Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 117
Текст из файла (страница 117)
СО5 сеПь с)1|$ по| апье Ъу ассЫеп| Ьш |чеге |Ье гели!| оЕ ьечега1 уеагь оЕ ыеас(у еЕЕогг Ьу Уа|Ьа б!игшап |о |)ече1ор а 1ше о( Я|40-ггапьуоглвес) сеПь ЕЬа| |чеге реппВяче |о ьиреНпЕес|юп Ьу Я'40. 1п |Ье гпЫ 1970ычЬеп Ье |чаь а Вгас)гласе ыи|$е|н а| |Ье ЪЧе)ггпапп 1пьП|ше, б!ихгпап ехроье|1 япиап сеПыо ()Ъ'-)гга|$(а!ел) Я'40 ап|1 (ьо!иге|) |Ьгее !шеь оЕ шогрЬо1о8)са! |гапьЕопнапя |Ьа| |чеге 6лПу репвьяче |о ьирегшЕес|юп Ьу лч)1|$-гуре 5'||40 (61иявап е| а1. $977). $)п(оггипаге1у, попе оЕ |Ье сеП 1шеь сои!|1 ьирроя |Ье гер1ка|юп оЕ Я'40 нш|апя |Ьа| ехргеьье|$ г)еуесг(че Т апВВеш 5ечега) уеагь )асег, С)ихшап ьЬо|чес) |Ьа| |Ье сеПыЬа| Ьас) Ьееп ггапь(огше|$ Ьу 5Н40 Ьас) асс)и(гес( а ши|а|юп айесг)п8 а Еипс|(оп гел)и)гес) Еог ч)га1 Р)4А ьуп|Ьеыь (Мапоь ап|1 О!ихшап 1985).
$4|Ьеп Ье |чеп| |о Со1|$5рпп8 НагЬог ).аЬогасогу аь а роьЫос|ога1 ЕеПолч, О1ихшап с)ес(л)ес( |о |гу а8аш — |Ыынве ияп8 шилапгь оЕ 5Ч40 (С1ихгпап е| а1. 1980а,Ь) |Ьа| сагг)е|$ а с)е(есг)че оНЬПп оЕ герП- са|юп Ьи| ехргеььес) мнИ-|уре Т ап68еп. Не (ьо1агес) |Ьгее Ппеь оЕ ггапьуогшес( япнап (Слл-$) сеПыЬа| |чеге со|пр1е|е!у регпня|че Еог 1у|к роюсЬ оЕ 5||40 апс) сои!|) ьиррог| |Ье гер!ка|юв оЕ Ьо|ЫешрегагигеьепыТ)че ап|$ с)е!ег)оп шигапль оЕ Т ап68еп (С1ихшап 1981).
ТЬеье сеПычеге саПе|$ СО5-1, СО5-3, ап|! СО5-7, СО5 Ъе|п8 ап асгопуш Еог СЪ'- $ ог(8)п, Я|40. О!ихгпап |ЬоиВЫ о( ьее)ип8 а ра|еп| Ъи| |чаь ас)ч(ьес) |Ьа| СО5 сеПычеге ип1йе1у |о Ье оЕ ше |о согпп|егс|а1 соп|рап)еь. Не |пнпесПа|е1у Ье8ап |о сПыпЬше |Ье сеПыо |пчеы|8а|огычЬо |чап|е|$ |о ехргея с1опе|$8епеь Егош р!аып(с)ь саггу|п8 ап 5Ъ'40 ог(8)п оЕ герП- саВоп. ТЬе Пгы оЕ |Ье |папу рарегь иыпц СО5 сеПь Еог |Ьль ршроье лчаь риЫ)ьЬес( а Ееч| пюп|Ьь 1а|ег (МеПоп е| а1. 1981). Тччо о( |Ье ог(8)па1 |Ьгее Ппеь оЕ СО5 сеПь (СО5-1 ап|$ СО5-7) аге ьПП пьес) ехгепыче)у |и Ьо|Ь согпгпегс|а! ап|$ асас)еш(с !аЬога|оНеь. Ноьчечег, |папу реор1е аге соп(пьес) аЬои| |чЫсЬ 1ше |Ьеу саггу. ТЬВ В Ъесаиье б!ихшап, |чЬо лчаь Ьогп ш Вльыа, пьес) а Па|вЬоуап| |чН|ш8 ыу1е |и лчЫсЬ гЬе пшпега! 1 В еая!у соп6лье|$ лч(|Ь пшпега! 7.
Мапу оЕ |Ье реор)е лчЬо гасе)чес) СО5-! сеПь Его|п Ьнв (п|егрге|е|$ |Ье 1аЬе1 аь СО5-7 апс) ч)се чегьа. Нолчечег, |Ье вчо сеПь Ппеь сап еая!у Ье |$)Ы)п8и(ьЬес) оп СЬе Ьаяь оЕ |Ье(г ра|- |егп оЕ (п|е8ганоп оЕ Я'40 РНА: аи|Ьеп|к СО5-7 сеПь соп|аш 5'||40 Р)ь)А ьел)иепсеь )пге8гагес) а| ьечега! я|еь (Пю е| а1. 1985), ъчЬегеаь СО5- $ сеПь соп|аш оп!у глчо шге8гаге|$ сор|еь оЕ |Ье ч|га1 РНА (С1ихгпап 1981). Реьр||е |Ьеье |$!ЕЕегепсеь, Ьо|Ь сеП Ппеь ап|рПЕу р!аыпи)ь сопла)пш8 ап Я'40 ог(8(п |о арргох(- гпа|е1у |Ье ьагпе ехсеп| ап|$ ехргем Вепеь сагг)ес) оп |Ье р!аяпЫь лч)|Ь арргохнпа|е1у ес)иа1 еЕПс|епсу.
1и[оггиаг(ои Рапе)л 11.115 В!ОТ! [х$ ВюНп (Ы|атш Н, соепхуте К [РЖ = 244.31)) (р1еаае аее Р)циге 11-21 Еог СЬе сЬегпка1 лггисгиге) ь а |часег-ю1иЫе Ысапип сЬас Ь)пс)л лч(сЬ ЫцЬ ацлп(су со ачЫ|п, а сесгатепс Ьаяс 81усоргосеш, аЬип|1апс |п галч ецц |чЫСе (Еог геч(е|ч, р1еале аее Сгееп 1975). Весалое еасЬ аиЪ|лп)с оЕ ачЫш сап Ъ|п|1 опе Ьюсш гпо1- еси)е, 1 п|ц оЕ ачЫш сап Ь~п|1 -14.8 р ц оЕ Ьюип. ТЬе йыос(асюп сопяапс оЕ сЬе сотр!ех Ь -1.0 х 10 " м, |чЫсЬ соггелропс)а со а Егее епегцу о(аыос|аиоп о( 21 )сса1)то1е. |йсЬ аисЬ а пцЬс аыос|аНоп, сЬе оЕЕ- гасе ь ехсгете1у л1оъч ап|$ |Ье Ьа!Е-!(Ее оЕ сЬе соп|р1ех ь 200 |$ауа ас РН 7.0 (бгееп ап|$ Тоша 1973).
Рог а11 ргасВса1 ригроаея СЬегеЕоге, |Ье |п|егасСюп ЬеС|чееп ачЫш ап|$ Ь|оИп Ь еюепба!1у |ггечегяЫе. 1п ас(йсюп, йе ачЫ|п-ЬюВп сотр!ех Ь геяяапс со сЬаосгор|с ацепь (3 м циап)йпе Ьус)госЫопс)е) ап|$ со ехсгетеа оЕ РН ап|$ ютс асгепцсЬ (бгееп ап|$ Толпа 1972). Вюбп сап Ье ассасЬе|$ со а чапесу оЕ ргосе)па апс$ пис1е|с асЫВ оусеп лч(сЬоис а1сеппц сЬе|г ргорегВея 5(т(1аг!у, ачйт (ог асгерсачЫш, Вв попц!усоау1асес) рго1|агуоск е|)и(ча!епс) сап Ье )оспе|1 со герогсег епгутел лчЬоае асспцсу сап Ъе илес) со !осасе ап|$/ог срлапВсасе амйп-Ь~осш-сагцес со|пр1ехеа. Рог еха|пр1е, |п епхуте ипптпоаыауя а Ьюс(пу1асес) апВЬо|1у Ьоип|$ со ап пптоЬ11(хе|1 аппцеп ог рпгпагу ап6- Ьос)у В о(сеп аллауе|$ Ьу ап епхугпе, тсЬ ал Ьогаегайй регохЫаае ог а!)са!ше РЬоарЬасале, |Ьас Ьаа Ьееп соир1е|$ со ачЫш (Уоипц ес а1. 1985; РгепсЬ ес а1.
1986). 1п а|ЫЖоп, ш пис!ек асЫ ЬуЬпйгасюп, Ьюс(пу1асе|$ ргоЬел сап Ье с)есессес) Ьу аййп-соп)ицасе|$ епхутел ог ВиогосЬготея Елег!час(чел оЕ ЬюНп аге иле|1 со ЪюВпу1асе ргосе|пя рер|Ыея ап|$ ойег то!еси1ел (Еог гейе|ч ап|$ геЕегепсеа, р1еале лее ЪЧ)1сЬе)с ап|1 Вауег 1990). ТЬеае |$епчаВчеа шс1и|$е: ° Уаг(оал )ч)-Ьу|$гохулиспиЕ|ил|$е елгегл оу Ьюг(и, |чЬ)сЬ геасс |ч!сЬ Егее апппо цгоирл оЕ ргосетл ог рерсЫел со Еопп атЫел.
Х-Ьул)гохуялсс(п(тле Ь ге!еале|$ ал а Ьу-ргос)исс (р!еале лес $|(циге 11-22). ° РЬосогеасйчаЫе ЬлоВи ЕРЬогоЬюг(и), |чЬ|сЬ ~лроп ассьайоп юЬЬ а тегсигу чарог 1атр (350 пп|) геась Ыа ап агу! тсгепе шсеппейасе апс) Ь(пс)а |пйлсгпп1папс!у со ргосеша, о!|цоаассЬагЫея 1|РЫВ апс) пис!е|с асЫ|. ° Еол(пасе|у! Ьюйи, |чЫсЬ геась арес(цсацу |чЬЬ йю! цгоиря цепегасшц а яаЫе йк|есЬег Ьопй ° В(ог(и Ьу|ЬахЫе, лчЫсЬ геассл |ч1сЬ а18еЬул)еа цепегасе|$ Ьу тц|1 охЫасюп оЕ сагЬоЬу|1гасея ° 13ег(час)чел ау Ь)ол(и ел)и(ррел) и ЕгЬ ехлеил)е|Е лрасег аг|ил (е.ц., Ьюс(пу!-е-апипосаргоу1-ЬЕ-Ьус)гохулисс|пппЫе еасег).
ТЬеае агта ппргоче |Ье |псегассюп Ъеслчееп ачЫш апс) Ь|ос|пу1асе|$ тасго|по1еси!еа. ТЬе лсгепцсЬ оЕ сЬе |псегаспоп Ьеслчееп Ьюсш ап|$ аийп ргоч(Вел а Ьпйц(пц луасет со Ьппц то1еси!еа лч(сЬ по пасига1 а(цтсу Еог опе апойег |псо с!иле сопсасс (р1еаае аее Р(циге 11-23). В!01$пу[аЕ[оп оЕ Рго(е[па Вислу!-)ч'-лисс(пппЫе еяег, сЬе тол! сопипоп!у |ье|$ ацегп Еог ЬюВпу!асюп оЕ ргосешя геась лч|й рп'- таку атше цгоиря лчЫсЬ аге 1осасе|$ ас |Ье апппо септпиа оЕ сЬе ргосеш ап|$ ш 1улу1 яце сЬаша. Вешц ЫВЫу сЬагце|1, 1уяпе гелЫиеа аге ита!!у 1осасе|$ оп |Ье ю1чепс-ассею|Ые аигЕасеа оЕ сЬе ргосе|п.
Моас оЕ йе аиасЬес1 Ь(оВп геяциеа йегеЕоге |$есогасе сЬе оисег аиг(асе оЕ сЬе ргосе|п, |чЬеге сЬеу цепега11у саиле 1||с!е йеаигЬапсе со асгиссиге апс) Еипссюп. Еаечег|Ье!еъя В ь еыепца! со сье арргорпасе Ыо!оц)са! апс) еплутацс селла со сопцпп сЬас сЬе Ьюбпу!асе|1 ргосе(п Ьаа (Ц геса(пес! (са асс|ч|су ап|1 (2) сап Ь(пс( со ачЫш-герогсег пю1еси!ея Ргосеш ЬюНпу1асюп Ыса аге ача|1аЫе (гоги гпапу тапи(ассшегя |пс1ийпц Р|егсе ап|1 1л(е ТесЬпо!оц)ея 'с(япц |Ье тапиуассигег'а |плсгисцопа ал а циЫе!ше, орсипа1 сопйсюпл Еог ЬюВпу1асюп сап Ье еасаЫ(аЬес) Ьу аейпц ир а аепеа оЕ геассюпл сопса|тпц йЕТегепс гасюа оЕ Ьюсшу1ас|пц геацепс апс) сагцес ргосеш.
ТЬе Ьюцп сопсепс оЕ |Ье гея|1ипц соп)ицасел аге аллауес) |п ап ачЫш|НАВА аьау, НАВА (2- [4'-Ьус(гохуахоЬеплепе[) Ьепхо|с асЫ ь а уе11о|ч с)уе сЬас ас)аогЬ| асгопц1у ас 350 тп. М|Ьеп ачЫш ь ас)с)ес) со ласигас(пц сопсепсгацопл оЕ НАВА, а лрессга1 сЬапце оссигл апс) сЬе аЬ|огЬапсе ас 500 пгп (псгеааеа (Сгееп 1975). ТЬе аЬ|огЬапсе ас 500 пт с)есгеалеа лч(сЬ а|Ы1с|оп оЕ Ьюцп, ъчЬссЬ сотресеа лч(сЬ НАВА Еог Ь|пйпц ясеа оп ач(йп.
ТЬе сЬапце |п аЬюгЬапсе ас 500 пси и йгес|1у ргорогсюпа1 со |Ье апюипс оЕ Ьюцп Ы сЬе луасет. ТЬе апюипс оЕ ЬюВп ассасЬе|$ со йе сагцес ргосеш сап йе|еЕоге Ье са1си!асе|$ Егогп а агап|)агс) сигче сопл|гисСес$ лч)СЬ )сполчп с)иапг)С(еа оЕ ЬюЬп ()4|1)сЬе)с ап|$ Вауег 1990). (ТЬе НАВА лулгет Ь ассигасе Ьис пос чегу лепяцче. ЕасЬ амау гес)и(геа Ьес|чееп 50 апс)100 рц оЕ Ыосшу!асес) соп)ицасе ас а сопсепсгасюп оЕ -1 тц)т1.) 11.116 СБарсет 11: РтератаНоп о( сР1нтА Е!Ътатгег апс( степе 1г)епес))саС!оп О 11 С. НН НН ! ! НС вЂ” СН 1 НгС СН (СНг)4 СООН ВУ Р)С1)КЕ 11-21 5(гас(иге о( Вю6п Ь)ог!пу(-И-Иубгохувисаи~ю!бе ев1ег вехиев О 1! ..С~ НН НН 1 1 НС вЂ” СН ! !! Ыос(иу1асеб ргосе~и Р1С()КЕ 11-22 В1о6пу!а6оп о( Рго1е1пв ог Рер6дев Ыос!иу!асеб Сагде1 ' ргоЬв анапп Р!Сс)КЕ 11-23 АисВп-Вюбп Керогсег Сотар!ех гврог1ег ТАВЕЕ 11-7 Вю6пу)а6оп о( (нспс)е!с АссЫ5 МЕГНОО Кеееаенсе5 ЬВс1с сгапв1абоп сн!1Ь Ьюбпу)асеб ппс1еосЫев Кер1асетепс вупсЬевь пбп8 ЪассепорЬа8е Т4 РХА ро1угпегаве Р1!1!п8 о( гесесбед 5' епсЬ вбсЬ Ъюсюу!асес1 ппс1еосЫев 5'-1суйгоху! сегпппа1 абгВсюп пяп8 сегпипа! с1еохуипс!еосЫу! сгапвусгаве !п наго сгапвспрсюп сн!1Ь Ъ|ос!пу1асес) ппс!еосЫев РСК юЬЬ Ьюс!пу!асеб рпгиегв РСК аг!1Ь Ьюбпу!а1еб ппс!еосЫев СЬеюка1 геасбоп оГ ХН5-Ьюбп сн!1Ь 5'-апппоаПсу! РЬоврЬогатЫ!се Р)4А РЬо1оЬю1спу1абоп о( 1714А апб КЫА Рогвсег ес а!.
(1985); Мс1ппев ес а!. (1987) О !! ,.С~ НН НН ! ! НС вЂ” СН ! ! НгС СН вЂ” (СНг)4 О О с — с — С вЂ” Й С вЂ” С О (,еагу е1 а1. (1985); Яппйпв ес а1. (1986) ВИЛ.йе ТесЬпо1ох!ев (1985) Мпгавпф апб Ъ(га1!асе (1984) Вга1се1 апс1 Еп8е!ЬагсЬ (1985) Свге!ег апб Ковесге (1988) Нп! спсап ес а!.
(1989); УЫеп (1989) Сагсег еС а!. (1992); МеПг е1 а!. (1994) СЬоИес апб КаснавЬ!гпа (1985) 1п)от|пас(оп Рапе!з 11.117 ТЬе Ьюйпу1асей ргосеш ргот(нсет( ш еасЬ геасс|оп сап сЬеп Ье сЬес1|ей Еог асс|чйу ап|$ Еог |сь аЬП|су со Ь~пй со ач(йп-ВерЬагозе со!шипя, ТЬе зрес(йс(су оЕ Ьюс(пу!асе|$ апс|Ьотйез ап|1 сЬе(г 1ече1 оЕ попзрес|йс Ь(пйпй сап Ье сЬес)тет$ Ьу йос-Ыоо апй |чеяегп Ыои сЬас Ьаче Ьееп "зр((тет)" тч(сЬ чатушй цнапййез оЕ |Ье ап|18еп.
В!01!иу!ас!оп оЕ (з(нс!е!с Ас!с$8 Вюйпу1асей пнс1ео|ЫеычЬ|сЬ аге ачайаЫе сонниегс|айу, аге ейессие знЬягасез Еог а чапесу оЕ ро1угпегазез (пс1нйпц тЬе РХА ро1утегазез оЕ Е. со(т', ТЕет|пиз ш(иайсиз, ЬассейорЬайе Т4, апс( |Ье КХА ро1утегазеь оЕ Ъассег(орЬайез ТЗ апй Т7. Вюйпу!асей пнс1е|с ас||Ь сап сЬеге(оге Ье йепегасет)(и чнго Ьу аЬиозс ай оЕ|йе ргосет(нгез (пк1| сгапз1айоп, епд-66(пй РСК, гап|$оти рпнний, ап|1 сгапзснрсюп) сЬас аге нзе|$ со йепегасе гайо1аЬе1ет$ ргоЬез (р1еазе зее ТаЫе 11-7). !п а|Ыйюп, Ьюйи а|Ынссз сап Ье (псго|1нсе|1 шсо пнс1ек асЫз ап|1 ойцопнс!еосЫез Ьу а пшпЬег оЕ сЬеннса1 тетЬо|Ь, (ис1нйпй ассасЬтиепс со а 5' аттис йгонр.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
