Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 118
Текст из файла (страница 118)
ТЬьз йтонр Ь а|Ыед йнппй |Ье 6па! |сер оЕ сопчепс|опа1 суапоесйу1 рЬозрЬогоаннйсе ьупсЬеяь оЕ оййопнс1еосЫез. ТЬе ат(по-оййопнс!еосЫе сап сЬеп Ье 1аЬе!ей |чнЬ соинпегс(айу ачайаЫе Ьюйпу!-Х-знсс(ттЫе езсег. Аь 1оий аь сйе|г сопсепс оЕ Ьюйпу1асе|1 пнс1еосЫе |1оез пос ехсее|1 а Еетч регсепс, сйе геял16п8 ргоЬез ЬуЬийте со сагйес зес)непсез ас арргохнпасе1у сйе зап|е гасе аз нпзнЪзйсшед ргоЬеь.
!псогрогайоп оЕ адййопа! Ьюсш геьЫнез ылпй)се!у со (псгеазе сйе веня|(ч(су оЕ десесйоп 8(чеп сЬас а сур|са! ачйп-1ш1|е|1 герогсег гпо!есн1е (е.й., ачйп-ай|айне рЬозрЬасаье) Ъонп|1 со а яп81е Ъюсш гея|$не чйй сочег Ьеьчееп 50 апй 100 пнс1еосЫеь оЕ пнс!е|с асЫ. ТЬе ерйс|епсу оЕ |$есессюп о( Ь|осшу!асе|$ ргоЬеь Ьу ач|йп-1|и!|ей герогсег зузсеи|з |з йгеас!у |трточет) й тЬе 1епйсЬ оЕ сЬе 1ш1|ег Ьес|чтееп |Ье Ь~ойп н|о|есу ап|$ тЬе пнс1еой|1е Ь знрйс|епс со очегсогпе зсепс Ып|$гапсе ап|1 то айо|ч |Ье Ьюс!пу! Вгонр со репе|тасе ейесси е1у (псо сЬе Ь~пйпй в|сея оЕ ачЫш.
А пшиЬег оЕ сотратея зей Ь|осшу1асей пнс!ео|Ыез тч(сЬ 1ш(сетя сопса|пш8 я|х ог тоге сагЬоп агота. Вюс(п сап а1зо Ъе штго|Ьлсей тисо пнс!е|с аскЬ ягпр1у Ьу инх|пй РЬосоасс|часаЫе Ьюйп тч(сЬ |$онЫеог яп81е-зсгапс)ет) РХА ог КХА апс( сЬеп Ьгайайпй сЬе иихснге ит(сЬ ч(з(Ые 68Ь| (350 тп) (рогзсет ес а1. 1985). ТЬе нзна1 ргососо1 у|е!сЬ а пнс!е|с асЫ |Ьат сои|ать ап ачегайе оЕ опе Ьзойп гез(т(не рег 200 ог ю геяс(нез.
Мой6сасюп ас |ЬЬ |подея 1ече1 сегса|п1у т)оез пот шсегЕеге ъч(сЬ сЬе аЬ|йсу оЕ |Ье ргоЬе со ЬуЬ|(йге то тЫагйет агЫ ует Ь зн(йс|епс со айо|ч йесесйоп оЕ яп81е-сору зес)непсез ш ЕошЬегп ЬуЬт(йхасюп оЕ татн|а1|ап РХА (Мс1п пел ап|$5утпопз 1989]. ТЬе Еойотч(пй аге а|Ь апсайез оЕ Ьлойпу1асе|1 ргоЬез. ° ТЬеу сап Ье зсогей Еог!опй регю|Ь оЕ сине тч(сЬонс 1оы оЕ асс|ч|су.
° ТЬеу пеет) по зрес(а1 те|Ьой оЕ |$(ярова(. ° 518па)з Егот а Ь~осшу!асес) ргоЪе сап Ье т(есессе|$ |чйЬ а чапесу оЕ ачйп-герогсег то1есн!ез, (пс1нйпй сЬозе |Ьас сап Ье т(есессет$ Ьу сЬепн!шпшеьсепсе апй йногеьсепсе. ТЬЬ тпеапз СЬа| а з(п81е ргоЬе сап Ье мед Еог а чайесу оЕ ййегепс рнгрозез (е.й., 5опсЬегп Ыосйпй ап|1 ш ясн ЬуЬ|Ы(тас(оп).
° ТЬе Ыосшу!асет( пнс!е|с асЫ сап Ье гесочегей Ьу ай|пну рнпйсайоп оп атййп со!шнпь ог оп ачЫ(исаа|ей тайне|к Ьеай. Хосе |Ьас сЬе шсогрогайоп оЕ Ънйту Ь|осш йгонрз ге|Ьлсез |Ье е1ессгорЬогейс гпоЬ|1|су оЕ пнс1е|с асЫь. Еог ехагпр1е, еасЬ адййоп оЕ Ь~ос(п-14-т)СТР Ь ес!шча! епс со шсгеаяпй |Ье тпая оЕ сЬе пнс1ек асЫ Ьу 1.75 сусояпе геыт(нез (Мегсг ес а!. 1994). Резрие сЬеье а|Ьаптайез, Ьюсшу1асе|1 ргоЬез Ьаче пос тс(зр!асс|) сопчепсюпа! гатсто1аЬе1е|$ ргоЬеь (тот сйе|г ргееспшепс роясюп ш ню!есн1аг с!опшй. 1п рагс, сЬЬ тпау Ье Ьесанзе сЬе 6гзс-йепегасюп Ьюйпу1асей ргоЬеычеге пос аз ьепяс|че аз с!анпе|$ со Ье аий зогпеснпез Еайей |Ье Псты сеьс оЕ йесесс|пй япй!е-сору зет(непсез т 5онтЬегп ЬуЬгЫ|аасюпз оЕ танниайап РХА.
1п ат(йсюп, опе зес оЕ с|гсшпяапсея ш |чЫсЬ Ьюйпу1асе|$ ргоЬез аге ас а рагйсн1аг |1Ьа|Ьапсайе Ь тчЬеп зсгееп(ий Еог рагйайу Ьоп|о1- ойоы зесрлепсез Ьу стоя-зрес|ез ЬуЪПйтасюп. Неге, |Ьеге Ь а розяЬ|)йу |Ьас |Ье ргезепсе оЕ Ьойсу Ьюс|пу! йгонрз тау 1о|чег |Ье зсаЬ|1йу оЕ нняпассЬей ЬуЬгиЬ со сЬе роси| |чЬеге по яйпа1 сап Ье оЬзегче|1. В|ос|пу1асей ргоЬез аге печегсЬе!езз П)се!у со йго|ч цгеас1у ш нирогсапсе йнипй сЬе пехс Ее|ч уеао аз сЬе ййкн16ез апй соя| оЕ йьроза! оЕ гайоасс|че |чане |псгеазе йгатпайсайу.
$)зе(н1 ш(оттасюп аЬош ачЫш-Ьюсш сЬетЬ|гу апт) ачнйп-Ьюйп сесЬп(т)нез Ь ачайаЫе |п Мет)тот(з |п Епгу|по1оду (чо1шпе $84 (е|1. М. тттйсЬе)с ап|1 Е.А. Вауег! 1990). 1п атЫ)С(оп, Р|егсе СЬетка1 Соспрапу зейь а Ьапс(Ьоо)т (Ачйпийютт С(тент(зтту: А Напт(Воо)с) сйас сон|ать ншсЬ ргасйса! ас(ч|се. 11.118 СЬаргег 11: Ргерагайоп о) сРНА ПЬгаг(ев аий Сепо Ейеигфсаг(оп МАСй)ЕТ!С ВЕАРБ 5)псе |Ьек шсго|1исйоп со спо1еси1аг с1ошп8 ш 1989 (Ни1|тап ес а1. 1989), гпа8пейс Ьеайв (а1во 1спо|чп ав гпкговрЬегев) Ьаче Ьееп ыей Сот а чаг|есу оЕ ригровев, (пс1ий!п8 рипйсабоп апй ве|)иепс!п8 оГ РСВ ргойиссв, сопягиссюп оГ ыЫгасбче ргоЬев апй сРЫА ВЬгапев, а|Впйу рит!Всат)оп оГ РЫА-Ь)пй(п8 ргосешв, гевсие оЕ вЬитйе чессогв Етогп сгапвГессей се1!в, апй ЬуЬпйгаВоп оЕ соча1еп|1у ассасЬей о118опис1еосЫев.
А!сЬоиВЬ ялсЬ сав1|в сап Ье ассотр1ВЬей Ьу пюге тгайсюпа1 сесЬшсрлев, сЬеве о!йег тпесЬойв аге аЬповс |пчапаЫу тоге сейоы апй 1ея еГВс)епс. Атоп8 сЬе айчапса8ев оГГегей Ьу п|а8пейс Ьеайв аге вреей оЕ орегасюп апй |Ье ровяЬ|1|су оЕ |чогЫпВ ас Ыпейс васев с!ове со сЬове оссигпп8 |и Егее во1ийоп. В|пйп8 оЕ 118апй са1|ев оп1у а Ге|ч пипи|ел, тпаВпебс вератайоп са1|ев весопйя апс! счавЬ)п8 ог е1шюп сап Ье сотр1есей ш <15 пипи|ел |и тпов| савел. Ма8пес!с Ьеай аге попрогоив, пюпойврегве, виреграгагпаВпейс рагск!ев оГ ро!уяугепе апй йсйпу1 Ьептепе |чВЬ а та8пес(се соте (8 г 2 х 10 ' с8в ишь) апй а йаспетег оГ -2.8 рсп.
Р)ГЕегепс суре| оГ Ьеай саггУ й(ЕЕегепт асс|хе ВгоиРв оп сЬек ЯлгГасев (ОН, ХНл, ОН!)в(Н ), СООН, есс.), |чЬкЬ сап Ъе овей Еог соча1епс апасЬтепс оЕ ргосе|п апй пис1ек асЫ 1|8апйв (е.8., р!еаве вее Ьипй ес а1. 1988). Наречет, псов| шчевщасогв ргеЕег со ригсЬаве таВпес|с Ъеайв сЬас аге рге1оайес! чй|Ь соча1епс!у Ьоипй всгерсачЫ(п (1.еа ес а1. 1988), |чЫсЬ сап сЬеп Ъе овей со сесЬег апу Ьюсш-1аЬе!ес! пис!е|с асн! ог ргосеш со |Ье вигЕасе оЕ ГЬе Ьеай (Гог теч(ечг, р1еаве вее Наи1|апев апй Кмат 1993). )чете гЬат гЬе Ь(пй(гсе сарае!ту чапе| лч)гЬ Ьеай |ге, Ьеай сотроя боп, а ой гЬе яее оЕ гЬ е Ь(тлй(п8 68аи И.
Р!Яегепг Ьта ой оГ Ьеай саг ту йфегеп г а то а и ь оГ соча1епйу аиасЬей ятергалйа ю йаг гЬе Ьгпйпд сарае(г!ев оЕ Ьеай вирр!!ей Ьу й(фегепт тапаГасгглгегв аге иос песеяап!у ет)алга(епг. Гп айййоп, воша Ьгапй оу Ьеайв сап Ье геавей |чЬегеал осЬеп тавг Ье йвсагйей ау|ее а в)гсе)е иве.
Опсе ассасЬей, ГЬе се|Ьегей ВВапй сап Ье овей Еог аГВп(су сарсиге апй рипйсас|оп оЕ сагВес пю!еси1ев Егосп во1исюп. Весаиве |Ье вигЕасе атее оЕ сЬе рагс|с! ев Вчем 1ат8е (5 — 8 тл(8), всгерсачЫш-соасей Ьеайв Ьаче а чету ЫВЬ ЬюВп-Ь!пйп8 сарасйу (>200 рто!евлт8). РигсЬеппоге, Ьесаиве оЕ |Ье ЫВЬ ай|пйу оГ всгерсачЫш Еог Ьюсш (К„, = 10" ссс ', лвг(1сЬес)с апй Вауег 1988), соп|р!ехев Ьепчееп Ьюс|п апс! всгерсаийп Еопп чету гарЫ1у ап|1 опсе Гоппей аге гев(всапс со ехсгеп|ев оЕ РН, огВашс во1чепся апй гпапу йепашпп8 а8епь (Огееп 1975). 5спп8епс |чавЬсп8 с)оев пос саиве!еасЫп8 о( сесЬеге|1 118апс) Ггогп сЬе вигГасе оЕ тЬе Ьеай, апй еппсЬтепс Еассогв оЕ 100,000 сап Ье апа|пей йипп8 а яп8!е гоипй оГ аГВп)су сарсиге.
РегЬарв ГЬе та)ог йвас!чапса8ев оЕ та8пепс Ьеайв аге (1) сЬе|г ЬГВЬ совс ап|1 (2) сЬе пеес) Гог ап еГГсс|епс |пацпейс рагйс!е вера|а|от. ТЬе Ьевс оГ |Ьеве с)еч|сев сопса|п опе ог пюге пеойупшпп-|гоп-Ьогоп регтапепс та8песв апй аге ача|!аЫе |и а пшпЬег оГ Еоппасв Ггот вечета1 сопипегс|а! вирр1|егв. БВиге 11-24 |Вивсгасев а Вепепс ргосейиге Гог аВ)п)су сарсиге оГ а врес|йс РЫА-Ь)пй)п8 ргосеш Ьу а Ь~оНп-1аЬе!е|1 о!)копие!еосЫе 118апй се|Ьегей со гпа8пейс Ьеайя Ночеечет, п|апу о|Ьег арр1каИопв Ьаче Ьееп йевспЬей юте оЕ |чЫсЬ аге 1)всей ш ТаЫе 11-8.
Риг|Ьег шЕоппайоп п|ау Ье Еоипй |и |Ье течк и Ьу 1а1|оЬвеп ес а!. (1994) апс! ш сЬе!Вега|иге риЫВЬе|1 Ъу гпапиЕастигегв оЕ та8пеВс Ьеайв (е.8., Рупа! Ьсср:Псччпч.йупа!. пес(Рупа! ЪСгеЫРупа!ЪСгеЬ.пвЕ(Ь|гп! спей(а/то!оси! аг Ыо! о8у. Ьсгп1). 1п3гогтаГ1оп Рапе11 11.119 рдгдпГддпе11С Ьевб оддопис3еоабе вггергднГб~п а11всп Ьюап-1аЬе1еб 3~депо 1о вггер1дн1б3П-соагеб ппа9пеас Ьеаб 3ПСОЬО1е Ьеабв нГПЬ во3иаоп соп1дГСГп9 беагеб 1вгде1ддапб гагде1 1!депо авп дпб/СГ~ПСОЬО1е мпаа пвресГГГС СССГреагог 1о босе Ьдсадгоипб Ь3пб3пд еГО1е Ьоипб В9апб ап НСО33СЕ 11.24 АНЗП!1у Риг!йса6оп 33в1пе Маепе13с 33еаг3в А аепег!с арргоасЬ 3в 1!!Овггагеб Ьеге аког 1Ье саргиге о1 а вресйс Гагаег 11аапс3, ив!па ав ап ехапГр!е а 03н3А-Ь3пс31па ргоге1п.
ГЬе ЫО11п-1аЬе1ес3 11аапс3, Гп 1Ыв саве, ап о11аопис!ео11бе епсос3!Пе 1Ье ригагЫе ЫПГ31пе в31е аког 1Ье гагееС ргоге1п, 1в айасЬег3 1о в1герган3б1п-соаГеб гпаепе11с Ьеабв апг1 1псиЬаге13 1п а во1иггоп сопга1п1пе 1Ье 13ев1гес3 гагде1 ргоге!и. ГЬе Ьоип13 рагггс!ев аге со!!есгег3 ън31Ь а гпаапег!с верагаггоп 13ен!се апс3 ннавЬес3 гереагеб!у нн!1Ь а во!Одоп соп1а3П1пе а попврес33!с согпрег!1ог. С!па!!у, 3Ье Ьоипс3 гагеег 11еапс$ 'ь е!пег! 1гогп 1Ье о11еопис1ео1!бе апг1 апа1укеб.
Еи)отта?топ РаиеЬ 11.121 Е?САТ!ОВ?-1В(ОЕРЕВ?ОЕВ?Т СЕО1Ч! 1ЧС Ь(цас(оп-шс?ерепс?епс с1опшц (ПС-РСК) (а1ко ?спокчп ак епгуше-Егее с!ошпц) шстеакек ЬосЬ йе еВ?с(енсу апс? креес1 оЕ с1ошпц оЕ РСК ргос?нсск. ЫС-РСК е!ншпасек сЬе пеес! со 1?Васе РСК ргос?нсь со а чессог, с?оек пос ге!у оп геяпсцоп ясек, апс? ачоЫк ргоЫеспк санкес? Ьу ехсга Ьакек йас аге ас?с?ес? Ьу сЬе ехсепс?аке асс(ч?су оЕ сЬеппоксаЫе РХА ро!упсегакек ас сЬе 3' сегинш оЕ РСК ргот?нсск (С!аг?с 1988; Нн 1993).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
