Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 115
Текст из файла (страница 115)
Рог ехатр1е, Е. со6 зсгаш КК1, |чЬ)сЬ В |.есА', у)е!йз сеп сипев аз тоге гесотЬ|папс с0$4А с1опез та|$е Ъу |Ье |1А:|1Т саПш8 ргосейиге |Пап сЬе тесА зсга|п НВ101 Ереасос)с ес а!. 198!). Рпсгеасей р1аяпЫ РЬ)А сгапзЕогпь |Ье с|чо зсгашз ас ет)иа) еПЬ с|епсу. ТЬезе тези)сз шйсасе |Пас |Ье Ьассепа! КесА зузсеп| п|ау Ье Ычо)чей |и гера|пп8 ореп с)гси1аг ЬуЬгЫ Р)з)А тпо1еси1ез |Пас сопсаш Ьо|поро1уп|епс тай|.
'тчЬесЬег о|Ьег Ьассепа1 Вепез аге |пчо!че|1 В ип)спосчп. Нотчечег, сЬе Гаса сЬас сЬе Вепеск Ьас)|8гоипй оЕ |Ье гес|р|епс зсгаш оГ Е. соБ сап тат)сей!у )пбиепсе |Ье ейк)епсу оЕ сгапзГоппасюп Ьу 0)4А п|о!еси1ез сопсаш|п8 ип68асей Ьоторо!утепс таПз гаьез |Ье розяЪ|16у оГ зуяеспаск зе1ессюп Гог ог а8ашзс зрес)6с с1а|ьез оГ р1азтЫ-с0$4А ЬуЬгЫз.
Нопюро1утепс са6108 сар)са1ыей оп |Ье аЬ~!Ку оГ са!Е сЬупшз сепшпа1 сгапзГегазе со сага!ухе |Ье а|ЫЖоп оГ й)з)ТРз со |Ье 3'-Ьу|1гоху1 сегпиш оГ яп81е- ог |$оиЫе-зсгапйей РХА. Ес |чав 6гзс |пес! Ьу Ъзтепяп)с ес а1. ! 1974) со |псго|Ь|се гесотпЪ|папс РЬ)А шсо Е. со6 Ьу ра|пп8 Ьес|чееп йАйТ Ьоп|оро)утегз Дас1|зоп ет а1. 1972; ЕоЬЬап ап|1 Ка)зег 1973). !п сЬе ог)8!па! ргосе|$иге, а япаП пшпЬег оГ пис1еотЫез |чете гегпоче|1 Егогп |Ье 5' сеппш) оГ сЬе |1оиЫе-зсгап|1е|$ РЬ)Аз со )еаче ргосплйп8 яп8!е-зсгапйет! 3'- Ьуйгоху1 сеппш|, тчЫсЬ зегчей аз ербс|епс сетпр1асез Гог сегпипа1 сгапзГегазе. ТЬе пее|$ Гог сЬтз зсер |чав оЬч|асей |чЬеп П |чав зЬо|чп |Ьас сегпипа1 сгапзЕегазе сои1й и61|хе гесеззе|$3' сегпип| ш |Ье ргезепсе оГ соЬаЫ |опз (КоусЬои|$Ьигу ес а$. 1976). РзиаПу, Ьес|чееп 80 апй 150 йА гея|Ьлез |чете а|Ые|1 со сЬе Ппеапхей чессог Рлх)А, апй а соггезропйп8 пшпЬег оГ йТ гезЫиез |чете аййей со сЬе йоиЫе-зсгапйей с0$4А.
Ноитечег, Ьотпоро!угпепс |1А;йТ сайш8 |чав изей оп1у гаге!у Гог сР)чтА с!оп)п8, сЬ~ебу Ьеса|ье сЬете |чав по засьГассогу лчау со ехсье сРМА шзепей шсо р1азт)йз Ьу йА:йТ саГПп8. ТЬе тесЬойз йезспЬе|1 |и сЬе Псегасиге ГНоЬаепег ес а1. 1976; боб ап|$ Вег8 1978) аге ше6)степ| апй пос гоийпе1у герго|$ис|Ые. Рог тапу уеагз, |ЬегеЕоге, а1п|оя аП с1ошп8 оЕ сР)з)А |чав саге)ей ош Ьу Ьоп|оро1утпепс йС:йО са|Пп8: |1С гезЫиез |чете аййей то |Ье йоиЫе-зсгапйей сРГЕА, апй сотр1етепсагу йб геяйиез |чете аййей со а р1аз- гпЫ чессог сЬас Ьай Ьееп й8езсе|1 лч)сЬ Р|6 ЕУП)а-КотагоЕГ ес а1. 1978; Ко|че1|атпр апй отсе) 1980). ТЬВ епхутпе сгеасез ргосплйп8 3' сегпиш сЬас аге !йеа) зиЬзсгасез Еог аййсюп оГ Ьогпоро1утепс сайз. с0$4А !пуогтаьоп Рапе1| 11.111 с!опеа саггу)пц |$СЫС са)1а сап еая1у Ье гешочес$ Егош йе р1аяпЫ чес|ог Ьесаиае |Ье а|$|$1$1оп оЕ а аЬогг аггессЬ оЕ |$6 гехЫиеа со |Ье 1шеаг)хес$ р1аяпЫ РЕ4А геаиЬ| |п гедепега|юп оЕ а р|г! я|е а| еасЬ еп|$ оЕ йе г)С-га11е|$1паегс.
1п ргасдсе, |Ье еЕ6с|епсу оЕ гецепега6оп оЕ |Ье Ря! я|е |$ерепг)а оп |Ье |р|а16у оЕ |Ье геяьс|юп епхуше иае|$ |о !|пеаНхе |Ье р1аяпЫ апй оп |Ье г)иа1$гу оЕ |Ье |еппйа! ггапаЕегаае. Соп|аш|пацоп оЕ еЬЬег епхуше ргерага6оп ед|Ь ехопис!еаае ог япд)е-а!гав|1-арес)Е|с пис1еаае ргечепга гедепега|юп оЕ |Ье я|е. А чапа|юп оЕ |Ыа яга|еду ыо шаегг |Ье |$оиЫе-а!гав|$е|$ сРЬ)А |п|о а я|е |Ьа| ь с)охе1у Вап)се|1 Ьу пчо Ьехапис!ео|Ые геа|псдоп я|ею !п рРС18, Еог еха|пр1е, |Ье Р|6 я|е ь бап1|е|1 Ьу 5аП ап|$5рЫ я|ея |чЫсЬ оссиг оп1у гаге1у ш п|агпгпадап РЕ4А. !п пюя сааея сРЬ)Ах |паеьед |п|о йе Р|6 я|е Ьу Ьогпоро!ушепс |а|дпц сап Ье гесочеге|$ ш|ас| Ьу с)еачаде сч1|Ь 5а$$ апс)5р)|1. ).
ИО АЙ!0 Х 82'$ Вас|еьорЬаде 2,8110 Еуоипд ап|$ РачЬ 1983а) Ь а |пеп|Ьег оЕ а Еапи)у оЕ пвпшш|у Ыаег6оп чес|ога (Миггау е| а!. 1977) г)еядпе|$ со ассер| Еоге)дп аедшепь оЕ РМА ш |Ье гед!оп оЕ |Ье Ъас|еьорЬаце цепо|пе |Ьа| епсо|$еа |Ье гергеяог (сП депе $р!сазе аее гпар оЕ )8!!0 ш Аррепйх 3). ТЬеае чессога саггу а ЕипсПопа1 с1 цепс ап|$, 11)ге ип1й|уре Ьас|еьорЬаде 2, Еопп |игЪЫ р! ас)иеа оп гпоаг а!чаша оЕ Е.
со)6 ),8|10 РЬ)А сопсаша а япд!е Всо81 с1еачаде я|е 1осаге|$ ебй|п |Ье согдпд гед)оп оЕ |Ье с! депе |п|о |чЬ|сЬ Р)4А Егац|пепь сап Ье )паегсей 1паеггюп са|ье| |Ье с1 депе |о Ье |пасбча|ей депегабпд гесоп|Ь~пап| с! Ьас|епорЬадеа |Ьа| д)че гЬе |о с!еаг р!аг)иеа |ч)дсЬ аге геас61у |$ы)пдшаЬаЫе Егоп| |Ье гигЬ18 р1ас)иеа Еогше|$ Ьу |Ье рагепса! $).е., попгесошЬ~пап|) ) 8|10.
Рагеп|а! ),ц|10 РХА В -43 1|Ъ |п 1епд|Ь апс! |Ьгь сап ассер| шаегга оЕ Еоге)дп РЬ)А ир со 7.6 1|Ь |п ! епд|Ь. Но|чечег, |Ье чес|ог г)оех по| гег)и)ге а 6 адшепг оЕ Еоге!дп РХА |о Ье 1паегге|$ со депега|е а депо|пе оЕ рас)садеаЫе яхе. ТЬия сРЬ)А 11Ьгаьех сова!госсе|1 |и ),8!10 аЬчауа сова)аг оЕ а пих|иге оЕ попгесоп|Ь|- пап| ап|$ гесошЬ|пап| Ьас|еНорЬадея ТЬеае ьчо гуреа оЕ ЬасгегюрЬадеа сап Ье |$1аг)вди)аЬе|$ рЬепосур|- са11у Ьу |Ье|г аЬ|16у со Еопп с1еаг (гесогпЪ|папЦ ог гигЬ18 Епопгесо|пЬ|пап|) р1а|)иея Мосе ппрог|ап|1у, Ьо|чечег, |Ье ргорог|юп оЕ гесо|пЬ|папьНп |Ьеае 1|ЬгаНеа сап Ье дгеа|!у 1псгеаае|$ Ьу р! а||пц оп а агга)п оЕ Е.
со!| |Ьа| сагг1еа ап /ф пп||а|юп. ТЬе сП депе оЕ Ьас|егюрЬаце ). ь а роа!$1че ас|п а|ог оЕ ауп|Ьеяа оЕ с1. ТЬе а|аЪ|6|у оЕ йе сП депе ргойк| Ь соп|гоНе|$ Ьу |Ье рго|1ись оЕ |Ье Ьоаг /фА депе ап|1 |Ье сП1 цепе оЕ |Ье Ьас|еьорЬаце. Мша|юп оЕ |Ье 86А цепс епЬапсеа йе яаЬ|16у оЕ |Ье сП цепе рго|$ис|, ге|и!1)пд ш ап 1псгеахе|$ ргог)исп!оп оЕ йе с1 депе ргос)исг апс$ а ЬзцЬ Егес)иепсу оЕ 1уаоцешга6оп. ТЬе дго|ч|Ь оЕ рагеп|а1 Ьасгег)орЬадех |Ьа| саггу ап ш|ас| с1 цепе ь йегеЕоге аирргеяе|! оп а!геша оЕ Е.
со6 йа| саггу ап 87$ пш|а|юв. Ву сопсгаац йе дго|ч|Ь оЕ гесошЬшав| Ьас|еНорЬадеа йа| саппо| аупгЬеа!ге ап асбче с! депе рго|$исс ь по| шЬ)Ь)гес)ЕЕог а сйсиыюп оЕ йе )пгегасгюпа оЕ йе с!, сП, сП1, апс$ )1$)А депе рго|$исгя р1еаае аее Ноус ес а!. $1982] ап|$ Еог а ше|Ьо|$ |о р1а|е Ьас|еьорЬаце Хд|10, р!еаае аее СЬар|ег 2). 28!!1 Е"гоипд ап|1 РачЬ 1983а,Ь, 1991) 'ы ап ехргея)оп чес|ог йа| сагНеа а сору оЕ йе Е. сод !ась депе, |ч1|Ь а япд!е Есоц) с!еачаде а)ге 1оса|е|1 53 Ър ираггеагп оЕ йе |гап|1а6опа! |епшпаПов со|!оп оЕ |Ье 1асх.
депе Ер1еаае аее |Ье шар оЕ )8|11 Еп Аррепйх 3). Арргохипа|е!у 72 1|Ь оЕ Еоге|дп РХА сап Ье ассо|пшо|$агес) а| йь я|е. Со|1шд ьег)иепсе| !паегге|$ ш |Ье соггес| геагдпд Егаше ап|$ оьеп|а|юп |ч!11 Ье ехргемец |о у|еЫ 6|яоп ргосеша |чЬоае апнпо гегшш1 сопяя оЕ !3-да!асгояс1аае аес)иепсеа ап|$ |чЬоае сагЬоху1 |егпиш сопяя оЕ а Еоге|цп ро!урер|Ые. 5оп|е оЕ |Ьеае 6|яоп ргогеша |ч111 й|р)ау апбдешс ог 1|дап|$-Ь|п|6пд ер!|ореа йа| сап Ье г)есесге|$ Ьу |Ье|г аЪ|16у |о геас| |ч1|Ь арес|дс апПЬосдеа ог о|Ьег 1)дапс)я ЫЬгапеа сопаггисге|$ |и 28111, 11)се |Ьоае сопягис|е|1 ш )8!!0, сап Ье асгеепе|$ |ч1|Ь пис1ек асЫ ргоЬея Но|чечег, 11ЬгаНе| сопаггисге|$ ш 28110 аге Еаг Ьеиег аи)ге|! Еог |Ь)а ригрохе.
Ап ейк|еп| ше|Ьос$ ь ача1!аЫе |о ае!есг адашаг попгесоп|Ь|пап| Хд|10 Ьас|еНорЬацеа Ер!еаае аее аЪоче), ап|$ Ьой йе рагеп|а! ап|$ гесоп|Ь|пап| ).8!10 Ьас|еьорЬацеа дго|ч |о 168Ьег 6|ег |Ьап Хд|11 ав|$ |ь г)ег)чаг)чея риг|Ьегшоге, диНпц ашр1|6са|юп оЕ 11Ь|аг)еа сова!госсе|! |и 28111, аоше гесогпЬ)паиса шау ехргеы 1о|ч 1ече1а оЕ Еияоп ргогеша йа| епЬег ие |охк |о |Ье Ьоаг се11 ог я|рргесь дго|ч|Ь оЕ йе шЕес||пд Ьас|епорЬаде. Раыаде оЕ сР$4А 1|ЬгаНеа сова!госсе|! |и )'8|11 сап |ЬегеЕоге геаи!с |и!оя оЕ аоше с1аяех оЕ гесошЬ)паиса апс) ее!ее||хе ашр1|6сабоп оЕ о|Ьегя рог |Ьеае геааопя )'8|11 аЬои18 Ье иае|$ |о сопаггисг сРЬ)А 1|Ьгаьех |Ьа| |ч|В Ье асгеепе|$ оп!у |ч1|Ь ппшипо!од)са) ог с)оиЫе-аггапг)ес) РЕ4А-Ь)пс$1пд ясе ргоЬея 11.112 СЬарсег 11с Ртерага6ои о1 СОХА й(Бгаттеь апй Сепе 1йепстутсастоп СО(ь(ВТК$1СТ!(ь(С сРЬ(А ЕЕВКАК1ЕВ ГКОМ ВМАЕЕ Ь(Е)МВЕКВ ОЕ СЕЕЕВ Мапипа!сап сЬшеь сопсаш й!Е(егепс сеП суреь, попе оЕ иЬссЬ ехргея ехасс!у $6е ьапсе ьея оЕ Пепеь. СОХА ПЬгапеь еьсаЫЬЬей Егош Пыиеь !Пете(оге сопяьс оЕ а гпе1ап8е оЕ ьес(иепсеь, югпе сошшоп со аП сеПь, осЬ- егь ийсрле со а рагПси!аг рори)айоп, шПХАь сап ьошесипеь Ье ехсгассес1 (гоги Ьопю8епеоы роро!айопь оЕ сеПь оЬсашей Ьу писгосПььессюп о( Пхей игшеь, Ьагчеьйп8 оЕ оосусеь, югбп8 оЕ сеПь чйсЬ ьрессбс ьигЕасе ргорегйеь, ог спеПчЫиа1 со1ошеь оЕ ьрес(6с суреь оЕ й(ЕЕегепс(асей сеПь, А ьопсаск сПр!оЫ псапипа(сап сеП сопсашь -10ь шПХА пю1еси!еь (1 р8), иЬегеаь а шапипаПап оосусе сопсаспь 7 — 35-Ео1й пюге.
ТЬе ьсакЬу оЕ сЬе ьсагпп8 псасепа1 сЬегеЕоге йешапйь сЬас ьресса1 сесЬшс(иеь апс$ ргесашюпь Ье тес(и)гей со еьсаЫЬЬ СОХА ПЬгапеь оЕ ыеуи1 ь!ке. ТЬе сЬапсе оЕ еяаЫЬЫп8 а ЕписЕи! ПЬгагу Ь шсгеаьей Ъу сЬе Ео1- 1очлп8: ° ЕСье угеьЫу Батчеьсей тасеПа! аий ехтгасс сЬе $СХА Еттейтасе1у. А 1ею йеягаЪ)е а1сегпайче 1пчоЬ еь яопп8 сЬе сеПь ог Пяие ас — 70'С ш 1уьЬ Ьи((ег сопса(шп8 ап спЬ(Ьссот оЕ ПХаье ипсП ьиЕ6ссепс спасепа! Ьаь Ьееп Ьагчеяес1. ° Есье а ьса!ей-йосчп четь(оп оуьсапйатй ргососоЬ со Ьо1асе сЬе ЕСХА (е.8., р!еаье ьее Ве!уачь(су ес а(. 1989; ЪЧеп8 ес а!. 1989; Вгайу ес а1. 1990; НаЬпе! ес а1. 1990; рече1 ес а1.
1995). ° $7ье сатгтегь со гейисе 1огь о1 та!ее!а! опто ьитуасеь апй со ттргоче сйе ефс(епсу апй ьреей оургессрЬайоп оЕ сЬе тЯХА счссЬ есйапо!. Песошшепйей сагпегь (МсСаггеу апй *ьЧППашь 1994) шс1ийе сПХА, ро!у(1), апй ро1у (ЬС). Ве асчаге, Ьосчечег, сЬас ияп8 а сагпег гпау с1есгеаье сЬе Егассюп оЕ ОХА с1опеь ш сЬе 1сЪгагу сЬас соггеьропс1 со сЬе саг8ес шПХА рори1асюп. ° Есье соса! И)ЧА гасЬег сЬаи ро!у(А)' тЯХА аь а сетр1асе уотутгьс-ьсгапй сРХА туп сЬеьЬ.
Моьс шесЬ- осЬ ыес$ со риПЕу япаП агпоипя оЕ ро1у(А)т ПХА геьи1с ш я8шбсапс 1оы оЕ псаСегта! оп ьигЕасеь апс$ усе1й ргерагасюпь сЬас аге соо сП!исе со аПосч сЬе шПХА со Ье гесочетей ейсссепс1у. ТЬе иье оЕ соса! шПХА аь сегпр1асе шеапь сЬас ьупсЬеьЬ оЕ Пгьс-ягапй СОХА пшя Ье рпгпей Ьу о68о(йТ) гасЬег сЬап гапс$опс рйтпегь (Оопсес ес а1. 1990; Огчеп ес а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
