Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 152
Текст из файла (страница 152)
12.102 Е Ьартет 12с Р)ъ(А оет)иенс(тсК --.счрсчртсон СъСрттраСрттрттртчр 5' М9 + тиепоъч СтаЯГпепт птстрв Е!СРКЕ 12-12 Е!!1!пи-1п кесеааей 3' Тегпипс оЕ Р(ъСА Рта пъеп15 Ргйп К1епоьч Р)ъ(А Ро! тетаае ТЬе 3' Сеет)п! Вепетатей Ьу й!Веат(оп ъий теаСпсСюп епс1опис1еааеа пъау Ье !аЬе!ед иа)п8 йе Иепоъч ЕтаВтепс оЕ Р!ъСА ро)угпегаае 1 !и СЬе ртеаепсе оЕ дЬСТР5 апс1 Мцс". .....тчргтрССртчртСрттин 3 СтрттрКСраСРКСрттр 5' 1Еа (558)ЙНТР!5 иаед шасеад оЕ сЬе сопчепсюпа! (а-агр]ЙХТР, йе геассюп В !!писей со опе сус1е оЕ гегпоча! апс1 гер!асепсепс япсе сЬе 3'ъУ ехопис1еаае оЕ Е. сой РЫА Ро1 1, ип11)се йе ехопис1еаае оЕ Т4 Р(ъСА ро!утпегаае, саппоС агтас)г СЬюеаСег ЪопсЬ (Кип)ге1 ег а!.
1981; бирСа еС а1. 1984). ° ЕаЬе(те тти81е-тттапйей РЬЕА Ьу тапйот ре(ттпе (РеспЪег8 апс! 'ъто8е1асеш 1983, 1984) (р1еаъе аее СЬарсег 9, Ргососо! 1). ° Ртойис6оп о~а(пц!е-зттапйей ртоЬет Ьу рт(тает ехтепйоп (Меш)соСЬ апй 'ъътаЫ 1984; БшйепсЫ апй 'ъъта1!асе 1984) (р!еаае аее СЬарсег 7, Ргососо1 12). Рог тпапу уеагя сЬе К1епоъч епгуте ъчаа сЬе ЫВЬеас-авиа!)су РЫА ро1утпегаае сЬас ъчаа сопппегста!1у ача)!аЫе апй, ш сопаес!иепсе, ъчаа сЬе епгупъе оЕ Вгас апс1 !аас геаогс Сот ш чйсго аупсЬеяа оЕ РЫА.
Ноъчечет, аа ро!утегааеа сЬас аге Ьессег зи(сей со чапоиа аупсЬейс саа)са Ьаче Ьееп й(асочегей ог еп8(пеегей Иепоъч Ьаа Ьееп Вгайиа!1у тер!асей апй ь по!оп8ег сЬе епгупсе оЕ Вгас сЬоке Еог а ъчЫе чапе!у оЕ ргосейигеа тп тпо!еси!аг с1ошп8. Ыасес) Ье!оьч аге юте оЕ сЬеае ргосейигеа. ° Р)ъ(А ает)иепс(п8 Ьу йе Баи8ет шетйой.
К1епоъч Ьаа Ъееп гер1асей Ьу Т7 РХА ро1утегаае (Вес(иепаае) апй йеппоасаЫе ро!утпегааеа йас 8)че 1оп8ег театр!-!еп8сЬя ° 8уитЬет15 оу йоиЫе-мтапйей Р)ъ(А Етош зтп8!е-тттапйей тетр1атет йипп8 ш ч(сто тиса8епеяя АЬЬоиВЬ сЬе К1епоъч Ета8тепс ь ас!!! ъч)йе1у чьей Еог (п чЬго аупйеяа оЕ с)гси1аг РЬСАа ияп8 пшсаВешс ргппегя тс Ь пос аЬчауа сЬе Ьеас епгуте !ог сЬЬ ригроае.
Уп!ея 1аг8е с!иап06еа оЕ!с8аае аге ргеаепс ш сЬе ро1угпейгасюп1ехсепяоп геассюп пихсиге, сЬе Иепоъч епгуте сап й)ар1асе сЬе пшса8епк о1с8опис!еосЫе ргппег !топь йе сетпр1асе асгапс), йегеЬу гес1исш8 сЬе пшпЬег оЕ пшсапса оЬсаспей ТЫ5 ргоЫепь сап Ье ао1чеь( Ьу гьтп8 РЫА ро!утегааеа сЬас аге ипаЫе со саггу ош астарт) йьр1асептепс, (пс!ийп8 ЬассепорЬа8е Т4 РЫА ро1утпегаае (ЬСоааа1 1974; ЬесЬпег ес а1. 1983; беьае!аойег ес а!.
1987), ЬасСепорЬа8е Т7 РЬСА ро1ушегаае (ВеЬепе)г апс) Кип)се! 1989), апг) Вес)иепаае (ВсЬепа 1989). ВассепорЬа8е Т4 Вепе 32 ргосеш сап Ье иаед ш рпгпег-ехсепяоп геассюсь сага(угед Ьу РЬСА ро1утегааеа Дпс!ийп8 сЬе К1епоъч епгупъе) со а11ечтасе аса11ш8 ргоЫепь саиаес1 Ьу сепър1асеа гкЬ тп аесопйагу аттис!иге (Сга((г ес а1. 1983; Кип1се1 ес а1.
1987). ° Ро1ушечате сЬа(п теасполт. ТЬе К!епоъч Ега8тепс ъчаа йе епгугпе иаеь) ш сЬе Вгя РСВ5 (ЯатЫ ес а1. 1983), Ноъчечег, и Ьаа поъч Ьееп согпр!есе1у гер1асей Ьу сЬетшоасаЫе РНА ро!утегааеа йас пееъ) пос Ье гер!епьЬед аЕсег еасЬ гоипс1 оЕ аупйеяа апй йепасигасюп. рисса апсЕ Е)дите5 ТЬе асапс1аЫ агьау гьег! со гпеааиге сЬе ро1угпегаае асспйту оЕ СЬе К1епоьч Ега8гпепС В йаС оЕ ВеС1оъч (1974) ъчссЬ ро!у(с! (А Т) ) аа сеспр! асе.
Опе ипп оЕ ро!утес(г(п8 асс(ч)су ь йе апюипс оЕ епгутпе йас саса!угеа йе спсогрогасюп оЕ 3.3 пто!еа оЕ с)ЫТР шсо аспЬю1иЫе тасепа1 ш 10 пшшсеа ас 37 С. А аатр1е оЕ риге К!епоьч Ега8тепС Ьаа а арессйс ас6чЬу оЕ -10,000 ип(С51т8 ргоСесп (РегЬуаЫге еС а1, 1993). ТЬе геасйоп Ь иаиа11у сагпег) сп йе ргеаепсе оЕМВг'. 8иЬ5ВСигюп оЕМпт Еог МВт~ шсгеааеа СЬе гаге оЕпияпсогрогаВоп апй ъ)есгеааеа сЬе ассигасу оЕ ргооЕгеай)п8 (СаггоП апй Веп)соч(с 1990).
ТЬе К оЕ сЬе епгутпе Еог сЬе Еоиг АЫТР8 чапеа Ьесъчееп 4 апг! 20 рм. Рог тпесЬосЬ со аяау сЬе ехопис1еаае асстч)су оЕ сЬе Иепоъч Ега8шепс, р1еаае аее Ргеепюпс ес а!. (1988) апг1 РегЬуаЫге ес а1. (1988). 1пЕогтагзоп РапеЬ 12.103 РЫеоху-шейазе|1 РВА-аез)иепсш8 геасйогь 8епега1!у соп|аш йче го геп сипел июге пю!еси1еа оЕ 0118опис!еозЫе рпгпега йаи яп8!е-а|гааз)ес) Р)с)А |епзр1а|е. Нозеече, |Ьь ь по| а Ьагс) ап|1 Гааз ги1е, ап|1 )пчел|)8асога зйоиЫ по| Еее1 сопазгаше|$ |о |пашзазп йе галю оЕ рпшегиешр!азе 1Е йе гея|1ь оЕ ае|!иепсзп8 геасйопа аге ипаазьЕас|огу. Апюпй |Ье ргоЫе|па |Ьаз сап ойеп Ье ао1чес) Ьу (псгеаяи8 ог |1есгеаяп8 |Ье газю оЕ рпгпег:зешр1азе аге асс)иепс)пц агз|Еась саиае|$ Ьу пш!Вр!е рпзпш8 ечепся !пей|слеп| рпиип8 оЕ с(оиЫе-а|сап|!ее) РВА се|пр!азеа; апс) 1озч у)е!6а оЕ ргоз)исса 1п сус1е-аесрлепсш8 геасзюпа. СЧ)зЬ ссыоизаупзЬеясе|$ 0118опис!еозЫе рпзпега, Ь ь аопзейзпев песеяагу |о |$езегш(пе епзрзгка!!у йе орзипшп газю оЕ рпшег зо |епзр1азе ш Йе аес)иепсш8 геасиоп.
5|ос1| ао!и|юпа оЕ о!18опис1еозЫе ргипега сап Ье илес) Еог Ьой РЬ(А ае|Рлепсш8 апс$5'-еп|1!аЬе1- )п8. Ънеаг ц!очес зчЬеп с)(аао1чш8 ог сй!ийп8 о1|8опис!ео|Ые рп|пега. !Е |Ье 0118опис1еозЫе ргипега аге зо Ье иле|3 ао1е1у Еог РВА зез)иепсшц, 1уорЬ11)лес) рок |$ег а|ос1|а аЬои16 Ье с$ьао1че|1 аз а сопсепзгайоп оЕ 1 — 2 $|8/ш! (0.03-0.05 А„„йп!) зп Н О. 5|ос)с ао1изюпа аге а!огас( аз — 20 С. 1| ь ойеп сопчешепз Зо Ьаче оп Ьап|3 |зчо ао!и|юпа оЕ ап о!|8опис!ео|Ые рпзпег, опе оЕ $85 08/зп! (5.0 А „йп1), зчЬ(сЬ сап Ъе РЬоарЬогу1асе|$ зп геасгюпа сага1ухес1 Ьу ро!упис!ео|Ые Ыпаае (аее СЬар|ег $0, Ргососо! 2) апс( илес( зи аез)иепсш8 геас|юпа, ап|1 |Ье о|Ьег аз а сопсепсгазюп оЕ 1 — 2 Рййп) (0.03 — 0.05 А йп1) Еог аециепсш8 геасйопа зч)зЬ а гас(101аЬе1ес) з)ЬГТР, А ишчегаа1 ргипег (1 08) йаз ь 19 пис1ео|Ыеа ш 1еп8|Ь за =160 ршо1еа.
Рог сопчегяоп ча!иеа оЕ о)|8опис!ео|Ыеа оЕ о|Ьег !епйгЬа, р!еаае аее ТаЫе 12-24. Ригпеь ауизЬеяхег( )и |Ье $аЬога|огу аис$ с)еайие) Гог РЬЛА асс)иеис)ий |и |Ье ргеаеисе о(а гас))о)аЬе!ес( с(Ь|ТР цеиега))у иее|$ иоз Ье риийе|$ Ьу ие! е!есзгорЬогеа)а ЬеЕоге иге. ТЬе ашоииз оГ соизаиииазюи Ьу "ой же" 0$!цоиис!еоЗ(з)еа !слепа)(у |оо яиа!! (<104) Зо айесЗ ЗЬе с)иа)13у о( Йе РЬСА еес)иеисе. ТЬ)а оЬаегнайои Ь ио| зиле знЬеи 5'-гас($0)аЬе(ес) о))цоиис(еоз)г(еа аге иаес) ас рг(олега )и аес)иеис)пд геас6оия Рг)парезе |Ьаз Ьане Ьееи риг)Езе|3 Ьу ае( е(есзгорЬогеа|а (еее СЬарзег 10, Ргозосо! 1) аге ргеГеггес) Гог зЬ!а ригр|ье. Рг)гпега риийес! )и зЬ)а ъчау а)со у)еЫ |Ье Ьеаз аес)иеисе с$аза |и сус)е-аес)иеис!ид рго|осоь (Рго|осо1 68 $/и!негаа! рппзега оЕ еенега! с))йегеиз (еидзЬе (Ггоги 15 зо 26 иис(еоз)г(еа) аге ача))аЫе Ггоиз а и|ииЬег о( с()йегеиз согппзегс)а! Еирр1(еь (р)еасе аее Йе !и(огизайои раие! ои $))з(!ЧЕВ5А$.
РВЕМЕВ5 |и СЬарзег 8). ТЬеге ь ио с)езесьЫе г))йегеисе |и |Ье с)иа)!|у оНЬе аес)иеисе оЬ|а| ие|! Ггоиз гесошЫиаиз ЬасзегюрЬайе М1 3 |ешр3а|еа зм|Ь рг)пзеге оГ с3(йегеиз )еиизЬя Нозчечег, ннЬеи с(еиазигес( с)оиЫе-азгагк(ес) РХА зегпр(азег яюЬ ас ЬасзепорЬаде ог р)асшк)а аге иеес), )оиаег рг)пареза (ь20 иис)еоз(с)еа) 5)не гье зо Генчег апзТасзиа) ЬаисЬ. ТАВЕЕ 12-24 Сопнег$)пВ Мо!агз1)еа оЕ О1здопис1еойс3еа со $3п|Ь оЕ ЪЧе(ВЫ 5|Те ог О и б О аз и с з е О т з О е ((З(ОССЕОТЗОЕЕ) рмозеа ог Р(з(А |я 1 РВ Мозесизеа ог Р)с)А зя 1 ии 2.32 х !О'" 1.85 х !О" 1.55 х $0|| $.34 х $0" $.$6 х 1О" 1.03 х 30'| 9.27 х 10'з 8 10 $2 !4 $6 18 20 385 308 257 220 193 $71 $54 Ьло|пЬега 8|чаи со |Ье |аье аге са|соза|ед, Ьаае|$ оп Йе аале|пей озо!есо|аг озая ос Йе оос|еоззде оГ 324.5 да!зооа аои Йе чазие оГАчосадгоа ооозЬег |о Ъе 6.0220 х |0||.
РКЕРАКАТ!О(н) ОЕ ЯТОСК КОШТ!О(н)$ ОР ОФПСО)нК)СЕЕОТ10Е РКЕМЕКБ РОК 0(н(А БЕЯЕ)Е)н)С!$ЧС 12.104 СЬаргег 12: Р)ьЕА Бег)иеттд ЬЩЕ)НЧАЯ Ъй!т$-гуре Т7 Ег)ч)А Ро1угпегаае ТЬь ро1ушегаае сопаьса оЕ пчо мЪишся опе епсот1ет1 Ьу йе ЬассепорЬаде, сЬе ойег Ьу сЬе ттхА депе оЕ Е. со)т'. Севе 5 оЕ ЬассепорЬаде Т7 епсойеа а Р$4А ро!ушегаае $М, -80,000) сЬас сопаьаса оЕйгее аератасе т1ошаьпя опе оЕ ьчЬ)сЬ Ъеага а ЫВЬ йедгее оЕ Ьопьо1оду чйй йе РЪ$А-Ъ)пй)пд апь1 ро!успепхасюп йошаша оС ойег шешЪега оЕ йе В1ро1а) Еапи1у оЕ РЪ$А ро1успегааея ьпс1игдпд Тат) ро1успегаае апй Е. сод РХА ро1ушетаае 1 1 Сот геч)еьча, р1еаае аее !оусе апй 5сеьш 1994, 1995; Ре11есит 1994; Рег1ег ес а1.
$996; 5се)сх $998). ТЬе Ь)пгВпд/ро1утпепха6оп т1отпяп оссир)еь июя оЕ йе сагЬоху-сепшпа1 ась)иепсеа оЕ йе ъч)1йсуре Т7 РЪ)А ро!ушегаье. ТЬе апипо-сегийпа1 т1отпаш оЕ сЬе тпо1еси!е сагпех а ротчегуи1 3'-5' еховис!еаае асспйсу йас В ас6че оп ЬосЬ япд!е- авй йоиЫе-ягапс$ет$ РХАя А йи т$ йогпаш оЕ сЬе ро1угпегазе $сЬе 76-геа!йие "сЬшпЬ" йошаьп) Еогпь а $;$ соьпр1ех ьчссЬ сЬе Ьоя-епсойет1 ргосеш, сЬюгейохсп $РоиЫ)е ес а1. $998; К)еЕег еь а!. $998). Весагье оЕ Ва карЫ гасе оЕ ро!утпепхабоп апй ЬьдЬ ргосеьяч)су, сЬе ро1угпегаае;сЬюгейоьйп сопьр1ех В аЫе со гер1касе сЬе еп6ге депоьие оЕ Т7 ьччсЬоис й)ьос)ас)пд Егопь йк сеиьр1асе РЪ$А 1НиЬег ес а!. $987; ТаЪог ес а1.
1987; Веь$Еогй ес а!. 1997). Вег$оепаае ьГега1опа 1.0 апт$2.0 ТЬе росепс 3'-5' ехопис!еаае асс)чссу оЕ ьчйй-суре Т7 РЪ)А ро1ушегаае, ьчЬьсЬ ьчоиЫ ЬиссЬег апу аиегпрс со гье сЬе епхуше Еог РХА аеь)иепсьпд, сап Ье дгеас1у гейисей Ьу шсиЬабпд йе епхутпе Еог ьечегас йауа ьччсЬ а гейисшд адепс, пю!еси1аг охудеп, апй асокЬ)ошесгк сопсепсгас)опт оЕ Ееггоьь юг $ТаЬог апй ВкЬагйаоп $987Ц. 1пассйасюп ь йоидЬс со Ъе сЬе геаи1с оЕ ясе-арес)йс шой)дсассопа оЕ сЬе ехопис1еаае йопьаш Ьу 1оса!1у ргойисей йее тат$ка!я ВассепорЬаде Т7 РЬЕА ро!ушегаае йас Ьай Ьееп сЬеьпка1!у пьогВВей ьп сЬ)з ЕааЬюп ьчаь ас опе сипе иьаг1сесет1 Ьу $)п)сей дсасеа ВюсЬеписа1 $$35В), ипт$ег сЬе сгат$епапье дет)иепаае.
ТЫь Вгас чегяоп оЕ сЬе асс)иепс!пд епхуьие ьчаа 1асег аирегзейей Ьу 5ет)иепаае чеьюп 2.0 ш ьчЬкЬ сЬе 3'-5' ехопис1еаае йопьаш Ьаь Ьееп согпр1есе!у !пасси асей Ьу т1е1есюп оЕ 28 апипо ас)тЬ !ТаЬог апй РйсЬатьЬов 1989а). ТЬе ехопис!еаае-йедс)епс Еоппа оЕ дет)иепаае й)ар!ау а роьчегВт! асгапй-й)зр1асешепс аЬь10у, ьчЬкЬ епаЫеа сЬеш со педобасе сед!опт оЕ сеиьр1асе сЬас аге Ео1йей )псо аесопйагу аспьссшех Опе ипьс оЕ дет)иепаае сага!утех сЬе шсогрогасьоп оЕ 1 птпо1е оЕ пис1еосЫе шсо ап асЫ-)пао1иЫе Сопи В 30 аесопйа ас 37 С, ияпд 5 сьд оЕ рпьпег апт1 М$3тпр$8 РЪ)А аа сЬе сеспр1асе ипйег асапйагй амау сопг06опя Весагье сЬе аресьйс ассьчВ! еа оЕ дет)иепаае апй деь)иепаае чегяоп 2.0 аге й)ЕЕегепс Сгоьп еасЬ ойег, сЬе пьаьшЕассигег 1РВВ) иаей йьЕЕегепс йедшйопа Еог йе ишь оЕ ассьчьсу оЕ сЬе сьчо епхушея Арргохипасе1у 25 ип)са оЕ 5еь)иепаье В ет)исча1епс со $ ипВ оЕ 5ес)иепаае чегяоп 2.0.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
