Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 102
Текст из файла (страница 102)
Мошсог сЬе ргоагея оу йе сРХА сЬгоиВЬ йе со1игпп исбпВ а Ьапс)-Ье16 пипипошсог. Веа!и ео11есг!пц 2-с)гор Вас6опа 1-60 р1) |и писго)иае СиЪеа ъчЬеп СЬе гагбоас6че сР)ь)А Ьаа 11.58 СЬаргег 11: Ргерага6оп о) сРХА ЕлЬтатгег апгЕ Егепе 1г)епгфсаггоп 10. 12. ггаче1ег! тгчо ЕЫгба ЕЬе 1еп81Ь оЕ тЬе со1шпп. Соп6пие со1!есбп8 Егастюпа ип61 а!! оЕ тЬе га61оасбч)ту Ьаа е!и!ее! Егош гЬе со!шпп.
Меааиге 1Ье га6!паст!ч!ту ш еасЬ Егас6оп Ъу Сегеп)соч соипбп8 (р!еаае аее Аррепб)х 8). Апа1ухе япа11 а11г!иота оЕ еасЬ Етасбоп Е-5 )г1) Ъу е1есггорЬогеяа ЕЬгои8Ь а 1% а8агоае Ве!, ияп8 аа гиаг)сета епд-1аЬе1ег1 Ьацгпепта оЕ Р)ч)А оЕ )споччп яхе (200 Ьр то 5 )гЬ). 5тоге гЬе геша)пбег оЕ 1Ье Егастюпа ат — 20'С ип6! ЕЬе аигога6!оцгарЬ оЕ ЕЬе а8агоае це1 са ача11аЫе. Сая ЕЬе ахагоае 8е! аа йш аа роаяЫе го ареег1 ир йе г1гу1и8 ргосея аг йе согир1егюи оЕ е1есггорЬогеяя ТЬе агиоииг оЕ гайоасичггу 1и йе ргерагагюи оЕ шаг)гег РтчАа аЬоиИ Ъе -0.3 игиеа йе агиооиг 1и гЬе реа)г Егасиаиа оЕ сРЬ1А.
АЕтег е1естгорЬогеяа, сгапаЕег гЬе Ве! го а ртесе оЕ ЮЬагтпап 3ММ рарег. Сочег ЕЬе 8е1 чч)гЬ 5агап эггар, апг1 г!гу и оп а сопипегс)а1 Ве1 6гуег. Неат ЕЬе Ве! то 50"С Еот 1Ье Егат 20-30 пипигеа оу дгу!п8 ап6 ЕЬеп тити оЕТ ЕЬе Ьеас. Соп6пие Игу!п8 йе Ве1 ипбег часишп Еог а ЕитЕЬег 1 — 2 Ьоигя Ехроае йе 66е6 8е! то Х-гау Ит ат — 70'С чбй ап тпгепяЕуш8 асгееп (р1еаче атее Аррепйх 9). ТЬе аигогас8охгарЬ аЬои!д гечеа1 а иге-ЕгасгюиагегЕ аигеаг оЕ гаг1юасг1ч1гу гч1ЕЬ сР14Аа 1и ЕЬе 5 — 7-ЕгЬ гаи8е ш еаг1у тгасиоиа Егоги йе со1огии аид рго8геаяче!у аига1!ег сРЬтАа 1и гшЪае0иеиг Егасиоиа, АсЫ 0.1 чо1шпе оЕ 3 М ао6!игп асетате !рН 5.2) ап6 2 чо1шпеа оЕ ейапо! го Егасгюпа сопга)п)п8 сР)ч)А тпо1еси!еа ЕЬаг аге >500 Ьр ш 1еп81Ь. АПоъч йе сР!ч)А то ргес!р)тате Еог ат 1еаат 15 ш)пи!ее ат 4"С.
Кесочет тЬе Р)ч)А Ъу септт)Еи8атюп аг тпахипшп арее6 Еот 15 пипи!ее аг 4'С ш а ш!сгоуи8е. Ве чету соиаегчаг1че ш ае!есии8 ЕЬеае Ггасгюиа. Кеяаг а!1 гешргагюи го шс1иВе 1гасиоиа ЕЬаг соига1и аиу ггасеа оЕ сР14Аа яиа!1ег гЬаи 500 Ьр; огЬепч1ае, йе!!Ьгагу ч611 соига1и а ргероиг1егаисе оЕ аЬогг с1оиеа. 13шгю1че 1Ье РЫА тп а тота1 чо!шпе оЕ 20 )г1 оЕ 10 тМ Тпа-С! !рН 7.6). Рететпипе гЬе апгоипт оЕ га6!паст)ч)ту ргеаеп1 тп а япа!1 а11г)иот, ап6 са!си1ате йе тота1 атпоипг оЕ срт ачат1аЫе тп тЬе ае1есге6 Егаст!опя Са1си!асе йе соса! г!иап61у оЕ сРЯА ача11- аЫе Еог 1т8агюп то ЬастегюрЬа8е Л аппа 1Еог са1си1абоп оЕ гесаб-атгапс1 сРЬ)А 6ата, р!еаае аее 51а8е 2, 51ер 8): сртп ача11аЫе х 2х )г8 аесоп6-атгап6 сР)ч)А ауптЬеа!хе6 сртп 1псогрогатед тито аесоп6 аггап6 = )г8 оЕ сРЫА ачат1аЫе Еог 1г8абоп 1ЕечегугЬги8 Ьаа 8оие гче11, 10 08 оуро1уЕА) КтчА аЬои!8 у1еЫ ас 1еааг 250-400 и8, аиг1 роягЫу аа игисЬ аа 3 р8, оЕ сРтчА гчЬоае яге Ь 1аг8ег ЕЬаи 500 Ьр ги 1еи81Ь.
Реп|ого! 1| 5гаее 6| Е18аг)оп оЕ сР)чА го Васгег|ор)|а8е ) Агтя 1!.59 СТАСЕ б: Йда6оп о1 СОМА 1о Вас$епорЬаде А Агтрк 1Е ечегу|Ь!п8 ир |о |Ь~я ро)п| Ьая ччог)сег! регЕес|1у, аП оЕ |Ье |еппш| ш йе ргерага|юп оЕ сР!х!А яЬои!д Ье е|!и!ррес! чч!|Ь соЬеыче |ептип! йа| сап Ье ПВагес! ейк)еп|1у |о а Ъас|епорЬа8е г. ог р!аыпЫ чес|ог.
1п ргасПсе, |Ье ы|иаПоп шау Ье Еаг Егош Ыеа1. !Е, Еог ехашр!е, |Ье Егауег! |епп1- ш оЕ |!оиЫе-яггап|!ег! сРЬ)А |чеге !пейк)епг)у роПяЬег! ог рЬоярЬогу!агег! г!иг!п8 5|а8е 2, йеу ччои1д пос саггу а 1|п1|ег ог аг!аргог апг! |чои!г! Ье ипаЫе |о ПВа|е еЕПс!еп|1у со йе чес|ог. ТЬе Ьея| ччау |о ея|ипасе йе сопсеп|гаПоп оЕ со|пресепс |егпигП ш |Ье сР!х)А !я |о саггу ои| рПос ПВ- аПопя ап|! еиЬег рас!са8!п8 геасПопя ог |гапя)оппа|юпя. 1п |Ьеяе геас|юпя, а сопя|ап| ап|оип| оЕ Ьас|епорЬа8е ). аппя ог 1шеаг!ге|1, г!ерЬоярЬогу!агег! р!аяп|!г!я аге ПВасеП |о чагу!п8 апюипгя оЕ сРЬ)А. ТЬе аип |я со яе|Пе оп ап агпоип| оЕ сР)х)А йас у)е16я а |папипаПап сР!х)А ПЬгагу оЕ геаяопаЫе я)хе.
Тог!ау, а ПЬгагу сопя!яг!пц оЕ 5 х 10Я гесошЬ!пап|я !я ге8агг!ег! ая Ьаге1у ассер|- аЫе; Ьесаияе оЕ |Ье Ь!8Ь г!иаП|у оЕ епгушея сиггеп|1у ачаПаЫе, ПЬга|Пея соп|а|п|п8 5 х 10' |о 5 х 10" !пг!ерепг!епг с!опея аге по|ч |чеП чч!|Ь!и йе геасЬ оЕ |Ье ачега8е |пчеяП8а|ог. ТЬе рПо| ПВа|юп геас|юпя аге сагеЕиПу аггап8е|! |о пип!ппге |Ье сЬапсе |Ьа| а ып81е гесошЪ|пап| Ъассег)орЬа8е ог р1аыпЫ |чП! соп|аш пюге йап опе сРЬ)А шо1еси1е. АчоЫ с1опея сои|а!и!п8 сошроипг! сР)х)Ая Ьу ° ия!п8 а шо1аг гаПо оЕ рЬоярЬогу1агег! Х аггпя |о сР)х)А яисЬ гЬа| оп1у 588 оЕ йе геяи1|ш8 Ъасгег!орЬа8ея аге гесошЪ|пап| ог ° !Е дерЬоярЬогу1агег! Х аппя ог р!аяш!П чес|огя аге ияей аясегга)п!п8 |Ье апюип| оЕсРИА |Ьа| Пепегагея гепЕо16 п|оге р1аг!иея ог со1оп!ея, геяресПче1у, йап чесгог ПВасег! 1п йе аЪяепсе оЕ сР)х!А.
реп сопя|гисПп8 сР)я)А ПЬгапея !п Ъасгег!орЬа8е чес|огя яисЬ ая )|8|11, 18|18-23, ).х.!р1.ох, апг! ХОР, |чЫсЬ Ьаче по яуя|еш |о аПочч яе1ес|юп а8ашя| попгесогпЬ)пап| Ьас|епорЬа8ея, и |я яепыЫе со ияе |1ерЬоярЬогу1а|е|1 агп|я, ччЫсЬ ге|!псе Ьу -100-Ео1|! йе пшпЪег оЕ ешр|у Ъасгег)орЬа8ея 1п йе сР)х)А ПЬгагу. ТЬе яаше геяи!| сап Ье асЬ!ечег! ия!п8 аппя чч!|Ь попсоп|раПЫе |егпиш ргог)исег! Ьу рагПа1 ПППБ ог а|Ыиюп оЕ арргорпа|е Пп1|ег-адар|огя.
ч|г!|Ь яо|пе оЕ |Ьеяе чессогя, П |я рояыЫе |о ея|ипасе йе гаПо оЕешр|у |о гесогпЬ!пап| Ъассег!орЬа8ея !п йе ПЬгагу Ьу р!аПпц оп я|га!пя оЕ Е. соП яисЬ ая У!0906||!Я. 1п йе ргеяепсе оЕ |Ье 1пг)исег 1РТС ап|1 |Ье сЬгопю8ешс ы|Ьыга|е Х-Ва!, попгесошЪ|пап| р!а|р|ея аге Ыие; гесо|пЪ|пап| р1ас!иея аге со1ог!еяы !х)опгесошЪ!пап| Ьас|ег!орЬа8ея ргеяеп| 1еяя оЕ а ргоЫеш ччЬеп Ъасгег!орЬа8ея яисЬ ая )|8|10 аге ияеП ая чес|огя, ыпсе а ып8!е гоип|! оЕ 8гочч|Ь оп Е. соП я|гашя саггу!п8 ап /ф ши|аПоп е1ип!па|ея йе чаы ша!оп|у оЕ попгесошЪ|пап|я Егогп йе рори!аПоп. КесошЪ!пап|я Еопп с!еаг р!а|!иея оп |Ье Е.
со1| )ф ыгаш В)х!)х)102 (Ьесаияе шяег|юп оЕ йе сРЫА шасПча|ея |Ье с1 Пепе, ччЬюсЬ сог)ея !ог гергеяяог). )х)опгесошЬ)папг Ьас|егюрЬа8ея ея|аЫ!яЬ гергеяыоп яо еЕЕесПче1у йас йе|г ейк!епсу оЕ р!аПп8 !я Вгеа|!у геПисед. ТЬе аЬяо!и|е пшпЬег оЕ сР)х)А гесошЪ|- пап|я сопяггисгег! ш ).8|10 сап йегеЕоге Ье оЬга)пед Ъу соипПп8 йе пшпЬег оЕ р!ас)иея Еогшег! оп В)х))х)102. ТЬе ргорогПоп оЕ гесогпЪ|пап|я !п йе Ьасгег!орЬа8е я|ос)с сап Ъе п|еаяигед Ьу соипПп8 йе га|ю оЕ с1еаг |о шгЪн1 р1а|!иея оп С600, ап )ф+ я|га!и. КесошЬ!папс Ьасгег!орЬа8ея Еопп с1еаг р1ас)иея оп |Ь|я я|гаш, |чЬегеая попгесогпЬ|пап| Ьассег!орЬа8ея, |чЬ|сЬ соп|шие |о яушЬеыхе асггче гергеяяог, рче пяе |о шгЬЫ р1аг!иея.
ТЬе пшпЬег оЕ с1еаг р!аг!иея оп я|гаш С600 яЬои1|! е|!иа! йе |о|а1 пшпЪег оЕ р1ас)иея оп я|га!и В!ч)х)102. рог геаяопя йа| аге ипс!еаг, !7.60 СЬаргег !1: Ргерагаг!оп и) сРХА Е!Игаггеь апгЕ Сеие Тг)епг!)гса1!оп 1Ьы рогчегЕ01 Вепег!с ье!еспоп ацашьг попгесогпЬ!пап! Ъасгег)орЬа8еь !ь пьес! оп1у гаге1у, гч)й шоЯ гпчеьЬВа1огь ргеЕегг!пц Со иье с)ерЬоьрЬогу1агег! 181!О РЬ)А аппь. ТЬе шаги ргососо1 ргочЫеь шьггисбопь Еог ргераг!п8 а сРЬ)А 17Ъгагу ш а Ьасгег!орЬа8е Х чесгог. Ап а11егпагв е ргососо! Е011оачь 51ер 8 йас ьиЬы)гигеь а р1аяпЫ чесгог 1ог йе Ьас!епорЬа8е Х агшь. Р1аяпЫ чесгогь шау Ье ргеЕегаЫе гчЬеп ргераг!08 а сРХА ехргеьяоп !гЬгагу !Ьаг ии11 Ъе ьсгеепес! аЕгег Ь 1ь !гапьЕесгег! шго си!гигег! шапипа!гап се!1ь.
Рог г!е!а)1ь оп !пйчЫиа! чесгогь, р!еаье ьее 1Ье )пуогшагюп рапе1 оп СОММЕКС!АЕ К!Т5 ГОК сог4А 5гЬ)ТНЕ5!5 АИ)Р Е!ВКАКг' СОИ)5ТКЕ)СТ!О)ч). МАТЕВ1А15 Впбег5 апд Бо1о6оп5 Р1еаье ьее Аррепг!!х 7 Еог согпропеп1ь оЕ 81осЬ ьо!иг!опь, Ьийегь, апгЕ геадеп1ь. О1!и1е ь1осЕ ьо)иг!опь 1о йе арргорг!а1е сопсеп1гаоопь. АТР Е70 тм) 5М Епкугпе5 апд Войег5 Васгег)орИаВе Т4 Р74А ВВаье Се!5 АВагоье де! Е7;Ю Р!еаае аее спер 8. Нос!е1с Аси15 апд О!1допос!ео6де5 сРХА Е)ае гЬе сРХА ргерагег) ш 5га8е 5, 5гер 12 !р.
! !58), оЕ гЬВ ргососо!. Сопгго! ЬасгепорИаВе Х Р)чЕА Т!Ва Р!4А В иьиа1!у ргочЫеИ аигЬ гЬе соиииегс!а! рас)са8!и8 ехггасс аи8 Ь пьес! го Оегегш!ие гЬе рас1га8ш8 еЬВс!еису оЕ йе ехггасг. Маг)гег РА)А ТЬе гиаг1сег Р74А аЬои!д Ъе Ега8шеип гаи8!и8 ги яхе Егоиг 500 Ьр го 5 1сЬ. орес1а1 ЕЕ1п1ргпепЕ Яа1ег Ьайь ргеье1 го 76оС апгЕ 42~С АеЫ111опа! ВеадепЬ 51ер 4 оЕ й!ь ргогосо! гег)и)геь йе геаВепо 7!пег) гп СИар1ег 2, Ргогосо! 7. Бгер 7 оЕ 1И!и рго1осо! гес)и!геь 1Ье геаВепо 7!ьгегЕ т СИар1ег 2, Рго1осо! 23.
ЧесЕог5 апг! ВасТег1а1 ага! п5 ВасгепорИаВе Х агть !Е ша)с!и8 а !аг8е ишиЪег оЕ 1гЬгапеа, и !а шисЬ 1ея ехреияче го ргераге апиа Ьу а8агоае Ве! е1ессгорЬогеяа ог Ьу аисгоае г)епа!гу Вгайеигь !р1еаае аее СЬаргег 2, Ргогосо! !6) йап ю ригсЬаае йеги. рог оссааюиа! ыегя г)ерЬоарЬогу!агег! апиа Еог юиге чесгога !с.8., а8г ! О, Хр!х, аис! ЛХ!рЕох) аге ачаг1- аЫе Егоиг 5ггага8еие, ЕаЕе ТесЬпо!о8!еа, аиг! ойег согигиегс!а! аирр!!ега. 'чЧЬагечег гЬе аоигсе оЕ аггиа, и Ь пироггаиг го сапу ош а аепеа о! рг!ог геасгюиа го сЬес)с гЬаг йе аппа саи Ье !!Васег) го Еоге!Ви РЕКА аиг) рас!са8ег! ейюгеиг!у шго шй:оба ЬасгегюрЬа8е )ч рагггс1еа. Р74Аа Еог гЬеае сои!го!а аге иаиа!!у !ис!иг)ег) гч!ЕЬ соиииегс|а1 ргерагабоиа о!чесгог апис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
