Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 106
Текст из файла (страница 106)
1г !а еааепг!а! со ордпихе гЬе еЕ6с!епсу оЕ ггапаЕесг!оп оЕ гЬе Ьоаг сеПя ияпд р1аяпнЬ саггу!па героггег цепеа (е.ц., !3-ца!асгоа!даае ог цгееп 6иогеасепг ргогеш) ЬеЕоге ешЪаг)с!пи оп ехргеаяоп с!оп!пц. ТЬеге ь 1!Нде Ьоре оЕ аиссеы гч)гЬ ехргеяюп с!оп!пи !Е йе сРМА Ил.агу !а пог оЕ гЬе Ь!0Ь- ея авиа!!гу. ТЬе агагг!пд шйЬ)А пиьг Ье !пгасг, гЬе роро!а!!опа оЕ Еггаг-аггапд сР!чАа апд шВЬ)Аз аЬои1д шассЬ еасЬ огЬег Еог яхе, гЬе у!е1да оЕ гЬе Еггаг- апд аесопд-ьггапд сРЬ)Аа шпаг Ье ассергаЬ!е, сРМА оЕ гЬе гег!и!гед яге зЬои!д Ье гесочегед !п аиубс!епс с)иапг!гу, апд а1! агера гп йе Нцаг!оп апд сгапаЕогшаг!оп/рас)сариев геасдопа пггьг Ье ассопгр1ьЬед гч!гЬ Ь!аЬ еЕ6сгепсу.
1)п1еаа аиссеы аг еасЬ рЬаае оЕ 1!Ъгагу сопаггисг!оп сап Ье досшпепгед, и ь Ьея со аЬапдоп гЬе ргерагадоп апд агагг очег ада!и ю!гЬ ЕгеаЬ шКЬ)А. Ьеаа гчог)с ь !пчо1чед гп гереаг!па йе аупгЬеяа апд с!оп!пц оЕ сРЬ)А йап !п асгееп!пи Епадег!иаге ехргеаа!оп 1!Ъгапеа ччНЬ а чч!аЬ апд а ргауег. СОМТКОЕ5 ЪЪеп сопаггисг!пи ап ехргеаяоп сР)ч)А 11Ьгагу, 6 !а еааепда1 го Ьаче шсегпа! сои!го!а гЬаг сап ргочЫе ечйепсе йаг гЬе очега!1 ргосея — Егогп аупйеяа оЕ Еггаг-аггапд сР!чА го йе 6па1 яер оЕ !депг)Еу!щ ЕпсбчЫиа1 сР!ч)А с!опеа оЕ 1пгегеаг — Ьаа ччог)сед ю!гЬ ассергаЫе ейк!епсу.
ТЬе Ъеаг шгегпа! сопгго1 !а а аупгЬег!с, ро1уадепу!агед шКЬ)А епсод!пц а ргогеш чч!гЬ а Ь!о!ои!са) асднду гЬаг сап Ъе геас61у аяауед. 1Е роаа!Ые, йе сои!го! гпКЬ!Л апд йе !агапе! шКЬ)А аЬои1д Ье япи!аг !п яге апд аЬои!д епсоде ргоге!па ичгЬ япи!аг Ъиг д!аг!пег сЬагасгепадся Ап пег )А епсод!пи а сугор1аяпк ргоге!и, Еог ехагпр!е, ь пог ап арргорпаге сопгго! Еог ап ехрепгпепг ъчЬоае аип ь го !ао1аге а сРЬ)А епсод!пд а се11 аигЕасе ргоге)п.
ТЬе сопгго! шаг)А !а аеедед аг ап арргорпаге депягу шго гЬе пег)А ргерагадоп иаед го сопагпкг гЬе сРЬ)А ехргеаяоп !!Ьгагу. ТЬе!!Ъгагу гпау гЬеп Ье асгеепед Еог йе аЬг!!гу го ехргегь пчо Ъю!оа!са! асдгддея опе епсодед Ьу гЬе сопгго! пЖ!)А апд гЬе огЬег епсодед Ьу йе деа!гед !агнес шй!ч)А. Биссегь !п гесочег!пц арргорпаге пишЬега оЕ сРЬ!А с!опеа ехргеаяпи гЬе сопгго1 ргоге!и ргоч!деа сошЕогг!пд геаааигапсе йаг а11 Ьаа ропе ъче!1 !п ечегу рЬаае оЕ йе ехрегипепг.
А 1ея гЬап регЕесг Ьиг адег)иаге !пгегпа! сопгго1 ь ап а!геаду-с!опед сРЬ)А епсод!пц а дьНпсдче, Ью1ои!са1!у асдхе ргоге!и. ТЬе сРЬ)А сап гЬеп Ье ехс!аед Егош !ь чесюг апд зеедед пио йе ргерагадоп оЕ аесопд-аггапд сРМА иаед го сопаггисс гЬе 1гЪгагу. А сопгго! оЕ гЬ!а гуре ргоч!деа агьигапсе гЬаг сопаггисг!оп апд асгееп!пц оЕ йе ехргеаяоп!гЬгагу Ьаче цопе ассогд!пц го р1ап.
$оше !пчеащагога ргеЕег го иае аа ап шгегпа! сопгго! а сРЬ)А гЬаг Ьаа а1геаду Ъееп с!опед !пго ап ехргеяюп чесгог. ТЬь чесгог аЬои!д Ьаче йе ааше Ееагигеа аа йе ехргеяюп чесгог изед го сопаггисг йе сР! !А 1гЪгагу, Ъш 6 пеед пог Ъе Ыепдса1 гп а1! геаресгя Рог ехагпр1е, йе сР!чА гьес1 аа а роядче сопгго1 гпау Ье с!опед )пго ап ехргеаа!оп р1аяпЫ гЬаг сагг)еа а 1сапагпусгп геяагапсе депе, гагЬег гЬап ап ашрк!!1!п геяагапсе депе. 1Уяпц а д!ЕЕегепс ап6Ьгогк геяяапсе депе ргочЫеа ап ипашЬ!ииоиа шейод го д!яг!при)яЬ Ьепчееп сР!ч)А с!опев г1епчед Егош гЬе !гЪгагу апд гЬе сРЬ!А гьед аа а сопгго1. !п гЬе асгеепшц рЬаае оЕ гЬе ехрепгпепг, и !а еааепг!а! го !пс!иде а пера!!че сопгго!, Еог ехашр1е, ап егор!у сору оЕ гЬе ехргея!оп чесгог, чг)дсЬ аЬои1д Ье )пс!идед !п а11 ехрегппепга !пчо1ч!пц ггапаЕесг!оп оЕ си!гигед гпагпгпа1!ап се!1я 'ччЬеп ияпи Хеппрт оосугеа аа а чеЬгс1е го асгееп гЬе ехргея!оп 1!Ьгагу, гЬе Ъеаг пера!!че сопсго1а аге (1) ап а1и!иог оЕ гЬе ш чбго ггапаспрбоп геасгюп йогп иЬ)сЬ гегпр1аге РЬ)Л Ьаа Ъееп опниес1 апс1 (2) ап а1ирюг оЕ ап !п ч!гго сгапаспргюп геасдоп йаг сои!а!па ешргу р!аяпЫ РМА аа гешр1аге.
Ргососо! 2| 5гаде1| СоиьггисгЕои оЕ сРХА 1лЬгаг3еь Еи Еи)сагуопс Ехргеьь3ои Ъесгогь 11.71 МАТЕР!А15 Вийег5 апд Ьо!и6оп5 Р(еаье ьее Аррепепх ! Еог соп|ропеп(ь оЕ ь(ос!| ьо1ибопь, ЬиЕЕегь, апс$ генея(ь. 031и(е ь1осЬ ьо(ииопь 1о йе арргорпа1е сопсеп(гаиопь. 10х ЛеьЕг(с((оп епсЕопис3еаье ЬиЕЕег(ь) Епкугпе5 апд Вийег5 Кеь1гус((оп еплутеь Р1еаье ьее 5гер 3.
$Чис!е!с Ас!еЬ апд О!фопис!еобде5 Ро)у(А) ' -епг(сИесЕ тЛХА Т!пь шКМА ьЬои1|3 Ье (ьо!ага|3 Егоп| а сеН Нпе ог Ныие |Ьа| ехргеыеыЬе асВчпу оЕ |п|егеы апс( рипа у|а|3 Ъу с|ъо-раеа сЬ|огпасоцгарЬу оп оНцо(г)Т) сеаи!оье (р!еаье ьее СЬар|ег 7, Рго|осо! 3). 1|)епг)у|гас(оп оЕ |Ье Ь(КЬеьг ехргеьяп5 |Ья|е ог сеН 1ше пп|ы Ье ассопър1(ьЬе|3 ешри|еаау ияп5 йе Ъ|о1о5)са! аыау |Ьа| ъъ(11 Ъе егпр1оуе|$ |и йе ехргеьяоп с!оп)пц ьсгееп. Кпочг)е|35е оЕ |Ье яхе оЕ йе саг5е| шНМА Ь ъшу и|его! ш ехргеьяоп с!оп)пц.
ТЫь чапаЫе сап ьошеИгпеь Ье ъ)есегш(па|3 Ьу сгапь1а|юп оЕ яае-Егасс)апаса|3 шКМА Ео11очгес) Ьу Ь~о!оЕрса! аыау оЕ |Ье сгапь1аНоп ргоъ)исса, Ьу |щесип5 яхе4гассюпасес) гпКМАып|о оосу|еь апъ) йеп аыауш5 |Ье ец5ь Еог йе саг5ес рго|е|п, ог роьяЫу Ьу |гапьЕесНп5 яхе-Егассюпасе|3 шКМАып|о си!|иге|3 гпапипа1|ап сеаь (р!еаье ьее СЬарсег 16). прес!а! ЕЕ!и!р3пепй СОХА ьупЕЬеяь Ес)1 ТЬеье ЕН|ь аге ачаНаЫе Егоп| ьечега! п|апиЕас|игегь ап|3 Непега))у шс1иъ)е аН оЕ |Ье геа5епш ге9и)ге|3 |о ьупйеяке а рори1аВоп оЕ с0МАь геаг)у Еог НВаиоп шсо а ЬассепорЬа5е ог р1аяпеа ехргеьяоп чес|ог (р1еаье ьее |Ье шЕоппа||оп рапе! оп СОММЕКС1АС К)Т5 ГО)3 СОМА 5уМТНЕ5!5 АМ0 ОВНАау СОМ5ТР(3СТ!ОМ).
СЬооье а 3|111Ьа( аНоъчь ЕЬе сопигис(юп оЕ ап ог)еп1ес( СОМА 3(Ьгагу, ).е., опе )п ъыЫсЬ |Ье ьупЕЬеь)хес( сОМАь Ьаче |3)Пегеп( геь1псиоп епхуше я1еь а( |Ье(г 5' апс) 3' епс)ь. Еог ехагпр!е, Ьу иы(пц йе арргорпа1е ас)ар1ог-1)п(сег согпЫпа1юп, сОМАь сап Ье ьупйеь)хес( ъчай а 5аЛ ясе ас йе 5' епс( ап|3 а Хоп я|е а(|Ье 3' епй ица(юп о( ЕЬе сОМАь )п|о а 53!3!Хог)с1еачес( чес|ог )п ъъЫсЬ йе 5313 ы(е )ь (оса1е|3 с(оьеи |о йе ргоп|о1ег апс( 1Ье Хоп ясе )ь!осасес$ с!оьеь( 1о (Ье (гапьспр(юпа( сегпипасог ьес(иепсе о( ЕЬе чес|ог ъъН( ргос$исе ап опепсес$ СОМА НЬгагу. Ву сопьсгисипц ап|3 ьсгееп)пВ ап ог(еп(е|3 СОМА НЬгагу, 1Ье аЬьо)и(е пигпЬег о( с)опеь ЕЬа1 гпиьс Ье ьсгеепес) )ь гес(исес) Ьу а Еас1ог о( 2, апс( ргоЫегпь ъч(1Ь ап1)ьепье (пЫЬ(иоп от ехргеьяоп о(1Ье ЕагВе1 рго(еш асНТЛ1у аге е! $гп)па1ей А ~хьь(Ь)е |3)ьас(чапсаце ог йЫуре о( )с(с Ь |Ьа| йе роя|юп| пВ о( а Хоа ы|е а| йе 3 ' епс( о( йе СОМА 'ь иьиаНу ассошр))ьЬес) Ьу иье о( ап о()ео(с)Т) рпгпег 1о иЕ||сЬ а Хоп ьеср|епсе Ьаь Ьееп аиасЬе|3 (е.ц., 5'-рССССССССССТ„-3 ).
5упН|еьа о( СОМА Ьу гечегье |гапьспр1аье ъъ)ЕЬ (Ь)ь (уре о( рпгпег ЬеВ)пь а1 1Ье ро)у(А) сы) ог гпоь| пзНМАь апс$ ргосее|3ь соъчагс1 |Ье 5 епс( оНЬе шКМА Ееп|р)а1е. И ЕЬе 1агВе! п|КМА 'ь )опт, (Ье сЬапсе о( оЬш)п)пд а Еи)1-1епВ|Ь СОМА ап|3 Ьепсе а роя!Хе ыфпа) 1п (Ье )п(ес(ес$ ог (гапь(ес(- ес$ сеаь )ь гес$исес). Ораопь Со очегсо|п(пе ЕЬ)ь росепиа3 ргоЫегп )пс(ис(е (1) (Ье иье о( |апс)ош Ьехапис)ео1(с$е-Хоа рп гпегы)п 1Ье гечегье 1гапьсп р1аье геас Ноп (е.д., 5 '-рССССССССССММММММ-3 '), ъчЫсЬ сап!еас$1о Ь)аье|1 рг!гп)пВ с(ие со йе СС-псЬ па!иге о( ЕЬе рпгпег ог (2) (Ье сопьсгисНоп о( ыхе ЕгасНопа|е|3 3)Ьгапеь соп(а(п(пе а ргеропс(егапсе оЕ )опт сОМАь. )п ьоше |пь1апсеь, ап апиьепье арргоасЬ 1о ьсгееп)пе )ь (а(сеп Ьу с(еыеп (е.а., р(еаье ьее СНЬЬег( е| а1.
1987). )п 1Ыь ясиа(юп, опеп1 1Ье 3 епс) о( 1Ье СОМА пехс 1о йе ргопю1ег апс$1Ье 5 еп|3 оЕ йе СОМА пехс 1о йе сгапьсприоп Еегпчпа1ог. 11.72 СЬартет 11: Ртератапоп о1 сРЕчА ЕЕЬтат)еа апс7 Сепе 111епсфсапоп ТАВЕЕ 11-5 Чессог 5уоеша Еог Ехргеаяоп С!оп!пк ЕХРКЕ551ОЕ7 пч Хеяоеих ООСУТЕ5 С исти кеп АААммАЕ1А!ч Сеи5 ЧЕСТОК 5ООКСЕ РКОМОТЕК!5) !пч)сгоВеп !плггоцеп Е)Ее ТесЬпо!оВ)еа СМЧ, Т7 рсР)4А 3.1 рсР14А 4 СМЧ я11Ь епЬапсег ОВ! 5Р163 1ас, 5рб, Т7 рЗРОЕТ р!аяпЫ честить РСМЧ-Зспрс р!аяпЫ честит ХЕ)РЕох 72АР-СМЧ 51гагаВепе СМЧ ЕПе ТесЬпо!оЬПеа 51гасаВепе !ас, Зрб, Т7 СМЧ, ТЗ,Т7 !ас7, ТЗ, Т7, СМЧ Зрб, Т7 ХУАР Ехргея ХЕхСеП 51гасацепе АшегаЬаш РЬаппас!а 'туесЕог5 апе7 Вас$егса! Ягаспб Е!есттосотпресепт Е.
со11 се!75 1Е а р1аяпЫ ехргеаяоп час!от Ь сЬоаеп, ргераге Ер!еаае аее СЬарсег 1, Ргогосо! 26) ог ригсЬаае е1ессгосопгре1епс Е. соП аа Ьоаса Еог 1Ье сР14А ПЬгагу. ТЬе Псег оЕ 1Ье е!есггосогпресепс се!15 ьЬои!с$ Ъе ас 1еаас 5 х 10" со!ошеа!Рц р1аяпЫ Р)4А. 14еапу, ые а яп51е 1ос ог ргератапоп оЕ сепа 1ЬгоицЬоис сЬе ехргеаяоп с1ошпВ апс) асгеешпВ ргосес)иге. Рас)сае)пе ехстас!5 1Е а Ьассег)орЬаВе Х чессог ы сЬоьеп, 1Ьеп ригсЬаае Еог ргераге) а чету Ь)ВЬ сиег рас1саЬбпВ ехсгасс ълсЬ счуасЬ со Епаегс 1Ье гесопгЬ)пап! сРЬ)Аа )псо 1Ье чсср ЕР1еаье аее 1Ье !пЕоппасюп репе! оп Пс) Ч!ТПО РАСКАС!В)С).
ТЬе 111ег оЕ 1Ье ехсгас1 аЬои!д Ье а1 1еаас 10' РЕи/иВ чпа) Р14А. Р)аатЕСЕ от ЬассетгорЬаде Х ехртехяоп тес!от ТЬе сЬоссе оуч ее!от Ь гасса1еа Ьу 1Ье Ьоас ауа1епг иаес) Еог ехргеаяоп. !Е Хеиорат оосусеь аге иаес), 1Ье ехргеьа)оп чессог аЬои!д Ье а ЬассепорЬаВе А Р14А ог а р1аяпЫ чессог РЬ)А саггу)пВ ргопшгегь Еог сЬе Ьассег)орЬаВе 5Рб, ТЗ, ос Т7 Р14А-с)арсис)еис К14А ро1упыгаае* Папппц 1Ье ро!упи)сег (е.В., ХЕАР Ехргеы, ХЕхСеП, апс1 РЗРОКТ). !Е сипигес) гпапипапап сепа аге иаес), 1Ьеп сЬооае а р)аяпЫ-Ьааес) ехргеаяоп чесгог 1Ьас сап!а)па а росчегЕи! ргошо1ег Ее.В., 1!се ипгпегпасе еаг!у геВ)оп ргошотег оЕ Ьшпап сусогпеВа!оч)гы) апс) а ягопВ сгапаспрпоп сегпипатог аес)иепсе Ее.В., 1Ье 3' аес)иепсеа оЕ йе Ьшпап ВгоиаЬ Ьогшопе Пепе ог сЬе ЗЧ40 !асс сегпнпасог геВ)оп).
Ехашр1еа шс1иае 1Ье РСМЧ аепеа оЕ р1аяпЫа апс) рсРЬ)А 4 Ер!еасе атее ТаЫе 11-5 апс1 Аррепйх 3). !ЧТЕТНО0 1. 1 ае а сопппегсса! )с11 ог Ео!!очч йе сп5!гиспопа гп РгоСосо1 1 !51акех 1 — 4) Со 5упйеасхе Ыипсепс)ес1, с)оиЫе-асгапс)ес) с)Э)ч)А апс1 ес)шр ТЬе Тегпиш ипсЬ ТЬе арргорпа!е! )п1сег5 ог ас1арсога. АТЫ!6опа! КеаеепЬ 5тер 7 ОЕ ЕЫ5 ртотосо! тес)и!тех йе теадеп15 7!51ес)гп Ртотосо! 7, 57аее5 7 — 4. 5тер 2 оЕ 1ЬЕ5 ртотосо! тес)и!те5 йе теакеп15 7!57ес7 1л Ртососо! 7, 57аее 5. 51ерх 4 апс) 5 ОЕ 1ЬЕ5 ртососо! тес)и!те йе геаееп15 !151ес7 т Рто!Осо! 7, 51аее 6. 5тер 8 ОЕ ЕЬЕ5 ртососо! тау тес)и!те йе теаееп75 !Ехсес) га СЬартет 7, Ртотосо! 26.
Рготосо! 2: Маце 1: Сопягис6оп оу' сРХА Е!Ьгаг!еь ш Еи)гатуоггс Ехргеььтоп Ъесгогз 11.73 2. Ргасбопасе сЬе 6оиЫе-ьсгапс1е6 сРХА ассог6|пц со а|хе, ияпц це1-61сгасюп сЬгоптасоцга- РЬу. Рог дега!!ь, р1еаье ьее Ргососо! 1, Маце 5. 1Е йе яге оЕ йе тагает птКХА Ь )тпоъчп, роо! йе со|шпп Ьассюпз йас сопсаш ттоиЛ)е-зтгапттетт сстХАз гапаспц ш яте Еготп 1 |тЬ япа!|ег сЬап тЬе тасует тпКХА со 1 СтЪ |агцег йап тЬе сагцес шКХА. 1Е сЬе яае оЕ йе тагает птКХА ть пп)споила, Егас6опате сЬе ргерага6оп оЕ г|опЫе-зтгапс|- ег| сстХА тпсо тЛгее роо1з сопсатп|пц пю!есо!ез оЕ гт|ЕЕегепт яаеь: 500 — 1500 Ьр, 1500 — 3000 Ър, апг) >5000 Ьр.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
