Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 108
Текст из файла (страница 108)
Ее! пр а лепет оГ лпа1 ехрепгпепга со ор6пиае йе сгапа(есбоп апг) ехргеьяоп ауалепыльег! го асгееп йе ВЬгагу Гог сРМА с1опеа о( !пгегеал. ТЬ)ь га Ъеал г)опе Ьу пяпВ а ргечюца1у с1опес1 сРМА епсог)!пВ а Ью1оцка! асллчбу уог лчЫсЬ ге1!аЫе аааауа аге ача11аЫе. ! Е А ЕЕЛКАКЧОТ!С РЕА5М!О ЕХРКЕ55!ОМ ЧЕСТОК АМО СРЕТЕЛКЕ0 СЕЕЕ НО5Т АКЕ 05Е0 а. 1посп1аге а япа1е со!опу о1Е; соЕ ЬагЪог(пц а р!аяиЫ саггу)иВ йе сРМА паес1 аа а роя Ьлче сопсго1 )пго 10 ш! оупсЬ гпесбшп (е.В., Тегп6с ВголЬ сопла(шпа а ье1ес6че ап6Ълогк) лоцегЬег лч)гЬ 10, 100, 1000, 10,000, ог 100,000 со!оп!еь с1епчег1 Егош е!есггорога6оп оуЕ.
со6 ъч)гЬ ап еплргу чеслог. Сголч лЬе се!!а го аашгагюп ли ап очегшцЫ си1лиге шсиЬалег) лч!гЬ а61гал)оп а! 37'С. Ь. Рае а сопппегс(а! )с!! го ргераге р1аяпЫ РМА оу а ршпу ап(6лс!еп! Гог ейк(еп! ггапя уесбоп оу сп1гигег) шапппа11ап се!!а (р1еаье аее ТаЫе 1-6 ш СЬарлег 1, Ргососо! 9). с. 1Ле опе ог пюге оГ лЬе шегЬогЬ с1еьспЬед ш СЬаргег 16 го !тапа(ес! гЬе чагюиа р1аяпЫ ргерагабопь )пго си!лигеа оГ еи1сагуойс се!!а апг) аааау уог йе Ыо1оВ(са! аслпбгу епсог)- ес1 Ъу гЬе роя!же сои!го! сРМА.
ЪЧЬео асгееп!п5 гЬе сРМА !!Ьгагу, оье йе !таил(есг!оп илегЬол! йаг Вепегалел лЬе шах!тошп л!Воа! аил! ао ассергаЫу 1олч !ече1 о! ЬасЕЕтооий !Е А ВАСТЕК!ОРНАСЕ КМА РОЕЧА4ЕКА5Е (Е.Со ТЗ, Т7, ОК 5Р6) !5 ЕЛ5Е0 ТО ТКАМ5СК!ВЕ СОМА5 ЕКОМ А РЕА5М!О ЕХРКЕ55!ОМ ЧЕСТОК ГОЕЕОЧЧЕ0 ВУ ХемОРЕт5 ООСЧте !ЬЦЕСТЮМ а. Ео1!олч Мерь а апд Ь аЬоче. Ь. Ыпеапае йе роо1ел), рп66е6 р!аяпЫ РМАь ас лЬе гаге геагг(сг!оп ыле р1асег) ас гЬе 3' епс1 о(лЬе сРМАа с(иг!па 1!Ьгагу сопьггисбоп, апг( лгапьспЬе лЬе сешр!а!аз !и лбгго !иго шКМА (р1еаье атее СЬарлег 9, Ргогосо! 6).
с. 1п)ес! лЬе шКМА ргерагег) угош лЬе роо!ег( сРМАь ли!о Хепорил оосугеа апг( аааау гЬе арргорпасе Ыо!оВ!са! аслпбгу ог ггапьуесл гЬе шВМА !ило лЬе арргорпале се11 11пе. ! Г А ВАСТЕК!ОРНАСЕ )с ЧЕСТОк СОмТА!м!мО ВАСТЕК!ОРНАСЕ-ЕмСООЕ0 КМА РО$УМЕКА5Е РКОМОТЕК5 ЪЧА5 СНО5ЕМ А5 АМ ЕХРКЕ55!ОМ ЧЕСТОК а. Сепегаге а ае! о( Ъасгег!орЬаае апарепяопа сопла!шпк гИЕегеп! га6оа (10:1, 100:1, !000:1, еле.) оу аи еплргу ЪасгепорЬаце Х чесгог го а гесоплЬлиапл ЬасгепорЬаце Х ЬагЪоппд йе сопгго1 сРМА.
!инесс ап арргорпаге а!га)п оГЕ. со6 чч(гЬ а пш!6р1кбу о(ЪаслегюрЬаВе раг6с1еа лЬа! у(е1сЬ пеаг-сопйиеп! 1уа!а о(Ьассепа1 1аччпа ог согпр1еге 1уыа о( (пГесгед себа цгоччп ш 1щи)д сп1лпге (р1еаае атее СЬаргег 2, Ргогосо! ! ог 5). Ь. Ргераге Ъасгег!орЬаае Х РМА Егош йе р1алеь (р!еаье аее СЬаргег 2, Ргососо! 23) ог 6опл лЬе 11г)иЫ со1лигеа (р!еаье аее СЬарсег 2, Рголосо! 24). с. 1апеапге гЬе Ьаслег(орЬаае Х РМА аг йе гаге геагпсгюп яге р1асед а! гЬе 3' епг( оу гЬе сРМАа гвалт!иа !лЬгагу сопвггисгюп, апд ггапаспЬе гЬе сРМАа !ило шКМА аа <1еьспЪед ш СЬаргег 9, Ргососо! 6.
д. !и)ес! гЬе ргерагед шКМА ппо Хепорил оосугея апс1 аааау гЬе шКМАь уог гЬе)г аЬл16у со епсос1е гЬе Ъю1оЕВса1 асл)ч!лу о( гЬе сРМА паег) аь а роя6че сопгго1. Ртгосо1 2: 5!ар. 2: 5сгееи)ид сЕ|МА Г.ГЬгаг)ел Соилггисгес) Ги Еи)сагуо|Гс ЕхргеяГои Чесгоь 11.77 2. 13япд |Ье гехи)га оЪ|а)пес1 1п 51ер 1 аа а гоиВЬ ВиЫе, |3|ч1йе !Ье с!)МА!|Ьгагу т|о роо15 оЕ а хи1!аЫе х)хе Еог хсгееп)п8, апс) ггапаЕогт ог лгапхЕесг Е. сой |чиЬ йе ехргеаяоп!|Ъгагу роо1я Ргераге р!ахпл)с1 ог ЪасгегюрЬа8е Х ЕлМА |Ьа! чч1!! Ъе илес) !о хсгееп |Ье роо!а Еог |Ье ргехепсе оЕ йе |аг8е| с)3МА. !Г ТНЕ ЕХРКЕ5ЯОМ ПВКАКЧ!5 СОМВТКОСТЕО 1М А РЕАВМ!О ЧЕСТОК АМЮ РООЕ5 АКЕ СКОЧЧМ ОМ 5ОЕ!О МЕО!13М а.
ЪЧ11Ьс)гачч а ялЕйс|еп| пшпЪег оЕ а1нрюгх !е.8., 50 — 100 а!н)иоь, еасЬ сараЫе оЕ Вепегагт8 -1000 гесотЪ)пап!а) Егот |Ье 118а!юп пих|ше (5ла8е 1, 5гер 8), ап|1 Епггос!исе еасЬ а1нрло| ГпйчЫиа11у т|о Е. сой Ьу е!ес|горогайоп. Р!а|е |Ье епйге сопгепь оЕ еасЬ е!ессгорога|юп сичеие оп|о а яп81е йхЬ оЕ Тегпйс айаг гпейшп сопла|тп8 |Ье арргорп'- а|е апйЬю|к. 1псиЪа|е йе р!а|ее очегтВЬл а| 37'С. ТЬе Воа1 Ь Гог йе пшпЬег оГ со1оп|ел оп еасЬ р1а|е |о ес!па! йе деягед роо! яхе. Гог еха|пр1е, 1Г йе роо! яхе го Ье асгеепес) Ь 50,000 со!ошея йеп епопВЬ 1!Вал!оп ппх аЬоп18 Ье е1есигорогаселл |о рго|лпсе 1000 со!оплел оп еасЬ оГ |Ье 50 р1а|еа. Сп!шге и|ау Ье 5го|чп Ьеуоге р!а|1п5 аа |леасг!Ьес! |п 5|ер Ь Гог 8|ош|Ь ш 110пЫ гпейшп. Ь. Ехг)таге йе пшпЬег оЕсо1оп)ех оп еасЬ р!асе. 5сгаре |Ье со!оп)еа йот еасЬ р1аге 1псо 5 гп1 оЕ псЬ лпейшп (е.8., Тегпйс Ьгой сопса!0108 а хе!ес!аЫе апйЬюйс), бгочч |Ье Ьас|епа1 яьрепяопх |о аашгайоп, апс) |Ьеп ргераге риг)Елее! р!аяпЫ ТлМА Еог асгееп!08.
!Г ТНЕ ЕХРКЕ5ЯОМ ОВВАЙ 15 СОМ5ТК!ЛСТЕ0 !М А Р!А5М!О ЧЕСТОК АМГЛ РООЬ5 Аке скОччм Гм е!ГТ|л!Гл меО!|лм ТЬе а|Ьап!айех оЕ |Ьь ргосес1ше аге |Ьаг !Ье р1айп8 алер 15 от!!!ее!, гЬих аач)п8 липе апс! е!Тог|, апс! |Ьеге Ь 1еха сЬапсе |Ьа| апу 1пйчЫиа1 с))МА лч111 Ье 1оя Ъесаиае оЕ роог Вгочч|Ь оп а8аг, ог Ьесаихе оЕ гпесЬапка1 с!агпа8е.
а. ЧЧ11Ьс!гале а хийк)епг пшпЪег оЕ а!1|!иогх (е.8., 50 — 100 а!1с)иогя еасЬ сараЫе оЕ Вепегас1п8 -1000 гесотЪ|папь) !гот |Ье 118агюп пих! ше (5гаВе 1, 5гер 8), ап|1 1пггос!исе |Ьеп| тйчЫиа11у |псо херагале си!тгеа оЕ Е. сей Ьу е1ес|горога|юп. ТЬе пшпЪег оЕ лгапхЕогтапа хЬои10 есрла1 йе с)еягес! роо! ыхе 1п еасЬ си!|иге.
Ь. А|Ы 1 т1 оЕ псЬ гпейшп (е.8., 5ОС ог Тегпйс Ьго|Ь) |чЬЬои! апйЪ|ойса го еасЬ Ьас|еПа1 сийиге )пипейа!е1у айег е!ес|горога|юп. 1псиЬа|е |Ье си!|иге Еог 1 Ьоиг а| 37"С шйЬ чегу Веп|1е а81|аг)оп. ТЬе аЬогг рег!о|! оГ |пспЬа|юп а11олча |Ье р1аяп1йепсо|)е|Г апВЬюйс геяа|апсе Вепе |о Ье ехргеааес! |о а 1ече! |Ьа| |ч111 рго|ес| |Ье ггапауогше|Г Ьас|епа. с. с)ае ап а1н!ио! оЕ еасЬ Ъас|епа! си1|иге |о 1поси1асе херагаге 5-т1 сийшея Айег Вгоъч- т8 |Ье Ьасгейа! си1гигеа Со аа!ига|юп, ргераге рипйес! р!аяпЫ РМА Гог хсгееп)п8.
!Г ТНЕ ЕХРКЕ55!ОМ Е!ВКАКУ!5 СОМ5ТКЛЛСТЕ0 !М А ВАСТЕК!ОРНАСЕ )с ЧЕСТОК АМГЛ РООЕ5 АКЕ ТО СОМТА!М 10,000 ТО 100,000 СОМА5 а. Р1а|е ап арргорпа|е чо!шпе оЕ расЬа8!08 пих|ше го ргос)исе а аеткопйиеп! 1а|чп оЕ гесотЪ|пап| Ьас|епорЬайе р!ас)иея А!гегпал)че!у, иле а ялйк)еп| атоипг оЕ рас)са8108 пих|ше |о оЬ|а)п сотр1еге!уаЬ оЕ Е. сой се!15 Вголчп 1п!н!ш|1 сийиге. Ь. 1|ю1а|е Ьас|епорЬайе Х РМА Ьу а р!а|е 1уых ргосейие ог а!1с)и)с1 си1|ше ргосе|1иге (р1еахе хее СЬар|ег 2, Рго|осо1 23 ог 24).
11.78 СЬартет 11т Ртератат(оп о! се!А Е!Ьтат(ех апт( бепе Едептт(гсат(ои 1Е ТНЕ ЕХРКЕ55!ОЫ ИВКАКЧ !5 СОЫ5ТКРСТЕР !Ы А ВАСТЕК!ОРНАСЕ А ЧЕСТОК АЫР РООЬ5 Аке тО сОытА!ь! 10,000 Ок ееъчек сРьтА5 а. Р1ате гесошЪгпапт ЬастепорЬаВея ет)иа1 (п пцтпЬег то тЬе роо1 яге, ат а депяту оЕ 1000 рЕц рет 100-пцп д(хЬ. Ь. чттЬеп р1ас)це Еоппадоп 15 сошр1ете, очесу еасЬ д(хЬ чч(ЕЬ 2-3 тп1 оЕ 5М то ртодцсе а !ою-мет р1ате 1ухасе. Са1си1ате тЬе 6тег оЕ ЕЬе 1ухате.
с. Ргош тЬе 1отч-т(тег р1ате 1ухате, ршс1цсе а Ь!КЬ-т!тег ьтос)с ш 1н!шд сц1тиге. д. РцпууЪастепорЬаае Х РЬЕА Ьу а 1н!цЫ сц1тцге ргоседцге (р!еахе хее СЬарЕег 2, Рготосо1 24). 3. ТгапхЕег йе рцпйед с1опе што йе арргорпате Ьас)сагоцпд со апа1уге Еог ехртехяоп: 11 йе с(оие Ь ритфед р!аятЫ РЬЕАЕ Е!ЕЬег тгапхЕесс !и!о сц1тцгед пгапцпа!тап се1!х ог цхе ах а сетпр1ате Еог ш чгтто хупйеяа оЕ К)ч(А Ьу а ЬасгегюрЬаВе-епсодед КЬ)А ро!ушегахе, Ео1- 1ои ед Ьу ш!есдоп што Хеиорих оосутея 1Е" йе с!опе и ртгтт)тей Ьастет(орБа5е Х РМА: Ь)пеаг(ге тЬе РЬ)А апд цхе ах а тешр!ате Еог ш чКго ьуптЬеях оЕ К)х(А, Ео!1оччед Ьу (п)ест!оп (пто Хепорит оосутех. Л гуртса! тгапьЕесдоп ехрепшепт иа!п5 50 — 100 йтЬет оЕ си1тигед гпагпша1!ап се1!ь регш!гт 50,000 — 100,000 сР!чА с!опек (Егопт роо1т сиота!пЕп5 1000 с!опта еасЬ) го Ье ьсгееоет( Еог йетг аЪт!Ьу со ехргеаь ЕЬе т!еягед Ью!05!са! асгМту А тургса! Хеиорит ехрепшепт шчо! чеъ !о!есгюп оЕ шК!чАь сгапьсг!Ьед Етого еасЬ роо! о! р!аяпЫ РЫА того Вче Хеиорит оосутея рог роо1ь соогаш!п5! 000 с!опт еасЬ, 250-500 оосутеь аге йегеЕоте геошгетЕ то ьсгееп 50,000 — !00,000 сРЕ4Ак Еог Ь!о!05!са! асдчтту.
4. Аааау Еог йе Ъ!01оа!са! аст(ч!ту епсодед Ъу тЬе тагает сРЬ(А. 5. АЕтег а роядче роо!(ь) оЕ сРЬ(Ах Ьах Ьееп Ыепдйес1, хцЬд(чЫе апд гехсгееп и !п ап иега- дче ЕахЬюп цпт(! а х!па1е сР)х(А епсод(пВ йе тагает аст(ч(ту Ьах Ьееп Ыеп66ег1. Саггу оит тЬ(а Воа!, ччЬ(сЬ !а тпоя еая!у ассотпр!15Ьед цх(пВ йе ргерагатюп оЕ рцпйес1 р!аяпЫ ог ЬастегюрЬаае Х Р)ч(А соггеьропд!па то ЕЬе роядче роо1(х) оЕ гесошЪтпаптя ах Ео!1огчя а. Рп Ые йе рояле (рпшагу) роо1 оЕ р!аяпЫ ог ЬастепорЬаВе Х Р)ч)А што а1н)иота йас Вепегате арргох(шаЕе1у опе тепй оЕ ЕЬе опВ!па! пшпЪег оЕ сгапхуоппед со1ошех от р1аг)цея А рптпагу роо! сои!а!и!п5 а тота1 оЕ 10,000 тийчЫиа! гесотоЬтпапт РЬЕАь а!юи!д Ье йчЫ- ед шго -30 а!!оиотя еасЬ оЕ тчЬ!сЬ Еепегатеь -1000 со1опЕеь ог р!а0иея Ь. Кереат 5терх 3 апд 4 аЬоче.
1пс!цде йе опа!па! роядче роо! аа а рояле сопсго! !п йе геьсгееп(па аххау. с. Кереат ЕЬе ргосеах оЕ аиЬйляоп ип6! а х!031е гесотпЬтпапт !а оЪтгдпес1 ЕЬат епсос1ех ЕЬе деягед аст(ч(ту. Ма)те ацге йат оп!у яп31е чче!1-1501асед р1ат)цех ог Ьассегга1 со!ошех ате цхед то ргераге ЬастепорЬаае ог р1аяпЫ Р)ч(А Еог тЬе 011(шаге асгееп. 6. СЬагассепге тЬе япВ(е 1501ате тЬат епсодеа йе татре! асдчКу Ьу РЬ)А аес(цепс(пВ (СЬартег 12), ехргехяоп (СЬартег 15 ог СЬартег 16), апд К)х(А Ыогт!пд (СЬартег 7).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
