Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 104
Текст из файла (страница 104)
5|иге 1пе ипиясх) Роиюп о1 йе с0ХА а1 -20С. Ве лиге 1о |псю|)е а соп|го| 65агюп геасгюп их)п5 а ге»1 )паеи |о ||е|епп|пе Фе 6|уиоп апг) |гаги(оггпа1юп ейю)епОР5. 2. Тгапа(оггп ап арргорпа(е 61га!п о1 соп»ре(еп1 Е. со5 Ьас(епа иа!пц опе о1 1Ье (гапа(оггпа1!оп п|е(Ьо|Ь с(експЬег( |и СЬар1ег 7. 3. Айег ап очаги)ф1 !псиЬа1юп а1 ЗTС, соип1 йе пигпЬег о( ап1!Ыо()с-геа|а(ап1 со|огиев 05аПоп А 6Ьои1|1 у|еЫ (еъч| К апу со)оп!еа, ъчЬегеаа 1|еа1юпа В, С, апс| 0 аЬоиИ у|еЫ |псгеаа)пц питЬегз о( со)оп)ея сои(а!п!пц гесогпЫпап( р)аагпИ гпо|еси!ев 4.
Ггогп йе питЬег о1 со!оп|еь са|сЫа(е йе ейк|епсу о1 с(оп!пд о( с0ХА (со|опу4оггп|пд ип|ь [с(и))па СОХА). К а|! Ьаа еопе ъче!1, 1Ье е0|с(епсу 6ЬоиИ Ье а( (еаа1 2 х 10 с(ъъгпК с0ХА. ТЬе го1а| у|еЫ о| гесогпЫпап(а (гогп 5 РВ о1 ро!у(А) ъ КХА аЬои!с1 Ье |п ехсе|ь о( 5 х 7 0~. 5. Рк1с 72 со|оп|ею егаи арпа(1-аса)е си!Ьлгев ап|1 ргераге 0ХА гог г(|цех(!оп сМ(Ь 1Ье арргорпа(е геа(г!сПоп епаугпе |ь с(експЬес) |и СЬар(ег 7, Рго1осо! 7. 6.
Апа)ухе 1Ье а|хе о( 1Ье с0ХА !паегЬ Ьу е)ес(горЬогеа|а 1ЬгоиаЬ а 7% аугоае це(, иа)пе аа гпагЕега Егацгпеиь о| 0ХА 500 Ьр (о 5 )|Ь |и !ей(Ь (ъчЬейег р)аагпИ ог Ьас(ег!орЬаае ) ). К 1Ье гесогпЬ|пап1 чес|ог аппо)еси!ея (ъчЬе(Ьег р1|ьгпк! ог ЬаггепорЬаде )4 сои)а|и )паапа о( с)|бегеп( а|кех апг( К 1Ье ачегаее а|ге о( йе !пкеиа 'ь — 7 И» ог цгиа(ег, К 'ь ъчог|Ьи4и!е ргосеес(!пд (о 1Ье цепега(|оп о( а согпр|е(е с0ХА!|Ьгагу К 1Ье ачегаВе а|хе о( 1Ье )паеиа ь а!Кп|5сап1)у!е|ь йап 7 1|Ь йеп йе с(иа(|(у о( 1Ье !!Ьгагу 'ь по( аа ЫВЬ аз |1 соиИ Ье. Со Ьас|| апг( геапа(уке 1Ье с(иа(|(у о1 1Ье агагВпд |пКХА ап|1 йе СОХА геасй|опа, рау|пд арес)а) аиепиоп 1о 1Ье ргесаиПопа по(ег! |п 5(а5е 7, 5(ер 6 апг( 1Ье рапе! оп ОРТ|М12ПЧС Г|К5Т 5ТКА!Ч0 с0ХА 5УМТНЕ5!5) 5(аее 2, 51ер 8 апс| йе рапе! оп ОРТ1М12!ХС 5ЕСО!Ч0-5ТКАХ0 1ЧТНЕ5!5) ап|| П|е !п1гог(и| Поп 1о 5(аде 5. Гог асЫ)1юпа) аъа|а(апсе оп ниргочпд йе с!иа||1у о( йе аае аее 1Ье рапе! оп ТКОНВЕЕ5НООТПЧС оп 1Ье ЕоПоиапд раде.
|а| !|Ва1!оп геа| Попа ъч)11 о((еп у|е!|1 аи(Г|с!еи( гесогпЬ|пап1 гпо)еси)еа (>70' с(и) 1о Ьее!п асгееп- СОХА о1 !п(егеа(, То цепега(е а сотр!е(е 1|Ьгагу Когп 1Ье а|хе (гас(!опа1ес( СОХА, асИШопа| !!уопа еЬоиЫ Ье ае1 ир Ьааес( оп йе гехи)16 о(йе (па! !|Па(!опа апг! аи|ьесулепПу рас(гаеег( ог сьег| т Е, соК ТЬе атоии( о( с0ХА гес(и! гег) с(е реп с(а )п рап оп (Ье еа((тагес( аЬи ос(апсе о( 1Ье г(еа! гег( ъч| 1Ье!|Ьгагу чМ!! Ье иаег) |и йе Миге, апс( 1Ье |аЬога1огу Ьифе1. А рптагу 1|Ьгагу о( >70" с)опея 1|1 ечеп гаге с0ХА". 1( йе 1|Ьгагу ь (о Ье асгеепес( аечега) Пгпеа, 1Ьеп |ь п»апу |ь 70' гесогпЫЬе гег(и|гас(.
Ноъчечег, чес(ога апс( рас(гаВ!пц геас(|опа аге ехрепа|че, апс( К сап сох( п»апу (Ьоио||аь (о Пу(е апс( рас(гау ечегу паиоегат о1 СОХА. 5исЬ гвта аге сьиа1|у ои1 о( йе тасЬ о1 а|! Ьеа( (аЬога(опеа. 11.64 Сйаргег 11: Ргерагагюои о| СОХА Еюйгагюею аию( Сеие ИеигюрсаНои ТКООВЕЕВНООТ|МС 5ечега| ргоЫета ге|а(ею3 (о юЬе агИ(юп о1 йи|юег-аю|ар(ога (о с0МА епюЬ гпау Ьесогпе ечю|еп1 (ойоъч(пд геа(г|с(|оп апа|уа|а о( (Ье гесопъЫпап( Ьас|егюрЬаде 2 ог р|йьпзк| 0МА. | ° ТЬе СОХА юпюгЬ сои(а(п тоге 44|ею 1ог Мо($, 5а$1, ог Есод( ГЬап ехресгеюЕ |и гпагпгпаИаи 0МА, Ход я(ех ассиг, оп ачегаде, опсе |и 1000 |сЬ; 5л$! Нюеа аге аерага(ес$ Ьу ап ачегаде о1 100 (ъЬ, апю3 Есод| Н1еа аге юрага(ею3 Ьу ап ачегаде о1 4 |сЬ.
К юЬеяе я1еа ассиг гпоге йею|иепйу |Кап ехрес(ею$ (е.д., И ечегу СОМА сагпеа ап юп(егпа| Ход а((е$, ю( Ь Нсе|у |Вас юапс|егп аггаук ою' с0МА гпо(еси(еа Ьаче Ьееп с|опес1 юп(о (Ье чес(ог. ТЫа ргоЫегп сап Ье ачо|с|ею3 Ьу с|есгеюь(пд (Ье га(ю о1 |паегЬ (о чес|ог гпо(еси(ея юп |Ье йдайоп т|х(игеа о1 5(ер 1. ° Т(юе Егею(иепсу ау Есой! хю(еым(уююи юйе СОХА юпяегЬ юх < 1 хю(е рег 4 3юЬ. ТЫ а ргоЫегп аг|аея ъчЬеп гпе(Ьу|а(юп о1 Есод| а((еа чю|(Ып 1Ье ю|оиЫе-аюгапю|ею$ с0МА Ь по( сотр|е(е. 1и (Ьь сазе, И Ь июайу песегьагу юо сЬес|ю (Ье гпе|Ьу|айоп геас|юп |и а аепез о( рйос геас($апа апс| идеи (о гереа( (Ье гпе(Ьу|айоп спер иНпд а 1геаЬ Ьа(сЬ о1 с0МА.
° Хо СОХА юпхегЬ сап Ье екающею( Егот юйе чес(ог Ьу юТюдех(юоп и $$$ю 16е арргоргюаюе гехюгюсююоп епхуте. ТЫъ ргоЫепь ь а(гпоа( а|ъчаух саихес$ Ьу |пейсюепсу юп ас|с$(пд асуп(Ьейс йпйега ог ас|ар(оь (о (Ье епсь а( гЬе с|оиЫе-е(гапс(ес$ СОМА. Ке-ггеа( |Ье епс|х о1 (Ье ю|оиЫе-а(гапю|ею3 СОМА чю((Ь Ьас(егюрЬаде Т4 0МА ро(угпегахе (5(аде 4, 5(ера 2 апс! 3$, апю3 гереа( (Ье |агде-еса!е Идайоп геасйоп чю((Ь а т|х(иге о1 ип|аЬе|ею|, рЬоарЬогу|а1ею3 йп|юега апг1 ллР-|аЬе|ею$ йп(сеь, Апа(ухе ап а|к|ио( о1 (Ье геас(|оп Ьу ро$уасгу|апюк1е де| е$ес|горЬогеяа (о сЬес(ю (Ьа( (Ье гас!|о(аЬе|ею3 йп$юега Ьаче 1оггпею| а аепеа о1 йдайоп ргою|ись (Ьа1 ехЫЫ( а !аю|ю|ег-(йсе ю(|аюг(Ьи(|оп. Еюпайу, с0МА (паегь (Ьаю саппо( Ье ехавшею| Ьу с$(деайоп ъи(Ь (Ье арргорпа1е геа(пс((оп епхугие саи о((еп Ье гесочегею! Ьу юйдеяйпд (Ье гесогиЬ|паи( чес(ог 0МА чч(Ь геаюпс(|оп епхугпеа | да( с|еаче (Ье чес|ог аесйлепсеа пеаг гйе а|(е аю ъч ъ3сЬ Июе с0МА Ь (паег(ес3.
Гог ехаюпр|е, Нюпг|И| апс$ ВВЛ| с|еаче ои е||Ьег е|с|е о1 |Ье а|пд|е Есод| а((е иаею3 1ог с|опюпд |п 7 д(10, депегайпд а 0МА 1гадпюепю — 1 $юЬ юп |епд(Ь. ТЬе Нге о1 СОМА (паегЫи ри(а((че ИВ|10 гесопюЫпапь сап Ье еИгпа1ею| 1гогп сЬапдеа |и 1Ье гпоЬ~И(у а| (Ьь (гадтеп( апс$ Иле арреагапсе о1 паче! 0МА 1гадтеп(к А|(егпа(ве|у, с0МА |пеегь саи Ье ю$|гес((у агпрййес| ча РСК 1гогп Ьас|ег|орЬаде л. р|аю|иеа ог апйЬюйс-геяа(ап( со(оп|ее (р(еаю аее СЬарюег В, Рго1осо|12$. АООШОМАЕ РКОТОСОЫ АМРЕ|Е|САТ|ОМ ОЕ СОМА Е|ВКАК1Е5 'чче а(саид(у гесотгпепс$ (Ьа( рппъагу ИЬгаг|еа Ье иъею3 1ог пкь1 с0МА асгееп(пд ригрсьек А|йюоидЬ атрййса(юп о1 а рппюагу ИЬгагу сап ргочс|е а пеаг йт|((еюь юигсе о1 СОМА с!опт (о есгееп, ечеп а а(пд(е гоипю$ о1 агпрййса(юп ю3|а(огыйе гергеаеп(айоп о1 гпКМАа гп а с0МА ИЬгагу.
Ночечег, аплрИсайоп Ь сег|а|п|у (Ье Ьсь( ор(юп ъчЬеп (Ье агпоип| о( а двеп ИЬгагу Ьед(па Со сйч(пг$$е. АпърИса(юп юпчо|чеа р|айпд (Ье рпгпагу ИЬгагу |и |ь епбге(у оп адаг р|а1еа агк3 Июеп ргераппд а (уъаюе 1гопю (Ье ю3|аЬек ТЬе (уаа1е Ь (Ьегеа($ег ихес$ аъ а юигсе о( гесогпЫпап( Ьасюег(орЬадеа 1ог ясгеевпд ч(йь гвс|ек аск|В апйЬос$|еь ог оюЬег йдапю|к А|йъоидЬ аплрййсайоп Ь а Нгпр|е ргасею|иге, р|айпд апю| дгачаЬ |пчапаЫу гею|исе |де согпр|ехйу о1 |Ье |юЬгагу, юе., (Ье пигпЬег о1 |пс1ерепю|еп( СОМА с|пиеа (п (Ье сойесбоп. ТЬь (огь геаи|ь 1гопь р|айпд |пе1йс|епсу, роог дгоч|Ь о1 юте гесотЬ!папЬ, апс$(аъ(ег дгочаЬ о1 попгесагпЫпапс чиль А доою$ ехагпр|е о( (Ьь рЬепопъепоп ь (Ье ге|аюве аЬИИу о1 ю$|((егеп( (пчеаю(да(ога юо Ьо|аюе а СОМА (ог (Ье|г 1ачопюе депе 1гогп а согпгпеюс(айу ачайаЫе ИЬгагу.
О3(еп, опе (пчеа(|да(аг сап йпс$ тапу с|опек 1ог опе депе |п а д|чеп ИЬгагу, чюЬегеаа а сойеадие с|е1есЬ по $ю(а(ев (ог апойъег ею|иа($у аЬипю3ап( пъКМА оп |Ье аагпе 9(еь. Согпгпегс|а! 3|Ьгаг|еа аге |пчапаЫу агпрййюею$, ип|еюь (Ьеу Ьаче Ьееп сиа(отьуп(Ьеа(хес$, апс| Июеу гдеге1оге Ьаче а Ыааес| гергеаеп(айпи о1 (Ье а(аи(пд гпКМА рори|а(юп. Аа по(ес$ ееъега! 13гпеюН и |В ь рго1осо$, и ее рп гп агу ИЬгапкь чюЬепечег рось! Ые. Ноч ечег, И (Ье пеею3 апь еь опе о1 (Ье Ьчо |Ы|оъчпд те(Ьою|а сап Ье иаею3 1о агар!!(у пюа( Ьас(ег(орЬаде-$;Ьаяес| с0МА ИЬгапек МЕТНОО 1: Атр|31|са1|оп о1 Е|ЬгаПеа Саик(гис1ею3 1и )д110 То еаюаЬ||аЬ а регпюаиеп1 юрр|у а| (Ье ИЬгагу, |1 аЬои!с$ Ье агпрййюею3 Ьу дгомаЬ оп Е. со/ю е(га(п ВММ102 оп адаг р|аюек ТЬе ВММ102 а(га|п соп(а(па ап ЬПА пвюа(|оп |Ьаю ае(есЬ адьпя( попгесопъЫпап( Ьасхег(арЬадеа (р(еаъе еее 1Ье рапе! оп Р$АТ|МС ВАСТЕК|ОРНАСЕ Е ОМ Е.
СОН 5ТКА1М5 !|и|де гпа|п рго1ско! о1 5ьде 0$ апс$ сопъгпеп(юНп (Ье рго(оса| юп(гос3ис|юп|. Ргогосо/ 1: Вгаее б| Е(еаг(оп и/г сРИА го Вас!ее/орйаее Х Агтг 11.65 Адд!1|опа! Ма(ее|а|а САС/ТЗОЫ: Рlеазе зее Аррепдзх 12 !ог арргорпазе Ьапд|(пс о( гпазепап зпаг|гед ъчПЬ <|>. СЫого!оггп <! > Р/тегйу/аи!йх/сне < ! > А/2СУМ аВаг р/а1еа апд гор аВагоае ! 5гзгча!/ 55-34 го1ог ог ес/и!ча/епг Ме1Ьод 1. Еог апърИса(юп, асЫ 10з Ьас(ег(орйаВеа ог 200 р! о! 1Ье рас|гаВ(пц гиодиге (ъчЬ(сйечег ь (Ье ыиаПег чо(- ипъе) 1о 300 и! о! р|а6пВ Ьас(епа о! а1га(п ВЫЫ102 (!ог те1Ьода, р|егье аее СЬар(ег 2, Рго1осо! 1).
|псиЬа1е ВЬе |п!ессес! си31иге !ог 20 иди изеа а| 3 TС, тЬеп р|а1е 1Ье епб ге си|(иге |и 1ор аугоае оп а 150- гиги Ре1п д(аЬ соп1а(п(пц ЫХСУМ ауг, апс$ зпсиЬа(е 1Ье р|а(е !ог  — 1 0 Ьоига а( 3TС. |п зогпе савей гйе изе о! (агВе чо(игпез о! РасйаП(пП гп|хвге |еасЬ |о а гедисгюп |и р|аипП е/Сзс(епсу. ТЫз |пЫЫ|юп сап Ье сЬес|гес$ Ье|оге агпрИсагюп Ьу а гесопззпзсг(оп ехрепгпепг |п ъчЬкЬ хпоъчп пигпйегз о( Ьас|егюРЬаВе )В|10 (е.В., 1000 рйз) аге пъ/хед чд||ппсгеаяпП агпоип|з о! Рас)саВ(пВ пах|иге апд р(азад оп Е.
со/г' ззга)пз С600 апс| ВЫЫ102. Пъе созз о! зисЬ ап ехрепгпеп| сап цикьу Ьесогпе ргоЫЬШче П согпгпегс|а$ рас(съП(пц ехггась аге изес|. 2. Очег!ау зйе р(а(еа ъч|(Ь 15 пз! о! 5М. 51оге 1Ье р!а1еа !ог 2 Ьоига а1 пюпь (етрега(иге ог очегп(ВЬ( а1 4'С. 3. Нагчеаз 1 Ье 5М сагейлйу, аид геп|оче сеПи|аг деЬгь Ьу сеп(пйзВабоп ас 7000а (7700 гргп !и а 5огчаП 55- 34 гозог) !ог ЗО гпив(еа ас 4"С. 1Ъе с(ТЫА ПЬгагу ъчП! Ье азаЫе йг аечега! гпопйь ъчгЬеп азогед аз 4чС |и агпаП (1-п|3) а)|с|оп(а /и 1/ВЛ()у с!паосе(иЬеп еасЬ о! ъчЫсЬ сопсдпа 20-30 р$ о! сЫого!оггп. Гог |опВег-сепо иогаце, асЫ д|тедъу(аи!!ох(де (о а Ппа! сопсеп1га(юп ог' 7К(ч/ч) апд асоге а(|с|по(а а( -70'С. 4. Меаъиге Пъе1пег оНЬе ПЬгагу оп Е.
со/! азга(па С600 апс$ ВЫЫ102 (р)еаае аее СЬар1ег 2, Рго1осо! 1). ТЬе йег ог с3еаг р(аз|иеа оп азга(п СЬОО айпи)д Ье 10'е 1о 10" реп! апс$ !Ье гайо о! с|еаг зо (игЬк| р!аг|иеа 5Ьои!д Ье >20:1. |п апу атр()йса1(оп, Меер зп пъзпд гйа1 |Ье яке ог согпр|ехйу о( гйе ПЬгагу Ь с$е|егпхпед Ьу |Ье гвгпЬег о! |пдерепдепг гесогпЫпап1 р(ас(иез гйа1 аге агпрИед. Еог ехагпр|е, П зеп р(азез, еасЬ сопсъ(п(пп 100,000 р)аз|поз, аге изо) !ог агпр|зйсапоп, зйе гезийпп сзТНА пьгагу сап ьаче по пюге |ьап 1,000,000 гпепъьегз.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
