Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 105
Текст из файла (страница 105)
тье дгег о(гье а пр((йод ПЬгагу Ьаз позЬ|пд го до ъч|1Ь (Ь согпр|ехйу. МЕТНОЕ) 2г Акр||(|са1|оп о( Е|Ьгаг|еа Сопх(гис1ед зп ИВ(11, ЛХАР, хк|рЕох, апд ТЬе|г ОепчаНчеа ТаЫе 11-4 !)аь ВЬе азга)гь (Ьа( айпи(д Ье сьес3 зо агпрП(у с(ЗЫА ПЬгаиеа сопсдгисзес! |и чаг)оиа (уреа о! Ьассег)орйаВе ) чес|огв Адд|1|опа! Ма(ег|а|я САС)ТЗОЫ; Р|еазе зее Аррепдlх 12 (ог арргорпа1е Ьапд|/пП о! гпазепа1ъ гпагйед ъч|1Ь <! >. СЫогойггп < ! > Рхие|йуВи/йх/де < ! > 200 тВ/т/ /РТС (20;4 и'М ЕВ аВаг р/а(еа апд (ор аВагохе А/2СУМ аВаг р/агеа апд гор аргосе 5опа!/ %-34 гогог ог ес/и/ча/епг 20 тП/т/ Х-у/ (2И ъч/ч зп сПгпесЬу|(опиапчде) <! > Ме1Ьод 1.
М|х 10 Ьасхег|орйаВеа ъч((Ь 300 р! о! р(а((пВ Ьас|епа о!Пзе арргорпа(е Е. сой аиа 20 гп(пи(ее а1 37"С, р|а1е Пъе (п(ессед си|(иге Ы 1ор аугоае оп а 1 50-гппь Ре1п! д аус!псиЬа1е !ог 12 Ьоига а1 37-42 С (ТЬе (аиег 1егпрега1иге ь иаед ъч((Ь ЭВ(11 ПЬ рагед |и депча(Ыеа о! ) В|1 1 со ргечепз |Ье !опиасюп о! !уаоВепв АП о(Ьег чу! чес|ог 2. Ргераге апс! а(оге (Ье ПЬгагу аа деасг(Ьед аЬоче |и 5(ерш 2 апд 3 о! Ме(йос! 1. 3.
Тпег (Ье агар((йзед !|Ьгагу оп |Ье арргорпасе Е. со/г' асса(п иа(пВ ЕВ аВаг р!а(ея апс! 3 за)п(пВ 40 р! о! а Иосй ао(из)оп о! Х-Ва! ап|$4 р! о! а ао!обои о! |РТС (200 гпП/т!), Т ог(ее а р(ас|иеа (а а теааиге о! (Ье ргорогйоп о| (Ье | |Ьгагу | Ьа1 сопя ьь о! попгесогп 11.68 СЬартет 11| Ртератайоп о( сРА(А БЬтат(ел апй Сепе Ейептфсатлоп СТАСЕ 1: Сопйгпс6оп от с0МА 1!Ьгапеь 1и Еи1агуо6с Ехргеьяоп Чес1огь Ехрге|ьюп с!ошп8 ш еи1|агуоПс сеПа !а а Ьгиге-(отсе ше|Ьо|1 Со ьо1а|е сРЬ)А с1опеа СЬа| епсо|1е 6|псПопа1 ргосе(пк Еог ччЫсЬ по апипо асЫ лег)иепсев ех)ас.
ТЬгее Ъгоа|1 орсюпк аге ачайаЫе, дерепй!п8 оп сЬе Пепета! сЬагассеПаПсл оЕ |Ье саг8ес ргосе|п (Еог геч!елчя р1еаае аее АгиЕЕо 1991; РгесЬ апд )оЬо 1992; 5!шопаеп апй Еой(|Ь !994; 5еей 1995). ° Рот ртоте(пл зисБ ал татта1|ап тесертотл аий сЬаппе1 аий ттаплроттет ртотетп лчЬоле ехртелл(оп ои |Ье р1азта тетЬтапе саи Ье йетестей Ьу е1естторЬуяо1о81са1 те|Ьойя А сРЬ)А ПЪгату ь ргерагей !п а р1аяпЫ ог ЬасСепорЬа8е ).
чесСог ес)и(рред лч!СЬ ргошогегь Еог ЬассеПорЬа8е-епсодей РЫА-йерепдепс ЯМА ро1ушегазея Роо!а оЕ сРЬ)А с!опея сЬолеп ас гап|1огп Егош |Ье ПЪгагу, аге сгапасПЬе|1 |п чПго, ап|1 |Ье гели!с)п8 ш1сл (А ь (п)ессей |псо Хепорил оосусея ТЬе |пйчЫиа1 оосусеа аге |Ьеп асогей Еог ехргеаа!оп оЕ сЬе 6лпссюпа1 ргосе!п. Роо!а оЕ сРЫАа сЬас Пепегасе а рояле я8па! аге йчЫей !псо лиЪроо!а ап|1 гесезсей ип61 а яп81е с!опе епсойп8 |Ье саг8ес ргосеш ь Ыеп66е|1 ап|1 ьо1асе|1. ТЬ(а суре оЕ а)Ъ-ле1ессюп Ьаа Ъееп иаед со (ао1асе сРЬ)Аа епсойп8 чо1са8е-Пасей апд юп-Пасей сЬаппе1а Еог аой!шп, росааа!шп, са1сшш, апй сЫогЫе юпя С-соир!ест гесерсога Еог рерсЫе Ьогпюпея апд сгапя ротсега Еог и.еа, рерсЫея ап|1 апПЬюПся ° Рот се11-литуасе апй зестетей ртоте(ия А сРЬ)А ПЬгагу ь ргерагед ш а ЬассеПорЬа8е )с ог р1аяпЫ чессог ес)и!Рред лч!сЬ я8па!а Еог ехргеаа)оп ш шапипаПап сеПя ТЬеае я8па!а !пс!ис1е а ргошосег/епЬапсег, зр!Ые йопог апс( ассерсог, апй адйс!оп оЕ ро!у(А).
Роо!к оЕ сРЫА с!опеа аге |Ьеп сгапасессед шсо а Ппе оЕ си!сигей п|а|п|паПап сеПя !п сЬе сале оЕ аесгесед ргосе(пя |Ье аирегпасапс п|ейшп Егоп| |Ье сеП| ь а|ьауе|1 Еог |Ье арргорПасе Ью!о8!са! асПчху. Ттап|Еессед сеПа ехргеаа!п8 а саг8ес аигЕасе ргосе!п аге Ыеп66ед Ъу Ъ|пйп8 оЕ а арес)Е|с П8- апй ог апЬЬойу. 1пйчЫиа1 сРЬ)Аа епсой!п8 сЬе саг8ес ргосе(па п|ау Ье Ыепййе|1 Ьу яЬ-ае1еспоп, аа йексПЪе<1 аЪоче. А!сетпас!че!у, сеПа ехргеаяп8 |Ье саг8ес ргосеш ас сЬе сеП яиЕасе гпау Ъе ьо!асей Ьу рапп(п8, сЬе иле оЕ гайо1аЪе!ей П8апйя ог Пиогеасепсе-асс(часед сеП аогПпр. ТЬе р1аяпЫ РМА ь |Ьеп тесочегей 6огп |Ье ае1ессес1 рори1асюп оЕ сгапаЕессей сеПк апй ашрПЕ|ей |п Е.
со)|, у|е1йп8 а рори1асюп оЕ сРЬ)А с!опеа |Пас ь епПсЬе|1 Еог |Ье саг8ес Пепе (Ати(уо ап|1 5еей 1987; 5еей апй АгиЕЕо 1987; Ногя ес а1. 1991; р1еале лее Ье!олч). ТЬ!ыпесЬод Ьаа Ъееп лье|1 со Ыепс((у сРМАа епсойп8 а чаПесу оЕ 8!усосгапвЕегааеа (Еог геч)елч, р1еаае аее Ри)сида ес а1. 1996), аа ъчеП ал а 1аг8е пшпЬег оЕ сусоЫпе| апй |Ье)г гесерсога (Еог гечлеы, р1еаае лее Ь)а)сауаша ес а1.
! 992). ° Рот ЕпттасеИи1аг ртоте|пя Роо1а оЕ сРЬ)А с1опеа аге сгапйессед шсо си!сиге|) п|апипаПап сеПя Ехсгасса оЕ |Ье сгапяепс1у сгапкЕессес1 сеП| аге |Ьеп асгеепед Еог ап асПЫсу сЬагассегьПс оЕ |Ье саг8ес ргосеш. Рог ехап|р1е, Таа! ес а!. (1989) |ье|1 а 8е!-гесаг|1асюп аааау со )ао1асе а сРЬ)А епсойп8 а РМА-Ь!пй!п8 ргосе!п Ь|8Ыу ехргетьед ш сЬе егусЬгоЫ Ппеа8е, апй Апйегааоп ес а!. (1989), асгееп!п8 !псасс сгапаЕессес1 сеПа Еог асегоЫ 5и-гейиссаье асс(ч(су, ъчеге аЫе со |тю1асе а сРЫА епсойп8 |Ье епхуше. Веса|ье аиссеаа(и! ехргеааюп асгееп!п8 тес)шгеа ргодисПоп оЕ Ью!о8(са! асйчпу, сЬе ргоЬ- аЬПЬу оЕ ьо!аПп8 ЕиП-!еп8|Ь сРЬ)Аа Ьу ехргеаяоп асгееп!п8(а |псгеааед, лчЬегеаа |Ье т(а)с оЕ ьо!айп8 сгипсасед с!опеа ог ге1асей сРЬ)Аа !а йестеааес1. Ргогосо! 2: 5гаче 1: Сопьйисйоп оусо2ъ(А 7(Ьгаг(еь гп Еи)гатуог(с Ехргеьыоп (есгогь !169 МАММАЕ1АЫ НОБТ/ЧЕСТОК БУБТЕМй ТНАТ АМРЕ1ЕУ ТКА)ъ!БЕЕСТЕ0 с0Ь!А СЕОМЕ6 То е1пп|па|е ьоте ог" |Ье сопя|1егаЫе 1аЬог (пчо1| е|1 1п |гасй|юпа! яЪ-ье1ес|юп ьсЬетеь, п|апу (пчеь68а|огь (п гесеп| уеагь Ьаче пьес( Ьоы)чесгог ьуыеть (п ъчЬкЬ ггапьЕесгеъ( сР)ъ(А с!опеь гер1ка|е аь ер|ьоп|еь (п п|апипа!1ап се1!ь.
суъ)ь(А 11Ьгапеь аге сопьггисъес) 1п р!аяп(с(ыЬа| саггу а М1йъуре ог(81п оъ Тъ!ъ)А гер1кайоп ъ)ег(чеъ) 6от Я'40, ро!уотач|гиь. ог, тоге гаге!у, ЕрьСе(пВагг ч)гиь ог Ъоч|пе рарй1отач(гиь (Кегп апг( Вая1ко !986; Ми!1ег ес а!.!994; 5Ьеп е| а1. 1995). Роо!ь ог сР)ь(А с!опеь аге |Ьеп ггапьгесгед ш|о 1|пеь ог" тапппа11ап се1!ь йа| ехргеьь ай ог йе гтап|-ас||п8 гассогь гег)и(гег( |о со|хе гер1ка|юп ог' йе ггапыесгег) суъ)ь(А с1опеь. Се!1ыЬа| ехргеьыЬе сагйег рго|еш тау Ье |йеп66ед, гог еха|пр!е, Ъу 1ттипо!о81са! ыа|тп8 (е.8., р!еаье ьее Ногы е| а1.
1991) апй |и ьоте саьеыьо!а|ее! Ьу "рапп(п8" оп а Ре|п' сйьЬ соа|е|1 ъч(|Ь ап арргорпа|е!18апъ) ог аппЪойу (гог геч)еъчь, р1еаье ьее Агийо 1991; )ъ)а)сауата е| а1. 1992; 5еег) 1995). ТЬе се!1ь ехргеьып8 |Ье сагйе| рго|еш аге !уьес(, ап|1 |Ье ер|ьота! !7)ъ(Аь аге 1ьо1агед (Н|г| ! 9б7) апг) гееыаЫ|ьйей |и Е. со(1. йерепй(п8 оп (1) йе еЕ6с(епсу ог" раптп8, (2) |Ье ап|оипс ог ап|р66са|юп ог" |Ье ггапыесгег( сР)ь(А с!опеки йе |пагпгпа1|ап Ьоы, ап|1 (3) йе уге|!иепсу ъч1|Ь и ЫсЬ йе сагйе| с1опе 1ь гергеьепгег) ш йе сР!ъ(А!1Ъгагу, йе Вепе ог шсегеы тау Ье (ьо1агег) айег йгее |о гоиг гоипъ)ь ог" |гапяеп| ехргеьыоп ап|1 ье1есйоп.
Ву гаг |Ье тоьг рори1аг Ьоы се11ь гог й|ь суре ог с1оп(п8 аге реппапеп| 1(пеь ог" Аупсап Вгееп гпоп1|еу 16|1пеу се11ь йа| ехргеьь 5Ч40 Т ап68еп ггот сЬго|поьо|па1!у 1пъейгаъег) сор|еь ог" ап ог18)п-т(пиь пииап| ог 5Ч40 (61ихтап !98!). ТЬеье 11пеь аге 1|поъчп аь С05 се11ь (СЪ'- 1, ог(8(п-т(пиь, 5Ч40). Весаиье йе )п|ейга|е|1 сор(еь о( |Ье чйа1 !)!ъ)А 1ас1| ъйаЫе ог(8(пь ог' гер1ка|юп, |Ьеу аге ипаЫе |о Ъе ась(чагег) Ъу |Ье епдойепоиь!у ехргеьье|1 Т апййеп (р1еаье ьее |Ье шгогтаъюп рапе1 оп СО5 СБ.|5). ТЬе у(е!6 ог' ер|ьота1 ))(ъ)А ГЬегегоге сопыь|ь рге|1опипапйу ог атр1|йе|1 ГгапьГесъег! Р1аяпн)ь.
Вхргеьяоп ог |Ье с1опе|1 се>!ъ)А |ь Вепега11у |1г|чеп Ьу а ягоп8 ргопю|ег ьисЬ аь ап 1ттеъ(1аге еаг1у суготеца1оч(гиь (СМЪ') рго|по|ег (Аги(уо апг) 5еед 1987). ТЬе 5Ъ'40 ог(8(п ог гер!ка|юп (ыпахппа1!у асйче оп1у |п се1)ь ог" япиап ог)81п апй |ь сотр1е|е!у |пасйче ш пшппе се!1ь, ечеп |и |Ье ргеьепсе ог" Т ап|18еп. А пшпЬег ог ойег таттайап Ьоя-чес|ог ьуьсеть Ьаче Ъееп сопьггис|е|1 (п ап ейог| |о ех|еп|1 |Ье Ьоы гапйе ог' се1!ыЬа| сап Ъе пьес) гог ехргеьь(оп с!оп)пц (р!еаье ьее ТаЫе 11-5). Рог ехатр1е, суъ)ь(А!1Ьгапеь сопьсгиссед (п р1аяпы( ьЬи|йе чес|огь саггу(пц йе ог(8(п ог гер!ка|юп йот ро!уотач(гиь сап Ье ьсгеепеъ) Ьу ехргеьяоп ш пшппе се!1 11пеыЬа| ехргеьь ро1уоп|ач(гиь Т ап68еп.
Ноъчечег, геъч ог |Ьеье ьуьгеть тагсЬ гЬе ейк(епсу ог гер!кайоп гоийпе1у асЬъече|1 1п СО5 се1!ь ияп8 ьЬигйе чессогь саггу(п8 ап 5У40 ог(8(п ог" гер1кайоп. ЧАК1АВЕЕБ ТНАТ 0ЕТЕКМ1(ъ!Е Я)ССЕ% ОК ЕА1ШКЕ ОГ ЕХРКЕ%1О(ъ! СЕО!ъ)1)ь)С Ргопипеп| а|поп8 |Ье п|апу гассогыЬаг дегепы1пе |Ье ьиссеьь ог 6и!иге ог ехргеььюп с1огйп8 аге йе го!1оъч(п8: ° Лге амау иьег| го г|егесг йе гаг|гег ргоге|п, и Ь|сЬ пшы Ье гоЬиы, ьепый(че, апъ) ьрес|йс. ° Туге аЬип|4апсе апй 1епйй оу' г)ге гат|гег тИМА. ТЬе!опйег йе тй)ъ(А апг) йе 1оъчег йь аЪип|1апсе, |Ье япа!1ег йе сЬапсеь ог 1ьо1аг)п8 с!опеь сараЫе ог ехргеьып8 ап ас||че рго|е(п.
° Т)ге |1ерг)г оу" г)ге 11Ьгагу. Весаиье п|оы с(Э)ь(Аь (ьо!асег( Ьу ехргеьяоп с!отп8 епсоъ(е ге)аиче!у гаге ргосе)пь, й |ь иьиа11у песеььагу |о Вепега|е а!1Ьгагу сопяьйп8 ог" !Оь ог гпоге шдерепг(еп| сг|!ъ(А с1опеь. 11.70 С)гаргег 17: Ргерагабст оЕсРМА Е!)ггапез апд беие Едепгфса6от ° ТЬе ефс!епсу гч!Е)г зч)г!с)г г)ге сНтед сР)чу Еог тИМАа ггагьсг!Ьед Егот г)гет) сап Ье тгго- дисегЕ !иго еи)сагуоНс сеНя.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
