬ сиеса) юпз. Яос1с ю1исюпз оЕ асгу!ашЫе шайе ъчсЬ йезе Вгайез сап еая!у Ье ршт6ей Ьу з6гпп5 очегшПЫ гйй -0.2 чо1шие оЕ тиопоЬей геяп (МВ-1, МаП)пс!стой!), ЕоПоъчей Ьу 6!сга6оп сЬгоиВЬ 'тссЬастпап Но.
1 рарег. Рипп5 зсога5е, асгу)ашЫе аий Ьсзасту!ашЫе аге з1осч!у сопчепей со асгу)к асЫ аий Ьтзасгу!к асЫ. ТЫз йеапйпабоп геас6оп 6 сага!уаей Ьу !тВЬс апй аПса1с. СЬес1с сЬас йе рН о( сЬе асгу1атпЫе ю!шюп ь 7.0 ог 1ея, апй поте сЬе зо1исюп ш йаг1с Ьои1ез ас гоотп сетпрегашге. ЕгезЬ зо!шюпз зЬоиЫ Ье ргерагей счету Еесм змее)и. Аттотигп регзи/Еасе (!.6% сч/ч) т Н О <! > Апипопвтп регзиПасе ь изей аз а саса!узс Еог йе ро!утептас)оп о/ ро!уас~у!ат)йе Перв ТЬе ро!утег)ха()оп теас6оп 'ь с1пчеп Ьу стев тай!са!з )Ьас ате Вепетасес1 Ьу ап охЫо-тейис1юп геас6оп !п ччЫсЬ а й!ат!пе (еПм ТЕМЕР) !з изей аз йе ай) ипсс гаса!узс (СЬгапсЬасЬ атх) К х!Ьатй ! 922). ОЫ апс гноив то ретзиПасе зо!исюпз тау пос Ьаче йе саса1у6с рочмег со с/гве (Ье ро!ушетоеа6оп теас6оп со сопср!есюп.
Еитху Ьапйз о/ Р!м(А апс! чагюиз ойет Еогпсз о/ псаспх й!зсоп!оп аге йе !пеисаЫе сопзетрсепсе. Ре/оп/еед Н,О Ое/егВеп/, ЬоизеЬо/д д/зЬмчазЬ/пВ Е(Капо/ КОН/Ме/Ьапо/ зо!идоп <1> ТЬе зо!и6оп, счЬ)сЬ сз изей со с1еап 5!ая р1асез изей со сазс зет)иенс)и5 Пе!з, ы ргерагей Ьу тПяо!тйп5 5 5 оЕ КОН реПесз сп 100 ий оЕ тпейапо1.
5соге йе ю1шюп ас гоош сешрегасиге си а 65Ьс1у саррей 51ая Ьосс!е. 5//ал/х/пи Витд <! > ТЬе стас!нюпа1 я1апийп5 Пи)йз (е.5., ЯЕшасосе Егози ЯВша апй Кере1сосе Егош ВРН 1пс.) сопса(п й)сЫогойппесЬу!зПапе, смЫсЬ сз сохсс, чо)асПе, апс1 ЫПЫу ПаиниаЫе (Еог шЕоппасюв аЬоис й)сЫоготПшесЬу1я!апе, р1еазе зее йе ш(опиасюп рапе1 оп Р1СНЕОКОР)МЕТН тЕ513АНЕ). 1п гесепс усата, попсохтс а1сегпаичез Ьаче Ъесотпе ачас1аЫе, тпс1итПп5 Се! 5!сс1с (РМС Вюргойиссз), Ка)пХ (1/пеПсо, 5соссзйа)е Аптопа), апс! Асгу!сазе (5сгаса5епе). /Ох ТВЕ е/есЕгорЬогезтз Ьи/уег ТВЕ )з изей ас а смог)с!п5 зсгеп5й оЕ 1х (59 шхс Тпз-Ьогасе, 2 гпхс ЕРТА) Еог ро!уасту!асиЫе Пе! е1ессгорЬогеяз. ТЬсз !х сопсепсгабоп В ьчке йе зсгепВсЬ изиаПу ыей Еог а5агозе Ве1 е!ессгорЬогеяз (р1еазе зее СЬарсег 5). ТЬе ЬиВег гезегчо1гз оЕ сЬе чегйса! сап)сз изей Еог ро1уасгу!апсЫе Ве! е1ессгорЬогеяз аге Еаи1у яиаП, апй йе апсоипс о( е1естпс сиггепс раяей сЬгоиВЬ сЬетп сап Ье сопыйегаЫе.
Рзе оЕ сЬе 1х ТВЕ сопсеисгасюп ргочЫез сЬе песеяагу ЬиВепп5 росмег. ТЬе рН оЕ йе 1чийег зЬои16 Ье ИЗ. 1с ы ПепегаПу пос песеяагу со ай)изс йе рНс Поищет, сЬе рН оЕ еасЬ псам ЬассЬ оЕ 10х ТВЕ зсос)с пшзс Ъе сагейтПу сЬес1сей. Рзе йе затпе зсос1с оЕ! Ох ТВЕ со ргераге Ьой сЬе Пе) апй йе типшп5 Ьийегз. 5шаП й(ЕЕегепсез (п юпк зсгеп5сЬ от рН ргойисе ЬиЕЕег /топя сЬас сап Вгеас1у тПяогс йе ш!Вгас)ов оЕ сЬе РЫАз. А пюеППсабоп оЕЕЬе зсапйагй ТВЕ Ьийег ияп5 саиппе (36 5/!тсег о( 10х ТТЕ Ъи(/ег) (п р!асс оЕЬопс асЫ ъчП е1спииасе гПяог6опз ас сЬе сор оЕ йе Пе! саизес! Ьу 51усего1-Ьогасе ап(опк езсег сошроипйз (Р)за-СстППашзоп апт! ЕиПег 1992). Еог ЕипЬег тпЕогшасюп, р!сазе зее йе спЕоппа6оп ране! оп СЕТСЕКОЕ ПЧ РНА 5ЕОС/ЕНС1ЫС КЕАСТ)ОЬ)5.
ТЕМЕО (Н,А/,/м/',/9 '-/е1гагпе/Ьу/е!Ьу/епееВатте) <! > Е!ессгорЬогеяз-Вгайе ТГМЕР 6 зо1й Ьу тпапу шапиЕасшгея !пс1ий)п5 ЯВша апй Вю-Кай. ТЕМЕР ы ЬуВгозсорк апй зЬоиЫ Ъе зсотей сп а 65Ьс!у зеа1ей Ьосс!е ас 4'С. ТЕМЕР 6 ыей аз ап ай)ипсс саийузс Еот сЬе ро1ушепта6ои оЕ асгу1агпЫе.
(/геа, зо/!д Ьресса! Ецс))рс)тепе Ви//доВ Ь/пдег еВрз (5-ст /епВЕЬ; Ьче со зечеп рег Ве/) Се/-дгу/пВ гас)сз АЫюиПЬ пос еяепиа!, Ве1-с1гу)п5 гас1сз аге сегсатп!у ехсгепсе1у сопчешепс Еог йгу(п5 апс1 зсопп5 51ая р1асез ыес1 Еог зес)иенс)п5. ТЬезе гас1сз аге ачас!аЫе Егош зечега1 шапи/ассшегз нсс1итПп5 В)о'мЧЫсса)сег. 12.76 СЬарсег 12: В%А 5едиелс(ле Се)-яеа)(лП Гаре Рог ехагпр!е, ЗМ ЗсоссЬ ЗсгессЬаЫе Таре (1.аЬ ЗаЕесу Зирр!у, !апевча!е, Иг(звоня(п), ЗМ ЗсоссЬ уеаогч е1есспса! саре №56 (ГПЕе ТесЬпо!о8(ея), ог ЗМ ЗсоссЬ ро!усесгабиогесЬу!епе (РРТЕ) ехсгидег( 61ш саре.
Рог а саясизяоп оГ йе ияебг1пеяз оЕ чагюиз сурея оЕ саре апд осЬег пгесЬодз оЕ зеаап8 8е1 р!асея, р!еаяе вес Неп8еп (1996). С(авя р)асев ГтагсЬес) ра(г) алс( 5расегя ТЬе гессапаи1аг р!асея аге гладе 6ош попсешрегед 8!аяя, чдй опе р!асе З.5 — 4.0 ссп!оп8ег сЬап сЬе осЬег, ог гч(сЬ опе р1асе поссЬед. С!аяя (в а 60шд апд сЬив р!асея Ьесоше дегоппед дипп8 ые. То гедисе сЬе рояяЪгасу оЕ 1еа(св апд сгас)с(п8, и Ь Ьеяс го (сеер яег)иепсш8 р1асея ш шассЬед расгз апд со иве сЬе р1асея яресгбед Ьу йе пзапи(асшгег о( сЬе яег(иенс(п8 8е1 сап(сз. С!очея Гга(с-угее, с)(ярояаЫе гиЬЬег ог Р(ГО Регги!еит )еПу Ордопа1, р(еаяе яее 5сер 4. Ргосес(сче ЬелсЬ рарег Р!агак-Ъас1сед рарег (!(аудгу ГаЪ Сочег Егош Р!яЬег) ог ВепсЫсосе.
56аг)сясооГЬ сотЬ (0.4-глт ГЬгс)с, сч(ГЬ 32, 64, ог 96 сееГЬ, с)ерелс)(лд ол ГЬе сарасгсу оГ ГЬе ее) аррагасия) 5(с)е-агт Г)ай (250 гл)) 5расегя (си о рег ееl, е)ГЬег солясалг ГЬ(с)слезя ог и есГПе яЬарес)) 5расегя аге гпаг(е о( сЫп (ыиаау 0.4 пнп) ПехгЫе р!аяск ог Тейоп (Зап8ег апг( Сои!яоп 1978) апд аге жег( со 1сеер йе 81аяя р!всея арагс.
А гчасегс(8Ьс веа1 ь Еоппег( Ъепчееп йе р!асея апс( ярасегя, зо йас сЬе ипро!угпепсед 8е! яо! исюп доея пос 1еа1с ош и Ьеп сЬе 8е1 ь саяс. ТЧед8е-зЬаред ярасеп аге ыес1 со ргог(исе 8е!я сЬас аге сЬ(с1сег ас йе Ьоссогп йап йе сор. Ггипп8 е!ессгорЬогедз, сЬе спсгеаяед сгояя-яесс(опа! агеа 8епегасев Пе!д-ясгеп8й 8гагаепеи геш16п8 сп зЬагрешп8 оЕ Ьапдз апд а пюге нп1Еопп зрассп8 оЕ Ьапдз очег йе!еп8сЬ оЕ сЬе 8е! (Апяог8е апд ГаЬе(с 1984; 01ззоп ес а1.
1984). Чгедае-яЬаред 8е!я аге гесопипепдед ячЬеп сЬе 8оа! Ь со (псгеаяе сЬе геад-1еп8сЬ оЕ сЬе 8е1 Ьис аге пос песеяяап!у Ъепе6сса! гчЬеп сЬе агш Ь со гезо1че сошргеяяопв ог со пгахипае гею1шюп оЕ а рагдси!аг геГПоп оЕ яег!пенсе. А!сЬои8Ь гчед8е-яЬаред 8е!я пгау очегсопсе Ъапд ярас(п8 ргоЫешя, сЬеу аге д((6си!с со роиг апд обеп сгас(с ироп дгусп8. 5уг!лее Г60 сс) Орсюпа1, р!еаяе яее Зсер!5.
Теяс-ГиЬе гас)с Игагег ЬаСЬ ргеяег аг 55 С Роиг СЬе вес!иенс(пП ее!в по 1евв йал 30 пнлигев Ье(оге иве. Абег ро!утес(га(!оп, СЬе Пеа сап Ье всогед Гог ир Со 24 Ьоигв. МЕТНОР ас !МРОКТАЫТ То ргечепс сопсалиладоп о( йе ц!аяя виг(асев Ьу я(с!и одв, счеаг Са1сдгее П!очес а( аП Пгпев алс1 Ьалд!е йе р!асев Ьу йе(г едеея. Ргерагабоп оГ С!а55 Р!а1е5 1. 1Г песеяяагу, гегпоче о!д 861ашгдпП геаПепг Ггот р1агея Ъу ясчаЬЬ(пП СЬет илСЬ КОНЬпе(Ьапо! яо!иооп. 2. ЮаяЬ йе р!асея апс1 ярасегя сп а иапп, д(!исе 801исюп оГ д(вЬсчаяЬдпе 1(с(и(д апд (Ьеп ппзе йепс (ЬогоиПЫу сп сар иасег, Го!!осчед Ьу с1еюпгхед Н~О.
!((пяе ГЬе р1асея ил(Ь аЬво1исе ейапо1 го ргечепс ячасег ароса, апд а1!осч ГЬегп сппе со дгу. ТЬе р!асея пшзс Ье с1еапед гпедси!оив!у со епшге йас агг ЬиЬЫея до пос Гопп счЬеп сЬе 8е! ь рошед. 12.78 СЬаргег 1г: ОЕсЕЛ 5егЕиепс!пд 6. С!асор йе р1асеа соиесЬег оп опе яйе лч!сЬ ьчо ог сЬгее 1аг8е Е5-сш 1епВсЬ) Ъи!Ы08 Ъ|пс!ег с1лра. В!пс1 сЬе епПге 1еп81Ь оЕ сЬе ойег яс1е апсс сЬе Ьоссош оЕ сЬе р!асеа чч!ЕЬ Ве1-аеа!!и8 саре со ша1се а ччасегс!ВЬс аеа1. ТЬе апп Ь со сгеасе а лчасег08М аеа! Ьеьчееп йс р1асеа апг! арасега ю йас ипросугиеихесс асгу1апгЫе ао1псюп «Соса пос!саСс ош.
Моас 1еасса оссиг ас йе Ьопот согпега оЕ йе р!асса, ао !с Ь опропапс со са1се рагски1аг саге со 1еаче по Вара ъ«Ьеп Ео16!п8 йе саре агоипсс йе согпега. 1Е роаяЫе, йе согпег аессюпа оЕ саре аЬои14 Ъе Ео!оео аа "Ьоар1са1 согпега." 7. Регио ге йе Ъи1Ы08 сПра апс1 аеа1 сЫа ЕЫе оЕ йе Ве! Р1асеа гч!сЬ Ве1-аеаПии саре. 8. Р1асе сЬе Пас 8!Пе оЕ йе аЬаг1сасоой согпЬ !псо сЬе ореп епс1 оЕ йе Ве! шо!П ао сЬас П Пса апии!у. Кепюче йе сопсЪ апсс 1ау сЬе егирсу Ве! шо!П оп сЬе сеас-сиЪе гас1с.
Роиг!щ йе Се! 9. Сочег йе ччогЫпВ агеа оЕ сЬе ЬепсЬ тч!ЕЬ р1ааск-Ьас1сес1 ргосесссче рарег. !с Ь а1тоя ипроьяЫе со роиг аег!иепс!п8 ВеЬ к!ЕЬоис глг!рр!п8 асгу1апгЫе ао1исюпа опсо йе ЬепсЬ. Боте гпчеяЬТасогь р1асе а 1аг8е гссче1ор!п8 сгау оп сЬе ЬепсЬ со сопла!п сасаягорЬк аргПа. 10. !и а 250-пл! 8Ые-апи Паа!с, ргераге а асс!пепе!пи Ве! ю1исюп сопса1и!п8 йе ссеягес! сопсепсгасюп оЕ асгу1ашЫе аа арес!Пег! ш ТаЫе 12-19. ТЬе чо1ишеа 8!чеп !и йе саЫе аге ялЕПс!епс Еог а яп81е 40 х 40-сш асс!пепе!п8 Ве! апсс сап Ье ргорогсюпаПу асс!их!ее! со ассопппоссасе япаПег ог 1аг8ег це18. г4, !МРОКТАЫТ ТЬе РгеРагагюп оЕ йе Ве1 гпиал Ье согпР!егес! чч!СЬоиг !пгеггиРС!оп !гоги СЬВ Ро!01 оплчагсС.
11. СогиЪлпе аП оЕ йе геаВепса апсс сЬеп Ьеас йе сю!исюп ш а 55'С ччасег Ьай !ог 3 ш!писеа со Ье1р Й8801ис!оп оЕ йе шеа. 5о1пЬг!геапоп оЕ игеа Ь ап епгсогЬегпис гсассюп сЬас ргоссегла а!оп!у ип!еаг ап ехсегпа! юшсе оЕ Ьеас Ь ыей ТЬе чо1шпе оЕ ЕЬе ао!шюп ач1! Ье -66 гп1. АсЫ Н,О со йс ао!шюп Ьпп8!п8 йе Впа1 чо1шпе со 100 пг1, 12. Кеплоче сЬе гю!00оп Егош сЬе гчасег ЬасЬ апс1 аПочч Ь со соо! ас юогп сегпрегасиге !ог 15 пипигеа.
5чччг1 йе пихгиге Егош Ение Со йпе. 13. АссасЬ сЬе 8!сне-агш Паа1с со а ъасшлш!ше апгс с!с-Ваа сЬе ао!исюп. ТЬЬ асср ргечепса сЬе Еоппаиоп оЕ а1г ЪиЬЫеа !п сЬс 8«1 пихсиге Впг!п8 ро!угпеНхапоп оЕ асгу!агпЫе, ччЬкЬ га ап ехогЬеппк геассюп. 14. ТгапаЕег йе ао1иПоп со а 250-ш1 81ааа Ьеа1сег. АсЫ 3.3 ш! оЕ ЕгеаЫу ргерагесс 1.69« апппошшп реггш1Еасе апс! яччг1 йе ие! ао1исюп пепл!у со пих сЬе геаВепся 01«1 атпгопшгп регги!Еасе ао1исюпа тау пос Ьаче йе саса!упс роччег со иичс йе ро!угпепаасюп геассюп со сопгр!есюп. Риалу ЬапсСа оЕ 1314А апгс чапом огЬсг Еоппа оЕ пгасих сПасогсюп аге сЬе шсчпаЫе сопаегсиепсе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
