Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 103
Текст из файла (страница 103)
Е, соК ьггат, ЕгеьИ)у ргерагегЕ очегп)ВИ1 си)гигеь Е)ае асга!иа С600 (В!41493) Еог ВгочПЬ аиг) В!474 102 ЕС60067)А) Еог асгееши8 оЕ сР74А 1гЬгапеа соиягиссег) !и ЬасгепорЬа8е 281!О. ))ае агга!и У!0908448 Еог ВгоъчсЬ апг) асгееиш8 о! сР)ч)А !!Ьгаг!еа соиаггисгег) ги ЪасгепорЬа8е 28г! !. 1)ае а!гаги ВВ4 Еог ВгоъчгЬ аиг) асгееи!и8 оЕ сРГ4А !!Ьгапеа соиаггисг- Ргососо!1: 5!а~с б: Е.|Вас|оп оГсР/г/А го ВассепорЬа5е А Агпгз 11.61 ес! сп "г2АР апс! А2АРЕ! ог ыгаш ХЬ|-В!ие Еог ХХАРс!. 15сгаш Х|с-В1ие зирроги ЫВогоиз Вгогч|Ь оЕ А2АР!! Ьи| пос оЕ АУАР) Рог А2!Р1ох, нзе зсгаш у|09012Ц.
Р!еазе зее йе раве! оп РСАТВ|СС ВАСТЕК)ОРНАСЕ Х ОЬС Е. СО11 5ТКА)ЬС5 оп |Ье Еооо|чш8 ра8е. Рас/саВ/пВ ехггасСк Еог ЬасгеггорЬаде Х Рас)са8)п8 ех|гассз аге йоши!с со ша!ге аиг) зЬоиЫ сЬегеуоге Ье ригсЬазег) сопниегс|ас!у. Вечега! согпгпегс|а! зирр1|егз ргочЫе рас)сз8!и8 Ыи |ЫсЬ ип|Вие Ееасигез. Рог а г)езсгсрссоп оЕ рас)са8!п8 ехсгась, р!еазе зее |Ье спуоги|аооп рапе! оп сЬС 'ггсТКО РАССЕАСс)з)С. МЕТНОО 1.
5ес ир Гоиг секс ПВасюп/рас)саВ)па геассюпк ак ГоПочгк: Ел8асюп А В 10Н1 !О р! !.о р) !о р) !.о р1 !.о р) !О н! !О р) Аййп8 АТР аз а сои| ропепс оЕ сЬе ! Ох 08ас!оп ЬиЕЕег !еачез шаге чо!игпе Еог чессог ог Еог- е|8п Т|С4А сп сЬе геасооп иихсиге. !Е цаи8 а сопипегс!а! 1|Вазе Ьийег сЬас соп|а!пз АТР, сЬе айй!с!ои оЕ АТР В пос геошгей 1псиЬасе сЬе ПВасюп пихшгез Гог 4-16 Ьошк ас 16'С.
5соге сЬе ипике|1 рогсюп оГ |Ье сРЪ)А ас — 20'С. 2. Рас)сапе 5 р1 оЕ еасЬ ПВаПоп Епсо ЬассеПорЬаце )с рагПс1ек ЕоПозчшВ йе йгес6опк ргочЫес) Ьу йе шапиЕассигег оЕ сЬе рас)сап)па ехсгасс. Весацзе сЬе Ыге оЕ сЬе Впа! сР|чА !|Ьгагу г)ерепг)з ои сЬе еЕВссепсу зЫ|Ь ъчЬ!сЬ гесоп|Ь!иапс ЬассепорЬа8е Х Веиогпез аге рас)са8ес) шсо |пуесооцз ЬассепорЬа8е Х рагис!ез, и В еыепба! со изе рас)са8!п8 иихСигез оЕЬ!ВЬ росепсу |Ьас у!е!д )5 х |О р6|/НВ оЕЬассепорЬа8е Х !|С/А. Ве гиге со шс!и|се а сопсго! Х ЕсгзА 1изиаоу ргочЫег) зйсЬ |Ье рас!|аЕПп8 геассюп )с!с) со г)есегш!пе сЬе рас)са8!п8 еЕВс|епсу оЕ |Ье ехсгасс оп Ьапс!.
3. Айег СЬе рас)сап)пВ геасСюп )к сошр1е|е, ас)д 0.5 ш1 оЕ 5М Со еасЬ гпсхСиге. 4. 'с)ке йе 6екЬ очегп)ВЬ| си1сигек оГ йе арргорпасе ксга)п/к) оЕ Е. со/| со р1асе 10 р1 ап|1 100 р1 оЕа 10 ' сП!06оп оЕеасЬ рас)сап)пВ пихшге оп еасЬ ксгаш (р1еаке кее СЬарсег 2, Ргососо1 1, апс) йе рапе! оп РСАТЕЬСС ВАСТЕК)ОРНАСЕ Х ОЬС Е. СО11 5ТКАс)з)5). 1псиЬаСе СЬе р1а|ек Гог 8-! 2 Ьоигк ас 37аС ог 42'С. 5. СоипС СЬе пшпЪег оГ гесошЪ|пап| апс) попгесоп|Ь|папС р!а|раек.
1.|ВаПоп А кЬои!д у)е!г) по гесошЪ|пап! р1аг)иек, |чЬегеак ПВаг)опк В, С, апг) Р кЬои1В у)е!П шсгеаяп8 пшпЬегк оГ гесошЪ)пап! р!аг)иек. 6. Ргогп сЬе пип|Ьег оГ гесошЪ)пап! р1аг)иез, са!си!асе сЬе еГПс)епсу оЕ с!оп)пВ оЕ сР)зсА (РГи/ п8 сРЪ)А).! Е аП Ьак Вопе |чеП, йе ейю|епсу кЬои! П Ье ас 1еая 2 х 10| РЕи/пВ сР)4А. ТЬе соса1 у)е1г) оГ гесоспЪ|пап!к Ггош 5 НВ оГ ро1у(А)г КЪ)А зЬои!д Ъе ш ехсезк оГ 5 х 10'. 7. Р)с1| 12 гесошЬ|папс ЪассепорЬа8е А р1аг)иск, Вгосч япаП-кса1е 1укасек, ап|1 ргераге Р)4Ак Еог ЙВекПоп сйй |Ье арргорпасе гекспсПоп епгугпе.
В. Апа!)~е сЬе яке оЕ йе сРЪ)А )пкегск Ьу е1ессгорЬогеяк сЬгоиВЬ а 1% аВагоке Ве1, ияпВ ак п|аг1|егк Егаашепск оЕ РЪСА 500 Ьр со 5 1|Ь |п 1епВ|Ь. Х чесСог РЬСА 10.5 НВ/р!) сох Т4 Р)з)А ПВазе Ъи/Еег сРЬ)А Вас|еПорЬа8е Т4 РЫА ПВаке Е !00 с!се!за ипсск/р)) !О гпЫ АТР Н О со а Впа1 чо1шпе оГ !.о р! !.О р) 0 п8 0.1 р1 !ОН) !.О Н! 5 п8 О.! р1 !.О р) !.О р! !.о р! !.о р! !О п8 50 п8 о ! р! о ! р! 11.62 СИартег 1!г Ргерагаттоп и) сРМА 12Игайет апд Селе !деист|тел(топ РЕАТ1МС ВАСТЕК|ОРНАСЕ Х ОМ Е. СОЕ1 5ТКА1М5 О)Яегепт ЬастегюрЬаВе Х чистот тес!Ыге д!Яегепт етга!ие о1 Е. сой 1ог р|ас!ие тогпзатюп. ТЬе 1ойозч|пВ аге юпзе Вепеггт потех оп рге1егепсев Р!адие Ятипат(оп тч(тИ )ВПОт Сгочч Е.
сой етга!пе С600 апд ВХХ102 |и ХЛСТМ (р(еаее еее СЬартег 2, Рготосо| 1) солта!пвВ 0.2чА ва)сохе. (ВХХ)02 цгозче пвсЬ пзоге х!озч|у (Ьал С600.) Ргераге еик|ь о1 р1ат(пВ Ьастепа о1 ЬотЬ етга|пе ас дееспЬед !и СЬартег 2, Рготосо| 1. Хосе Язас |т гпау Ье песеееату то хиерепд (Ье Ьастепа от' атга!п ВХХ102 |и а егпайег чо1ипзе о1 10 тм МВ5О4 тйап ихиа) то аийп а савела(ту о1 -1.5 х 10 сейх(гп).
Меатиге тйе пигпЬег о1 )п(есйоие Ьастег(орЬаВе рад|с!ее ргодисес1 Ы тЬе рас(саВ(пВ гп(хтигее ль с1еесг!Ьес1 |и СЬартег 2, Ргоико! Ь их!пВ ЕВ айаг р)атее апс| ЕВ тор аВагою. С!еаг апд тигЬЫ р(адиее аге еае)|у д!ет!пВи(аЬед зчЬеп р!атед ат!озч савела)ту оп сопЯиепт Ьастепа|!азчпв Р)ас(иее о1 гесопзЬ!пал( )8(З 0 ЬастепорЬаВее арреаг оп (азчпх о1 С600 сей е айег 6-7 Ьоиге о1 )псиЬатюп ат 3TС; р1ас(иее оп ВХХЗ 02 та1се 1-2 Ьоиге )опВег то арреаг. Р(адие Илгтат(оп и)(И )дтт 1 апд )8118-23г Сгозч Е. сой етга(п у) 090Ьесй (п ХУСуМ гпесйив солта!ЫпВ 0.2чА арпа!(ою. Ргераге а атос)с о1 р(айпВ Ьастепа |и 10 пзм МВ5О, ае с1ееспЬед |и СЬартег 2.
Меаеиге (Ье пивЬег о1 |п1ес6оть ЬастегюрЬаВе раг6с(ее ргодисед |и тйе рас1саВ!пВ т)хтигее ае дееспЬед !и СЬартег 2, Рготосо| 1, их)пВ 3 гп| о1 ЕВ тор аВагоее солта|и!пВ 40 и) о1 а етосх ю!ийоп о( Х- Ва) (20 гав) !п йгпе(ЬуйогглагпЫе) апс| 4 и! о1 а ео!ит)оп о1 1РТС (200 вфп() 1ог еасЬ 90-пхп Рези' сйеЫ 1псиЬате |Ье р)атее 1ог 8-10 Ьоиге ат ЗTС. Р1адие Еогтатюп тчТИ )УАР: Сгозч Е. сой етга)п 884 |п ХУСуМ ведвгп солта!п|пВ 0.2 А пза1(оъе.
Ргераге а атоса< о1 р(абпВ Ьастег|а !и 10 пзм М85Ол ть деасг)Ьед !п СЬартег 2 Рготосо| 1. Меаялге тЬе пипзЬег о1 |п(есйоть Ьастег!орЬаце рагйс)ее ргодисед |и тйе рас1саВ!пВ в|хтигее ае дехспЬед |и СЬартег 2, Рготосо! Ь их!п8 3 в! о1 ЕВ тор аВагоее солта!п!пВ 40 и! о1 а атоса< ю|итюп о1 Х- ца) (20 вфп) |п сйтетйу!(оппаттде) апд 4 и( о1 а ю!итюп о1 |РТС (200 гав() 1ог еасЬ 90 титл Реги с|ьЬ. |полЬате (Ье р)атее тот 8 — 1 0 Ьоиге ат 42'С то ргенепт Иле 1огпзатюп о1!уеоцепв уз 090/жй яЬои!д пот Ье пьес| зм(Ь (Ье АХАР честогв а|псе (Ьь етга!п соптйпе а р(тьгп!д (рМС9) тйат 'ь Ьопзо(оВоие то (Ье рЬацев!д хесрлепсех иг!Яз)п (Ье лЛАР честог.
ТЬь Ьогпо)оВу сап ргогпосе гесопзЫпатюп Ьетъчееп гЬе Ьастег!орЬаВе Х честог апд (Ье р(аев)д. Р1адие Еоппатюп и гТИ ЛУАРПг Сгозч Е. сой атга!п ХП -В)ие тп Х2СУМ гпес|впз солта)п!пВ О 204 ва)тоее. Ргераге а атос)с о1 р1ат!пВ Ьастепа |и 10 пзм М85Ое ах с1ехспЬед |и СЬартег 2, Рготосо| 3. Меасиге тЬе пипзЬег о1 |птес6ось Ьастег!орЬаВе раг6с)ее ргойкед |и (Ье рас1саВтпц в)хтигее ае деесг!Ьед !п СЬартег 2, Рготосо| 1, ие!пВ 3 гп! о1 ЕВ тор аВагоее солта)п)пВ 40 и) о1 а етос1с ю!идол о1 Х- да( (20 пасв) |и д!пзедзу!(оппапз!де) апс| 4 и( о1 а ю|ииоп о1 |РТС (200 пзфпз1) 1ог еасЬ 90-впз Ретп' йеЫ ЫсиЬате (Ье р(атее (ог 8 — 1 0 Ьоиге ат 42 "С то ргечеит гйе 1огпзайол о1 |уюВепв Р|адие Еогтатгдп ыд(И ШРЕохт Сгозч Е, сой еагатп У) 090(УЕ) !и Х2СУМ гпед!ит соптйпв8 0.2"А гпа|- тоее.
Ргераге а етос1с о1 р|айпц Ьастепа |п З О гпм МВ5Ои ть деесг|Ьес1 |п СЬартег 2, Рготосо| Ь Меаялге (Ье пигпЬег о1 !п(ест|оих Ьастег|орЬайе рагс!с|ее ргодисес| !и (Ье рас)савпВ гп)хтигех ае дееспЬед (п СЬартег 2, Рготосо! 1, сь| пВ ЕВ аВаг р!атее апс| ЕВ тор аВагою. Р1ади ее о1 гесогпЫ палс Х2(р$.ох Ьастег!орЬаВее арреаг оп |азчпе о1 У( 090 И) се! В айег (оси Ьат)пВ 1ог 6-7 Ьоиге ат 3 TС.
5(га(и УЗ 090(ЛЕ) 'ь а дедчатгче о1 сага|и уз 090Иедй (Ьат Ьгь Ьееп ситес| о1 ТЬе геяс|епт рМС9 р1ачп!д. Етю о1 0.27ч пзайоеет 5опзе !пчехт|Ватоге асЫ гпа(тоее то гпесйа иеед то Вгозч апс| р|ате ЬастепорЬаВе ).. ТЬе ргееепсе о1 0.270 пса!тоее!еасЬ то а еиЬетапт(а( |псйлстюп о1 гЬе гпайоее орегоп (пс!ид)пВ тЬе (аги8 Вел е, зчЫсЬ епсодее ейе сей ялг(асе тесе ртог то ъчЫсЬ ЬастегюрЬаВе Ъ ЬтпсЬ (5сЬзчаих 3 967). ТЬ В Ыс|ис6оп хЬои!д (Ьеогейсайу !псгеаее (Ье еЯ(с!епсу о( |п1есйоп апс| Ьепсе (Ье у|е1с| о1 ЬастегюрЬаВе. ТЬе иее о( гпайоее 'ь а доиЫе-едВед езчогд, Ьозчечег, япсе Яопс| Вгочс4Ь о1 юпзе етга(пе о( Е. со(1 в хисЬ псЬ гпес|вгп гпау!еас| то сей (уы апд тйе ассипв!атюп о1 сейи!аг с|еЬгь!ас|еп зч)(Ь тЬе |.апзВ рготе|п.
В)псйпВ о( Ьастег!орЬаВе рагйс(ее со (Ьь с|еЬгь !еасЬ то Я Ит|е ге1еаее о1 (Ье чка! ОХА апс| ап илргодисйче !и(естюп, |п оиг ЬапсЬ, тЬеге ь ИП!е д!Яегепсе |п ЬастепорЬаВе )зеЫ 1гогл сийигее Вгозчп !и (Ье ргееепсе ог аЬеепсе о1 ва(тоее. Ртгосо1 7: 5(аЕе б: 1леаггоп о7'сРМА го ВасгеггорГ»аде )ъАгтл 71.63 АЕТЕКМАТ|ЧЕ РКОТОСОЕ: ЫСАТ1ОМ ОГ СОМА 1МТО А РЕА5М10 ЧЕСТОК ТЬе ||есьюп (о иае а р(аагпИ чес(ог !па(еас( о1 а ЬасгепорЬа5е».
чес(ог сМН с(ерепс) оп 1Ье тейп|( иаег) (о асгееп (ог 1Ье и»гце1 0ХА апс) оп регаоиа) рге1егепсе. А гвгпЬег о( Ь|ВЫу ечо!чег) р)аатЫ чес(ои аге поъч ача||аЫе, )пс1ис(!пц рСМЧ-5спр1 (5иа(ацепе), р5РОКТ П»Ке ТесЬпо(о5!еа), ап|1 рс0ХА3.1 ПпчКгоцеп). ТЬеяе четка(!!е гпо)еси(еа аге еарес!а))у сье6л| ъчЬеп ргерапп5 с0ХА ехрге|ьюп!!Ьгапев Ад|111|оиа( Ма1епа15 Р!алтИ чес1ог Е. со5 сотре1епг Еог (гапауогтаг(оп 5(ер 2 гег)иггеа 1Ье геаеепЬ Егот опе оЕ 1Ле (гапх(огтаПоп рго1осо)а !п СЬаргег 7. 5(ер 5 гес(и|сел йе геадепи 1|а(ег( |и СЬаргег 7, Рт1осо( 7.
Ме(Ьог| 1. 5е( ир (оиг (еа1 1|Па(!опграс(саВ)пц геас Попа аа Ео!!оъчв 05а1юп А В С 0 7.0 р! 7.0 и) 7.0 ф 7.0 и) 7 Л) и! 7.0 )»1 7.0 р! 1.0 и! Оп5 5п5 10пВ 50п5 0.7 и) 0.7 и) 0.7 и! 0.7 и) р1»ьгпИ чес1ог 0ХА (50 п5»р)) 10х Т4 0ХА Еухе Ьи((ег с0ХА Вас(епорЬаВе Т4 0ХА Пухе (1 00 )Аге||ь ип)Ь)и!) 70 гпм АТР 1.0 ф 7.0 П! 7.0 и! 1.0 р! Н,О (о а Впа| чо|ип»е о( 70ф 70 и) 70 и! 70)|1 ! псиЬа1е йе )фа1юп | п|х|игех |аг 4-1 6 Ьопь а1 16С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
