Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 116
Текст из файла (страница 116)
1993). О1с8о(йТ) рпгпсп8 сап Ье сагпес$ оис сп ьо1иссоп ог Ьу ияп8 о68о(йТ) се!Петей со рагаспа8пессс ЬеасЬ (ЬашЬегс апс1 СЧППашьоп 1993). ° Етье а ьсп8!е Ьифег Еог ьуисЬеь!ь оуутгьс-ьсгапй сРХА, ьесоий-ьсгаий сРХА, аий айй!т!ои ос'!!и)сеть ог Ьоторо!утепс сатЬ (Вгайу ес а1.
1990; Ооп ес а!. 1993; АасяпЫ ес а1. 1994). ° $7ье РСЕС со атр!ЕЕу е(сЬегут гас-ьстапй ог йоиЫеиигапйей сРХА (е.8., р1еаье ьее Ве)уачьку ес а1. 1989; Вгас1у ес а1. 1990; Епшь ес а!. 1990; МсСаггеу апй ЪЧП!ашь 1994; Вече! ес а!. 1995). То ргочЫе Ьспй!п8 ясеь Еог о1с8опис(еосЫе ргипегь, сЬе 3' сегпипы оЕ 6гьс-ьсгапс$ СОХА Ь спос66ес1 Ьу асЫсс!оп оЕ а Ьошоро1ушег сас! (Ве1уачь)су ес а1. 1989).
А!сегпайче1у, ЪосЬ сегш!п! оЕ Ыипс-епйес$ с$оиЫе-ьсгапйес1 СОХА сап Ье гпос66ей Ъу асЫтйоп оЕ 1ш1сегь, 18 — 20 Ьр сп !еп8сЬ (Таш ес а1. 1989; Ооп ес а1. 1993). р(гьсьыапй СОХА сап сЬеп Ье ашр66ей ияп8 рпгпегь согпр1ешепсагу со сЬе ро1у(йТ) стас! ас ЕЬе 3' епй апй ЕЬе Ьопсоро!успег саП (иьиаПу о68о(й(!) ) ас сЬе 5' епс1.
ОоиЫе-ягапс$ей СОХА сап Ье агпр!сбес( ияп8 рнгпеш согпр1егпепсагу со сЬе Пп)сеть. 1п еасЬ саье, 1оп8 ехсепьюп сипеь и'прсоче сЬе у)е1й оЕ с1опеь сопсасшп8 сОХАь >2 1сЪ сп 1еп8$6 (Ооспес ес а1. 1990; 5ееЪег ес а1. $993; АасыпЫ 1997). СОХА 1сЬгапеь Ьаче Ьееп еьсаЫЬЬес1 Ьу РСВ гпесЬосЬ 6огп аь Еесч аь сеп оосусеь апй Ьу пюс66ей чегьюпь оЕ сопчепСюпа! с1опш8 стоги 10ь ьотпайс гпагпгпаПап сеПь.
° От!с сЬе тейу!ас(оп ьсер тп сЬе тсегеьс оуьстеат!!исае сЬе ргосейиге апй тахст(г!пе сЬе ьие оЕ сЬе сРХА ИЬгагу (МсОоппеП ес а1. 1987; Ооп ес а1. 1993). ТЬе йоиЫе-ьсгапс(ес$ СОХА сап Ье ргерагей Еог 1с8асюп и сЬе чессот Ьу асЫиюп оЕ айарсогь ог Ьу ияп8 1ш1сеть соппишп8 гесо8пшоп ьпеь (ьисЬ аь №с1) сЬас аге гаге1у соипй ш сОХАь. ° Есье со1итп сБготасоегарЬу гасЬег сЬап ее! е1етгорЬотеьЬ со Етассюпасе сЬе сРХАь ассогй!пе со яхе (ЪЧеп8 ет а1.
1989; Отчеп ет а!. 1993). ° $7ье рИос теист!опт со аьсетсати сЬе орйтити тасю аусРХА со т ессог ти сЬе !!еас!ои геасйоиь. реп росепс рас1сарп8 пихсигеь Ьесаше сопипегссаПу ачас1аЫе, ЬассепорЬа8е ), чессогь тете ргеЕеггей со р1аяпЫь Еог еьсаЫ(ьЬшепс апс1 ргора8асюп о( СОХА ПЬгапеь сопьсгиссес$ Егогп 1ип(с!п8 апюипь оЕ шасепа(. Ноччечег, япсе сЬе йече1орспепс оЕ ьсгасы оЕ Е.
со1г ЕЬас сап Ье ейсссепс!у сгапь(оппей Ьу е1ессгорогасюп, сопьсгисйоп оЕ СОХА ПЬгаг(еь !п р!аяпЫ чессогь Ь опсе а8аш а ЫаЫе орсюп (СгиЬег 1995). ЫЪс.апеь сопьсгиссей ш ЬассепорЬа8е ). аге еаяег со гпашсаш, ашрПЕу, апй ьсгееп; оп ЕЬе о!Пег Ьапй, р1аьпийь аге ачаПаЫе сп 8геасег чапесу апй шау Ье сЬе чессогь оЕ сЬо(се счЬеп ЕЬе 1сЬгагу, ог шсПчЫиа! СОХА с1опеь, ате со Ье ыей Еог сгапь(есс!оп оЕ гпапипаПап сеПь.
Еп)огтиг(он Раве!ь 11.113 ЕМ 'я(1ТКО РАСКАС!МС Рас)са8108 оЕ Ьас|епорЬа8е Л РХА ш чпго |чая ш|йаПу йече)орей Ьу Вес1|ег апй бо1й (1975) игйп8 пихсигея о( ех|гас|я ргерагей 6ош Ьас|епа ш(ее|ей лч(гЬ яггашя оЕ Ьас|епорЬа8е Л саггуш8 гпшаповып Вепеь гел)и(гей 1ог | Ье аяяешЫу оЕ Ьас|егюрЬа8е рагйс)ея. ТЬе ргосейиге Ьая Ьееп |пог66ей апй ипргочей |о |Ье рош| |чЬеге 2 х 10я руи сап Ье Вепега|ей гоийпе1у ш рас)са8(п8 геас|юпя соп|а|пш8 1.0 08 оЕ ш|ас| ЬассегюрЬа8е Л РХА. ТЫь ЫВЬ ейк|епсу оЕ рас)са8(п8, совр!ей |чПЬ гЬе с!ече!ор|пепс о(а!аг8е ыаЫе оЕЬас|егюрЬа8е Л чес|огь апй |Ье аЪ|Иу |о ясгееп ПЬгапея Ьу ЬуЪгЫ|ха|юп ог ИппшпосЬеписа1 гпегЬойя, 1ей |о |Ье йопипапсе оЕ |Ьеяе чес|огь ш сРЫА ПЬгагу сопя|гисйоп ш |Ье 1980я.
ТЬе шсгеаяей ияе оЕ Ьас|епорЬа8е Л ая а с1ошп8 чес|ог а!яо!ей |о |Ье йече1ор|пеп| оЕ сопипегс|а1 рас)са81п8 геас|юпя. Тойау, |Ье ргерага|юп оЕ рас)са8(п8 геасйопь ая йеьспЬей |и |Ье 5есопй Ес66оп оЕ ЕЬ(я шапиа! (я а)гпо|и а 1оя| аг|, ечеп |и |Ье 1аЬогасопея оЕ ехрепевсей Ьас|епорЬа8е шчея68а|огя. Сопнпегс|а! рас)са8108 геасйопычог)| ехсеесПп81у |чеП ап|1 аге яо геаяопаЫу рпсей |Ьа| |Ьеу Ьаче гер!асей Ьоп|е-гпайе ех|гас|я ш гпоя| гоийпе с!ов(п8 |ая1|я. Но|чечег, Еог ярес|а1|аес! аррПса|юпя яисЬ ая ЕЬе совя|гис|юп оЕ ПпЬ(п8 апс! ) шпр)п8 Вепо|пк РХА ПЬгаг1ея (ъчЫсЬ ияе Ьи8е пшпЬегя оЕ рас)са8108 геас|юпь), П )я |чог|Ь гаРйп8 |Ье |ипе со ргераге Ьогпе-Ьге|чей рас)са8!08 ех|гасш (роияг)са !993). Рас)са8108 ехггасгя аге ргерагей Ьу опе оЕ ||чо Вепега! я|га|е8йек ° Ехргеяяоп оЕ Ьас|епорЬа8е Л Вепея Ея шйисей ш ||чо яерага|е!уьо8епя |Ьа| ргочЫе сошр1егпепйп8 сошропепгя оЕ |Ье рас)га8108 геаспоп (е.8., р1еаяе ьее 5са1еп8Ье е| а1.
1981). Ая а сопяес)иепсе оЕ пил|а|юпя ш |Ье ргорЬа8е Вепогпея, пе||Ьег 1уяо8еп а1опе (я сараЫе оЕ рас)са8108 ехо8епоия1у аййей Ьас|епорЬа8е РХА. Ехггасгя оЕ еасЬ си1|иге аге ргерагей яерага|е!у апй Ыепйей а| |Ье ЬепсЬ ~п|о а пнх|иге ЕЬа| сопла(пя аП оЕ |Ье согпропепгя песеяяагу Еог рас)са8108.
ТЬе геяи!г!08 рас1|а86п8 пих|игея аге е(6- слеп|, |ур|саПу у|е1сПп8 |и ехсеяь оЕ 10" рЕил!|8 оЕ Ьас|епорЬа8е ) Р)я)А апй еяяепг(аПу Егее 1гогп Ьас1|- Вгоип|1 (|чЬеп аяяауей оп арргорйа|е Ьояг я|га1пя). Ехашр!ея оЕ сопипегс|аПу ачайаЫе, пчо-сошропеп| яуя|егпя аге С(8арас)с 11 бо!й (5|гага8епе), апй |Ье Л рас1|а8йп8 яуягеш ачайаЫе |тогп Елуе ТесЬпо198)ея.
° А ап8!е Е. соП С ЬассегюрЬа8е Л 1уяо8еп 6 ияей |о ргераге ап ех|гас| |Ьа| сопла|па аП оЕ ЕЬе сошропепгя песеяяагу |о рас)са8е ехо8епоия1у аййей ч(га! РМА (ВояепЪег8 1987). Опе 1уяо8еп сап Ье ияей |о ргераге рас)са8108 ехггасгя Еог пчо геаяопь. Бгя|, |Ье ргорЬа8е сагпей ш |Ье 1уяо8ешс я|гаш епсойея аП оЕ |Ье рго|е(пя пеейей Еог рас)са8(п8. 5есопй, |Ье соя я(ге оЕ |Ье ргорЬа8е Ьая Ьееп йе1е|ей. ТЬеье Ееагигея лчог)с |о8е|Ьег |и |Ье ЕоПолч(п8 гпаппег. !пйисгюп оЕ |Ье 1уяо8еп геяи1|я |и |Ье ш|гасеПи1аг ассипш1айоп оЕ аП рго|еш согпропеп|я пее|1ей Еог рас)са8)п8, апй сошр1е|е ргеЬеайя аге Еоппей. Но|чечег, ЕЬе пех| гаера ш |Ье рас)са8108 ргосеяя аге | Ье гесо8ш|юп оЕ ЕЬе соя 6|ея ов сопса|епа|ей Ьас|егюрЬа8е Л РЫА Ьу |Ье Ьас|епорЬа8е А рго|еш апй |Ье шяеггюп оЕ ЕЬе Ьас|ейорЬа8е Л Пепите |п|о |Ье ргеЬеай.
ТЬе 1ас)с оЕ |Ье соя я|е ш |Ье ргорЬа8е РНА ргечепгя |Ыыиер Егош оссигпп8, апй рас)са8(п8 |ь |Ьы е(Тес|Не!у ЬаЬей а| |Ье ргеЬеай я|а8е, ечег| |ЬоиВЬ аП песеяяагу соп|ропепш ЕЬа| аге ыей!а|ег ш |Ье ргосеяя аге ргеяепс. Но|чечег, ехо8епоия РЫА лч!ЕЬ ап асйче соя я(ге сап Ье шяег|ей ш|о |Ье ргеЬеай, апй |Ье рас)са8(п8 ргосеяя |Ьеп 1еайя |о |Ье ргойис|юп оЕ ап шЕесйоы Ьас|епорЬа8е рагйс!е. Ехсгасгя шайе |и |Ыычау ияиаПу Ьаче а 1о|чег Ъас)|8гоипй оЕ р!аг)иея |Ьап | Ье с!алька! шпагу пихшгея, Ъесаияе |Ье йе1ейоп оЕ |Ье соя я|е Ыос)ся рас)са8108 оЕ епйо8епоия Ьас|епорЬа8е Л РЫА пюге согпр!е|е1у |Пап йо |Ье пил|айопя ргеяепс |и |Ье Ь|пагу я|гашя.
Е. со)|' С |чая сЬояеп аыЬе 1уяо8ешс Ьо|и |о 1еяяелл |Ье ргоЪаЪ|!Ву о( гесошЪюа|1оп Ъеглчеелл сгур|1с Ъас|епорЬа8е Л ргорЬа8ея, лчЫсЬ аге Кпо|чи |о Ье ргеяеп| ш |Ье Вепогпе оЕ Е. со6 К, апй |Ье соя-йе1е|ей ргорЬа8е. Виг|Ьегшоге, Е. са6 С 1ас)ся |Ье Его К гея|пс|юп яуягеш (ВояепЪег8 1985). ТЫя ьуя|еш, 1Йе о|Ьег ге|пйсйоп яуягешя, силь иппюг66ей РЬЕА ш а яел)иепсе-ярес)Еле шаппег апй (я аВо 6лпс|юпа! ш рас)са8108 геасйопь ш ч(гго. ТЬы, ех|гасш ргерагей Егогп сеПя оЕ Е. со6 К Ьаче |Ье ро|епйа! |о яе1ес| а8а|пя| РЫА |Ьа| соп|ашя ап ипгпос66ей ЕсоК гесо8шйоп 6|е.
Весаияе еи1|агуо|к РЫА ияей |о сопя|гис| ПЬгапея |чй! по| Ье рго|ес|ей Егогп с1еача8е, с1опея |Ьа| Ьу сЬапсе соп|аш ап ЕсоК гесо8п|6оп я)ге шау Ье!оя| Егогп |Ье рори1айоп йипп8 рас1|а8- ш8. Весопяггисгюп ехрегнпеп|я яЬо|ч |Ьа| Ьас|епорЬа8е Л РЬЕА саггуш8 ап ЕсоК гесо8ш|юп я|е !я рас1|а8е|1 глчо- |о яечеп(оЫ!еяя е(6с|еп|1у ш ех|гас|я |1епчей Пош Е. со!| К |Ьап |и ехггасгя ргерагей Егогп 6 со!| С (ВояепЪег8 1985).
Е. соП С епсо|1ея гея|пс|юп-шог66са6оп яуя|егпя |Ьа| соп|а|п сошропепгя (тсгА/тсгВ апй тгг) | Па| с68ея| РИА саггу|п8 гпе|Ьу! Вгоиря оп су|ояпе апй айешпе геяйиея (е.8., р1еаье яее Кгегх е| а1. !989; 11.114 С)ларгег 1$| Ргерагиг(оп оу сР)чА 6$6гапеь анс$ Сене Ес)енгфсаг(оп КоЫег е| а!. 1990). Весаиье пюы еи)сасун!к РНАь аге ше|Ьу1агес( оп |Ьеье геьЫиеь, рас)|а8(п8 ех|гаси Егош ыгашь оЕ Е. соП саггушВ ш|ас| тсг ап|$ тгг ьуыешь ье1ес| а8ашы ше|Ьу1а|е|$ еи1|агуоПс Р)ь)А ьел)иепсеь.
Нолчечег, |Ье ме оЕ рас)са8(п8 ех|гася ргераге|$ Егош Ьас|еНа! сеПь с(еулс)епг ш |Ье ЕсоК, тсг, ап|$ тгг Вепеь (Вепо|уре А(тгг)льл)ПМ5-те|В)) еЕЕес|в е!у е1ннша|еыЫь ргоЫен| (Кгегг ес а1. 1989). рог Вовс) п|еаялге, |Ье тсгг- ап|$ тгг-епсос)е|$ геыНсПоп лук|ешь Ьаче а1ьо Ьееп еПш)палас(йош |Ье В соП ыгашь пьес) |о ргераге ьогпе сопнпегс|аПу ачаПаЫе |и ч!|го рас)са8(п8 ех|гас|я Вхаплр1еь оЕ яп81е сошровев| Ьас|еНорЬа8е ).
рас)са8(п8 ех|гася |Ьа| аге соннпегс|аПу ачаПаЫе аге |Ье О(8арас)с И1 Оо18 (5|гага8епе), |Ье МахР1ах рас)са8)п8 ех|гас| Егоп| Еркеплге ТесЬпо1о8)еь, апс) |Ье Рас)саВепе ех|гас| 6он| Ргоше8а. СОЯ СЕ!.хв СО5 сеПь аге а ыаЫе 1ше о( АЕПсап Вгееп гпоп1|еу )ос)пеу сеПыЬа| саггу шге8гагес) сор|еь оЕ |Ье 5У40 Вепогпе ап|$ соньгПи||че1у ехргея Ъ|осЬепнсаПу асйче, Я'40-епсос)ес)1аг8е Т апПВеп. Весаиье 1агВе Т апг)8еп В |Ье оп1у ч(гаПу епсол)ес) ргос(исл гел)и)гес) |о ас|в а|е |Ье 5Ч40 ог(8)п оЕ Р)4А гер!ка|юп, СО5 сеПь аге аЫе со ьиррог| |Ье гер!каИоп оЕ апу р!аыпЫ |Ьа| соп|ашь ап ш|асс 5Ч40 ог)8(п.
Тгапь(ес|юп оЕ СО5 сеПь лч)гЬ гесогпЬ)пап| р!аьпис)ь сопсашш8 ап Я'40 опЬПп апс( а 6|пс|юпа1 |гавьсНрПоп ипн 1еас)ь |о еЕПс|еп| ап|р1гПсаПоп оЕ |Ье |гапь|ес|ш8 РЕПА апс) ап епЬапсе|$1ече! оЕ папяепс ехргеьяоп о( |Ье с!овес) РХА ье8шепг. сПпсе |Ье|г сопыгисгюп ш 1980, СО5 сеПь Ьаче ргочеп со Ье шча!иаЫе Еог ыис)у(п8 |$)ЕЕегепг аьреся о(' еи)сагуог)с Вене ге8и146оп, Еог ехргея|п8 с!овес)Пепел ш ш)Пс|еп| |)иапг(гу Еог ЬюсЬеннса1 апа!уыь, Еог апа1ухш8 |Ье ш|гасеПи1аг сгапьроя ап|$ ргорегВеь оЕ лч)1|$-гуре ап|$ пш|ап| рго|ешь, ап|$ Еог с1ошп8 сР)4Аь |ог лчЫсЬ по рго|е)п ьес)иепсеь аге ача(1аЫе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
