Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 107
Текст из файла (страница 107)
3. О!цеьс 10-25 рц оЕ йе р!аяпЫ ог ЪассегюрЬаце Л ехргеььюп чессог ъчпЬ съчо геяпссюп епхутпеь ъчЬоье гесоцпшоп ьет)иепсеь оссиг !п сЬе 1!п)сег-ат!ар!ось р1асет! ас сЬе 5' ап6 3' епбь оЕ йе сРХА. Аъ 1А4РОКТАХТ Та|ге саге со епьиге сЬас Ьой геьспссюп епгушеь йцеьс йе чессог РХА со согпр1есюп, Саггу оти йе йцеьцопь !и ьег)иепсе гайег йап ь!гпи!сапеоиь!у; ригцу йе РХА Ьу ехсгасСюп ъч!СЬ рЛепоЛсЫого|опп апт) ргес)р)татюп ъч)СЛ еСЬапо| Ье1и ееп г)1цеьть, апг! ъчЬеге роьяЫе, иье це| е!ес1горЬогеяь со сЬес|т сЬас ЬосЬ оЕ сЬе г))цеьсь Ьаче цопе со согпр|есюп. То епзиге согпр1есе с1еачаце оЕ йе ехргеяюп честог ЬеЕоге сЬе с! ошпц оЕ сстХА, гоше шчезпдасогз тпзегс а зЬогс "зсиЕЕег" Егацшепт оЕ 200-500 Ьр Ьесъчееп сЬе 5а11 апгт №г| !ог осЬег епгуше согпЬшаиоп) ясез оЕ сЬе ро1у1тп1тег.
ТЬе ргезепсе оЕ а зш|Тег Егацшепт а|1оъчз йе еЕВс|епсу оЕ йцезсюп со Ье пюппогег| пюге геатц1у апй ш зопте сазез, епЬапсез г|опЪ|е йдезсюп оЕ тЬе чессог япсе йе тъчо гезспссюп ясез аге ыиаПу!осатетт с|озе со еасЬ осЬег ш тЬе ро|у1тп1тег зет|иепсе, апг) зерагатшц СЬепт Ьу 200 — 500 Ьр гешочез епг) тпЫЛтиоп. 4. 5ес ир спа1 1!цасюпь ияпц 6|ЕЕегепс габоь оЕ сРХА со ЪассепорЬаце Л агшь ог р1аяпЫ РХА.
Рог т!еса!15 оп орлоппа!пц 1|ца6опь, р1еаье ьее сЬе !псгойис6оп со Маце 6 (аь ъче1! аь Мер 1 оЕ Маце 6) оЕ Ргососо1 1 оЕ сЬть сЬарсег. 11 йе сстХА Ьаз Ьееп зерагатетт шсо Егассюпз оЕ ййегепс ятез |р1еазе зее тЬе посе со Мер 2), а1т0иош оЕ еасЬ Егассюп гас Ъе аззауег) зерагате!у. 5. Рас)таце ап а1!т)иос оЕ сЬе ргобиссь оЕ еасЬ оЕ йе!тца6оп геасбопь !псо ЬассепорЬаце Л раг- 6с1еь. Оесеппше сЬе йег оЕ !пЕессюиь раг6с!еь цепегасес1 тп еасЬ рас)тац!пц геасбоп. Рог т)еса!1ь, р1еаье ьее ЪосЬ йе рапе1 оп РСАТ!ХС ВАСТЕК!ОРНАСЕ Л О|Ч Е. СОС! 5ТКА!Х5 апт1 Мерь 2-6 !п Ргососо1 1, Маце 6.
Уье е!ессгорогасюп со сгапьЕопп Е. сей ъч|сЬ а1н!иось оЕ еасЬ 1|цасюп геассюп (р!еаье ьее СЬарсег 1, Ргососо1 26). 6. Тея ях ЬассепорЬаце Л ог р1аяпЫ гесошЬтпапсь Еог сЬе ргеьепсе оЕ сРХА тпьегсь оЕ сЬе арргорпате ь!хе апт| 6етегпипе СЬе га6о оЕ СОХА Со чесСог РХА СЬаС цепегаСеь йе 1агцеьС пшпЬег оЕ гесотпЬтпапс с1опеь. Са!си1асе йе а|ге оЕ сЬе 1|Ьгагу сЬас сап Ье цепегасет1 Егози сЬе 1|цас|оп геассюпь сопсапбпц сЬе ор6ппип га6о оЕ СОХА со чессог. 7. Е)ь|пц йе ор6тпшп га6о оЕ сРХА шьег1 со чессог,!|цасе аь пикЬ оЕ сЬе сРХА аь роьь!Ые со йе ЪассепорЬаце Л ог р!аяпЫ РХА.
1с Ь тлша11у Ъеиег со зес ир тпапу япа11 1|хат|оп геассюпз, гасЬег сЬап опе 1агце геассюп. 8. Ргераге ап6 апа1ухе сЬе гесотпЪ!пап!а ияпц опе оЕ сЬе шесЬобь Ье1оъч: ЕЕ а ЬастепорЬаце Л честог Ь иьегЕ Рас1саце сЬе 1|цасе6 сРХА !псо ЬассепорЬаце Л рагбс!еь Ео1- 1оъъчпц йе т|!гес6опь ргочЫед Ъу йе тпапиЕассигег оЕ йе рас)сац|пц ехсгасс, шеаьиге йе Шег оЕ сЬе ч!гиь яос1с, апт| ьсоге йе ьсос1с ас 4'С. Е1 а Расти! честог и изет)т Меаьиге йе пшпЪег оЕ росеп6а! гесотЪтпапсь |п сЬе 1|цас|оп геассюп Ьу е!естгорогаппц япа11 а!|с|иота оЕ йе 1|цас!оп ппхсиге !псо Е.
сей се!!ь !Р!еаье ьее СЬарсег 1, Ргососо1 26). 9. Ргосееб аь ьооп аь |ь ЕеаяЫе со йе ьсгеепшц оЕ сЬе еи)сагуоск ехргеьяоп |тЬгагу. 11.74 СЬарсег 11| Ргерагассоп оЕсРИА Ь!Ьгаг!ез аил( беие Ыеигфсас!оп СТАСЕ 2: Ьсгееп1пд с0МА $логаг1еь Сопйгис$ед 1и Еи1сагуобс ЕхргеВВ1оп Чес1огь То пшшшхе йе ашоцпс оЕ ъчог1| !ичо1чес! ш зсгеешп8 ехргезяоп 1|Ьгапез, |Ье сР)ь)А! |Ьгагу ь йчЫе|1 |псо а зепез оЕ зсгееп!п8 роо!з сЬас соила!п |Ье п|ахипшп пшпЬег оЕ сР!ъА с1опез сошра6Ые ъч!|Ь еЕЕ|с!епс |1есес6оп оЕ |Ье саг8ес Ь!о!о8!са! асс!ч!су.
ТЬе согпр!ехпу оЕ |Ье роо!з |ЬегеЕоге с(ерепс!з а1|позс ехс!цяче1у оп сЬе зепыс!ч!су оЕ йе зсгеещп8 аззау изей со |(есесс сЬе саг8ес асбчпу. Рог юп сЬаппе1 ап6 осЬег ргосе|пз ъчЬозе асс!ч)су сап Ье с(есессес) Ьу зеия6че рассЬ- с1агпр!п8 ог е!ессгорЬуз!о1о8!са1 аззауз, сошр1ех роо!з сопсашш8 цр со 300,000 сРХА с1опез Ьаче Ьееп цзе|1 (е.8., р1еазе зее Маял ес а1. !987). Рог а зсегоЫ-шесаЬо!!х!п8 епхуше !и ъчЬЫЬ йе аззау сичо!че6 а|Ыш8 ! '4С]сезсозсегопе со |Ье гпейшп оЕ сц!сиге|1 се!!з, Ео1!оъчед Ьу а сЬ|п-1ауег сЬгошасо8гарЬу зерага6оп оЕ ялЬзсгасе апс! рго|1цсс, роо1з оЕ !0,000 с1опез ъчеге зцссеззЕц1!у зсгеепед (Апс)егззои ес а1.
1989, 1991). А ргосе|п йас сгапзрогЫпеча!опале ъчаз |зо1асе|1 аЕсег зсгеешп8 роо1з оЕ 1000 сР)ъ)Аз (К!ш ес а1. 1992), ъчЬегеаз |Ье !зо!ас!оп оЕ опе оЕ сЬе еп|1ойе1!п гесерсогз ъчаз ассогпр1|зЬед Ьу зсгеепш8 роо!з оЕ 500 сРХАз (8а)сига! ес а1. 1990). С!еаг1у, йе !аг8ег |Ье роо1 з!ке, йе 8геасег йе сарасиу со зсгееп 1аг8е пшиЬео оЕ с!опез Егогп сЬе 1!Ьгагу. !п 8епега1, |Ье зепз!с!ч!су гес)ц!гес( со 6есесс а з!и8!е саг8ес сР)ь(А ш а зсгеешп8 |псгеазез аз а 1шеаг Ецпс6оп оЕ сЬе яхе оЕ |Ье роо1. [Е |Ьеге !з геазоп со Ье1!ече |Ьас |Ье Ь|о1о8!са! аззау |з шзепябче, а 1аг8е пшпЬег оЕ зсгеешп8 роо!з зЬоц!6 Ье сопягцссе|1, еасЬ соила!шп8 по июге |Ьап 1000 ог 2000 с1опез.
'ъъсЬасечег йе пшиЬег оЕ с!опез ш |Ье зсгеепш8 роо1, |Ье аип зЬоц16 Ье со зсгееп ас !еазс сЬгее сипез п|оге гесогпЬ!иапо сЬап сЬе пшиЬег оЕ !пйчЫца1 сРХА с1опез !и йе ехргезяоп 1!Ьгагу. Рог ехашр!е, ап ехргезз|оп 1|Ьгагу оЕ 10з шйчЫца1 с1опез сап Ье йчЫ- ед шсо -30 зсгееп!п8 роо1з, еасЬ сопла!п!п8 100,000 с1опез, ог !псо 1000 зсгееп!и8 роо!з еасЬ сопсашш8 3000 с!опез, ог |и!о апу шсепиейасе пи|пЬег оЕ роо1з оЕ ргорогсюпа1 з!ке. АЬчауз !пс1цс(е а роя6че ап|1 пе8абче сопсго1 ш еасЬ зсгеепш8 ехрегипепс.
МАТЕК!АЕ5 ВоЕЕегь апд йо!611опь Р1еазе зее Арреийх ! Еог соп|роиеп|з оЕ злое!| зо!и6опз, Ьц((егз, апсС геа8еплз. Р!!иле злое!с зо1и6оиз Со СЬе арргорпале сопсеилга6опз. Епгугпеь апс! ВоЕЕегь йезгг!сг!оп еидоиис!еазез Вез!с!с|сои еиъСоиис!еазез ъч|1! Ъе ге|ли!ге|С Еог сегсаш ргосе|Сцгез. Р1еазе зее 5серз ! аи|С 3.
Ь!ос!ек Ас1118 апд О1фопос!ео1сдеь сПНА 1!Ьгагу, ргераге|1 аз г)езспЬегу |и 5саде 1 оЕ й|з ргососо! Тгаиз(есооиу!п)еспоп сои|го)з А сглЪСА сЪа| сап Ъе иле|С аз а роя|ае сои|го! ь а рисе!е|а соиииой|у ъчЪеп зесиих ир ехргезяоп с1ои|и8. ЪЧЪеоечег розз|Ые, сЪоозе а сулЪСА сЛас еисо|)ез а Ъсо!охсса! асссчссу яии!аг со йас о( |Ъе Ргососо! 2: 5га5е 2| 5сгееп165 СОХА ПЬгаг)ея Сопьггисгед |п Еи)гагуодс Ехргеьясоп Ъессогя 1!.75 6еяге6 саг8ес сРХА. рог ехашр1е, |Еа поче) росаяз1шп сЬаппе! Ь йе саг8ес сРХА, пяе а сРХА сисой ш8 а ргечюцз!у Ьо!асе6 К' сЬаппе1 ая а роясл е сопсго1. ТЬе сопсго! сРХА Ь ые6 со еясаЫВЬ сЬе орп'- гпшп роо1 яхе ап6 со сЬес1| йас а 8)чеп сгапзЕессюпбп)ессюп ехрепшепс зчог)|ей ТЬе роябче сопсго1 сРХА яЬоп1|1 Ье сгапзЕегге6 шсо сЬе арргорпасе ягаш о! Е.
соб !11 пя)пц а р1аяпЫ ехргезяоп чессог) ог рас)га8е6 шсо ЬассегюрЬа8е Х ЬеЕоге саггу1п8 ош Всер 1. Тзчо сурез оЕ пе8апче сопсго1я яЬоп16 Ье 1пс!пбе6 1п ясгеешп8 ехрегппепся пяп8 Хеиориз оосусек ТЬе р1аяпЫ чессог а!опе ап6 сЬе сгапяспр6оп геассюп ълйопс а|Ые6 сеп|р1асе РХА. 1п абйсюп, Зсер 1 гецшгея епЬег ап ешрсу ЬассегюрЬаВе Х ехргеьяоп чессог рас)га8е6 шсо ЬассепорЬа8е Х рагбс!ея ог Е.
соб сгапяуоппе|1 ч|1|Ь сЬе егпрсу р1аягпЫ ехргеыюп чессог. Месь!а уегпбс айаг р!агеь сопса)п)па ЕЬе арргорпасе апдЬидс Тегпбс ЬгоЕЬ Еог оЕЬег псЬ тед)ит) сопса)п)п5 ЕЬе арргорпасе ап6Ыодс АсЫЖопа! Кеареп$5 5|ерь 7 апд 2 оЕ |ЬЬ ргососо1 тау гедшге а соттегс)а1 р)аьт|д рипбсадоп Ег!С Ьее СЬарсег 7, Ргогосо) 9). 5|ерь 7 апд 3 оЕ сЬЬ ргососо1 тау гедшге |Ье геаеепсь Егот опе оЕ |Ье сгапьуесдоп ргогосоЬ |и СЬарсег 16. 57ерь 7 апд 3 оЕ |ЬЬ ргогосо1 гпау гедиие ГЬе геа5епсь !|ьгед и СЬарсег 9, Ргогосо! 6. 57ерь 7 апд 3 оЕ |ЬЬ ргососо1 тау гедшге ЕЬе геаделсь песеььагу со |л!есс тАХА то1еси)еь |псо Хепория оосусеь, аь с!еьспЬег! Ьу 5рессог ес а1. !7998а). 57ер 7 оЕ ЕЬ|ь рго|осо1 тау гедшге ЕЬе геааепсь 1Ьсед и СЬарсег 2, Ргососо! 1 ог 5 апд Ргогосо) 23 ог 24.
51ер 7 оЕ ЕЬЬ ргососо1 геди)геь ЕЬе геааеп!ь песеььагу со аььау Еог |Ье Ьуо)орса) асдису епсодед Ьу |Ье роза|ее сопгго1 СОХА. 51ер 2 оЕ ЕЬЬ ргососо1 тау гедшге |Ье геадепсь Ьасед т СЬарсег 1, Ргососо) 26, апд СЬарсег 2, Ргогосо) 1 апд Ргогосо! 23 ог 24. 5сер 4 оЕ !Ьгь ргососо! гедшгеь ЕЬе геааепсь песеььагу со аььау 1ог ЕЬе Ь|о)пасса! ассвду епсодед Ьу |Ье саг5ег СОХА. 51ер 6 оЕ ЕЬгь ргогосо1 гедитеь ЕЬе геааеп!ь 11ьсед и СЬарсегь 7, 72, 15, апд 76. СеПВ апсь Т!55ссе5 ноьс се)Ь Хепория оосусея аге са1|еп Егош Ееп|а1е Воп|Ь АЕг!сап с)атче6 Егоая зчЫсЬ аге ача|1аЫе Егогп яечега1 Ью1оадса! зпрр!у Ьошеь 1япсЬ ая Саго!|па Вю198)са) Вирр!у ог Копя Вс|епббс). ТЬе аЬ|!ку оЕ оосусе с!шсаея со ехргея )п)ессе6 шВХАз чапез яеаьопа1!у ап6 Ь аЕЕессе6 Ьу |Ье а8е ап6 рЬуя)о1о8)са! ясасе оЕ йе 6опог апппа1я, Р)ЕЕссо16ез )п ехргеяя)п8 шВХАя сап зоше6шез Ье очегсоше Ьу ячассЫп8 япрр1|- егя. рог п|е|Ьо|Ь со Ьо1асе оосусея, р1еаяе зее Со1п|ап 11984), Врессог ес а!.
11998а), ап6 )п1шз ес а1. 11988). 5)ш)ап СО5 се!1я ог Вепчас)чея оЕ |Ье 293!ше оЕ Ьшпап еспЬгуошс Ыбпеу се1Ь аге сЬе гпапппа1)ап Ьояся оЕ сЬо|се Еог сгапыепс ехргезяоп оЕ с1опе6 сРХАя Ьесаые оЕ йе|г зпрепог еубс)епс)ея оЕ сгапяЕессюп ЕС1пхп|ап 1981; Соппап 1990).
Нозчечег, п|апу о|Ьег се11 1|пеь Ьаче Ьееп пзе6 зпссеыри1!у Ее.8., СЬспезе Ьашзгег очагУ ап|1 Х!Н-ЗТЗ) (Ха81ЫЬ еС а1. 1992; Вагах е| а1. 1993; Уопп8 е| а1. 1993). ВеЕоге ешбагЫп8 оп ехргеяюп с)ошп8, сея| 1уяасея оЕ шос)г-Ьс!ессе6 оосусея ог 1уяасея оЕ шос)с-сгапзЕессеб се!Ь Еог сЬе асбчау оЕ саг8ес ргосе|п. !с Ь еыепс)а! со ясагс ъч)й ап ехргеяяоп Ьоя йас Ьая 1озч со пссбесессаЫе 1ече1я оЕ йе асс|псу со Ье с1опей 11.76 СЬартет 11: Ртератабоп о~сРИА Е1Ьтат(ел апл1 Степе Иептфсабоп МЕТНО0 1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
