Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 153
Текст из файла (страница 153)
ВосЬ епхушеа аге ьшрр!ьей Ьу сЬе иьапиЕассигег ас а сопсепсгасюп сЬас девега11у В оршпа1 Еог аециепсшд аусег г01шюп Ъу 8 — 20-Ео!й. 101исьоп ь геь)шгей со гейисе йе сопсепсга6оп оЕ 81усего!, ьчЬьсЬ геасса ьч!сЬ Ьогасе юпь ш йе е!ессгорЬогеяа ЪиЕЕег апт1 саыеа гдяогсюпз ьп сЬе сед!оп оЕ сЬе ает)иепс)пд де! сЬас сопсаьпз Егадшепсь оЕ РЕ4А ш йе 400 — 600-пис1еоСЫе гапде $р!еаае аее йе спЕоппабоп рапе! оп СРГСЕДОЕ $Ъ$ Р$ьсА 5Е(3$3Е)ь)С$$чсС $$ЕАСТ$О$ьсд). 5ет$иепаае ЕЕЕ1с1ев1$у $всогрогагеа т$т$)ч)ТРа апг$ ОЕЬег Апа!оеа оЕ т$Ь)ТРа деь)иепаае В ьшсЬ а доой епхуше Еог Р$4А ась)иепсспд Ьесагье В депегасеа!опд асс)иепсшд 1аййега ьч)сЬ !$сс!е чапасюп ш!аЬе1шд шсепясу Егосп опе Ьапт) со сЬе пехс $ри!!ег $992). Кеспаг)таЫу, сЬ!а рторегсу сигпа оис со Ъе ьп!агде рагс тЬье со а япд!е Ьуйгоху1 дгоир аиасЬей со йе тугояве геяйие ас роябоп 526 оЕ сЬе епхутпе $ТаЪог апй РйсЬаЫьоп $995).
5еь)иепс)пд ро1угпегааеа осЬег йап деь)иеььаае сага|ухе йе шсогрогасюп оЕ ййХТРа ас оп!у 0.02-198 оЕ сЬе гасе оЕ йЬ)ТРя деь)иепаае ь Еаг тпоге еЕВс)епс. $7пйег сопгдсюпа гоибпе!у иаей Еог РЪ)А ает)иепсшд, дет)иепаае саса1ухеа сЬе ьпсогрогабоп оЕ ййЬ$ТРа ас -$00 пис!еоссйеаЕаесопй, ъчЫсЬ )а -3396 оЕ сЬе гасе оЕ йЪ)ТРя Ноъчечег, гер1асьпд йе сугояпе геяйие ас роясюп 526 ьчЬЬ РЬепу1а!ашпе йесгеааеа сЬе еЕВс)епсу оЕ иааде оЕ ййЪ)ТРа Ьу )2000-Ео1й.
Сопчегае1у, гер1асшд сЬе апа1одогь апипо асЫ оЕ Е. сод Р$4А ро1угпегаае 1 от Тат) ро1ушегаае чйй а сугояпе геяйие ьпсгеая еа сЬе еЕЕьсьепсу оЕ спаде оЕ ййЪЕТРа ир со 8000-Ео1й $ТаЬог апй рйсЬагйаоп 1995). Епхушеа сЬас Ьаче Ьееп ьпосддет1 ш сЫа ьчау 1р!сазе аее ТаЫе 12-9) сап депегасе ась)иепсспд де1х сЬас тпассЬ сЬоае оЕ дет)иепаае )п 1епдсЬ, Ьеаису, авй аЬагрпея. Ь)Ее аечега1 осЬег ьетсиепс)пд епхутпея деь)иепаае геаг01у ыеа аа аиЪасгасеа 12.106 С)саргег 12: РИА Бес)иепстП СОй)ЧЕЫТ1ОМАЕ СНА1Х-ТЕ)1М)МАТ)ОХ БЕ1$1)ЕМС1ХС ОГ РСК-АМРЕ1Е)ЕО 0В)А Ме|Ьойх со аеъ)пенсе сЬе а|прППей йоиЫе-асгапйей ргойись оЕ РСПа аге ангасйче ш |Ьеосу Ьис ипсеП- аЫе ш ргасбсе. ТЬе тесЬойа арреа1 со сЬе шчеа|18асог ъчЬо |чань со аеъ)пенсе е|йес ос ЬосЬ вссапйа оЕ сетр!асе Р)ъ)А, апй сЬеу оЕЕег сЬе аЬ|1|су со Вепегасе сеп|р1асеа Еос аеъ)иенс)п8 ъч||Ьоис йе 1аЬос оЕ с!ошп8 |пса Ьассепа! ог ЬассегюрЬа8е чессося Ноъчечег, сПгесс аеъ)иепсш8 оЕ йоиЫе-ассапйей РСВ ргойись ге|пыпа а сесЬшса! сЬаПеп8е, аа сЬе сПъегясу ап|$ пшпЬег оЕ рареь оп сЬе сор|с |па1|е |наш)еы.
ТЬе )ъеуа со аиссеы аге п8ого|ь орснп|гасюп оЕ сЬе аспр66сасюп ыер со аиррсеы т)арпт)п8 апй |пес|си!о|ь рип6сас|оп со гЫ сЬе РСП ргойисс оЕ геаЫиа! рпспегя сЬеппоасаЫе Р)9А ро1упнтахе, ипше|$ йЫТРы ап|$ попарес|6с гергойкбопа оЕ сЬе опрпа1 сеспр1асе. Рипбсасюп Вепега$!у Ычо)че| сЬсо|пасо8- гарЬу сЬ|оиПЬ арин со)итпк ог сопппегс|а1 сеяны ЕоПоъче|$ Ьу е1исюп оЕ сЬе йеыге|$ Ега8тепс Егоп| ап а8агоае ос ро)уасгу)атЫе Пе1. $4|)сЬ сЬ)а а|поипс оЕ ъчог)с, и ь регЬара пос аигрпяп8 йас н|апу шче|68асоь сигп со сус!е аеъ)ыепсш8 (р1еаае аее Рсососо! 6) ог орс Еог йе ъчеП-сго|Ыеп ссай)сюпа) гансе оус)оп|п8 РСП рсойисса |псо р1аыпЫ| ос ЬассепорЬа8е М)3 чессоты Весаиае оЕ й)ЕЕегепсеа ш йе яге, у)е!й, ап|$ арес|6сьу оЕ сЬе аспр66сабоп рго|$исс, попе оЕ сЬе ачаП- аЫе рип6сасюп тесЬойа сап Ье и|ей со рипЕу еасЬ ап|$ ечегу РСП ргойисс. Ноъчечес, ъч)сЬ юспе ейогс, П Ь а!тиас а1ъчауа роя)Ые со йечье а |шссеяуи1 рип6сасюп асЬете Еог йе ргойисса оЕ а арес|6с РСВ.
ТЬе ЕоПоъч|п8 ПиЫе 16ь |Ье таш орсюпа сЬас аге ачайаЫе. Ресайей ргососо)а Еог п|апу оЕ сЬехе орбопа асе ргеаепсей ш о|Ьег гесс)опа оЕ сЫ| тапиа1. ° Кеточа! оЕ $)еа)йиа) Рг|тет аий $7пиаей й)ъ)ТРа Ярип со)ити с)сготаго8тар)су йгои86 5ерЬагоае С1:6В ог 5ерЬасгу1 5-400 (р)еаае аее АррепсПх 8).
5ерЬагоае С1.-6В е|!иЬПЬгасе|1 ш ТЕ (РН 7.6) ехс)ийеа йоиЫе-асгапйей Р)ъ)Аа >190 Ьр )п яге. 5ерЬасгу1 5-400 ехс)ийеа йоиЫе-асгапйей Р)ъ)Аа >260 Ьр ш яге. Во|Ь таспсеа чйП гесас|1 сЬе раъаа8е оЕ й)ъ)ТРя ргнпега, апй ргнпег-йнпегя Сеисг)унда) и)сга)с)|гас(ои сЬ|оиПЬ Сепспсоп-$00 ог Мксосоп-100 ип)са (Ксоъчсгупа)са апй Непйесхоп $992; Ееопасй ес а!. 1998; р)еаае аее СЬарсес 8, Рсососо! 3). ° ЕВиииабои оу' йелйиа) Т)сеппохга)г)е РХА Ро1утепье Тас) ро)утегаае, апй ргеашпаЫу ойег сЬеппоасаЫе Р)ъ)А ро!успегааея аит|че ехссасбоп ъч|сЬ РЬепоЬсЫососопп, е|Ьапо1 ргес|рьасюп, апс) о|Ьег ге8)шепа сопнпоп1у |пей со рип(у |Ье ргойись оЕ РСВ (Сгоъче ес а1. 1991; Васпеа 1992). ТЬе сопсшшп8 рсеаепсе оЕ сЬе РЫА ро)утесаае со8ейег ъч)сЬ сея|$иа! |$ЫТР| |пау ЬеСои! сЬа|п-сеппшасюп веъ)иепсш8 геассюпа саса1угей Ьу ойег сЬеппоасаЫе епгутеа |шсЬ аа ТЬеппо 5ес)иепаае ап|$ А|прПТас), А |песЬой со гепюче гевЫиа) сЬеппоасаЫе Р)4А ро)утегаае ь йеаспЪей |и СЬарсег 8, Ргососо! 3.
° Н)ттапои оу)ъуоихресфс Атр!фсабоп Ртодисса Та|8еС РЫА сап Ье аераса|ей Посп атр66ей Р)ъ)Аа йаС й)ЕЕег ш а)ге Ъу е)ес|горЬосеяа СЬ|оиПЬ |оъч те)с)п8(8еПш8 сетресасиге а8агоае (р1еаае атее СЬарсег 5). ТЬе йеягей РСП ргойисс сап сЬеп Ье гесочегей Егот |Ье Пе! Ъу опе оЕ йе тейойа йеаспЬей ш СЬарсес 5. 'ъъ|Ьеп |Ье РСВ у!е)йа а Ьесего8епеоиа аес оЕ ргойисса оЕ япи1аг ыге, П тау Ье песета|у со саггу ош а аесопй саин|1 оЕ РСП ияп8 пег!ей ргнпеея ос со иае а сеасгксюп епгу|пе со с1еаче оп|чан|ей ргойисса, ос со иге а сносе аорЬ|абсасей е1ессгорЬогебс ауасет, Еог ехаспр!е, йепасипп8 8гасПепс Пе! е)ессгорЬогеыа (РьсЬег апй ).еппап 1983; Еог геч|ев, р)еаъе ъее Муегь ес а1. 1998).
БпаПу, |оспе оЕ йе й)66|си)с)еа епсоипсегей ш ае|р|епсш8 ап|р66ей РХАа аге пос ип)иие. $6)ье апу ойег йоиЫе-асгапйе|$ РНА, а|прППей Р)ъ)Аа ъч61 шечнаЫу геаяос|асе айег |$епасшабоп, ъчЬегеироп сЬе аеъ)иенс)п8 рп|пег п|ау Ье ипаЫе со аппеа1 ог сЬе РЕ4А ро)утегаае тау Ье ипаЫе со ргосее|$ а1оп8 сЬе ЕиП )еп8|Ь оЕ сЬе сетр!асе (СуПепасеп апй Вг!кЬ $988). ТЬеае ргоЫета сап Ъе ннпнп|гей Ьу гарЫ1у сгапаЕегпп8 йе атр66ей РХА, айег йепасисасюп Ьу Ьеас (Киги)ъаъча ес а1. 1990) ог аПсаП (ЖпасЬпПс ес а|.
! 987), со сопс66опа йас йо пос !агат геаыос1абоп оЕ РЫА асгапйя па|пе1у, 1оъч сеспрегасиге апй )оъч юшс асгеп8)Ь. ТЬе ошс)сег |Ье йепасигей Р!!А )а и|ей ш сЬе аппеаПп8 апй ехсепяоп(сепп)пас)оп геассюпя йе Ьенег (р!еаае аее Рсососо1 2). Еп~огтаттои Рапе!к 12.107 Ас еасЬ ксер йиппц сЬе рпшег-ехсепяоп РЬаке оЕ д)деоху-кет)иепс)пц геас6опк, йеге аге пчо рокяЫе оиссошек: сЬаш е1опцаслоп апт1 сЬаш сегпипасюп. СЬаш е!опцасюп оссигк ъчЬеп йе Р)ъ)А ро1угпегаке саса!утек сЬе $псогрогасюп оЕ а сопчепс1опа! д)ъ)ТР 1псо йе цгоъчшц сЬа!п оЕ Р)ъсА; сЬалп септипасюп геки!ск Егопл сЬе тпсогрога6оп оЕ а ддЬ)ТР пю1еси1е. ТЬегеЕоге, сЬе Ьа1апсе Ьесъчееп сЬаш е1опцасюп апд сЬа)п сегпипасюп Ек йесегпипед Ьу йе гасло оЕ д)4ТР со ддЬ)ТР ш еасЬ кет)иепс)пц геас6оп.
ЕасЬ оЕ сЬе РЬЕА ро1угпегакек сьет$ Еог йсдеоху-шед)асей кеииепс)пц Ьак а д)ЕЕегепс аЕЕтп)ту Еог сопчеп6опа! д)ъсТРк апд сЬаш-сепп!па6пц ййЬ$ТРк. ТЬик, теассюп пихсшек йас ц!че цоот$ геки1ь ъчтй опе епхутпе аге ип!1)се!у со ъчог1с ъче1! идсЬ апосЬег. 1т ь а1пюкс а1ъчаук песеккагу со "Етпе-типе" йе сопсепсгадоп оЕ ддНТРк со оЬсалп орсипа! геки1ск Еог йе рагски1аг сак$с ас Ьапт$. Ъйьеп ке0иепстпц Еог сЬе Егкс сипе ъчтй а раг6си!аг Р)ъ)А ро!ушегаке, ъче гесопипепд ршсЬаяпц а Ыс Егогп а сопипегста1 гпапиЕассигег йас сопсашк сЬе ге1ечапс Р)ъ)А ро!угпегаке, ргесексет$ сЬатп ехсепяопйегпипасюп иихсшек, япц!е-ксгапйей сегпр! атек, апй о!лцопис1еосЫе рпплегк !Еог ялрр1лепц р!еаке кее Аррепт$лх 13).
Ак соти ропепь оЕ сЬе Ыс аге ыей ир, йеу тпау Ье гер1асед ъч)сЬ Ьоспешаде тпасеиа! к, ъчЫсЬ аге 1ея ехрепяче апд сап Ье спаде ш а ъчЫе гапце оЕ сопсепсгасюпк. ЕасЬ пеъч ЬассЬ оЕ геацепь кЬои1д Ье сЬес1сет1 Ьу кесдпц ир а лепет оЕ секс геассюпк ъч)сЬ а ксапдагй сешр!асе апд рпшег апд а гапце оЕ сопсепстасюпк оЕ д)4ТРк апд ддЬ)ТРк. 1пи)а11у, Ь ь Ьекс со сье Елхей сопсепсгадопк оЕ дЕЕТРк апд чапаЫе сопсепсга6опк оЕ дй)ъсТРк. ОЕсеп, кечепд кепек оЕ секс геассюпк аге песеыагу со дейпе орсипа! сопд)сюпк. ТЬе Ео11очдпц ксос$с ю1исюпк аге икед со ргерате сЬе ъчог)сшц ко1исюпк оЕ д)ъсТРк апт1 дй$4ТРк Еог кет)иепс)пц геассюпк ияпц е)йет тЬе Иепоъч Егацшепс оЕ Е. соц Р$9А ро!упъегаке 1, 5ет)иепаке, ог йеппоксаЫе $е.ц., Тат)) Р)ъсА ро1уплегакек.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
