Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 154
Текст из файла (страница 154)
5!ос)с ко1шюпк икиа!!у сопсаш а япц!е йНТР ог дд)ъ)ТР ас а сопсепсгасюп оЕ 10 плм ог 20 птм, ассогд)пц со йе пеесЬ оЕ сЬе тпчекстцасог. ТЬеке ксос1ск аге ксогей ас -20 С ш япа)! а!и!иоь, апт1 сЬеу тпау Ье 61!осей со цепегасе, Еог ехашр!е, коЬлсюпк сЬас сопсаш а11 Еоиг дЬЕТРк ас а сопсепсгасюп оЕ 5 шм. А писгоЬа1апсе ылкей со ъчелцЬ оис сЬе гет)и)гед атпоипск оЕ д)ъ)ТР ог дй)ъ)ТР шсо ксеП1е писгоЕице сиЬек. ЕтсЬег ые а д)крокаЫе краит1а ог с1еап йе краси!а ъче11 ъчтсЬ есЬапо1 Ьеьь ееп еасЬ ъчетцЫпц ъчЬеп птаЫпц ир ко!исюпк оЕ д)ЕЕегепс дЬ)ТРк ог дйЬЕТРк. ТЬе саЫе кЬоъчк сЬе аптоипс оЕ ко1Ы, апЬус1гогь йеохупис!еотЫе ог т$Ыеохупис1еосЫе гет)и)гед со ша1се 1 тп! оЕ а 20 тпм ксос1с ко!и6оп.
Апюипс !ш шц) гет)и)гед то ша1се ! ш! оЕ а 20 шм ю1исюп Реохупис1еосЫе дАТР дСТР дТТР дОТР т11ТР ддАТР тЫСТР тЫТТР тЫОТР 7-йеата-дСТР 7-йеата-д!ТР 491.2 467.2 482.2 507.2 508.2 475.2 451.2 466.2 491.2 506.2 507.2 9.82 9.34 9.64 10.14 10.16 9.50 9.02 9.32 9.82 10.12 10.14 Рляо1че тЬе т1еохупис!еосЫек ог йЫеохупис1еосЫек тп а япа1! чо1итпе оЕН О, апд йеп ше РН рарег апд ап ашошас! с ртре6пц деч!се со ад)икт сЬе РН со -80 Ъу адйспц кгпаП аию писк оЕ 2 тт ттаОН ип6! сЬе РН геасЬек 8.0. А!сегиассче1у, йе ксос1т ко1исюпк гпау Ъе цепегасед Егош тиопоюйшп ка!ь оЕ йе деохупис!еоттде спрЬокрЬасек ог т$Ыеохупис1еосЫе тпрЬокрЬасек Ьу гцяосч!пц ап арргорпасе апъоипт оЕ йе ко)Ы сп 1.0 тп! оЕ Н О.
Мсх йе сопсепь оЕ сЬе сиЬе ъче11 апй ксоге сЬе ксос1с ю!ипоп лп кша)! а$19иоск ас -20'С. РН-ай)алтей юсисюпк оЕ дЕЕТРк апй тЫХТрк аге ачас!аЫе Ьопт гпапу согитпегста! тпаписаспиегк. ТЬе Ьаке апа!оцк дсТР апд 7-декка-дОТР аге юЬк6юсед Еот дОТР сп сЬаш еъсепксоп!сегшспасюп геасстопк со гедисе кесопдагу ксгисшге ргомепь. ТЬеке апа1ор Еопи Ьаке ра!ь ъч!й дС сЬас сопсасп оп1у пчо Ьудтоцеп Ьопдк шксеад оЕ йе сЬтее поппа!!у Еогптед Ъу С-С Ьаке рапи ТЬегесоге, йе апа)оц-С Ьаке ра! гк ате итоге геадссу депашгей Ьесоге керагасюп Ъу цес есессгорЬогеяк апд Ьаче!еы оЕ а сепдепсу со Еопп кесопйагу ксгисшге диг!пц сЬе ассиа1 е!ессгорЬогестс тип.
Ноъчечег, Ьесаше тЬе ше оЕ д!ТР апд 7-деака- дОТР ассепшасек раикек лп сЬе сЬасп ехсепяопйегпипапоп геастюп, кетрлепсспц геассюпк сопсаштпц а Ьаке апа!оц кЬои16 а1ъчаук Ье тип ш рата1!е! ъчтй теасиопк сопсаштпц йСТР. РРБРА$4АТ1О)ь$ ОГ БТОСК КОШТ!ОЬ$$ ОГ 41Ь)ТРЯ АЬ)О $141Ь)ТРЯ ГОГ$0Ь)А ЯЕЯ13ЕЬ)С1Ь)С 12.108 СЬаргег 12: РХА 8ег)иепс(по Си СЕКО~ ПЧ О!ЧУ ЬЩЫЬ!СПЧС КЫСТЕОМЬ Моя РХА ро!упктеаеа иаей ш РХА асс)иепс!п8 аге аиррБей Ьу совипегсса! шапиЕасшгега сп ЬиКега сопсашш8 5096 81усего1, чгЬ!сЬ а11осча сЬе епгуше ргерагас!опа со Ье асогей ас -20'С сч!сЬоис Ггеес!п8. Весате 8!усего! апй осЬег чк!па! й!о1а аЬо асаЪс1Ье ргосеш-ргосеш !псегасс!опт (!пс1ий!п8 !псегс1оспасп спсегассюпа ш а!пц1е-аиЬии!с ргосеша) авй сЬегеЕоге ргосесс епгушеь а8а(пас йепасшасюп, РЬ)А-аес)иепс!п8 геассюпа шау Ъе сагпей оис ас ЫВЬег сепсрегасигеь апй Гог 1ов8ег сипел сч!сЬоис я8шйсапс 1оаз оГ епгугпе асссчЬу.
Ночгечег, ЫВЬ сопсепсгасюва оЕ 81усего1 (>558) ш аашр!еа арр1сей со РЬ)А-вес)иепс!п8 8е1а Вепегасе Ьепйа ш сЬе асс)иепс!п8 сгас1га апй Ыигпп8 оЕ Ьалйа >300 Ьааеа ш яге (ТаЬог апй Е(сЬагйаоп 1987а). ТЬеае еКесь аге а1псоя сегсаш!у йие со сЬе геассюп о(81усего1 ипсЬ Ьогк асЫ 1п сЬе Ве1-гипшп8 ЬиКег со Еопп пе8айче!у сЬаг8ей ессеи сЬас пи8гасе апой!са11у сЬгоиВЬ сЬе 8е! йигш8 е1ессгорЬогеяя ТЬЬ ргоЫегп сап Ье со!чей ш аечега! счауа (Р!аа-'гч!11!агпаоп апй Ри11ег 1992): ° Р11иге гЬе РМА ро(утегаае спсо ке-соЫ ЪиКегь ГЬас йо пос сопсаш 81усего1. Аа а 8епега) ги!е, ые епхушеа !шшей!асе1у айег ййис!оп апс1 КЬсагс1 апу ипиаей гешпапь. ° )сегпоче гЬе 81усет1 Егош ЕЬе шашйассигег'ь ЬиКег Ьу сепспри8асюп сЬгоиВЬ а арии со1шпп оГ Р2 Ве! Ясгасюп шей!исп (В!о-Рай), е<~и!1!Ьгасей сп сЬе гпапиЕассигегЬ гесопппепйей асога8е ЬиКег сч!сЬоис 81усего( (ТгеЫпо ес а!.
! 993). ° Ргесхриаге гйе ргойисга оГ ЕЬе аес)иепс!п8 геасйоп к!ГЬ есЬапо1 ЬеЕоге 1оагВп8 опсо ЕЬе Ве!. ° Яер1асе Ьопс асЫ т сйе 8е! апй ш сЬе е1ессгорЬогеяа ЬиКег ипсЬ саиппе, а счеа1с апипоаи1Еошс асЫ к!сЬ а РК, ясш1аг со сЬас оГ Ъопс асЫ (Р!аа-ССг!11!агпаоп апй Ри11ег !992). Таис!пе(ЕРТА/Тпа е1ессгорЬогеь!а ЬиКег сопяаса оГ 89 гпм Тпа, 29 шм саиппе, апй О.! шм ЕРТА. А 208 т1исюп ЕЬегеЕоге сопгаспа 2 16 8 оЕ Тпя 72 8 оГ Саиппе, авй 2 8 оЕ ЕРТА рег 1Кег.
Еглуогтайоп Рапе(л 12.169 СОМРКЕЬЯО)ъ(й 1Еъ( О(ъ)А БЕЕ,Ех)ЕКОМС СЕЕБ Сотргея)опа оссиг ъчЬеп съчо ог тоге а(па)е-асгапйей Р)9Ах оЕ й(ЕЕегепс 1еп5сЬа пщгасе сЬгоиВЬ а ро!уасгу1атЫе де! ъч(сЬ сЬе лампе пюЬл16у. ТЬВ гет!я сп соспсЫепсе оЕ Ьапйа ш й(ЕЕегепс !апек апй апогпа!оиа арасша оЕ Ьапйа аЬоче апй Ье1оъч сЬе геВйоп оЕ сопъргеяюп. Весаиае оЕ сЬе с66лси!су ш са!1(п5 сЬе соггесс веъ)иепсе Егопл йеае Ьапйа, сотргеялоп агВЕась ойеп арреаг аа ге51опа оЕ й(ЕЕегепс аеъ)иепсе оп сЬе съчо Р)ъ(А асгапйя Согпргеяюпа апае ъчЬеп яп5!е-асгапйей РсъъАх аге пос Еи!1у йепасигей йиппВ е1ессгорЬогеяа.
Р)ъ)Аа сопла(п(пц аесопйагу асгиссигеа аге 1ея аиЬ)есс со чсасоиа йгад сЬап аге яп5!е-асгапйей РЬ)Аь оЕ еъ)и(ча!епс 1епВсЬ апй аеърлепсе апй ао пегасе тоге гарЫ1у сЬгоиВЬ сЬе Ве1. Согпргеялопа, ъчЫсЬ оссиг сп ЬосЬ сЬе Махагп-О1!Ьегс апъ$5апВег аеъ)иепс(п5 гпесЬойя гпоас1у а!Тесл геай(пВ оЕ сЬе б апс$ С сгас1са, а(сЬоиВЬ СЬе А апй Т Сгас1са аге Ьу по гпеапа иппшпе. Сопъргеаяопа агье ъчЬеп кеъ)иепсеа й(лр!ау(п5 йуай аупнпесгу аге!осасей ас ог пеаг сЬе 3' сеппш$ оЕ яп51е-асгапйей Рсъ(АЬ рагбси1аг1у сЬоае Р)ълАа епй(пВ ш ге5(опа ъч(сЬ сЬгее ог пюге О!С Ьаае расга ш тссеяюп.
5исЬ аеъ)иепсеа тау Еопп шсгаасгапй аесопйагу асгиссигеа (Ьа)грша апй сгис(Еоппа) сЬас аге пос 6лПу йепашгей йиппа е1ессгорЬогеяа сЬгоиаЬ яапъ1агс1 аеоиепсш5 Ве!а (50'С апй 7 със игеа). 5ечега! тесЬойа сап Ье иаей со геао!че сотргеаяопа лп аеъ)иепс(пц ае1а. ТЬе еаяезс, ъчЫсЬ сигеа аЬоис Ьа1Е оЕ йе ргоЫетя В ятр!у со ые а й)ЕЕегепс РсъсА ро1угпегаае со сага!ухе сЬе сЬаш-сегпнпайпВ аеъ)иепсшц геассюп.
СС-псЬ ге5(опа сЬас Ьаг сЬе рааааВе оЕ опе суре оЕ Р)ъ)А ро1успегаае ъчл1! Егес!иепс1у у(е1й со апосЬег. Мапу сотргеаяопь сап Ье Ъураааей Ьу аеъ)иепс(па сЬе осЬег асгапй оЕ Р)ъ)А. 1п юлпе сааеа, йе сотргеяюп сигпа оис со Ье аресл6с со опе асгапй (п осЬега, сЬе согпргеяюп оссига ш ЬосЬ всгапйа Ьис (а оЕЕаес Ъу а Ееъч пис!еосЫеа. В)сЬег ъчау, а сотроясе аеииепсе сап Ье сопасгиссей сЬгоиВЬ сЬе ге5(оп оЕ согпргеаяоп.
1Е а!! е1ае Еал!я сгу айсбпВ соло!чепя аисЬ аа й(тесЬу!ял)ЕохЫе ог ЕоппатЫе со а Впа$ сопсепсгасюп оЕ 109а ш сЬе сЬа1п-сеет(пасш5 аеъ)иепсша геасйоп. С1усего! сап а(ао Ье мей, аВа(п ас а сопсепсгасюп оЕ 109ю Ноъчечег, 6!а сЬеп песеяагу со иае а 51усего1-со1егапс е!ессгорЬогеяа ЬиЕЕег со ргечепс агс(!асса саиаей Ьу сЬе шсегассюп оЕ 51усего1 ъчлсЬ Ьогасе юпа ш сопчепсюпа! ТВЕ Ьийег (р1еазе аее СЬе лпЕоггпагюп рапе1 оп С$3СЕ$(О$. $$ъс Р(ъ)А 5ЕО()Е(ЧС$(ъ)С КРАСТ!О(45). АпосЬег ъчау со аИегйасе согпргеяюпа В со геъ1исе сЬе оррогсишсу сог Ьаае рагйпд йиппц е1ессгорЬогеагя )ъсопе оЕ сЬеае гпесЬойа ь Еоо!ргоо( апс$ а!! оЕ йегп Ьаче с$гаъчЬас1ъа. РигсЬеппоге, сЬе сЬоке Ьесъчееп сЬегп (а пос асга(ВЫЕогъчагс1 япсе Ееъч Ьеас$-со-Ьеас1 сотраг(аопа Ьаче Ьееп риЫсйей оЕ йелг аЬл!Ьу со ге!сече соплргеаяопа оЕ чапоиа аечеп6ея 1п йе лпоя сЬогоиВЬ асиг1у со йасе, В В!асспег (рега. сопип.) Ьаа апа1укей сЬе аЬл!Ьу оЕ пис!еосЫе апа!оВа апй це! аъЫЬлчеа со геео!че а Ъассегу оЕ ЬассепоРЬа5е М13 с!опеа сЬас ргос1исе аес)иепсш5 сотргеаяопа оЕ ъ аг(оиь Суреа.
ТЬе Ве1 айс66чеь ъчеге сапега!!у 1пеЕЕесс(че ъчЬеп асапйагй йНТРа ъчеге иаеъ1 ш сЬе геасслоп пихсигеа. Ноъчечег, сЬе соспЬлпаслоп оЕ пис1еосЫе апа1оВа апй Ве! ас1с66чеь ъчаа аЫе со геао!че ечеп йе тоас асиЬЬогп солпргеаяопа. Опе пис1еосЫе апа1о — й(ТР— ъчаа еЕЕесс!че ааа(пас а!! сотргеьяопа, аа ъчаа а согпЬъпасюп оЕ 7-йеаха- йСТР апй 7-йеаха-йАТР. 7-йеаха-йбТР а!опе геао!чей -509о оЕ сЬе согпргеяюпа.
Р1еаае посе сЬас й1ТР аЬои!й пос Ье иаей ш аег)иепс(па геассюпа саса1ухей Ьу Таг( РЕЮ ро1утегаае апй Ьь пшпегоиа йепчаНчеа (р1еаае аее ТаЫе 12-25). 12.11Е) СЬарсег 12: ОАЕА Бег)иеистиП ТАВЕЕ 12-25 МеСЬо65 со Кеьо)че Сотргеьяопь СОММЕ|975 МЕТНОО 7-деака-ПАТР 7-беата-2с-Пеохуабепов)пс- 5'-спрЬоьрЬасе 15 ивед со гер1асе ПАТР ш |Ье сЬа|п ехсепяопйегиипасюп геас- 6опь. РоппатпЫе 1пс!ийп8 20-5096 Гог- тпап|Ые !и йе вег)иепс!п8 Ве! гею1чеь ьоше сошргев- яопв.
Чо1СаВе СЬеписа1 шоййсасюп оЕ сушяпе геьЫиеь 61ТР 61ТР ап6 ЙПТР аге ьиЬ56- сисе6 Еог 6СТР ап|1 |ЫСТР ш Йе сЬа|п ехсепв!оп/сегш)- пабоп геас6опь. УюаПу, йе 61ТРЫСТРгабо |п Йе геас|юп иихеигеь В 4 ап6 йе сопсепсгасюп оЕ |Ы1ТР:|ЫСТР |п сЬе С сег- спша6оп пах|иге В 8. 7-Пеака ВСТР 7-Паата-2г-Пеоху-Пиапояпе- 5'-сг!РЬоврЬасе В юЬь6сш- ед Гог ПСТР си йе сЬаш ех- сепяопйеггп|па6оп тсас- сюпь. УьиаПу, ес)и!шо!аг апюипп оГ 7-Паата-СТР ап6 ПСТР аге иьед )и сЬе геассюп иих- Сигеь. 1пояпе Гоппь Ьаье раста сопса|шп8 оп)у съчо Ьудго8еп Ьопбь )пассам оГ |Ье |Ьгее поппаПу Еоппеб Ьу С-С Ьаье раста. ТЬе сопвеииепс ъчеа)сейп8 оЕ'ъЧасвоп-Ст!с)т Ьаье ра|пп8 гея|1сь ш а юЬьсапба) гей|с- 6оп ш сЬе Соппасюп оЕ |псгатпо!еси!аг "Ьа|гр)п" ягиссигеь.
5е9иепаье В СЬе сЬоке ро!ушегаве Еог геас6овв соп|аш|п8 |пояпе вис!ео|Ыеь. Ачо!6 Та0 ЕЛЫА ро1у- и|егаье ап6 |и чапоиь Пег!час)чеь Ер!еаье ьее ТаЫе 12-9) ъчЬев ияп8 |ПТР аь а юЪьсгасе. Весаиье йе ые оЕ 61ТР ассепсиасеь раыеып йе сЬаш-сегиипабоп геассюп, а!ъчауь шп ьеъ)иепс)и8 геасиопь сопташш8 йе Ьаье апа!о8 |и рагаПе! ъчиЬ всапбагд геасиопь сопсашш8 дСТР. 5иЬ|6сисюп оЕ 61ТР Еог ПСТР саыеь пис1ек асЫь со ш!Вгасе ьПВЬ|!у Йьсег йгоиВЬ ро!уасгу)ашЫе Пе!в. ТЬе 1.|5В ТЬегпто5е|)иепаье-гайо1аЬе!е6 сегиипасог ьег)иепсш8 Ыс гесоплшепбв 61ТР Ье ивед Сот аП пеъч ьеъ)иепсеь апд апу Йас 8)че пье со согпргея|оп|.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
