Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 113
Текст из файла (страница 113)
Кепюче )Ье Ъеат)5 Ггопг йе Ътпсцпц Ъийег ияпц а шацпе6с херага)ог, апт) йеп гепюче апт) сцхсагт1 ГЬе ятрегпатапт. ЪЧахЬ ГЬе Ъеат)х Гтч)се, Гог 15 пипитеа еасЬ Птпе, ш 1 тп1 оГ !х 55С!0.1% 51б ат гоопт Гетпрегатиге Гоцотчет) Ъу ГЬгее тчааЬея 15 ппптттеа еасЬ, ш ! пт1 оГ 0.1х 55СЕО.!% Юц аг 65'С. Айег йе 6па! ъчахЬ, ггапьГег йе Ъеат)ь го а ГгеаЬ тпкгоЕице тиЪе. То е)иге )Ье ЬуЬптцг)пц сГ)ХА5 Гготп йе ЪеасЬ ш 5)ер 12: а. АОЫ 100 )т! оГ 0.1 М ХаОН, апт) тпсиЬаге йе геастюп чих!иге Гог 10 тп!иигеь аг гоош тетпрегатиге. Ь. АтЫ 100 р! оГ1 М ТпяС! (рН 75).
с. Г)ей!с йе ппхтше Ъу арии-со! ишп сЬготпатоцтарЬу йгоицЬ церЬаг)ех б-50 (р1еаае атее Аррептцх 8). ТгапьГег йгее ацт)иогх (1 01, 5 р1, апт) 10 01, геьресбче)у) Егош йе 200 р1 оГ е)итет) су)ХА (цтер 13) Го 0.5-ш1 атеп!е аитр1т6са6оп ГОЬея 14. 15. то 25 р! цег ир гтчо соптто1 геаст)опь ат )Ье хаше типе аа )Ье аЬоче техт теастюпя рот )Ье пецабче сои- )то!, !пс1ит)е аП оГ )Ье сошроиепгх Катет) аЪоче, Ьит оиит )Ье Гетпр)аге сГ))ч)А. Рог ЕЬе аесопт) соптго1, шс1ит)е 10 иц оГ йе хтаг6пц сГ)1)А (цтер 4). 1Г ГЬе ГЬегша1 сус!ег !5 пот 6ттет) тч!ГЬ а Ьеатет) 1Ы, очеНау ГЬе геас6оп тп)хтигех чч)ЕЬ 1 тЬор (-50 )т!) оГ ПцЬ) пнпега! от! го ргечепс ечарога6оп.
А1)егпа6че1у, р!асе а Ьеат) оГ тчах шго йе гиЬе )Е ияпц а Ьот хтагт РСК. Р1асе йе ГОЬеа !и йе ГЬегпюсус!ег. 16. Атпрцру )Ье пис!ек асЫх ияпц )Ье ПепатигаПоп, аппеа1шц, апт) ро1утпепга6оп йпеь апт) гешрегатигеа 1ьтег) Ье1отч. ТЬече т)шеч аге чштаЫе Еог 25-р! ог 50-р! геасттопч аччетпЫед ш гЫп-ъча))ет) 05-ш! тиЬеч апт) )псиЬатет) тп ЕЬеппа! сус)его чисЬ ач )Ье РегМп-Е!птет 9000 от 9700, Мачтег Сус!ет ЕЕррепг)огЕ), апт) РТС )00 (М1 КечеагсЬ). Тнпеч апт) тешрегатигеч тпау пеет) то Ье аг)арт- ет) то г шт ойег сурет оЕ ет)шршепт апт) геастшп чо1швея 11.104 СЬаргег 11: Ргерага6оп оГ сРИА Гацталет апт) Сепе Ег)епгфсаггоп Аггчр!)Г)са1!оп оГ Йе Рггшагу це!естес! ссгМАь То еасЬ гиЬе, атЫ )Ье ГОПотч)пц: рптег о!)ЕоЗ Е)0 тм) )Ох атр1)цсаиоп ЬиЕЕег г)ХТР шопоте Еог РСК 12.5 шм) Таа Р)чА ро)утетаче Ерег)т)п Е!тег 5 ишь/р1) Н,О 5 Н! 2.5 и! 2.5 р! 0.2 р! ртотосо! 4: РЕтест Бе!ест|оп о) сРИАь мой Еатде Сепоттс РИА С1опеь 11.105 Апа!ухе 10% оЕ еасЬ ашр1|6са6оп теас6оп оп а 1% ацагоье Ве) саы апг) гпп ш 0.5х ТВЕ, )пс1ис)108 Р)ЧА тпаг1|егь оЕ ап аррторпа|е ьие.
5та)п йе Ве! |ч)й е|ЬЫшп| ЪготпЫе ог 5'т'ВК бо!г) со ч)ьиа1ие йе Р)ЧАь, еыииа|е йе сопсепсга6оп оЕ |Ье ашр66е|1 сР)ЧА, апг) |1е|егиипе |чЬкЬ )при| сР)ЧА сопсеп|га6оп рго|)исеь тЬе Ь~ВЬея у)е1|) оЕ сР)ЧА. А ьпссеььуп! геас|юп ьЬоп10 у)е10 а чеПЫе япеаг оЕ а|ар!!Пег) сР)4А Ега8гпепть апг) тпау сопта|п |оспе тП|Ппс| Ъапг)ь. 18. Опто а ьесопг) 1% а8агоье Ве1, 1оа|1 йе ьатпе аиюипо (-0.5 )|8 рег 1апе ) оЕ йе ашр66|)ес) ргос)ость оЕ еасЬ РСК, аь гчеП аь йе арргорпа|е яхе тпаг)сеть. АЬо 1оаг) 0.5 )|8 оЕ таис)ош1у рпи|е|1 сР)ЧА Егош 5гер 4. Тгапьуег |Ье ьерагатес) Р)ЧА ьрес|еыо а тпешЬгапе Ьу 5оитЬегп Ыоп)п8 (СЬар!ег 6, рго|осо1 8) апт) ЬуЬг)с)1хе чт!1Ь тЬе гаг)101аЬе)ес), роьтче сои|то! сР)ЧА.
ТЬе |п|епяту оЕ ЬуЬптПтаПоп то йе ье!естет) сРЕЧА ьЬоо!с) Ье -1000-Ео1с) 8геатег |Ьап то йе гапг)отп!у рг)тпес) сР)ЧА !5|ер 4). 20. Опсе йе роя6че сои|то! епгкЬшепс Еь соп6ппей ьса1е ир |Ье ортииа1 ашр1|6са|юп геас- 6оп |о у)е16 а|1еаЯ !.5 )|8 оЕхе!ес|е|1 сР)ЧАь. Ех|гас| йе роо1е|1 геас6опь гч)|Ь рЬепоЬсЫо- гоЕопп апс) гесочег йе Р)ЧА Ьу ыапс)агг) е|Ьапо! ргес)рКа6оп. Кеьиьрепс) |Ье с)г)ес) сР)ЧА реПей ш 7.5 р1 оЕ ТЕ (200 )тц)ш1).
21. 01гес$ с0)чЬА $е!ес11оп (Ьесопдагу 5е!ес6оп) В!ос)с гереи||че ьес)иепсеь )и йе рпшагу хе!естес) сР)ЧА аь г)еьсг)Ъег) ш 5!ер 9 (|ч||Ь 1 )|8 оЕ сР)ЧА Ъе)08 иьег) апг) 0.5 )тц оЕ сР)ЧА Ъеш8 Ье16 ш геьегче Еог !а|ег апа1уяь). 22. 5ет ир йе ьесоп|1агу ье1ес6оп аь с)еьсг)Ьес) ш 5!ерь 9 тЬгоиВЬ 13. 23. Апа1ухе йе ргог)ость оЕ йе ьесопс) ашр66са|юп Ъу е1естгорЬогеяь тЬгоиВЬ а !ото а8атоье Ве! аь )и 5!ер 18, 1пс1итПп8 а 1апе ьч1|Ь 0.5 )|8 оЕ рг)шагу сР)ЧА (Ье!д ш теьетче) апс) а 1апе гч11Ь 0.5 )|8 оЕ йе ыаг6п8 сР)ЧА. 24.
Апа!ухе йе Ве! Ъу 5оттйегп Ыо|бпц апг) ЬуЬг)г))хабоп |чПЬ тЬе гас601аЪе1ес) герог|ег ргоЬе аь с)еьсг)Ьес) ш 5|ер 20. 1п 8епега1, |Ье геьоЬ оЕ |Ьть апа!уыь ьЬоп10 гечеа! а !агре )псгеаье тп аЬппг)апсе оЕ йе герогтег ргоЪе Ъетггееп |Ье ыагПп8 апг) рптпагу сРЫАь апт) а тоге атос)еы Е-10-Ео10) |псгеаье Ьетгчееп |Ье ргппагу апт! ьесопг)агу сРЫАь. Опсе еппсЬп|еп| оЕ |Ье сои|то! )ь сопбтгшег), с1опе йе ье1ес!ес) сР)ЧАыпсо |Ье арргорпасе честит!а). ТЬе теыпс6оп епхуите я!еь )и |Ье ашрП6са|юп саьье||е Еас|П|а|е |Ье с!ои)пц оЕ йе ьесопс)агу хе!естес) сР)ЧАь )п|о ЪастегюрЬа8е ог р!аяпЫ чес|огь.
А пьеуп! а1|егпа|тче Ыо ые опе оЕ ьечега1 118аг!оп-!п|)ерепг)опт с!опт8 ьуьтегпь погг соти|пете)а11у ача|1аЫе Ее 8., |Ье РОС ьуьтеп| Его|и 1|Ее ТесЬпо1о8)еь ог |Ье СЕОМЕАМР РАМР чес|ог ау|- те|и Еготп алуа ТесЬпо1о8)еь). 11 опе оЕ |Ьеье а)|егпаПчеь )ь ньей |Ьеп пье йе о!18оь рптпег гч)тЬ а аппо|))Етег) 5' ех|епяоп !ьее тпапоЕасюгеп Еог г)ета)1ь). Рог Епг|Ьег сПьсоьяоп оЕ тЬ)ь ьтга|е8у, р!еаье ьее |Ье |пуоппаПоп рапе! оп Е!САТ!О)Ч-ПЧОЕРЕ)ЧОЕ)ЧТ С!.О1ЧПЧС.
26. Саггу ои| йе ьесопг)агу ье1ес6оп ипс)ег |Ье ьаше сопс66опь аь йе рпшагу ье1ес!юп, ияп8 1 )|8 оЕ йе рпп|агу ье!естес) сР)ЧА ап|1 50 п8 оЕ йе таг8ет Р)ЧА (!оса! !епВ|Ь 500 1|Ъ |и |Ь~ь ехашр!е). 11.106 СБаргег 11г Ргерагаг|оп о( со(ь(А 1.|йгаг(ез аиг3 Сепе Иепгфсаг|оп ТВОЕ(ВЕЕйНООТ1МС ° йюг 1айе11пе оИйе еепогп(с (агде1 гиЯ Ьюйп ь гйе пъохг согппюп саихе о1 (а!1 иге |п сй гес( хе|если, 11 ь негу $пъропап( по( (о ргосеес3 ън$(Ь |йе ве|есйоп $1 (Ье (ех( Ыпс||пд (Мер 8) 1а|В (о у|е|г3 1Ье соггес| гаьо о( Ьои пг$|о ипЬоипс3 еепогпк 0МАь. 11|Ье 0 МА ь гех| агап( (о |аЬей пи, 11 гпау Ье рипЯес3 Ьу хенега3 ех|гас($опь ън$(Ь рЬепойсЫого(оггп апг$ рагьаце онег а Яерйас|ех 0-50 хрип со|игпи.
° Нфй Тгег(иепсу о1 Бас(гйгоипг1 нег(иепсеи гп Гйе йпа1 с(опег1 ие(ес(ег( с0(ъ(Ах. ТЬеае аес|иепсеа ихиайу (а1 | 1п(о (оиг с(аъае5. Р|аъгп|с3 нес(ог аес|иепсех сап Ье а ргоЫепь ънЬеп их|ой согпгпепс|а| с0МА йЬгапех (Ьа( аге ггег!иеп(- |у соп(агп|па(ес$ ън3(Ь |Вехе "1пъегь." ТЬе Ьсь( ънау го ейпъ|па(е (Ьсье 3пхегЬ ь (о Ыос|ь (Ье СОМА ън1(Ь йпеаг|хес3 нес(ог 0МА г|иг|пе|Ье ае|есйоп. В|пей|па Ьу (Ье нес|ос ейои!с$ Ье овес! ънЬепенег а с0МА йЬгагу, га(Ьег 1Ьап рпгпагу с0МА, $а ихес$ |п гйе хе|есйоп.
М$1осЬопс|па3 с0МА 'ь хогпе(1пъех ргехепг Ьесаихе (Ье уеав1 пъйосЬопс$па| йепогпе В соп(агп1па(3пй а уАС 0МА ргерагагюп. ТЬВ соп1апппап( сап еах$3у Ье к1епййес1 апс| с|ьсагс|ес3 Ьу ясгееп!пе со|оп|кь Ьу ЬуЬпс33ла($оп го а гп|госЬопс|па3 0МА ргоЬе. (Агйе(Ьег ог по( пЬогюгпа$ аес|иепсех аге Ыос|сес$ ! п уАС г$3 гес( хе1есйоп, (Ьеу (епс3 (о хпеа|с (ЬгоийЬ (о (Ье йпа| аег о1 с|пиеа. ТЬь соп1апйпапг сап Ье соип(егзсгеепес3 ъъТЬ ап г0МА ргоЬе. А пЬогюгпа| ргоЬе сап Ье еепегагег3 Ьу йгхиъггапг3 с0МА ауп(ЬехВ (гогп (Ье ро|у(А| 1гас(юп о((о(а3 РМА. ТЬе йпа! сопипоп "сопгагп|папгя" аге с0МАь соп(а|п!пе герей(ве аес|иепсех.
Арргохипа(е|у $09' о( гпКМАа соп1а|п гере(11(не е!егпепь ън1(Ь|п 1Ье|г оп|сапа!агес$ гей|опх. А3(ЬоиеЬ гереа1-соп1а|п|пй с0МАь аге иеиа$!у по( апа|улес3 с|ие 1о|Ье (есйп|са3 ргоЫепь $п гпап!ри|а(1пй (Ьсье с|опех, (Ьехе с1опех гпау $п (ас( Ье Ьопе йс$е рапа о( а ггапхсг|рс (Ьас 'ь епсос$ег| Ьу (Ье гагее( сей|оп. Еог|и па(е1у, й с0МАь хуп(Ьех|гес3 Ьу гагх|огп рг|гп|пд аге гьег| |п |йе ае|есйоп, йъеп апо(Ьег попгереИне раг| о((Ье аагпе (гапъспр($оп ип!1 1:3с 1 Ье'с$ Тег| ТЬ ! Ь Ье $г|епййес3 Ьу со!опу хсгееп- !иуогтасЕои Рапе!я 11.107 СОММЕКС!АЕ К1Т$ ЕОК сОЫА йУЫТНЕ$1$ АЫО Е1ВКАКУ СОй!ЬТК11СТ1ОЫ Весчгееп 1975, ччЬеп сЬе Нгяс сРЬСА с!опея счеге Ьо1асей апсс сЬе !асе 1980я, счЬеп гпесЬосся со цепегасе 1агце сРХА НЬгапея Ьесагпе гоицпе, лгсиаНу аН оЕ йе ассчапсея ш сРЫА с!ошиц Носчес! Егот асассетсс 1аЬогасопея.
5!псе сЬеп, Ьосчечег, пюяс оЕ йе ргоцгеяя ш ЬосЬ яупсЬеяя оЕ сРСчСА апгс еясаЫЬЬгпепс оЕ сРЬСА 1сЬгапея Ьая соте Егот согпгпегсац согпрашея. Уегу Еесч оЕ йеяе ипргочегпепся Ьаче Ьееп сСеяспЬесС си йе Еоппа! яссеп66с 16егасиге, 5оте Ьаче Ьееп риЫ1яЬесс си сЬе Ьосье !оигпа1я оЕ сопипегсса1 сотрашея, счЬегеая осЬегя арреаг ш асЬегцяпц апсс сесЬшса! 16егасиге апсс ои ЪчеЬ рацея. Ноччечег, тапу оЕ сЬе яцшбсапс ипргочепсепь аге ягпр1у спсогрогасес1 си!о Ыыпагссесесс Ъу сопнпегсса! юррцегя, ТЬе ссиа11су апсс пшпЬег оЕ ргетассе сРсчА !сЬгапея ачас1аЫе Егопс сопспсегсса1 яоигсея Ьаче спсгеаяес1 цгеас1у ш сЬе рая Еечг уеагя.
!п асЫпюп, сиясот-тассе сРсчА 1сЬгапея сап Ье яупсЬеясгесс со огссег, юпсесипея ас а геаюпаЫе рисе. СопяесСиепс1у, Еесчег асяс!ею!с 1аЬогасопея посч пеесс со цепегасе йесг осчп сРЫА 1сЬгапея. ЕяаЫЬЫпц юсЬ а 1сЬгагу ь а 1еицсЬу ргосеяя гессисппц гпапу арест!гесс епхупсея апс1 геацепь, гпояс оЕ счЫсЬ пеесС со Ъе сея!ее! апс! орсипьед. ЬаЬогасопея йас пеесС со цепегасе сЬесг осчп сРСяЕА 1сЬгапея яЬои16 сЬегеЕоге сопяссСег сЬе асСчапсацея оЕ ияпц а сопстегсса1 Ыс. Епхутея, Ьибегя, геацепь, апсс си спапу саяея чессогя апН Ьояс сеця аге ргочЫей еасЬ оЕ йе ясеря ш сЬе ргососо1 Ьая Ьееп орсипсхей а сия!с сЬас пицЫ осЬегсчсяе гессисге яечега1 счеесся' счогсс Ьу ап асассетсс яссепссяс; сопсго1 тНЕЕАя апсс РИАя аге ойеп ргочЫей яогпе оЕ сЬе стргочетепь си сРсчА с1опшц аге ачас1аЫе оп!у ш Ыс Еопп; апсс 6иацу, а1сЬоицЬ Ыь аге ехрепяче, сЬе сгие соя оЕ цепегасшц а сРЬСА 1сЪгагу сЬе о16-ЕаяЬюпес! счау тау Ье Еаг цгеасег.
Сопипегсса! Ыь аге посч ачацаЫе ш юсЬ сштЬег апсС чапе!у ЕЕог а яатр1шц, р1еаяе яее ТаЫе 11-Ы сЬас ас 1еая опе оЕ йегп и Нссе1у со Нс сЬе пеесСя оЕ а рагцси!аг рго!есс. Ъчссегечег ромсЫе, сЬоояе а Ыс сопсашшц а чегяа6!е чессог, Сог ехатр!е, опе сЬас сопсасия сопсго! е1епсепь Еог ЬосЬ рго1сагуоцс апсс еи1сагуоцс ехргеыюп апд, ш сЬе саяе оЕ ЬассепорЬаце Ы ацоячя сЬе сР!я!А со Ье геясиесс ая а р1аяиЫ ог рЬацегпЫ. ССЪеп Еасед игссЬ а сЬоссе оЕ Ыь ргоссисесс Ьу сс1ЕЕегепс сотрашея,!посс ои сЬе СчеЬ со яее счЬссЬ согпрапу ргочксея Ъессег юррогс сЕ яопсесЫпц яЬои16 цо счгоиц апс1 сгу со оЬсаш а сору оЕ сЬе ргососо1 йас ассотрашея сЬе Ыс Егпапу оЕ сЬеяе аге ачас!аЫе оп сЬе ЪЧеЬЬ Неасс сЬе ргососо1 сЬогоицЫу со епюге йас сЬе 1пгНчЫиа1 ясеря гпассе яепяе апсс аге ссеяспЪесс апс! ехр1а!пес! сп яицбссепс ссесац.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
