Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 114
Текст из файла (страница 114)
Рау рагцси!аг аиепцоп со сЬе сгоиЫеяЬооьпц яессюп оЕ йе сесЬшса! 1Негасиге Ьесасье и ойеп цсчея с!иея со р1асея сп сЬе ргососо1 йас тсцЬс ргоче с11ЕЕсси1с. 5ее 1Е спсцчЫиа! согпропепь оЕ сЬе Ыс сап Ье гер1асесс ая сЬеу аге ияесс ир. СЬес1с сагеЕицу со ссесегтспе ъчЫсЬ !сей аге ргочЫес1 сп йе Ыс аисс счЬЫЬ аге сЬе геяропяЬс!Ну оЕ сЬе шчея6цасог со ргочЫе.
Ро пос огссег сЬе Ыс ип61 аН оЕ сЬе песеяяагу ю!шюпя апсс тасепа!я Ьаче Ьееп ргерагесс !осацу апс1, 1Е рояяЫе, сеясес1. СОММЕХТ5 (ВЕЧЕК5Е ТКАХ5СК|РТА5Е, ЧЕСТОК5) МАХОЕАСТССКЕК Апсегайапс-РЬагпсас)а ВюсесЬ юсяч.арЪсосесЬ.согп сРХА 5упСЬеяа КГС Типейачег сРХА 5упсйе515 Кп сРХА бупйеяа Мойи1е О!)цо(йт) Мо-МЕЧ ЕЕГСе11 Мо-М1Ч Ейс!! 0650(дТ)п и Капг1огп Рйгпег (рй(Х)б) Апсйогей ЙТП Рппыг Капйогп рппкг АМЧ хйс(0, хйс! ! (ГЬ55ка1 гпейой о( биЫег-Нойпсап) 5МАКТ сРХА 5упсЬеяа КИ СР5 П Рпгпег 5' РСР. Рпгпег СРВ П| Ргйпег КТ пос срес|йед СЕОХТЕСН юъсч.с)опсесй.согп 5МАКТ сРХА ЫЬгагу Сопягисйоп КЬ 5МАКТ ВАСЕ сРХА Апср)161- сайоп КЬ КТ пос аресгйес1 ЛТГ|р!ЕГ2 КТ поС аресс6ес1 5', 3' ВАСЕ сРХА 5упйеяа Рпгпега Сору КЬ (сРХА аупсЬеяа) 1пчйгойеп ичегс(пч|сгойеп.согп Оййо(ВТ))(№й) Рпгпег Капйогп Рпспег АМЧ Ы(е Тесйпо!ой)55 ипччс)(уесесй.согп сРХА 5упсЬеяа 5уяегп ОййоИТ)п и С|опес1 Мо-МЕЧ (с|аяка1 спейс о(биЪ|ег-Но%пап) 5ирегйспрс СЬоке 5уяегп 1ог сРХА аупйеяа 5ирег5спр1 Р|аяпм ог ЕагпЬйа 5у51егп Тог сРХА 5упйеяа Оййо(ВТ)п и апй)ог Капс1огп Ьехаапсега (Кб) 5ирег5спрс П (КХаае Н ) 5ирегбспрс П (КХаае Н ) РСМЧ-5РОКТ ог 272РЕох Ехргеаяоп 1|Ьгапеа РВРОРТ1 Ргегпаде 5ирегбспрг ЫЪгапеа 5ирегйспрс ЕагпЬда-5уяегп Тог сРХА 5упйеяа №г! Рпгпег-Айарсог мо-меч (с1ааяса| гпесЬод о! биЫег-Но(6пап) Хочайеп ипею.почайеп.соуп Опеп1Ехргея сРХА 5упсйе515 КЬ 01!Во(с)Т) ог НЫ61П Капе)огп Рпгпег Ргогпейа АМЧ (с|аяка| гпесйод о( биЪ|ег-Нойспап) илчк.ргопсейа.сопс КосЬе Ейайпоя|са 13шптса| К|ЬПС1опе сРХА 5упйе56 5у51епс сРХА 5упсЬеяа КЬ 01!Во(6Т) Рпгпег Капйогп(ВХ)„рппсег Оййо(с)Т) -Ргипег Капе)огп(с(Х) -Ргипег О!(йо(с(Т)-Е(ПЬег-Ргппег Оййо(с(Т)-Е(П1сег-Рг|пкг апс(/ог Капйогп Рппсег АМЧ (с1ааяса| гпейос1 о( биЫег-Ноййап) АМЧ сРХА 5уиСЬеяа КЬ ТИАР-СМЧ ЫЬгагу Соп5СГисггоп Киа М -М|.Ч Яга1айепе счипчгягасайеле.сопс Капс1огп ог 01сйоМТ) Рпгпегх 7АР Ехргея сРХА 5упйеяа К|п 7АР сРХА 5упйеяа Кся Капйопс ог Оййо(с1Т) Рпгпега Капйогп ог 01!Во(с)Т) Рпгпега Р|аяпгй ЫЬгагу Сопягисйоп Ксь Ргегпайе сРХА 1|Ьгапеа 01!Во(6Т) апй)ог Капйогп Рпгпег Та)сага! В(ПСЧЫССа)сег сРХА 5упйеяа Кп Оййо(ВТ) я Капйогп(с)Х) ВАЧ-2 (с|ааяса1 гпесйой о( биЫег-Нойгпап) 11.108 1 Ьарсег 111 Ргерагайоп о! ГРХА Бйгатсех апг( сгепе!Йепсс1гсасгоп ТАВЕЕ 11-6 Согппсегсса| КИЕ 1ог СОХА 5упсЬеейа апс( ЕГЬгагу Сопмгпсйоп ЧЧЕВ $1ТЕ АООКЕ55 К!Т5 3 РК1МЕК Мо МЕЧ )7АР-СМЧ Н)ВЫече1 еи1сагуойс ех- РГЕ5ЯОП Мо-м|.Ч ЕПЬагуоск апй ргойагу- о1к ехргесяоп Мо-М| Ч Рго1сагуойс ехргеаяоп Мо-МЕЧ РСМЧ-асор| РВ1иеаспрс П РАР-ОАЪ4-2.! х чессоГ5 (7АР, 7АРП, |)пс-7ЛР) ГпЕогтайоп Раве!а 11.$09 Мо-МЕЧ КЕЛГЕКЬЕ ТКАВ(БСК!РТАвЕ Еаг!у счог1с оп сорушд тапипайап тКХА шсо ОХА (Кас(ап ес а1.
1972; Коя ес а1. 1972; Лгегта ес а!. 1972), счЫеЬ ргес$асес) СОХА с!ошпц Ьу ьечегя уеагя илес) гечегае сгапасг(рсаье ах!гас!ел) Егот рагйс!еа оЕ асйап туе1оЫаасояь лйгиа (АМЧ). ТЬгоидЬоис сЬе 1970я Рг. ).Х. Веагй оЕ сЬе $.1пйегясу оЕ НогЫа счаь сопсгассес) Ьу сЬе Хасюпа1 Сапсег 1пасйисе со ырр!у АМЛг рагйс!еа Ьагчеасей 6от сЬе Ыоос) оЕ 1еи)сетк сЫс)сепя апй! асег, гечегье сгапасг(рсаае ргерагей Егот сЬе ч(гиа рагск1ея со сЬе геаеагсЬ сотпшпйу сп сЬе Уп(сес(дсасея ТЬ(а лчог(с лчаа Ьеуопс( сЬе геасЬ оГ тиас 1аЬогасог(еа япсе п (пчо1чес( лпЕеейпц с(ау-о1и гпа1е сЫс)са сч)сЬ АМЛг апс( ргосеылпд 1агце чо!отел оГ сЫсд Ыоой Веагс)'ь аЫН апс$ Ьагс) лчог)с ргоч)йес( йе Гоипс1асюп Гог ьупсЬеа(а апс1 с!оп(пд оГ сОХАь аа счей аа сЬе теапа со рипЕу сЬе епхупле со Ьосподепейу апс$ со с$ейпе (са сЬ(еЕ 6(осЬет(са! Ееасыея Ноч ечег, 6 лчаа пос ипй! 1988 сЬас сЬе сОХАа епсоейпд сЬе ьчо сЬа(па оЕ аНав гечегае сгапаепрсаае лчеге с1опей )пс(ерепс(епс!у ехргеааес( ш Е.
сой (5о1сь апй 5)са)(са 1988; Теггу ес а1. 1988), апг( таг)сесес) сопипегс)а(!у. РегЬара Ъесаиае сЬе асйче епгуте сопяяей оЕ аечега! гпопопсепс апс$ Ьесегоейлпепс Госта (Еог геч)есч, р1еаье аее 5)са1)са 1993), сЬе с)пай!у оГ сЬеае еаг1у гесотЬспапс ргерагас(опт чаг(ес( л)и)се с(гата!(сайу Ггот опе тапиГассигег со апойег, !п асЫгйоп, сЬе росчег6л! КХаае Н асслчйу аыосласес) чйсЬ ЬосЬ еиЬить оЕ сЬе епхуте мчал а НаЬс1йу счЬеп иашд ач(ап сечете сгапаепрсаае со сору рори1айопа оГ гпКХА шсо Еий-1епдй с$оиЫе-ягапс$ес( сОХАя Х(е1оа оГ СОХА гаге1у ехсеес(ес(509ч, ргоЬаЫу Ьесаые сЬе ЬуЬгЫ Гоппес$ Ъепчееп сЬе о1сцо(с$Т) ргипег апс$ сЬе 3'-сегтша! ро1у(А) сгаес оЕ сЬе псКХА сегпр!асе тчаа еГГлс)епйу с)едгас(ес) Ьу сЬе епс(одепоиа Ксчлаае Н асйчйу оЕ сЬе ачсап евгуте.
!п ас)с((с(оп, сЬе епс(опас!ео1ус(с апс1 ехопис!ео!ус(с с)едгас(асюп оЕ йе КХА толе!у оЕ йе ЬуЬгЫ Ьеьчееп сЬе Гсср-а!гипс) СОХА апс( сЬе спКХА (псгеааес$ сЬе гййсси1су оЕ аупсЬеягшд апг$ с1опшд с(оиЫе-асгапс(ес$ СОХА сор(еь оЕ 1опд тКХАл. 1п 1985, СОХА епсогйпц сЬе гечегье сгапаепрсаае оГ сЬе Мо1опеу асгаш оГ пшппе 1еи(сет(а ч(гиа (Мо-М1Лг) члаа с!овес( апс$ ехргеяес) ш ап евгутас(са(!у асйче Гопп сп Е. со!1 (Колесе(ох ес а!. 1985; КосЬ ес а1. 1985). ТЬе епаулпе Ьаа Ьееп ехргеяей ЬосЬ аа а 6лаюп ргосеш чйсЬ сЬе Ьассег(а( депе ггрЕ ргос(исс (Тапере ес а1. 1985) апс1 сЬе Ьассег(орЬаде Лг!1 (Ни ес а!.
1986) апс( ш а Еопп лчЬеге сЬе апипо сегтшиа оГ сЬе ргосеш тоге с1оае!у геаетЫеа йас оЕ сЬе аийепйс епгугпе (Нлй апс$ НидЬеь 1988; Коселчкх ес а1. 1988). Моас, лЕ пос ай, оГ сЬе сопппегс(айу ачас!аЫе епхугпе ргерагас)опа аге Ггопс депеа евсос(ес$ Ьу р1ая тЫ рВ6В15,23 (КосЬ ес а1. 1985) ог рКТ601 (Коселчкх ес а1. 1985; бегагс( ес а!. 1986). ТЬе аресЫк асс(ч(- с(еа оГ сЬе епхутеь епсос)ес( Ьу сЬеае р!аяп(оь гййег Ьу а Еассог оЕ -10, чйсЬ сЬе гечегае сгапьепрсаае епсой ес$ Ьу рКТ601 Ьешц сЬе дгеасег.
Оп йе Гасе оЕ (с, сЫл тау леет со Ье ап ас)чапсаде. Ноъчечег, гпахитпип у)е!иа оЕ СОХА аге оЬсашес( лчйЬ Ьой епхутеь счЬеп йе то1аг гайо оЕ гечегле сгапьсг(рсаае со гпКХА )а -5. 5(псе ай тапи(аесигега оГ йе епхуте иле йе лате ип(са оГ аейчпу, -10 йтеа аь тапу ип(сл оЕ сЬе епхуте епсог(ес( Ьу рКТ601 аге гес)и)гес( со оЬсаш ес)иа) еГГлс(епсу оГ соруспд оГ гпКХА ипо сРХА (Сгегагс) апй О'А)ея(о 1993). Мо-М1Л' гечегае сгапгкпрсаае спаса)па ьчо шс(ерепс(епс1у Еипсйопа1, попочег1аррлпд с)ота(па (Тапеле ес а1. 1985; Тапеае апс) боЕГ 1988; Гог геч(елч, р1еаье аее Ргааас)1993). ТЬе!агдег апипо-сепшпа! с)оташ (-450 геяйиеь) сопсаша йе РХА ро1угпегаае асссчйу, счЬегеаа йе КХаье Н асспйсу (а епсотраьаес) сч(сЫп сЬе сагЪоху-сегт(па) с)оташ (-220 геяииеа). ТЬе ОХА ро1утегаье ь гасЬег а1идд(аЬ апс$ ргопе со раиявд ас гед(опт оЕ сЬе КХА сегпр!асе г)сЬ сп аесопс$агу асгиссиге (Майкоп ес а1.
1980; Сегагй ес а1. 1989). 1п асЫйюп, йе КХаье Н асс(ч(су Ьаа йе сараейу со Ьуг(го)ухе сЬе КХА сегпр1асе пеаг йе рошс оЕ еЬаш дгоксЬ, счЫсЬ сап геял1с ш с)жос(асюп оГ сЬе РХА-КХА ЬуЬгЫ апс! сегпвпасюп оГ сЬе Глгасасгапс( сРХА. $3р со 50$о оЕ сЬе Глгас-ьсгапг( сРХА то!еси!еа (п)с(асес( Ьу Мо-МОЕ гечегае сгапасг(рсаье тау Ье ргегпасиге1у сегт(висел) Ъу опе ог сЬе осЬег оГ сЬеае тееЬап)атл (Вегдег ес а1. 1983). до1чшд сЬе сЬгеепйспепьюпа1 асгиссиге оГ Мо-М1Л' гечегле сгапаейрсаае (п сЬе еаг!у 1990а (АгвоЫ ес а(. 1992; КоЫасаес)с ес а1.
1992; Сеогд(ас))а ес а1. 1995) лчал ап шлрогсапс асер Еоглчагс) япсе й орепей сЬе счау со гасюпа1 депейс епд(пеег(пд оГ сЬе епхуте. Носчечег, Ъу сЬеп, опе оЕ сЬе сЫеЕ ргоЫегпа Ьас( а! геайу Ьееп ао1чел$ Ьу сЬе сгеасюп оГ а гписапс оЕ Мо-МОЕ сЬас геса(пес( ОХА ро!утегаье асйису Ьис 1ас)сел) КХаье Н асспйсу (Косеъчкх ес а1. 1988). 5игрпяпд!у, шасс)час(оп оГ сЬе КХаае Н с$оташ Ьу с$е!ес)оп ог рошс пшсасюп 1ес$ со а йгатайе (псгеаае ш сЬе аЬл!пу оГ сЬе епхупсе со сага)ухе сЬе аупсЬеа(а оЕ сРХА ас е1ечасес$ сеспрегасиге (Сегагс( ес а1. 1989, 1992).
$3всй сЬ(а аегепейриоиа йскочегу, Мо-МГН Ьас) Ьееп илес) ас сегпрегасигеь по цгеасег сЬап 42'С. Носчечег, сегсаш гпшапш оГ Мо-М1Л' с$ейс(епс лп КХаае Н сап ейц с(епс1у сага!ухе сЬе аупйеяа оЕ еРХА ас сетрегасигеа аа ЫВЬ аа 50 С (Сегагг1 ес а1. 1989, 1992), счЬегеаа КХаае Н Еогпь оЕ сЬе ач(ап епхугпе сап Ье ааГе1у пиес( ас 60 С (Гог гесйеъч, р1еаае аее бегагс$1998). 11.110 СЬартег 11: Ртерагабои о)т сРИА ЕЕЬгагтез аай Сепе Е|ЕепттГтсагтоп ТЬе е!шипайоп оГ сЬе К)з)азе Н асс|тйсу Ггоп| гечегзе сгапзспрсазе шсгеазез сЬе аЬ|16у оГ сЬе епхуте со Вепегасе ЕиП-!еп8|Ь сРХА пю1еси1ез ас зсапйаг|1 се|прегасигез. Ъапо|ь сопипегс|аПу таг1|есе|1 Согпь оЕ |Ь~з чапапс шс1ийе а ппиапс оГ Мо-М1У гечегзе сгапзспрсазе сЬас !ас)ь К)з)азе Н асс)ч)су ехрге|ье|$6от а пюй6ей чегяоп оГ РКТ601 епсойп8 497 гезЫиез оГ Мо-М1У течетзе сгапзспрсазе р1|ь 6че айй6опа1 гезЫиез ас |Ье сагЬоху! сегпипия О|Ьег сопипегс)а) Гогпь оГ Мо-М1У гечегзе сгапзспрсазе 1асЫп8 КГ4азе Н асййсу шс1ийе 8сгаса8спрс КТ Гготп 8сгаса8епе, 8ирегЯспрс апй Бирег8спрс П Ггоп| ЫГе ТесЬпо1о8)ез, апй с|чо чегяопз Ггот Рготе8а.
8ирег8спрс сагпез а |1е!есюп сЬас е!ипшасез КНазе Н асс)ч)су, апй сЬе 8сгаса8епе епхутпе 8ирег8спрс 11 апй ап ептуте Гготп Рготпе8а аге рошс пшсапсз. НОМОРОЕЛ'МЕЕх!С ТА! $.1Ь)С Рп|П 1981, пюя сРХАз |чете с1опей Ъу а|Ыш8 сотпр1етепсагу Ьопюро)утпепс стась со |Ье йоиЫезсгапйе|1 сРХА апй со а р1аяпЫ чессог. ТЬе честог ап|1 сЬе |1оиЫе-зсгап|1е|1 с0$4А счете сЬеп )о1пе|1 Ьу Ьу|1го8еп Ъопйп8 Ъепчееп |Ье сотпр1етпептагу Ьоторо1утпегз со Еопп ореп с|гси!аг ЬуЬгЫ то1еси1ез сараЫе оЕ сгапзЕогпип8 Е.
со!), А)сЬоиВЬ Ес |чав изей |чЬЬ зиссея Гог тпапу уеагз, с1ошп8 оГ Ьотпоро1успепсаПу саПей сРХАз шсо Ьотпоро1утепсаПу са|1ей чессоь забега Еготп зечега1 оГ сЬе ГоПочйп8 йгатчЬас1|з апй ь по 1оп8ег изей чйсЬ апу ге8и!апсу. ° ТЬе те|Ьой сап Ье изей ебесйче!у оп!у |чПЬ р!аяпЫ чессогз, |чЫсЬ у)е1й сРХА 11Ьгапез сЬас аге пилсЬ |поте й$6|си!с со зсоге апй гер1касе |Пап сЬозе сопзсгиссей ш ЬассегюрЬа8е ) чессогз.
° Рог орсипа1 еГП|с)епсу оЕ с1ошп8, сЬе питЬег оЕ Ьоторо1у|пепс геяйиез оп |Ье р1аяпЫ ап|$ сЬе с0)ч)А зЬои1й Ье арргохипате!у ет)иа1, сч)сЬ -100 |$АЫТ гея|Ь|ез ог 20 йСт'йС гезЫиез Ье|п8 а|Ыей со еасЬ епй оГ сЬе Р)ч)Аз Греасос1| ес а1. 1981). Нолчечег, ГЬе а|ЫКюп оЕ й)4ТРз ойеп ргосеейз азупсЬгопоиз1у, ю сЬас йНегепс сепшп1 оЕ РХА |по!еси1ез сапу Ьопюро1утепс саПз оЕ чету |$Негепс 1еп8|Ьз. ТЫз ргоЬ1е|п сап Ье аПеч)асей, Ъис пос сотр!есе1у зо1чей, Ьу |ып8 р1азт)йз саггуш8 Ьотпоро1угпепс сайз оЕ йебпей яхе, |чЬкЬ аге ача|!аЫе !тот а пшпЬег оГ сопипегс|а! зиррПегз. ° РНегепс зсга)пз оГ Е. со6 аге сгапзЕоппей ас йНегепс ейк|епс)ез |чПЬ р1азтЫкРГ4А тпо!еси1ез сЬас аге Ье1й со8есЬег Ьу сотр1етептагу Ьоторо!утепс сайз.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
